REPLICACION:
La replicación del ADN y medicina:
• La replicación del material genético es esencial a la vida.
• Errores en la replicación son el origen de las enfermedades
hereditarias.
• Errores en la replicación son causa primarias de canceres.
• Existen patologías por incapacidad de reparar errores cometidos
en la replicación.
• Los patógenos también replican. Entender estos procesos permite
OM
establecer terapias específicas para detener la replicación del
ADN de esos patógenos.
• Muchos antibióticos inhiben la replicación de microrganismos.
.C
DD
Modelos de replicación.
LA
• Replicación conservativa: en este modelo una molécula
de ADN original se va a replicar, sirviendo de molde para
generar otra molécula nueva. La molécula original se
conserva intacta luego de la replicación. Como
FI
resultado obtendremos dos moléculas (la original y la
sintetizada). En la segunda ronda de replicación ocurre
lo mismo, la molécula a dividirse va a permanecer
intacta y se va a generar una molécula 100% nueva.
Este archivo fue descargado de https://filadd.com
• Replicacion dispersiva: tenemos la molecula de
ADN orginal, esta molecula para su replicacion se
fragmenta y estos fragmentos se usan como moldes
para poder sintetizar el ADN. Entonces vamos a
tener dos moleculas, que cada una de ellas va a
estar compuesta por fragmentos alteraciones de
ADN orginal y ADN recien sintetizado.
OM
• Replicación semiconservativa: la molécula
.C
de ADN original para ser replicada se va a separar,
se van a desarrollar dos hebras y cada una de estas
hebras van a servir como molde de la síntesis de
ADN hijas en las cuales cada una de ellas va a tener
DD
una hebra entera original y la otra hebra entera
recién sintetizada nueva.
LA
• Estos modelos nos permiten hacer predicciones de cómo va a ser
la distribución del ADN original y el ADN recién sintetizado después
de la replicación.
FI
Replicación conservativa:
• Moléculas con 100% de ADN original.
• Moléculas con 100% de ADN sintetizado.
Replicación dispersiva:
• 50% de ADN original y 50% de ADN sintetizado a lo largo de la
molécula.
Replicación semicoservativa:
• 50% de ADN original y 50% de ADN sintetizado a lo largo de la
molécula.
• La diferencia entre la dispersiva y la semiconservativa es que en la
última tenemos una hebra completa original y una hebra
Este archivo fue descargado de https://filadd.com
completa nueva. Mientas que en la dispersiva tenemos una hebra
con fragmentos originales y nuevos.
El experimento de Meselson y Stahl:
Buscaban saber cuál era el modelo que se ajustaba más a lo que se
ve en la naturaleza. Llegaron a la conclusión de que el modelo
semiconservativo era el que mejor se ajustaba.
La replicación es semiconservativa:
• Cada hebra se usa como molde para sintetizar otra.
OM
• Los nucleótidos se unen y se van sintetizando por
complementariedad de bases.
• Se sintetiza una cadena nueva a partir de cada hebra vieja.
• Se respeta la disposición antiparalela de las hebras.
Orígenes, burbujas y horquillas de replicación.
.C
Replicación en procariotas: la replicación siempre se va a
iniciar en orígenes de replicación. En el caso de los
procariotas se va a abrir en lo que se conoce como
DD
burbuja de replicación, que se va a ir agrandando a
medida que la replicación avanza y va a crecer hasta
completar todo el cromosoma. A esa unidad de
replicación se la va a llamar REPLICON. Los procariotas
tienen un único origen de replicación.
LA
Replicacion en eucariotas: los cromosomas son lineales y tienen varios
origenes de replicacion. Van a haber varias burbujas de replicacion
simultaneas a lo largo de toda la molecula de ADN y entonces se
puede decir que van a haber varios replicones. Se van a resolver estas
FI
burbujas cuando se encuentren una con la otra.
Burbuja de replicación: cuando se encuentra el origen de replicación lo
primero que se tiene que hacer es desenrollar el ADN para poder
separar esas dos hebras. Una vez que se separan podemos decir que
tenemos la burbuja de replicación que va a estar compuesta por dos
horquillas y estas se van a mover en ambas direcciones, la horquilla 1 se
va a mover hacia la izquierda y la 2 hacia la derecha, es por esto que
decimos que la replicación es bidireccional.
