HEMOGRAMA

Es el examen que evalúa los elementos de la sangre en forma cuantitativa y cualitativa

•Coadyuvante en el diagnóstico y control evolutivo de numerosas patologías y su tratamiento:

enfermedades infecciosas y crónicas, emergencias médicas, quirúrgicas y traumatológicas, así
como quimioterapia y radioterapia etc…

Muestra
Sangre recogida en tubo con anticoagulante EDTA sódico o potásico.
• El volumen recomendado para el tubo debe ser respetado
• El paciente debe estar en ayunas de 3-6h preferentemente, porque de lo contrario la
turbidez del plasma interfiere en la dosificación de la hemoglobina.
• Muestra correctamente rotulada, rótulo manual o código de barras.
• Boleto de pedido: datos patronímicos, fecha y dato clínico, son útiles para poder
interpretar los resultados, podemos recibirlo en papel o en forma electrónica.
• Si se trabaja con un sistema informático, éste debe asegurar la trazabilidad de
la muestra.
• La extracción debe evitar la formación de coágulos o la hemólisis (destrucción de las
células). Mezclar suavemente el tubo para que tome contacto con el anticoagulante.
• CUANDO RECIBIMOS LA MUESTRA PARA PROCESAR EL HEMOGRAMA
CONTROLAMOS EL RÒTULO Y NO DEBE PRESENTAR COÁGULOS NI HEMÓLISIS,

Anticoagulante EDTA
EDTA es Ácido Etilén Diamino Tetra Acético de sodio o
potasio.

• IMPIDE LA FORMACIÓN DE COÁGULOS UNIÉNDOSE CON EL

CALCIO. ES UN AGENTE QUELANTE.

• Forma quelatos insolubles con las moléculas de calcio

presentes en la sangre, impidiendo que se desencadene la
coagulación.

• Permite una mejor conservación de la morfología celular

que otros anticoagulantes
- El hemograma actualmente se realiza en aparatos automatizados que utilizan métodos
conteo multiparamétricos.
- Obtenemos informes en pantalla imprimibles como a continuación vemos…
Pasos en los sistemas automatizados
1- Aspiración y fraccionamiento de la muestra
2- Procesamiento de la muestra
3- Análisis de la célula o parámetro de interés
4- Procesamiento de las señales y emisión de resultados

1- Aspiración y fraccionamiento de la muestra

- Dependiendo del modelo, la sangre es homogeneizada y aspirada automáticamente.

- Pueden tener dos sistemas de aspiración de la muestra: abierto o cerrado. En el modo

abierto el operario mezcla y destapa el tubo. En el modo cerrado la máquina lee el código
de barras antes o después de mezclar por inversión el tubo, pincha el tapón y aspira la
muestra.

- La muestra aspirada es fraccionada para realizar las respectivas diluciones, por una válvula
de segmentación. Se utilizan distintas diluciones para el recuento celular y la dosificación
de hemoglobina.

2- Procesamiento de la muestra
- En cada canal de procesamiento, la muestra es diluida en líquido isotónico, para facilitar la
medición de interés, puede ser coloreada o se lisan determinadas células para permitir el
conteo de otras.

3- Análisis de la célula o parámetro de interés

- Comprende el recuento, medición del tamaño o contenido celular por medio de distintos
métodos.

- Los datos obtenidos son analizados por el software.

4- Procesamiento de las señales y emisión de resultados

- Las señales eléctricas u ópticas que llegan al software son traducidas a resultado que se
expresan en células por mm3 o ul, porcentajes de células, hemoglobina en g/dl, índices,
histogramas y alarmas (flags) de alteraciones.
TECNOLOGÍAS TALES COMO:
-Pulsos de impedancia

-Onductividad eléctrica

-Análisis de dispersión de luz en varios ángulos

-Dispersión y absorbancia de luz láser tras reacción con mieloperoxidasa [mpo)

-Dispersión de luz polarizada

-Evaluación de fluorescencia tras tinción supravital del arn

PULSOS DE IMPEDANCIA
Los glóbulos (no conductores) al cruzar un orificio por el
cual fluye una corriente continua (pricipio coulter)
causan una oscilación de la corriente generada por la
célula cuando pasa por el campo eléctrico estático.

Genera un pulso directamente proporcional al tamaño

de la partícula.
CONDUCTIVIDAD ELÉCTRICA
Conductividad eléctrica de los glóbulos en radiofrecuencia:

• las células, suspendidas en el diluyente que es conductor eléctrico, pasan por un orificio o
pequeña apertura y según su estructura interna, generará resistencia eléctrica, permitirá
diferenciar los distintos tipos de leucocitos, por ejemplo, detectaremos complejidad
celular.

• A medida que cada célula pasa aumenta la impedancia eléctrico o resistencia.

