MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
ESPECIALIDAD DE LABORATORIO CLÍNICO CBTIS No.3
MANUAL DE PRACTICAS DE
CODIGO:
“REALIZA ANALISIS HEMATOLOGICOS
DE SERIE ROJA” CBTis3-LC-MP-006-2025
REV. 1 HOJA 2 de 50
PRACTICA No. 3
CUANTIFICACIÓN DE ERITROCITOS
COMPETENCIA
Emplear la técnica manual para realizar el recuento de eritrocitos utilizando la cámara de Neubauer.
INTRODUCCIÓN
Los recuentos celulares con métodos manuales utilizan hemocitómetros o cámaras
de Neubauer, hoy en día se emplean equipos electrónicos que pueden ser
semiautomatizados o automatizados.
El principio del recuento celular manual se expresa en cantidad por mm3, por el volumen
obtenido en el hemocitómetro, se expresa en litros (L), si se emplean equipos
automatizados ya que cuentan una mayor cantidad de células suspendidas en una
solución diluyente isotónica.
Los principios generales de estas mediciones son:
1. Escoger un líquido de dilución que no solamente diluya los eritrocitos
hasta cifras legibles, sino también permita identificarlos de una u otra
manera o destruya otros elementos celulares.
2. Emplear una cámara de recuento de glóbulos o un contador electrónico,
que presentan al observador o al aparato de lectura los glóbulos en
forma tal que se pueda establecer el número de ellos por unidad de
volumen de líquido. El contador electrónico de glóbulos evita el error
humano y al contar un mayor número de glóbulos, resulta
estadísticamente más preciso.
Recuento manual
Hemocitómetro o cámara de conteo
La cámara de conteo de Neubauer es un aparato de vidrio óptico
especial de precisión, se emplea para contar células o partículas en
suspensión. Es una placa rectangular gruesa del tamaño de un
portaobjetos, con dos superficies elevadas separadas por una hendidura en
forma de H.
Las prominencias transversales están localizadas a cada lado de la
zona rayada. Sobre las prominencias transversales se coloca un
cubreobjetos plano estandarizado y ópticamente corregido. Entre la
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superficie inferior del cubreobjetos y la superficie de la zona rayada existe
una profundidad de 0.1 mm.
Esta cámara consta de un cuadro primario que mide 3 x 3 mm (9 mm2),
subdividido en nueve cuadros secundarios, cada uno de 1 x 1 mm (1 mm 2).
Los cuatro cuadrados secundarios de las esquinas llamados A, B, C y D que
muestra la Figura 1, se emplean para el recuento de leucocitos y se
subdividen en 16 cuadros terciarios respectivamente.
El cuadro milimétrico secundario central E, está subdividido en 25 cuadros cuaternarios,
y cada uno de los cuales mide 0.2 x 0.2 mm. Cada uno de estos cuadros está subdividido
ulteriormente en 16 cuadros más pequeños (quinarios). El número total de cuadros
quinario suman 400 (25x16). Como regla, cinco de los cuadros cuaternarios equivalen a
80 de los cuadros quinarios (5x16) que se emplean para el recuento de eritrocitos y
se marcan como 1, 2, 3, 4 y 5 (Figura No. 2).
Fig. No. 1. Cámara de Neubauer y un primer plano de las áreas de conteo
como se ven en el microscopio. Los cuadros marcados con una W se
emplean para contar leucocitos y los que están marcados con una R para
eritrocitos.
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Pipeta para diluir los eritrocitos
Las pipetas de cristal de Thoma constan de un tubo capilar graduado, dividido
en 10 partes y marcado con un 0,5 en la quinta señal y con 1 en la décima, y
por encima un ensanchamiento, bulbo o pera para mezcla, con una perla de
cristal en su interior de color rojo indicando su uso para eritrocitos y blanca para
el uso de leucocitos, y por encima del bulbo otro tubo capilar corto con una marca
de 101 grabada en la pipeta para recuento de eritrocitos y de 11 en la de recuento
de leucocitos.
Líquido diluyente
El líquido debe ser isotónico para evitar crenar y lisar los eritrocitos. Debe
contener un fijador para preservar la forma de las células y prevenir la aglutinación
y autolisis, y solo si el recuento no puede ser llevado a cabo dentro de una hora.
Existen diversos tipos de líquidos de dilución utilizados en el Laboratorio.
Dentro de los más comunes se encuentra la solución de Hayem. Utilizando esta
solución se evita la formación de conglomerados y apilamientos de eritrocitos. Los
leucocitos no llegan a destruirse y aunque se cuenten a la vez que los hematíes,
no se originará demasiada variación en el número total de eritrocitos contados.
El recuento manual de eritrocitos tiene un error del 10%, el cual puede
deberse a múltiples causas, algunas de estas pueden ser:
• Errores de extracción: dilución o hemoconcentración de la muestra.
Hemólisis o coagulación parcial.
• Mala homogenización de la muestra.
• Utilización de material mal calibrado, sucio o húmedo.
• Errores de dilución de la muestra.
• Cámara de Neubauer no calibrada, sucia o mojada.
• Llenado incorrecto de la cámara de Neubauer.
• Empleo de cubrehematímetro descalibrado.
• Errores del analista durante el recuento y cálculos realizado.