Este archivo fue descargado de https://filadd.com
• La replicación se inicia en sitios particulares (orígenes de
replicación).
• Cada origen define un replicón (unidad de replicación
OM
independiente).
• A partir de cada origen la replicación avanza bidireccionalmente.
• Se forma una burbuja de replicación formada por dos horquillas
que avanzan en direcciones opuestas.
Replicación del ADN circular y lineal.
.C
Cromosoma bacteriano: replicación de tipo THETA. La burbuja va a ir
avanzando hasta que finalmente este todo el replicón ya replicado, por
lo tanto, lo que queda es separar las dos moléculas. Cada molécula
DD
(cromosoma bacteriano) resultante va a tener una hebra original y una
hebra nueva recién sintetizada.
LA
FI
• A partir del origen de replicación se desenrolla el ADN y se forma la
burbuja de replicación.
Este archivo fue descargado de https://filadd.com
Cromosoma eucariota: lineal. La
replicación se realiza usando varios
orígenes de replicación, esto va a hacer
que la replicación se pueda cumplir en
cuestión de minutos. En cada origen el ADN
se va a desenrollar y se va a producir la
burbuja de replicación y la replicación se
llevará a cabo en cada extremo de la
burbuja, ósea en las dos hebras de cada
horquilla y cada una de estas horquillas van
OM
a avanzar en ambas direcciones.
Eventualmente las burbujas se van a juntar
y van a terminar uniéndose. Esto se hace
hasta que se unan todas las burbujas y
queden las dos moléculas hijas formadas.
.C
DD
Reacción de síntesis: el proceso de replicación incluye muchos
componentes y estos pueden ser combinados en tres grupos generales:
1. Utilizamos un molde de ADN simple.
2. Vamos a precisar la materia prima (sustratos) que son los que van a
ensamblar una hebra de ADN nueva.
LA
3. Todas las enzimas y proteínas que van a leer el molde y ensamblar
esos sustratos en una molécula de ADN.
• El ADN nuevo sintetizado a partir de desoxirribonucleico trifosfato, tiene
FI
una desoxirribosa como azúcar que está caracterizada por tener un
grupo H en el carbono 2 en vez de OH. Además, tiene una base y un
grupo fosfato. La hebra sintetizada va a ser la que va a generar siempre
en dirección 5’------------3’. Se va a sintetizar está hebra a partir de una
hebra molde por complementariedad de bases. En el extremo 3’ es
donde se van a ir agregando los nucleótidos nuevos.
• En la síntesis de la nueva cadena se generan enlaces fosfodiéster
covalentes y puentes de hidrogeno que se forman entre las bases
complementarias.
La replicación es semidiscontinua:
• Todas las polimerasas catalizan la elongación de cadena en
dirección 5’----------3’.
• Las dos hebras están orientadas en dirección antiparalela.
• Solo una hebra avanza continuamente leyendo una hebra molde
en dirección 3’-----------5’ (hebra líder).
Este archivo fue descargado de https://filadd.com
• La hebra complementaria se debe sintetizar en fragmentos
discontinuos.
OM
La hebra retrasada se sintetiza en fragmentos de Okazaki.
•
• .C
En la hebra retrasada la síntesis no se puede iniciar a no ser que se
encuentre un extremo 3’ OH libre.
Para que la síntesis comience una vez que la horquilla avanzo,
DD
tiene que generarse ese extremo 3’ OH libre para que se pueda
empezar a sintetizar.
• Una vez sintetizado se puede generar nuevamente un fragmento
hasta que se encuentre con otro ya sintetizado.
• La hebra retrasada siempre se sintetiza en sentido contrario en la
LA
dirección en la cual va creciendo la horquilla. Es por esto que la
síntesis es discontinua y se fragmenta en segmentos llamados
“fragmentos Okazaki”.
La replicación es un proceso complejo.
FI
Señales: de iniciación o terminación.
• Ori C (inicio).
• Ter (final).
Enzimas principales:
• ADN polimerasa.
• Primasas.
• Ligasas.
• Helicasas.
• Topoisomerasas.
Este archivo fue descargado de https://filadd.com
El mecanismo de replicación.
Iniciación:
• Reconocimiento de orígenes de replicación.
• Separación de hebras.
• Posicionamiento de maquinaria de replicación.
Elongación:
• Crecimiento bidireccional de las horquillas.
• Replicación semiconservativa, semidiscontinua y coordinada.
