Reactivo de Millón
Es una mezcla de nitrato y nitrito mercúrico disueltos en ácido nítrico concentrado. La presencia,
en la molécula de proteína, de la tirosina produce una coloración roja que se debe a la formación
de nitrotirosina que, por adición de mercurio en el curso del calentamiento, se transforma en una
sal mercúrica de color rojo. Sirve para caracterizar los aminoácidos con grupos fenólicos de las
proteínas. Si en la proteína hay tirosina la reacción da positiva. Este reactivo consiste en una
solución de nitrato de mercurio (II), en solución de ácido nítrico-nitroso, siendo esta la reacción
que da lugar con la tirosina. La reacción da un coágulo blanco que por calentamiento forma un
coágulo color rojo carne que identifica los restos de tirosina.
Grupo funcional
Fundamento
El reactivo millón es una mezcla de nitrato y nitrito mercúrico, obtenido disolviendo mercurio
metálico en ácido nítrico. Añadido a una disolución de proteína, esta precipita y al calentar el
precipitado toma color rojo ladrillo.
La característica de la reacción es el cambio de color del precipitado. El precipitado blanco inicial
es debido a la sal de mercurio (metal pesado) del reactivo. La reacción se da con substancias
aromáticas portadoras ñ de grupos Fenólicos. En las proteínas el constituyente responsable es la
tirosina (debido al grupo hidroxifenilo). El pigmento formado parece ser una mezcla de sales
complejas de mercurio con derivados 3-nitroso-o-benbenzoquinonicos
El reactivo de Millon contiene una mezcla de nitritos y nitratos mercúricos en ácido nítrico
concentrado. Debido a la presencia del grupo fenólico se produce un compuesto de color rojo.
Procedimiento
El Reactivo de Millon se prepara disolviendo una parte de mercurio (Hg) en una parte de ácido
nítrico fumante (HNO3). De esta forma, la presencia de cantidades relativamente altas de
mercurio conduce a la formación de Nitrato de mercurio (I) Hg2(NO3)2 el cual en medio
fuertemente ácido reacciona con el grupo -OH de la tirosina produciendo una coloración roja
característica. Al finalizar la reacción, durante la cual se desprende gran cantidad de óxidos de
nitrógeno, el reactivo se puede diluir con dos veces su volumen en agua y deberá ser decantada
algunas horas después la solución clara sobrenadante. Se deben tomar precauciones para la
correcta eliminación de los residuos de mercurio.
Reactivo compuesto de 10 g de mercurio disueltos en 20 ml de ácido nítrico, diluido todo en 4
volúmenes de agua; muy sensible para descubrir ciertas sustancias orgánicas nitrogenadas, a las
que enrojece.
Reacción que ocurre
La reacción es debida a la presencia del grupo hidroxifenílico (C6H4OH) en la molécula proteica.
Cualquier compuesto fenólico no sustituido en la posición 3,5 como la tirosina, fenol y timol, dan
positiva la reacción. El mecanismo de la reacción es poco conocido, posiblemente por la formación
del complejo óxido de mercurio y fenol.
La evidencia de este tipo de reacción se dará por la presencia repentina de un anillo fenólico en la
muestra como tirosina.
Se necesita seguir la siguiente secuencia:
En tres tubos de ensayo diferentes, cinco gotas de albumina al 1%, gelatina al 1% y añadir a cada
tubo tres gotas del reactivo de Millon.
Mezclar bien y cuando forme un precipitado blanco someter a baño María hasta la aparición de un
color rojo que indica como prueba positiva.
El anillo fenólico tiene un comportamiento característico frente a ala sales de mercurio a pH ácido,
formando complejos color rojo ladrillo con el anillo fenólico de la tirosina y las proteínas que
contiene.
Millon es específica para el grupo fenólico por lo tanto, le dan positiva a todas las sustancias que
poseen esta función, como la Tirosina y todas las proteínas que contengan Tirosina. El primer paso
de la reacción de Millon consiste en la nitraciom del anillo fenólico ñ de la Tirosina, por el ácido
Nítrico del reactivo. La Tirosina nitrada forma complejos con iones de Mercurioso Hg(I) y Mercurio
Hg (II) del reactivo produciendo un precipitado Rojo o una solución roja, ambos resultados
positivos.