• Estos cambios se convierten a una señal que luego veremos en un histograma.

Hay dos electrodos situados a cada lado de la apertura, con un voltaje continuo, cuando pasa la
célula produce cambio del voltaje.

La conductividad celular se determina por la corriente alterna (RADIOFRECUENCIA) que penetra

atravesando la bicapa lipídica celular, emitiendo señales eléctricas según la composición interna,
tanto la composición química como la nuclear.

ANÁLISIS DE DISPERSIÓN DE LUZ EN VARIOS ÁNGULOS

Un foco luminoso de tungsteno o láser enfocado sobre la célula se dispersará en varios ángulos de
las que se detectarán la luz dispersa en ángulo lateral (SSC Side scattered light) y la luz dispersa
frontal (FSC forward scattered light)

Éstos datos se convierten en pulsos que se analizan con el software del equipo.
DISPERSIÓN Y ABSORBANCIA DE LUZ LÁSER TRAS REACCIÓN CON MPO
• Mediante el contenido de mieloperoxidasa de los leucocitos, éstos son identificados

• Reacción con 4-cloro-1 -naftol y peróxido de hidrógeno, luego la actividad catalítica de la

mpo de los gránulos de los leucocitos produce un precipitado de color oscuro proporcional
a la concentración de mpo.

• Linfocitos no tienen mpo

• Monocitos poca actividad peroxidasa

• Neutrófilos y eosinófilos gran cantidad de mpo

• Se pueden detectar deficiencias funcionales de peroxidasa

DISPERSIÓN DE LUZ POLARIZADA MAPSS separación de la luz polarizada en

múltiples ángulos
- Identificación de CÉLULAS por
dispersión de luz polarizada

fluorescencia
Colorantes más utilizados: tiazol naranja, auramina O, CD4K530, colorante de polimetina,
clorifosfina O, acridina naranja…

Estos colorantes tiñen el ARN y luego frente a un haz de luz, emitirán fluorescencia, midiéndose la
intensidad de la misma.
Enfoque hidrodinámico
- Metodología que se utiliza para lograr que las células pasen una a una frente a el rayo de
luz que se utiliza para su estudio.

- La suspensión celular se bombea hacia la cámara de flujo especial, con un pequeño orificio
en su extremo, ésta se inyecta a través de una corriente de líquido en movimiento rápido
(exento de partículas, reactivo envolvente), como viajan a velocidad diferente estos dos
líquidos no se mezclan entre sí, obligando a las células a disponerse en una sola fila.

Contadores hematológicos
En general utilizan una mezcla de estas tecnologías de detección de células junto con el uso del
enfoque hidrodinámico.

La hemoglobina se mide espectrofotométricamente previa mezcla con reactivos que la

transforman en un compuesto coloreado como: lauril sulfato o reactivos con cianuro que la
transforman en cianmetahemoglobina…

Gráficos de resultados - HISTOGRAMAS DE PUNTOS:

HISTOGRAMAS

• Los datos se disponen ilustrando DOS PARÁMETROS PARA CADA CÉLULA

COMPLEJIDAD hace referencia al contenido interno de

la célula, núcleo gránulos

HISTOGRAMAS DE DISTRIBUCIÓN DE FRECUENCIA NÚMERO DE CÉLULAS VS. TAMAÑO

PARÁMETROS DEL HEMOGRAMA GLÓBULOS ROJOS

ÍNDICES HEMATIMÉTRICOS
- VCM: VOLUMEN PROMEDIO DE LOS ERITROCITOS: calculado: Hto*100/dos primeras
cifras de hematíes.
- En la curva en general gaussiana de los aparatos automatizados es la media o la moda de
los valores según sea la distribución de estos, por lo tanto, se mide directamente
- HCM: Hb Corpuscular Media. HEMOGLOBINA PROMEDIO POR ERITROCITO hb g% /
eritrocitos
- CHCM expresa la cantidad de Hb en gramos de 100 cm3 de sangre en relación a la masa
eritrocitaria, relación masa volumen Hb g%/VCM
- ADE amplitud de distribución de los eritrocitos. En la curva que se forma con el conteo de
eritrocitos, de distribución gaussiana, es el CV coeficiente de variación. Suele verse RDW
(red blood cell distribution width)
PARÁMETROS DEL HEMOGRAMA PLAQUETAS
- PLT recuento plaquetario
- VPM volumen plaquetario medio
- PCT plaquetocrito, volumen de plaquetas expresado en % respecto al volumen total de la
muestra
- PDW ancho de distribución plaquetario, coeficiente de variación del histograma de
plaquetas

Parámetros del hemograma LEUCOCITOS

• Recuento total de leucocitos por mm3 o ul

• Recuento de las subpoblaciones en número absoluto, por mm3 o ul y en % del total de

leucocitos:

• Neutrófilos

• Linfocitos

• Monocitos

• Eosinófilos

• Basófilos

Leucocitos, en casi todos los autoanalizadores tendremos informes de número absoluto y

porcentaje de:

• Neutrófilos inmaduros, en cayado.

