Técnicas Moleculares

Técnica Principio Uso

PCR La PCR es una técnica que permite Se usa para caracterizar
amplificar uno o más genes microorganismos que son difíciles de
específicos, como el gen SSU rRNA, a cultivar en el laboratorio.
partir de un DNA genómico aislado.
Utilizando cebadores específicos que
se unen a la región de interés y la
reacción de PCR amplifica la
secuencia de DNA entre los
cebadores.
Alineación de La alineación de secuencias es el El uso de la alineación de secuencias
secuencias proceso de agregar huecos a las es fundamental para realizar análisis
secuencias moleculares para filogenéticos precisos. Se utiliza para:
establecer homologías posiciones. El o Establecer homologías
objetivo es asegurarse de que cada posiciones entre secuencias
posición de la secuencia se heredó moleculares.
de un antepasado común de todos o Asignar errores y huecos
los organismos en estudio. causados por deleciones.
o Realizar análisis filogenéticos
que calculan cambios
evolutivos a partir del número
de diferencias de secuencia.
o Analizar genes ortólogos que
tienen funciones similares.
Análisis El Análisis de Secuencias Multilocus El análisis permite distinguir entre
multilocus de (MLST) es un método que implica la organismos emparentados y asignar
secuencias secuenciación de varios genes un perfil alélico (tipificación de
constitutivos diferentes de varios secuencia multilocus) a cada cepa.
organismos emparentados. Este perfil consiste en una serie de
Los genes codifican funciones números que representan la
esenciales de las células y siempre combinación particular de alelos, el
están localizados en el cromosoma. grado de parentesco entre los perfiles
Se amplifica y se secuencia un alélicos se expresa en un
fragmento de aproximadamente 450 dendrograma de distancias genéticas.
pares de bases para cada gen.
La huella La huella genómica es un método La huella genómica se utiliza para
genómica: para evaluar polimorfismos entre evaluar polimorfismos entre cepas,
PCR cepas. Se generan fragmentos de identificar especies diferentes,
DNA a partir de genes individuales o diferenciar entre cepas diferentes de
genomas completos, y la una misma especie, en análisis
secuenciación de los genes es microbianos de alimentos, agua y
posible gracias a la amplificación de bebidas, y en el diagnóstico clínico
fragmentos génicos por PCR. para la identificación rápida de
patógenos.
La huella El ribotipado es un método de El ribotipado se utiliza para la
genómica: obtención de huella genómica identificación rápida de especies
Ribotipado basado en la localización de los diferentes e incluso de cepas
genes SSU rRNA en fragmentos del diferentes de una misma especie, y en
genoma. análisis microbianos de alimentos,
agua y bebidas.
Huella El método rep-PCR se basa en la Se utiliza para identificar y diferenciar
genómica: presencia de elementos repetitivos cepas bacterianas, lo cual es útil en la
PCR de de DNA muy conservados en el identificación de patógenos.
secuencias cromosoma bacteriano. Se utilizan
palindrómicas cebadores oligonucleotídicos para
extragénicas amplificar por PCR fragmentos
repetitivas genómicos que se encuentran entre
los elementos repetidos. Los
productos de PCR se visualizan
mediante electroforesis en gel, lo que
muestra un patrón de bandas que se
puede usar como huella genómica.
Huella El método AFLP se basa en la Permite distinguir y diferenciar entre
genómica: digestión del DNA genómico con una cepas diferentes dentro de una misma
polimorfismo o dos enzimas de restricción. Se especie.
de la longitud amplifican selectivamente por PCR
de los fragmentos resultantes, que
fragmentos después se separan mediante
amplificados electroforesis en gel de agarosa.
Se generan patrones de bandas
específicos de cada cepa, que se
pueden utilizar para discriminar entre
cepas de una misma especie.
Análisis El análisis multigénicos y de Se pueden utilizar para la
multigénicos genomas completos se basa en la reconstrucción metabólica y la
y de genomas secuenciación y análisis de múltiples caracterización de rutas genéticas.
completos genes o de genomas completos para Estos análisis han revelado la
obtener información sobre la importancia crucial de la transferencia
estructura, función y evolución de los horizontal de genes en la evolución
genes y genomas. microbiana y han demostrado la
Este análisis implica la utilización de naturaleza extremadamente dinámica
técnicas de secuenciación de ADN de de los genomas microbianos.
alta velocidad y capacidad, como la
secuenciación masiva paralela, para
obtener la secuencia de nucleótidos
de múltiples genes o de genomas
completos.
El análisis Se basa en la comparación de la El análisis comparativo del contenido
comparativo secuencia de ADN o ARN de génico se utiliza para:
del contenido diferentes organismos o cepas para o Investigar la evolución y
génico identificar similitudes y diferencias en función de los genes y
su contenido génico. secuencias génicas.
o Extracción del ADN o ARN. o Diagnosticar y identificar
 o Secuenciación del ADN o ARN patógenos.
extraído para obtener la o Desarrollar vacunas y
secuencia de nucleótidos. tratamientos.
o Alineación de las secuencias o Estudiar la diversidad génica y
de ADN o ARN de las la conservación de la
diferentes muestras para biodiversidad.
identificar similitudes y o Aplicaciones en medicina,
diferencias. agricultura, biología sintética y
o Análisis de la similitud entre conservación de la
las secuencias alineadas para biodiversidad.
identificar regiones
conservadas y divergentes.
o 5. Interpretación de los
resultados del análisis para
entender la relación entre las
muestras y la evolución de los
genes y secuencias génicas.
Sintenia La Sintenia se basa en la síntesis de La Sintenia se utiliza para:
proteínas a partir de ARN mensajero o Estudiar la síntesis de proteínas
(ARNm) utilizando un sistema de en un entorno controlado.
traducción in vitro. El proceso implica o Analizar la función de genes y
la unión del ARNm a los ribosomas, proteínas en la célula.
que luego traducen la secuencia de o Desarrollar vacunas y
nucleótidos en una secuencia de tratamientos contra
aminoácidos, formando una proteína. enfermedades.
o Estudiar la interacción entre
proteínas y otros componentes
celulares.
Contenido en El principio del contenido en GC del El contenido en GC del genoma se
GC del genoma se basa en la proporción de utiliza para:
genoma bases nitrogenadas guanina (G) y o Identificación y clasificación de
citosina (C) en el ADN de un organismos en diferentes
organismo. Esta proporción puede grupos taxonómicos.
variar entre diferentes especies y o Estudio de la evolución y la
puede ser utilizada para identificar y filogenia de los organismos.
clasificar organismos. o Análisis de la estructura y la
función del genoma.
o Desarrollo de herramientas
para la detección y el
diagnóstico de enfermedades.
Éster Metílico El análisis de ácidos grasos, también El análisis FAME se utiliza
de Ácidos conocido como FAME (Éster Metílico ampliamente en laboratorios clínicos,
Grasos de Ácidos Grasos), es una técnica de salud pública, inspección
utilizada para identificar y alimentaria y de aguas, donde es
caracterizar bacterias. común identificar patógenos de
Técnica de análisis manera rutinaria.
o Los ácidos grasos se extraen
del hidrolizado de células de
un cultivo en condiciones
 estándar.
o Los ácidos grasos se volatilizan
y se analizan por
cromatografía de gases.
o El cromatograma que muestra
los tipos y cantidades de
ácidos grasos se compara con
una base de datos de perfiles
de ácidos grasos de bacterias
de referencia.
o El grado de variación de los
perfiles FAME entre cepas de
una especie aún no está bien
documentado.