REGULACION EN EUCARIOTAS.

No todos los genes se expresan, algunos se expresan en todos los

tejidos y otros solo en algunos tejidos específicos. Esto sucede
durante el desarrollo embrionario y da lugar a la diferenciación
celular, también se da durante la homeostasis celular.
Niveles de regulación en eucariotas
 En eucariotas hay muchos niveles de regulación de la expresión
génica. El primer nivel es la compactación de la cromatina y la
activación del promotor.
 En un estado de cromatina compactado, los genes que están
inmersos en esa cromatina no van a poder ser transcriptos, por lo
que no se expresan. Mientras que en una cromatina menos
condensada el ADN está más accesible a los factores de
transcripción, por lo que pueden ser transcriptos.
 Los otros niveles son co- y post- transcripcionales. Como la
maduración, la exportación al citoplasma, la estabilidad, la
localización subcelular, y su traducibilidad.
 Una vez transcripto, el ARN es procesado de diferentes formas,
dando lugar a distintos mensajeros que van a ser exportados al
citoplasma mediante los poros nucleares.
 Si el ARNm es traducido a proteínas dará lugar a los polipéptidos
que son los que van a cumplir la función en la célula. Estos
polipéptidos pueden ser modificados posttraduccionalmente.
 Si el ARNm no es traducido, puede ser degradado en la célula o
puede ser mantenido sin traducir para ser traducido en un
momento en el cual sea requerido.
Regulación en el primer nivel: compactación de la cromatina
 El primer nivel de regulación de expresión génica en eucariotas
es la compactación de la cromatina.
 La acetilación de las histonas permite que la maquinaria
transcripcional acceda al ADN y reconozca las secuencias blanco.
 En la imagen se muestra que colas de las histonas, al no estar
acetiladas, están cargadas positivamente y son capaces de
interactuar (por carga) con la molécula de ADN; esto genera un
estado compacto y cerrado de la cromatina. Mientras que la
acetilación de las histonas permite que sus colas tengan menor
carga positiva y, por lo tanto, el ADN no estará tan compacto
alrededor del nucleosoma. De esta forma, los nucleosomas
pueden ser remodelados (o movidos) en la molécula de ADN para
permitir que los factores de transcripción reconozcan los sitios
blanco y llamen a la polimerasa para que inicie la transcripción de
los genes.
Código de histonas:
 Es así que se estableció un código de histonas en el que las
modificaciones diferenciales de las distintas histonas dan lugar a
un mensaje que es leído por proteínas indicando cuál es el estado
de esa cromatina; indica si su estado es abierto siendo capaz de
ser transcripta o si su estado es inactivo, siendo incapaz de ser
transcripta.
 La metilación de las colas de las histonas se asocia con la
represión transcripcional, mientras que la acetilación de las
histonas se asocia con la activación de la transcripción. Aunque
esto no es siempre así. En la imagen de la derecha se ven
metilaciones que están vinculadas a la activación de la
transcripción.
 Existen otros tipos de modificaciones post-traduccionales que
sufren las histonas como la ubiquitinación y la fosforilación de
aminoácidos serina en las colas de las histonas.
 Estas modificaciones dan lugar a un código de histonas que es
interpretado en la célula para ser transcripto o no un gen.
 Este código de histonas implica varios pasos en los que las
histonas deben ser modificadas y a su vez, cuando cambia el
estado de la cromatina las histonas deben ser también eliminadas
las modificaciones post-traduccionales y ese código debe ser
interpretado. Quienes interpretan el código son proteínas.

Establecimiento del código de histonas:

 En la imagen se indican las proteínas involucradas en el
establecimiento del código de histonas. Las enzimas que son
capaces de reconocer y de modificar post-traduccionalmente estas
histonas que están formando el nucleosoma.
 Hay enzimas encargadas de la acetilación de las histonas
(amarillas) como las acetiltransferasas. Las ubiquitin ligasas son
las que ubiquitinan las histonas. Las quinasas fosforilan. Las
metiltransferasas y demitelasas metilan.

