TEMA 5: LAS ENZIMAS
1.-EL CONTROL BIOQUÍMICO
En las células continuamente se producen un conjunto de reacciones bioquímicas que degradan las
moléculas existentes o dan lugar a unas nuevas, reacciones que reciben el nombre de metabolismo.
Debido a que las sustancias que intervienen son muy estables a temperatura ambiente, si no las
“ayudamos” no reaccionarían o lo harían muy lentamente. Ello supone una ventaja, ya que la célula
puede controlar qué reacciones se pueden dar y en qué momento. A eso lo llamamos control
bioquímico del metabolismo y es posible gracias a unas sustancias: los biocatalizadores o enzimas.
2.-LAS REACCIONES QUÍMICAS Y LOS BIOCATALIZADORES
Muchas sustancias químicas al reaccionar desprenden energía calorífica (reacciones exergónicas),
debido a que la energía química de las sustancias reaccionantes (reactivos) es superior a la energía
de las sustancias producidas (productos). A pesar de ello, estas reacciones no ocurren
espontáneamente; para que se de esta reacción, debemos suministrar energía para debilitar los enlaces
y posibilitar que se formen otros nuevos. La energía mínima que se debe suministrar para que se de la
reacción se denomina energía de activación.
Energía de activación: Es la energía mínima
necesaria para que se de una reacción química.
La energía de activación es necesaria para
debilitar los enlaces y facilitar que se formen
otros nuevos. Se puede definir como la energía
(expresada en calorías) necesaria para llevar un
mol de una sustancia hasta el estado de
transición, a una determinada temperatura.
Estado de transición: punto en el que las
moléculas activadas pueden reaccionar para
formar el producto, o desactivarse y quedar
como el sustrato inicial.
Catalizador: s u s t a n c i a q u e f a c i l i t a l a s
reacciones químicas al disminuir la energía de
activación.
En el laboratorio la energía de activación puede aportarse mediante un aumento de la temperatura o
mediante la adición de un catalizador. El calentamiento de los reactivos acelera cualquier reacción
química; por su parte los catalizadores son sustancias que atraen hacia sí las moléculas de los
reactivos, favoreciendo su contacto y que se formen los productos sin necesidad de calentarlos. Por
ello el catalizador disminuye la energía de activación necesaria para llegar al estado de transición.
En los seres vivos no se pueden calentar los reactivos para que se den las reacciones químicas. Sin
embargo las células poseen unas moléculas capaces de actuar como catalizadores biológicos o
biocatalizadores. Estas moléculas son las enzimas. Las enzimas actúan a temperatura ambiente.
En las reacciones enzimáticas, las moléculas que reaccionan reciben el nombre de sustratos y las
sustancias formadas se denominan productos.
3.-LAS ENZIMAS
Los enzimas son proteínas que actúan como biocatalizadores, es decir, son los catalizadores de las
reacciones químicas que se producen en la célula y funcionan reduciendo la energía de activación de
estas reacciones. Para ello las enzimas (E) se unen a los sustratos (S) formando el complejo enzima-
sustrato (ES).
Las enzimas aumentan la velocidad de las reacciones, lo que se puede medir por la cantidad de
producto liberado por unidad de tiempo.
Las enzimas cumplen varias características: actúan en pequeña cantidad, no se consumen durante la
reacción y son muy específicas.
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Según su estructura se distinguen dos tipos de enzimas:
Enzimas estrictamente proteicas (también llamadas holoproteínas) formadas por una o más
cadenas polipeptídicas.
Holoenzimas, que son las enzimas formadas por una fracción proteíca denominada apoenzima
y una fracción no proteica denominada cofactor.
Cuando el cofactor es una molécula orgánica
Si se une mediante enlaces débiles, el cofactor se denomina coenzima;
(coenzimas importantes en la célula son por ejemplo el ATP, FAD, NAD+,
NADP+, y Co A).
Cuando el cofactor está fuertemente unido a la fracción proteica se llama grupo
prostético; (por ejemplo el grupo hemo de la hemoglobina).
Como cofactores inorgánicos actúan iones metálicos ([Link]. Mg 2+, Zn 2+, k+).
Coenzimas
Los coenzimas son cofactores orgánicos que se unen mediante enlaces débiles a la parte proteica
de una enzima durante el proceso catalítico. La unión entre apoenzima y coenzima es temporal (similar
a la unión ES, por lo que se puede considerar la coenzima como un segundo sustrato). Las coenzimas
no suelen ser específicas de un solo tipo de apoenzima, sino que se pueden unir a muchos tipos con
funciones diferentes.
Las coenzimas actúan como donadoras o receptoras de grupos químicos (protones, electrones,
grupos fosfato...).
4.-EL CENTRO ACTIVO DE LAS ENZIMAS
Como hemos dicho, las enzimas son proteínas globulares. Se denomina centro activo a la zona de la
enzima que se une al sustrato. Dicha unión se realiza gracias a los enlaces entre el sustrato y los
radicales de los aa que constituyen el centro activo. En las holoenzimas, el cofactor también se
encuentra en el centro activo.
Los centros activos tienen varias características:
Está formado por pocos aa respecto al total.
Está formado por aa que se encuentran
alejados en la cadena pero que, debido a los
repliegues, se aproximan.
Tiene forma de hueco donde encaja el sustrato.