OM
Terminación:
• Reconocimiento de señales de terminación.
• Desensamble de replisomas (todas las proteínas se
desensamblan).
•
.C
Inicio de la replicación en procariotas: separación de hebras.
Una proteína iniciadora (DnaA) va a reconocer el sitio de origen de
la replicación (Ori C) y en el lugar donde lo reconozca esta proteína
DD
se va a unir a este sitio superenrollado el ADN.
• Ese superenrollamiento genera tensión, la misma hace que se disocie
la molécula de ADN, sobre todo en las regiones de los repetidos que
son ricos en Adenina y Timina.
• Cuando se abre esa porción pequeña de ADN, es cuando pueden
LA
entrar las proteínas helicasas, las cuales son responsables de
mantener desenrollado el ADN y las disociar las hebras.
• Cuando se unen las helicasas, también se asocian proteínas de unión
a cadenas simples de ADN. Estas proteínas evitan que se formen
FI
estructuras secundarias como por ejemplo horquillas que puedan
interferir con el proceso de replicación.
Helicasa: separación de las hebras de ADN:
• Una vez que una helicasa se une al ADN, por un proceso que
consume ATP, va a disociar las dos hebras. Separando y rompiendo
los puentes de hidrogeno que existen entre las bases.
• Se unen a la hebra molde de la hebra retrasada de cada horquilla y
va a avanzar en dirección 5’--------3’. Ayudan a mover las horquillas
de replicación en direcciones opuestas.
• El ADN en cromosoma bacteriano, cuando se hace una burbuja de
replicación, por causa de las helicasas se desenrolla una región y a
su vez se genera un superenrollamiento en todo el resto de la
molécula. Esto genera torciones que complican la replicación del
ADN, es por esto que también participan otras enzimas llamadas
GIRASAS.
Este archivo fue descargado de https://filadd.com
Girasas (topoisomerasa II):
• Desenrollan todas las tenciones que se generan durante la
replicación.
• Las girasas se unen al ADN superenrollado, generan como unos
“bucles” en él y generan un corte doble hebra. Una vez
cortado el ADN, lo giran desenrollándolo y vuelven a unir la
molécula de ADN, reparando ese corte doble hebra que
hicieron. Como resultado queda una molécula de cromosoma
bacteriano que ya no tiene ese superenrollamiento.
OM
Primasas: síntesis del cebador:
• Son las encargadas de generar cebadores (oligonucleótidos).
• Todas requieren nucleótidos que tengan un grupo 3’ OH libre
sobre el cual puedan agregar un nuevo nucleótido. No pueden
iniciar la síntesis de ADN ellas solas.
•
•
.C
Sintetizan pequeños fragmentos de nucleótidos (cebadores u
oligonucleótidos), los cuales hacen que la síntesis pueda iniciar.
Sintetiza un pequeño fragmento de nucleótidos de ARN (aprox 10
DD
o 12 nucleótidos de largo) y lo hacen por complementariedad de
bases usando como molde a la hebra de ADN.
• En la hebra líder la primasa va a tener que colocar ese
oligonucleótido solamente en un sitio de origen de la replicación.
• En la hebra retrasada va a tener que colocar el oligonucleótido
LA
varias veces y va a quedar al principio de cada fragmento
Okazaki. El oligonucleótido siempre va a estar en dirección 5’----3’.
Elongación:
• A medida que avanza la horquilla de replicación, la hebra líder
FI
avanza sin complicaciones, sin detenerse y de manera
continua, también va creciendo. Al finalizar el proceso queda
con una cadena única.
• La hebra retrasada a partir de oligonucleótidos de ARN va a
generar una molécula de ADN hasta que se le acabe el
molde. Una vez que la horquilla avanza, la primasa puede
generar otro oligonucleótido y a partir de él se genera la
polimerasa 3’, que va a estar generando otro fragmento. Así
continuamente.
Este archivo fue descargado de https://filadd.com
ADN polimerasa I.
Actividad polimerasa:
• Necesita Mg como cofactor.
• La energía es provista por PPI (grupo trifosfato).
• El ADN actúa como molde.
• Necesita un cebador que ofrezca un extremo 3’ OH libre para
agregar nucleótidos.
• La elongación ocurre en dirección 5’----------3’.
• Corrige errores en dirección 3’---------5’.