 Todas estas enzimas actúan en momentos diferentes sobre las

histonas para generar el código de histonas, que luego será leído
por diferentes proteínas que son capaces de reconocer las
modificaciones post-traduccionales que sufren las colas de las
histonas. Esto da lugar a la regulación de la expresión génica ya
que estas proteínas son capaces de activar la transcripción o de
reprimirla dependiendo de la función de cada una.

Activadores de la transcripción:
 Presentan actividad de acetilación de histonas. Algunos
activadores transcripcionales reclutan a las enzimas que son
capaces de acetilar histonas y estos acetilan las histonas
adyacentes a la región promotora y permite que la transcripción
inicie.

Represores y deacetilación de histonas:

 Actúan de manera contraria a los activadores de histonas
deacetiándolas.
 Estas proteínas reclutan proteínas que son deacetilasas de
histonas. Estas proteínas remueven los grupos acetilos de las colas
de histonas, quedando más positivas, por lo que el ADN queda más
compacto y se vuelve inaccesible a la maquinaria transcripcional
impidiendo la expresión de ese gen.
Metilación del ADN:
 Es otra modificación asociada con la expresión de
los genes. o En este caso sucede la metilación del
dinucleótido CPG (citosinafosfato-guanina) por una
enzima específica de las citosinas. Este
dinucleótido se metila en la citosina de ambas
cadenas del ADN.
 CONSECUENCIA: Esta metilación no permite el
reconocimiento de secuencias de ADN por los
factores de transcripción o por las proteínas que
deben unirse en ese lugar, ya que cambia de
manera epigenética (no mutacional). Cambia el
ADN de forma que estos factores proteicos no
pueden unirse en esta región y entonces dejan de
reconocerse los promotores. Los promotores
cuando están metilados se vuelven inaccesibles
para la transcripción.
 EJEMPLO: Este mecanismo es utilizado durante la expresión de los
genes de las globinas en el desarrollo embrionario. A las 6
 semanas se ve la expresión de la globina épsilon y a las 12
semanas se empieza a expresar la globina gama. Esto se da
debido a la metilación diferencial del promotor durante las
diferentes etapas del desarrollo embrionario.
- Mientras que a las 6 semanas el promotor de la gama-globina
está metilado e impide la transcripción de este gen, a las 12
semanas se metila el promotor de la globina épsilon y de
desmetila el promotor de la gama-globina produciéndose la
activación del segundo gen.
- En este caso, la ausencia de metilación de un promotor es
necesario para que se exprese, pero que el promotor esté
desmetilado no quiere decir que la transcripción suceda sí o sí.

La metilación del ADN y la acetilación de las histonas:

 Estos dos mecanismos actúan de forma coordinada en el ADN para
regular la expresión de los genes.
 En general, cuando una región del ADN está metilada se unen
proteínas de unión al ADN que son capaces de reclutar enzimas
que tienen actividad deacetilasas de histonas, produciéndose la
compactación de la cromatina.
 En la imagen de la derecha se ve un ejemplo donde se observa la
desmetilación del ADN y proteínas de unión a este ADN metilado
que reclutan proteínas capaces de deacetilar histonas. Entonces
estas histonas deacetiladas van a impedir la transcripción génica.
Remodelación funcional de la cromatina:
 Durante el ciclo celular, la cromatina debe ser remodelada
(movida), por ejemplo, para poder ser compactada hacia los
cromosomas metafásicos durante la mitosis. Todos estos procesos
son regulados por complejos proteicos que son capaces de
remodelar la cromatina.
 Esta regulación de la cromatina es energéticamente cara para la
célula (requiere de gasto de ATP) y en general está vinculada con
distintos sucesos que sufre el ADN, tanto con la transcripción
génica como con la mitosis.

Regulación en el primer nivel: activación del promotor

Elementos cis y trans:
 Para comprender este paso de regulación, que sería activar un gen
mediante la activación de un promotor, debemos entender qué son
los elementos en cis y los elementos en trans.
 Un elemento en cis es una secuencia de ADN o ARN que regula lo
que sucede con la molécula en donde se encuentra. En este caso
son promotores o potenciadores (enhancers).
 Los elementos en trans son factores (proteínas) que están
regulando no la molécula de la que son transcriptos, sino otro ADN.
En este caso veremos factores de transcripción.
 Son términos antiguos que se denominaron así por cómo actuaban
estos elementos.
 Un elemento en cis, al ser una secuencia de ADN, actúa
únicamente sobre la molécula en la cual está.
 Un factor proteico como es capaz de difundirse dentro de la célula
y de unirse a cualquier secuencia reguladora blanco, sea en el ADN
a partir del cual es transcripto o en otra región, por lo tanto, se lo
denominó factor en trans.