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Fig. No. 2 Cuadrícula microscópica de la cámara de Neubauer
1. Todo el cuadro (3 mm x 3 mm) = Primario
2. Los cuadros A, B, C, D y E ( 1 mm x 1 mm) = Secundarios
3. Los cuadros internos de A, B, C y D (0,25 mm x 0,25 mm) = Terciarios
4. Los cuadros internos de E: 1, 2, 3, 4, 5, etc. (0,20 mm x 0,20 mm) = Cuaternarios
5. Los cuadros internos de 1, 2, 3, 4, 5, etc. (0,05 mm x 0,05 mm) = Quinarios
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Material e instrumentos
• Sangre con EDTA
• Boquilla
• Pipeta de Thoma para eritrocitos
• Agitador para pipetas de Thoma
• Mezclador de tubos
• Cámara de Neubauer
• Cubrehemocitómetro
• Microscopio
Reactivos
• Líquido de Hayem o solución salina fisiológica
Muestra biológica
Muestra sanguínea venosa con anticoagulante EDTA
INDICACIONES PARA LA RECOLECCION DE LA MUESTRA
El paciente debe de estar en completo ayuno.
El paciente debe de informar si está tomando algún medicamento en ese momento
Procedimiento
1. Recolectar 5 mL de sangre venosa en un tubo con EDTA y mezclar por inversión.
2. Homogenizar durante 5 min. en el mezclador de tubos
3. Con la pipeta d e Th om a en posición horizontal aspirar sangre con la
b o qu illa d e su cción hasta la marca de 0,5. El exceso de sangre se
elimina tocando la punta de la pipeta con una gasa.
4. Limpiar la sangre adherida a las paredes externas de la pipeta con una
gasa procurando no tocar la punta de la pipeta.
Introducir la pipeta en forma vertical en el líquido de Hayem o solución
fisiológica y aspirar diluyente hasta la marca de 101. Si se aspira más
diluyente se desecha todo el contenido de la pipeta en un recipiente con cloro
y se inicia nuevamente con el paso 2.
5. Retirar el adaptador de la boquilla obturando con Parafilm la punta de la
pipeta para evitar la pérdida de líquido, colocar Parafilm en el extremo
opuesto a la punta y manteniendo la pipeta siempre en posición horizontal
se coloca en el agitador mecánico durante 1 minuto.
6. Colocar el cubreobjetos sobre las dos superficies elevadas de la cámara para
cubrir las dos cuadrículas.
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7. Quitar el papel parafilm de la punta de la pipeta
8. Desechar las primeras 4 gotas de la pipeta para eliminar el diluyente que
queda en el capilar y que no diluye la muestra.
9. Cargar ambos lados de la cámara manteniendo la pipeta en un ángulo de
45°, tocar con la punta el borde del cubreobjetos donde se junta con la
superficie elevada de la cámara. El hemocitómetro se llena por capilaridad,
el flujo de llenado debe ser constante y sin que este llene la hendidura en
forma de H de la cámara.
10. Colocar el hemocitómetro en la platina del microscopio y dejar reposar de 3
a 5 minutos, para dar tiempo a que las células se distribuyan y se asienten en
el fondo de las cuadrículas.
11. 12. Enfocar con objetivo de 4 X la cuadricula
12. Con el objetivo de 10X, se localiza el cuadro central E y se comprueba que
las células estén distribuidas uniformemente.
13. Una vez enfocado el cuadro central con el objetivo 40X, se cuentan los
cuadros marcados del 1-5 mostrados en la Figura No. 2.
14. Se comienza a contar las células contenidas en el cuadro cuaternario
superior izquierdo marcado como No. 1 y se sigue el orden establecido de
los números marcados en la Figura No. 2.
15. El conteo se lleva a cabo de la siguiente manera: se cuentan las células rojas
dentro del recuadro y las que tocan las líneas triples superiores e izquierdas;
discriminando las células moradas que se encuentran fuera y tocando las
líneas triples inferiores y derechas marcadas con una (X), como lo muestra
la figura No. 3.
16. Se anotan separadamente el número de eritrocitos de cada cuadro
cuaternario contado y se suma el resultado de los 5 cuadros.
17. Calcular la cuenta total de eritrocitos/mm3, empleando la fórmula siguiente:
N= Eritrocitos contados
5= Cuadros cuaternarios
contados (0.2)2= área de cuadro
cuaternario
0.1 = altura de la cámara
200 = dilución de la
muestra
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18. Lavar las pipetas de Thoma una vez con agua corriente y tres veces con agua
destilada.
19. El hemocitómetro y los cubreobjetos deben limpiarse sumergiendo en agua
tibia y nunca secados con gasa o pañuelos para evitar que se rayen. Una
vez limpios deben dejarse al aire antes de guardarse.
Fig. No. 3 cuadro cuaternario con 16 cuadros quinarios
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VALORES DE REFERENCIA
Recuento de eritrocitos X 106/µL
Edad Hombres Mujeres
Primera semana de vida 4,50-6,50 4,50-6,50
2 meses 3,60-5,00 3,60-5,00
1 año 3,50-5,50 3,50-5,50
1-3 años 4,00-5,50 4,00-5,50
3-8 años 4,10-5,50 4,10-5,50
8-15 años 4,10-5,70 4,10-5,70
15 años en adelante 5,00-6,30 4,10-5,70
OBSERVACIONES Y RESULTADOS
POSIBLES CAUSAS DE ERROR.
CONCLUSION
CUESTIONARIO
1. ¿Qué se debe hacer cuando la sangre aspirada en la pipeta de Thoma, se pase de la marca?
2. ¿Qué precauciones de deben tomar al cargar la muestra en la cámara de Neubauer para
garantizar un conteo preciso y reproducible?
3. ¿Qué situaciones pueden alterar la visualización y conteo de eritrocitos en la cámara de Neubauer?
4. Esquematiza y explica el principio que utilizan los contadores automáticos Coulter
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