OM
Actividad exonucleasa:
• Una vez que va sintetizado los nucleótidos y detecta un error en la
hebra nueva, detiene la síntesis y corrige ese error. Entonces pasa
del sitio donde está polimerizando al sitio activo para eliminar los
.C
nucleótidos, el sitio exonucleasa.
• Retrocede en dirección 3’--------5’, corrige el error eliminando el
nucleótido incorrecto y vuelve a reanudar la síntesis en dirección
5’------3’ para continuar.
DD
Actividad de reemplazo de cebadores:
• Exclusivo de la polimerasa I.
• Cuando va sintetizando el ADN si se encuentra con el cebador de
ARN, va a poder sacarlo, desplazarlo. A esta propiedad se la
LA
llama “Nick traslation”. Va remplazando y sintetizando por
complementariedad de bases la hebra nueva.
• Puede remplazar los cebadores de ARN por hebras de ADN.
• El remplazo de cebadores es una de las funciones principales del
FI
ADN polimerasa I.
ADN polimerasa III:
• La DNA pol III es la enzima principal en la replicación.
• Multimerica, con varias subunidades (con funciones distintas).
• El cargador de anillo hace que tengan una buena procesividad
de enzimas.
Este archivo fue descargado de https://filadd.com
El anillo corredizo y la procesividad.
• El Core no tiene afinidad con el ADN.
• Enzima multimerica, pieza clave en la replicación.
• El Core de DNA Pol III es poco progresivo
• El anillo corredizo asegura una muy alta procesividad (tiene
afinidad).
Avance de la horquilla de replicación:
• La DNA Pol III funciona como dímero.
OM
• Las hebras crecen de modo coordinado, avanzando en la
dirección de la horquilla.
• En la hebra retrasada, la hebra molde forma un bucle.
Resolución de la replicación en la hebra retrasada:
• Vamos a tener la hebra líder que tuvo una síntesis continua y una
•
.C
hebra retrasada que tuvo una síntesis discontinua.
La polimerasa de ADN de manera simultánea va a eliminar los
cebadores y va a rellenar los espacios que quedan con
DD
nucleótidos de ADN.
• Luego de que se eliminaran todos los nucleótidos queda un
hueco entre un fragmento Okazaki y el anterior.
• La enzima amilasa sella este hueco con un enlace fosfodiéster
entre el grupo fosfato 5’ con el grupo 3’ OH del nucleótido
LA
siguiente.
Terminación:
• Secuencias terminadoras.
• Retienen las horquillas de replicación.
FI
• Contienen secuencias que facilitan la decantación y separación
de los cromosomas resultantes.
• Requieren elementos de terminación particulares.
Replicación eucariota VS procariota:
• Los genomas eucariotas son más grandes, por lo tanto, tienen más
orígenes de replicación.
• Cromosomas eucariotas lineales.
• El ADN eucariota se asocia con histonas.
• La polimerasa que sintetiza la hebra líder no es la misma que
sintetiza la hebra retrasada en eucariotas.
Este archivo fue descargado de https://filadd.com
Replicación en los telómeros.
Telomerasa:
• Enzima que cataliza la síntesis de los extremos.
• Ribozima que contiene una molécula de ARN que sirve como
molde.
• El ARN guía la adición de nucleótidos correctos.
• Niveles variables de la actividad de la telomerasa.
• Regulan el envejecimiento y la división celular.
• La telomerasa se expresa en casi el 90% de todos los canceres.
OM
• Los telómeros por su composición de bases forman estructuras de
ADN no convencionales que son diferentes a las encontradas por
el modelo de Watson y Crick.
Replicación de la cromatina: cuando sucede la replicación del ADN las
histonas forman los nucleosomas, los cuales tienen que disociarse para
.C
permitir que la replicación ocurra. Entonces eliminan las histonas y luego
de que se sintetizaron las hebras nuevas van a reasociarse para
ensamblarse, ayudados por factores de ensamblaje de la cromatina,
DD
formando nucleosomas usando histonas ya existentes y nuevas.
Fidelidad de la replicación:
• Esta dada por la actividad exonucleasa 3’-------5’.
• Requerimiento de cebadores.
LA
• Imposibilidad de la polimerasa de agregar nucleótidos si no hay
apareamiento exacto en los nucleótidos previos.
• Implica la imposibilidad de replicación en dirección 3’--------5’.
FI
Este archivo fue descargado de https://filadd.com