Proteínas reguladoras y elementos en

cis-procariotas/eucariotas:
Los factores en cis son secuencias de ADN. Estos elementos en cis
son reconocidos por factores en trans que son proteínas.
Comparación entre procariotas, eucariotas antiguos y
modernos:
 En procariotas, existe una región promotora y una región de
regulación de la expresión génica que está cerca del promotor.
 En eucariotas antiguos (levaduras), vemos que las secuencias son
más y están más alejadas.
 En eucariotas modernos (humanos): Hay aún más secuencias y
están mucho más lejos, hasta luego del gen. Esto es debido a la
conformación que encuentra el ADN en el núcleo y además habla
de cómo la regulación de la expresión de estos genes es
importante para generar la complejidad del organismo.

Elementos en trans: factores transcripcionales.

Son proteínas de unión a sitios específicos de ADN, se asocian a
promotores y potenciadores, pueden ser activadores o represores.
Regulan la transcripción.
Estructura de los elementos transcripcionales:
 Tienen una estructura modular en dominios de unión al ADN que
son las que permiten que se reconozcan las regiones en el ADN,
que también funcionan de manera modular.

 La estructura modular permite separar los dominios de activación

y los dominios de unión al ADN.
 - Dominio de activación: Siempre que una proteína actúe con
factores de transcripción, debe ser capaz de reclutar a la ARN
polimerasa al promotor.
- Dominio de reconocimiento: Ubica a la proteína en cierta
región del genoma y no en cualquier parte para que la
polimerasa no transcriba en cualquier lugar.

Motivos comunes de unión al ADN:

 Existen varios motivos en común a las proteínas que se unen al
ADN.
 En las imágenes se ve como los dominios se ubican en diferentes
regiones del ADN, permitiendo el reconocimiento de las
secuencias por los motivos en la proteína. o Los dedos de Zinc
(b), son un motivo bastante típico, posee una estructura terciaria
y secundaria característica. Se acomoda en el surco mayor del
ADN, dando lugar a la interacción de la proteína y al
reconocimiento de la secuencia.

Factores de transcripción:
  Los factores de transcripción son necesarios para que la
polimerasa se ubique en la región promotora y pueda iniciarse la
transcripción.
 Los factores de transcripción pueden actuar de diferentes
maneras, existen distintos tipos de factores.
Algunos factores son:
1. Activadores de la transcripción: Los cuales reconocen la
secuencia de ADN y mediante un dominio de activación de la
transcripción, reclutan a la polimerasa para que se forme el
complejo de inicio y así comience la transcripción de los genes.
2. Represores de la transcripción: Es un mecanismo por el cual una
proteína se une al ADN y al no poseer un dominio de activación
a la transcripción que llame a la polimerasa, ocupa el sitio que
sería para el reconocimiento de un activador, por lo que el
promotor queda inactivo. El represor y el activador poseen una
“competencia” quedando inactivo, pero probablemente el
represor posea mayor afinidad hacia ese sitio en el ADN que por
el activador y por lo tanto la transcripción no suceda.
3. Otro tipo de proteínas que actúan como mediadoras, poseen un
dominio de represión de la transcripción que evita que la
polimerasa inicie la transcripción.

Factores hetrodiméricos incrementan las posibilidades de

regulación:
 Las características modulares que poseen los factores de
transcripción y las características modulares de los promotores de
las regiones que regulan los promotores (los dominios que
reconocen los factores de transcripción), generan muchas
posibilidades de combinaciones diferentes.
 Las combinaciones distintas de los factores y de los dominios
inhibitorios dan lugar a muchas combinaciones diferentes en un
determinado sitio en el ADN. Por ejemplo: el factor A, actuando
como homodímero, podría regular un sitio; mientras que actuando
con el factor B o C, podría regular un sitio diferente 4 o 5. A su vez,
actuando con factores inhibitorios podría también regular
negativamente la expresión de un determinado gen.

