FACULTAD DE CIENCIAS
Análisis Instrumental Grado en BQ
Boletín 3
1.- La determinación de Selenio en muestras alimentarias puede llevarse a cabo después
de destrucción de la materia orgánica, por medida a 525 nm de la fluorescencia del
complejo formado por el Se y el reactivo 2, 3- diaminonaftaleno (2,3-DAN).
La medida de disoluciones patrón del complejo formado a partir de concentraciones
de Se conocidas se recoge en la tabla. De cada patrón se han medido 2 replicados.
Intensidad de Fluorescencia
-1
[Se] µg mL Replicado 1 Replicado 2
0,00 10,0 9,0
0,01 195,0 203,0
0,02 399,0 404,0
0,03 600,0 605,0
0,04 795,0 810,0
0,05 1020,0 1005,0
Calcular la concentración de selenio (en µg/L) en una muestra de leche de la que se
tomaron 25,0 mL y después de eliminar la materia orgánica se llevó dicha alícuota de
muestra a 100 mL. La disolución resultante, tratada de la misma manera que los
patrones, produjo las lecturas siguientes 426,0; 419,0, en sendos replicados.
([Se] = 83,64 µg L-1)
2.- La forma reducida de la nicotinamida adenina dinucleótido (NADH) es un coenzima
importante e intensamente fluorescente. Presenta un máximo de absorción a 340 nm y
de emisión a 465 nm. Se obtuvo el calibrado siguiente con disoluciones de NADH de
las concentraciones indicadas:
[NADH] Intesidad de [NADH] Intesidad de
(µM) Fluorescencia (µM) Fluorescencia
0,100 13,0 0,500 59,7
0,200 24,6 0,600 71,2
0,300 37,9 0,700 83,5
0,400 49,0 0,800 95,1
Calcule la concentración de NADH de una muestra que tratada en las mismas
condiciones produjo una intensidad de fluorescencia de 42,3 unidades.
¿Cuál sería la concentración de NADH en una muestra de suero si para la
determinación de su fluorescencia se tomaron 10 mL de muestra, se diluyeron hasta
250 mL y la fluorescencia de esta disolución dio un resultado de 80,0 unidades?
([NADH] = 0,35 µM; 16,75 µM)
3.- La quinina es un compuesto fluorescente con un máximo de absorción a 322nm y de
emisión a 453nm. A partir de una disolución conteniendo 5 ppm de quinina se
prepararon las correspondientes disoluciones patrón disponiendo las cantidades
indicadas en la tabla y diluyéndolas en todos los casos con H2SO4 0,05 M hasta 25 mL
en matraces aforados. Medida la intensidad de fluorescencia de dichas disoluciones a
453 nm después de haber excitado a 322nm los resultados de la IF se indican en la
tabla.
Volumen (mL) de disolución Intensidad de
(5 ppm) añadida Fluorescencia
0.0 0
1.0 105
2.0 212
2.5 265
3.0 320
4.0 421
5.0 529
Una muestra de tónica se trató de la siguiente manera, se tomaron 10 mL y se
desgasificaron mediante ultrasonicación durante 30 min. La tónica desgasificada se
diluyó con H2SO4 0,05 M hasta 100 mL. La disolución obtenida se midió en las
mismas condiciones que los patrones y arrojó un valor de IF de 220 unidades. Calcule
la concentración de quinina en la muestra de tónica. ([QUIN]=4.16 ppm).
4.- En el caso del problema anterior se realizó una determinación mediante el
procedimiento de adiciones estándar, de manera que a una muestra de tónica
desgasificada y diluida 1:10 con ácido sulfúrico diluido se adicionaron las mismas
cantidades de patrón que en el problema anterior, y los resultados son los de la tabla.
Volumen (mL) de disolución Intensidad de
(5 ppm) añadida Fluorescencia
0.0 223
1.0 325
2.0 432
2.5 485
3.0 545
4.0 645
5.0 750
a/ Calcule por este medio la concentración de quinina en la tónica.
b/ Diga si hay efecto matriz debido a la diferencia entre calibración acuosa y en tónica.
([QUIN] = 4,18 ppm).
5.- La fluorescencia del complejo formado entre Al y Rojo de Alizarina (RA) se usó para
determinar este metal en una muestra de agua de suministro. Los resultados de la IF
para muestras patrón de agua conteniendo cantidades conocidas de Al(III) y tratadas
con RA en exceso se dan en la tabla:
[Al] µg mL-1 IF [Al] µg mL-1 IF
0.00 0 0.20 450
0.04 100 0.24 535
0.08 190 0.28 540
0.12 280 0.32 543
0.16 370 0.36 543
Una muestra de agua conteniendo Al fue también tratada con Rojo de Alizarina en exceso
y produjo una lectura de 789. Dado que el valor de la señal analítica supera el límite
superior de intervalo lineal del calibrado, se procedió a diluir al doble de su volumen
inicial la citada muestra, que una vez medida después de dicha dilución arrojó un valor
de 405.
a/Calcule el límite de detección si 5 blancos distintos, que fueron medidos en las
mismas condiciones que la muestra dieron los siguientes valores de IF: 0, 10, 2, 5, y
1.
b/ Diga cual es el intervalo de linealidad del calibrado.
c/ Calcule la concentración de Al en la muestra.
(a/ LD=0,005 ppm; b/ 0.018 – 0.24 ppm; c/ 0.36 ppm).