• Blastos

• Linfocitos atípicos

Valores de referencia
- Varían con edad y sexo; con la altura en el caso de glóbulos rojos, embarazo, …Hablamos
acá de Variabilidad Biológica (VB) que puede ser individual e intraindividual.
- Se obtienen del estudio de una población normal.
- Cada laboratorio debe realizar la determinación de los valores normales para su población.
- A estos resultados se le suma la variabilidad metrológica.
- Estos valores obtenidos siguen una distribución Gaussiana
Valores aumentados de (por encima del valor normal):
Valores bajos de (por debajo del valor normal):

VCM
• MACROCITOSIS, VCM POR ENCIMA DEL VALOR DE REFERENCIA

• NORMOCITOSIS, DENTRO DE LOS VALORES DE REFERENCIA

• MICROCITOSIS, VALOR DE VCM POR DEBAJO DEL DE REFERENCIA.

• BICITOPENIA: Disminución de 2 de las series, blanca, roja y plaquetas

• PANCITOPENIA: disminución de las 3 series blancos, rojos y plaquetas.

Posibles causas de Falsas plaquetopenias:

1- Formación de coágulos por mala recolección de la muestra.

2- Macroplaquetas. Ej enfermedad de Bernard Soullier
3- Aglutinación de plaquetas por EDTA, fenómeno in vitro, aglutininas que se activan por la
presencia de EDTA y las plaquetas forman conglomerados que no son reconocidos por el
contador.
Se extrae nuevamente sangre en un tubo de crasis (anticoagulante citrato de sodio) para
realizar el recuento plaquetario
4- Satelitismo plaquetario, fenómeno in vitro, se forman agregados de plaquetas
alrededor de los neutrófilos.

Alertas en el hemograma automatizado

• Serie blanca

• IG granulocitos inmaduros

• Blastos

• Glóbulos blancos frágiles

• RRBC glóbulos resistentes a la lisis o NRBC: Glóbulos rojos nucleados

Alertas en la serie roja

• Morfología de glóbulos rojos

Alertas en plaquetas

• Plaquetas grandes

• Acúmulos de plaquetas

Alertas generales
• Error en aspiración de la muestra

• Presencia de coágulos

Posibles causas de Falsa trombocitosis

1- Fragmentos citoplasmáticos (detritus) de leucocitos, en pacientes leucémicos en

quimioterapia …
2- Fragmentos eritrocitarios o microcitosis extrema, anemias microangiopáticas, púrpura
trombocitopénico trombótico (PTT), sídrome hemolítico urémico (SHU) microesferocitosis
hereditaria, interfieren por su tamaño en general menor a 50fl
3- Crioglobulinemias: Las crioglobulinas son Ig que precipitan en el frío.

• si producen precipitados del tamaño de plaquetas interferirán en este recuento.

• Para evitar la interferencia de las crioglobulinas, se realiza la extracción de sangre con el material
a 37°C y se mantiene así hasta su procesamiento.

Interferencia en el recuento de eritrocitos

Crioaglutininas
• Producido por mecanismo inmunológico, son autoanticuerpos contra eritrocitos que
producen su aglutinación. formando conglomerados grandes

• Por tanto disminuye el recuento de eritrocitos

• aumenta el VCM (por los aglutinados)

• Aumento de CHCM muy por encima

• de 35 g%

• Al colocar el tubo de hemograma 30min a 37oC y procesarlo

nuevamente, los valores suelen revertir.

Interferencias en el recuento de glóbulos blancos

- Falso aumento del recuento de glóbulos blancos por crioglobulinas, si estas al precipitan y
forman grumos del tamaño de glóbulos blancos.

- Eritroblastos: interfieren aumentando el recuento por no lisarse con las soluciones

lisantes utilizadas, los autoanalizadores disponen de la posibilidad de realizar el recuento
de glóbulos blancos posteriormente a mayor tiempo de exposición a la lisis.
Otros parámetros que podemos encontrar según el modelo de autoanalizador son:

- Eritrocitos hipocrómicos, porcentaje, indicador de eritropoyesis con déficit de hierro

- Eritrocitos microcíticos, porcentaje

- Recuento de reticulocitos, porcentaje y valor absoluto y porcentaje de poblaciones con

distinto grado de madures según su contenido de ARN,

- CHr-Dosificaciòn de hemoglobina reticulocitaria, independiente d la hemoglobina de los

hematíes. Indicador precoz de la deficiencia de hierro

- MCVr- Volumen corpuscular medio de los reticulocitos