Heterodimerización y asociación cooperativa de factores de

transcripción:
 Los factores de transcripción pueden actuar como moléculas
únicas o actuar como heterodímeros. En este caso, el factor de
transcripción NFAT posee baja afinidad por su sitio blanco en el
ADN para ese gen en particular. El factor de transcripción AP1
también posee baja actividad, baja capacidad de unión al ADN. Sin
embargo, la formación de un dímero entre estos dos factores, hace
que juntos reconozcan con mucha más afinidad un promotor y
sean un buen factor de transcripción para este promotor en
particular. Esto quiere decir que distintas combinaciones de
proteínas pueden dar lugar a la expresión de distintos genes sobre
distintos promotores, sobre distintas líneas en distintas células. En
células donde esta proteína no está activa, o no se expresa, este
promotor se expresa pobremente. Mientras que las células que
expresan los dos factores, muy probablemente expresen muy
fuertemente este promotor.
 Por separado poseen baja afinidad por el sitio específico en el ADN.
Como heterodímero aumenta su afinidad por el sitio en el ADN.
Ejemplos de regulación de la expresión génica:
1. Control transcripcional: genes inducibles en respuesta a
hormonas esteroideas:
 Las hormonas esteroideas provienen del colesterol y son
liposolubles, por lo que son capaces de entrar a la célula
atravesando la membrana plasmática.

1) La hormona por difusión entra la célula blanco,

a través de la membrana.
2) En el citoplasma es reconocida por su
receptor, que entra al núcleo y dimeriza para
unirse al ADN.
3) Así, activa la transcripción de los genes en
respuesta a la estimulación.
4) El transcripto es procesado y transportado al
citoplasma.
5) El ARNm es traducido a proteínas.

 Los receptores de las hormonas esteroideas y de

otras hormonas que son capaces de ser internalizadas al
citoplasma celular, tienen una estructura similar que tiene:

1) Una región de unión al ligando.

2) Una región de reconocimiento del ADN.
3) Una región variable que muchas veces es la zona por la cual
interacciona con otros factores de transcripción para llamar a la
polimerasa a esa región.
 En la imagen se ve la forma en la cual estos factores de
transcripción actúan. En general están unidos a una proteína
inhibitoria. Cuando la hormona está presente en la célula, se une
al factor, este inhibidor se suelta
y así la proteína puede ser
traslocada al núcleo. Allí, actúa
como dímero para el
reconocimiento del elemento de
respuesta en el ADN y activar la
transcripción de los genes.
 Muchas veces, este cambio
conformacional que ocurre
cuando se une el ligando, expone
la región que es necesaria para
la traslocación de la proteína del
núcleo al citoplasma y el dominio
de unión al ADN de esa proteína.
 RESUMIENDO: En presencia de la hormona, el factor de
transcripción pasa de un esta inactivo a un estado activo y es
traslocado al núcleo donde es capaz de activar la transcripción de
los genes que regula.
Genes inducibles en respuesta a hormonas peptídicas:
 Es otro tipo de regulación que ocurre por hormonas peptídicas.
Este tipo de hormonas
son incapaces de
atravesar la membrana y
actúan mediante un
receptor que las
reconoce, este receptor
se ubica en la membrana
celular. Una vez que la
hormona peptídica se
une al receptor, este
receptor se activa
generando una cascada
de señalizaciones, que
lleva a la activación de
genes que están en la vía
de respuesta a la
hormona.
 Estan involucradas en este caso, la transducción de señales desde
el receptor activado y la activación final de los factores de
transcripción que estimulan la expresión de los genes de respuesta
a la hormona.
Transducción de señales y regulación:
 Utilizando como ejemplo la respuesta de las células al interferón
gamma (IFNϒ). En una célula no expuesta la molécula, el receptor
se encuentra formando monómeros en la superficie celular. En
presencia del interferón gamma, el receptor se une y forma un
dímero. Este dímero, hace que la quinasa (denominada JAK) se
active y la quinasa, activa a un factor de transcripción del
interferón gamma a través de la fosfoliración.
 El factor de transcripción fosforilado es capaz de ser traslocado
hacia el núcleo y reconoce los elementos de respuesta activando
la transcripción de los genes de respuesta al interferón.

