Caldo nutritivo Polvo de Agar

8 g Pasta 1000 mL Agua 17 g Agar 1000 mL Agua

X 40 mL Agua X 40 mL Agua

(8 g) (40 mL) 0.32 g (17 g) (40 mL) 0.68 g

= Caldo nutritivo = Polvo de
(1000 mL) deshidratado (1000 mL) Agar

1 mL Diluciones seriadas
muestra
biologica 1 mL 9ml H20
1 mL 1 mL 0.9% P/V
muestra 1 mL Dilucion 1 mL Dilucion
Dilucion +
10
-1
Dilucion 10
-2
1 mL
10
-1
10
-2
Dilucion
10
-3

n
Dilucion Dilucion Dilucion
10
-3
10
-1
10
-2

9ml H20 9ml H20 9ml H20 Tubo final

0.9% P/V 0.9% P/V 0.9% P/V (10 mL)

Siembra por agotamiento de estrias

1
2
3

Colocar
Preparacion de caldo nutritivo
Encender recipiente Pesar
y tarar material Autoclavar
121°C por Enfriar y servir en Incubar por
15 minutos un disco de petri 24 horas
esteril

Llevar materiales a un Diluir Enfriar y

erlenmeyer y agregar en placa de reservar
agua calentamiento
 Colocar
Preparacion de medio liquido
Encender recipiente Pesar Llevar materiales a un Diluir
y tarar material erlenmeyer y agregar en placa de Enfriar y Autoclavar
reservar a 121°C por Enfriar y
agua calentamiento fraccionar Incubar por
15 minutos 24 horas

Medio Tomar una

previamente gota del
inoculado medio
Sembrar por
estria de
agotamiento

Sembrado
de medio
liquido Esterilizar el
asa en llama
directa

Tincion de Gram

Preparacion de la muestra
Agregar y esparcir una
gota de la muestra en
una lamina
Centrifugar
Tomar
muestra Fijar la gota
desde el con calor
medio

Diluir en Eliminar el Secado al

NaCl al sobrenadante aire libre
0.9% y resuspender

Procedimiento de tincion
(1) (2)

Añadir gotas Dejar actuar Enjuagar con agua para Añadir gotas Dejar actuar Enjuagar con agua para
de cristal por 1 minuto retirar el reactivo de lugol de por 1 minuto retirar el reactivo
violeta Gram

(3) (4)

Añadir gotas de 5 Seg Enjuagar con agua para Añadir gotas 30 Seg
Alcohol-Acetona retirar el reactivo Enjuagar con agua para
de Safranina retirar el reactivo
 Tincion negativa
Fijar la gota
con calor
Agregar y
esparcir una
gota de la Observar al
muestra en una microscopio
lamina Secar al aire
libre
Añadir gotas
de Nigrosina

Tincion de endosporas Schaeffer-Fulton

Preparacion de la muestra
Agregar y esparcir una
gota de la muestra en
una lamina Fijar la gota
Centrifugar con calor
Tomar
muestra
desde el
medio Secado al
aire libre
Diluir en Eliminar el
NaCl al sobrenadante
0.9% y resuspender

Procedimiento de tincion
Colocar papel Calentar con vapor y
absorbente seguimos saturando con el
sobre la lamina colorante por 5 minutos Secar de
Dejar actuar manera
por 20 seg horizontal
Saturar el papel
con gotas de
Verde Malaquita
Añadir gotas
Enjuagar de Safranina
con agua Enjuagar con agua para
para retirar retirar el reactivo
el reactivo

Relación con el oxígeno

A) Anaerobios aerotolerantes
Zona anaerobia
Zona microaerófila B) Micro-aerófilos

C) Aerobios facultativos
Zona anaerobia
D) Anaerobios obligados

E) Aerobios obligados

Infusión Cerebro-Corazón
(BHI)
37 g Caldo 1000 mL Agua El medio preparado se
dividio en 2 partes
X 20 mL Agua iguales para continuar
las pruebas

(37 g) (20 mL) 0.74 g

= Caldo Infusión
(1000 mL) Cerebro-Corazón
 Conteo de microorganismos en cultivos de diluciones seriadas
Medir el disco de petri Separar las colonias en Realizar el conteo de
con una regla para morfos para facilitar su microorganismos a mano
establecer una escala diferenciacion tomando sus medidas

1 2 3

4 5 6

7 8 9

Motilidad
Tomar muestra Preparar el frotis Observar al
resuspendida y cubrir con una microscopio
laminilla

Actividad citocromo oxidasa Actividad catalasa Espuma o

Sacar tira burbujeo:
indicadora e Cambio de color: Tomar Agregar una Resultado
Tomar impregnar con la Resultado muestra gota de positivo
muestra muestra positivo Colocar una peróxido de
hidrógeno
gota de la
muestra en
una lamina Resultado
Resultado negativo
negativo

Permanece Permanece

Fermentación Ácido-Mixta Fermentación butanodiólica

3 mL 3 mL Resultados en 15 min
Agregar 5 Caldo KOH α-naftol Formacion de aro rojo
gotas de rojo RM/VP (40%) (5%)
Caldo de metilo
RM/VP Resultados inmediatos No Fermenta
evidenciados en el color produce Glu y
sustancias produce
neutras. sustancias
pH basico: pH acido: neutras.
No produce Fermenta RTA -
acidos, no Glu y RTA +
evidencia de produce
fermentacion acidos.
RTA - RTA +

Relación con el oxígeno Respiración anaerobia Fermentación

(Tioglicolato) (SIM) (Glucosa y Glicerol)
Medio con
sulfato
Zona anaerobia Medio con
tubos de
Zona microaerófila Incubacion DUrham para
captura de
gases

Zona anaerobia

Incubacion
Incubacion Incubacion
A) Anaerobios aerotolerantes sal de hierro
B) Micro-aerófilos

C) Aerobios facultativos -
D) Anaerobios obligados

E) Aerobios obligados
+ Cambio de color por pH
basico gracias al indicador
Presencia de sulfuro ferroso rojo fenol
 Pruebas enzimaticas
Gelatinasa Amilasa DNAsa Trioptofanasa Agar
MacConckey
Medio con almidon Medio con almidon

Agregamos
HCl 1N
Agregamos Agregamos Lugol Agregamos Medio exclusivo
Sulfato de amonio reactivo de Kovac para bacterias
6M Gram -