Unidades de transcripción complejas: A nivel del núcleo celular

ocurren varios mecanismos:
 Mecanismo de maduración diferencial (splicing alternativo).
 Varios sitios diferentes de poliadenilación.
 Varios promotores de uso alternativo.
 Edición del mensajero.
 Combinación de estos mecanismos en la unidad transcripcional.
Splicing alternativo o maduración diferencial del ARNm:
Es un proceso que ocurre co-transcripcionalmente y el cual da lugar,
a partir de un transcripto primario, dos ARNm que codifiquen para dos
proteínas distintas.
 La incorporación de una proteína
que estimula el uso de un sitio de
splicing diferente hace que el ARNm
incorpore un exón (B en la figura) y
se forme un ARNm más largo que da
lugar a un antígeno t, diferente al
que se produce cuando el exón es
cortado como parte del intrón.

Maduración diferencial de un gen para un factor

transcripcional:
 La maduración diferencial explicada antes puede dar lugar a
proteínas con funciones totalmente diferentes, ahora lo
observaremos con el ejemplo de la maduración de un ARNm que
produce un factor de transcripción.
}

 La proteína represora y la activadora competirán por el sitio de

unión al ADN, en caso de estar presente en esa célula.
Poliadenilación alternativa:
Este es otro mecanismo por el cual pueden generarse dos mensajeros
diferentes a partir de una misma unidad transcripcional.
Formas en las que puede ocurrir la poliadenilación
alternativa:
1) Por splicing alternativo se genera un mensajero que incluye un
sitio de poliadenilación (en figura luego del exón 2) u otro sitio de
poliadenilación (en figura luego del exón 3). Se generan dos ARNm
maduros con los exones 1 y 2 o con los exones 1 y 3.

2) En un mismo ARNm (en figura

exón 2) existen sitios distintos de
corte del mismo y de
poliadenilación subsecuente. De
esta forma, si se usa el sitio 1 de
poliadenilación, el exón 2 que
queda en el ARNm será más corto
que si utiliza el sitio 2 de
poliadenilación, el cual dejará un
exón 2 largo. Como consecuencia
se eliminan intrones diferentes y
se generan ARNm distintos los
cuales codificarán proteínas
distintas.
Splicing alternativo y poliadenilación diferencial:
Las unidades transcripcionales complejas suelen sufrir más de un
evento de regulación diferencial, por lo que el splicing alternativo y la
poliadenilación diferencial pueden ocurrir en un mismo ARN
mensajero, provocando la generación de proteínas distintas. Esto
ocurre en el gen de la Calcitonina.
Uso de promotores alternativos y splicing alternativo:
 Agregándole aún más complejidad al sistema, el uso de
promotores alternativos aumenta la cantidad de ARNm posibles de
producir a partir de una misma unidad transcripcional. • Por
ejemplo, una unidad transcripcional por el uso de promotores
diferentes (sitios de inicio) puede generar distintos ARNm que
pueden formar la misma proteína final. Esto genera sitios 5’UTR
diferentes que son blancos de regulación post-transcripcional
alternativos.

 Por el uso de inicios de la transcripción alternativos pueden

generarse proteínas con distinto N terminal. En el que la utilización
de un sitio de inicio de la transcripción o de otro y luego el splicing
de estos sitios, generamos ARNm que llevan en su N terminal
dominios diferentes, produciéndose a partir de un mismo ARNm
una proteína que podría ser anclada a la membrana y una proteína
soluble.

 En este caso observamos que el uso de inicios de la transcripción

genera splicing alternativo de los ARNm, lo cual provoca un
 corrimiento del marco abierto de lectura y por consecuente
proteínas muy diferentes.

Edición (editing) del ARNm:

 Este es otro mecanismo que aumenta el número de proteínas
capaces de producirse a partir de los mismos genes. El mismo
sucede luego de que el ARN se transcribió y procesó.
 En algunos tejidos hay una enzima llamada Citidin Deaminasa que
elimina un grupo amino de la Citidina produciendo una Uridina,
esto genera un cambio en el sentido de los codones. Por ejemplo,
en el gen de la Apo proteína B-100 lo que sucede es que un codón
CAA es editado a un codón UAA, por lo que se genera un codón de
stop y se produce una proteína más corta. Esta proteína más corta
se produce solamente en el intestino, porque son las únicas células
que expresan la enzima Citidin Deaminasa.

Regulación postranscripcional de la expresión génica:

 A nivel postranscripcional hay dos factores principales que actúan
en la regulación de la expresión génica:
- Proteínas de unión al ARN o ARNs pequeños: microARN y ARNsi.
- Estos dos factores intervienen en distintos pasos que sufre el
ARN una vez que está siendo transcripto o luego de ya ser
transcripto y procesado.

 Las proteínas de unión al ARN están

involucradas en:
- Proceso de Splicing. o Transporte
del ARNm desde el núcleo hacia
el citoplasma.
- Estabilidad de los ARNm.
- Localización del ARNm en una
determinada región de la célula.
- Regular la Traducción del ARNm.

 Los ARN pequeños son capaces de

regular la expresión génica en:
- La Transcripción.
- La estabilidad de los ARNm.
- La Traducción.
Regulación de la expresión génica por ARNs pequeños:
 ARN pequeños interferentes: Provienen de un ARN doble
hebra que es cortado por una enzima y luego reconocido por un
sistema de proteínas que por complementariedad de bases se
une al ARNm y lo degrada. Es un sistema de defensa que
utilizan las células contra la infección por virus de ARN.
 ARN micro: Son transcriptos por las ARN polimerasas
eucariotas, es decir, que provienen del genoma eucariota. Estos
ARNs son procesados por la enzima Dicer y luego el mismo
complejo RISC une al micro ARN al ARN mensajero por
complementariedad de bases. En este caso, los micro ARN no
se aparean de forma completa al ARNm, por lo que se define la
inhibición de la traducción de ese mensajero que da lugar a la
degradación del mensajero. Se da un bloqueo de la traducción.
 Otro tipo de ARN interferentes: Interaccionan con el
genoma y un sistema proteico llama a enzimas Metyl
transferasas por lo que el ADN se metila en esa región y
entonces se inhibe la transcripción génica en esa zona.

Regulación de la expresión génica por proteínas de unión al

ARN:
 Transporte: Para ser traducido el ARNm debe ser exportado
desde el núcleo al citoplasma, por lo tanto, las proteínas de unión
al ARN son muy importantes en este paso de la regulación ya que
las mismas determinan qué ARNm va a ser exportado del núcleo al
citoplasma. Si un ARNm queda en el núcleo, no es traducido.
 Estabilidad: Un ARNm que es más estable estará disponible en la
célula durante más tiempo para ser traducido que uno inestable,
esta estabilidad del ARNm en la célula depende de cuáles son las
proteínas que se unen a él. Hay algunas secuencias que están en
la región 3’UTR y 5’UTR que son reconocidas por proteínas que
desestabilizan a los ARNm haciendo que su vida media sea corta
para que se utilicen poco y produzcan poca proteína. De manera
contraria, hay elementos que actúan como estabilizadores que
reclutan proteínas que lo estabilizan para que sea traducido con
mayor eficiencia y cantidad.
 Localización: La localización sub-celular de los mensajeros en las
regiones donde se requiere la proteína, incrementa la eficiencia y
velocidad de la expresión génica. De esta forma como no se
traduce y luego recién se mueve la proteína, se logra ahorrar el
traslado porque ya se forma la proteína en su lugar. REGULONES
TRANSCRIPCIONALES.
 Traducción: El inicio de este mecanismo está muy regulado en las
células eucariotas y además se ha descrito la especialización de
los ribosomas, no todos los ribosomas traducen todos los
mensajeros, debido a que existen variantes ribosómicas que
traducen determinados mensajeros en las células.
Regulones postranscripcionales:
 Las proteínas de unión al ARN regulan ARNm que produzcan las
proteínas ribosomales. A partir del genoma se producen varios
ARN distintos que pueden llevar en sus regiones UTR zonas de
reconocimiento para una determinada proteína, y entonces esta
proteína generaría un regulón postranscripcional.