Los R de algunos de sus aa presentan afinidad
química por el sustrato estableciendo enlaces.
Así pues, una enzima presenta tres tipos de aa:
1. Aminoácidos estructurales: Son los más
abundantes y responsables de la forma de la enzima. No participan en el centro activo.
2. Aminoácidos de fijación: se encuentran en el centro activo y son los que se unen al sustrato
mediante enlaces débiles; son los que “sujetan” al sustrato.
3. Aminoácidos catalizadores: también en el centro activo; son los responsables de la
transformación del sustrato, debido a que al establecer enlaces con él, provocan la rotura de otros
enlaces, (son los que “atacan” al sustrato).
Por lo tanto, el grupo de aminoácidos que se encuentra en el sitio activo, así como la posición que estos
tienen en el espacio tridimensional, le dan al sitio activo un tamaño, forma y comportamiento químico
muy especificos. Gracias a estos aminoácidos, el sitio activo de una enzima es apto exclusivamente
para unirse con una molécula concreta o con un tipo de moléculas concretas (su sustrato o sustratos).
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5.-LA ESPECIFICIDAD DE LAS ENZIMAS
La característica más sobresaliente de las enzimas es su elevada especificidad entre el E y el S:
1. sólo los sustratos que presentan la forma adecuada pueden acceder al centro activo,
2. sólo los S que pueden formar enlaces con los aa de fijación pueden fijarse y
3. sólo los S que poseen un enlace susceptible de ser roto cercano a los aa catalíticos pueden
alterarse.
Para comprenderlo se propuso una comparación con el
modelo llave (S)-cerradura (E). Este supone que la
estructura del sustrato y la del centro activo son
complementarias, de la misma forma que una llave encaja en
una cerradura. Este modelo es válido en muchos casos, pero
no es siempre correcto. El modelo del ajuste inducido (el
más aceptado) afirma que en algunos casos la cercanía del
sustrato provoca un cambio en la forma del enzima para
adaptarse mejor a él (símil mano-guante). En algunos casos
ambos, E y S, pueden modificar su forma para acoplarse
(modelo apretón de manos).
La especificidad puede darse a varios niveles. Algunas enzimas son más específicas que otras y solo
aceptan un sustrato particular; hablamos de especificidad absoluta. Otras enzimas pueden actuar
sobre una gama de moléculas, siempre que tengan el tipo de enlace o grupo químico que la enzima
tiene como objetivo; se trata de la especificidad de grupo. Por último, la especificidad de acción es
la menos específica, ya que la enzima solo realiza un tipo de transformación, es decir, solo actúa sobre
un determinado tipo de enlace, independientemente del sustrato que lo presente.
6.-LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
En las reacciones enzimáticas, la enzima (E) se une al sustrato (S) para formar el complejo activado
(ES) que, tras la transformación enzimática, se separa en los productos de la reacción (P) y el enzima
libre (E) (las E no se consumen en la reacción). Dependiendo de la reacción, puede haber un solo
sustrato o dos o más.
Un solo sustrato
La E fija el S a su centro activo mediante los aa de fijación (enlaces
débiles) formándose el complejo enzima-sustrato. Gracias a esta
unión, los enlaces del sustrato se debilitan y se produce la
transformación. Finalizada la transformación, queda el complejo
enzima-producto (EP) que posteriormente libera el producto y el
enzima libre.
Dos sustratos
En las reacciones en las que hay dos sustratos, A y B, que
reaccionan entre sí, las enzimas atraen hacia su superficie a los
sustratos, aumentando la probabilidad de que se encuentren y
favoreciendo la reacción. Una vez transformados los sustratos A y B
en los productos C y D, se libera de nuevo la enzima.
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En ocasiones se da un mecanismo llamado ping-pong; la enzima atrae a un sustrato, se queda una
parte de él y atrae posteriormente al segundo sustrato uniéndole esa parte.
A+B+EABECDEC+D+E Ping-pong B+EBED+E´ ; A+E´AE´C+E
Varios ejemplos de un E y dos S. En cualquiera de los casos,ya sea uno o dos S, la energía necesaria para llegar
al estado de transición del complejo ES es menor que para llegar al estado de transición del sustrato solo.
7.-LA CINÉTICA DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA
La cinética de las reacciones enzimáticas estudia la velocidad de la reacción enzimática (es decir, la
V de la catálisis), y se mide como la concentración de producto por unidad de tiempo. Esta
velocidad depende de varios factores: la concentración de sustrato, el pH, la temperatura y la presencia
de inhibidores.
7.1- INFLUENCIA DE LA CONCENTRACIÓN
Con una concentración de enzima constante, si aumentamos la cantidad de sustrato aumenta la
velocidad de la reacción, ya que aumenta la probabilidad de encuentro entre la enzima y el sustrato. Sin
embargo, llega un momento en el que la velocidad de la reacción deja de crecer, es decir se llega a la
velocidad máxima (Vmax). Esto se debe a que todas las moléculas de la enzima están ocupadas por
moléculas de sustrato formando el complejo enzima-sustrato; esto se denomina saturación de la
enzima.
En la mayoría de las enzimas la representación gráfica de
estos valores da una hipérbola. Michaelis y Menten
definieron la llamada constante de Michaelis-Menten (kM),
Dicha constante depende de la afinidad de la enzima por su
sustrato y se define como la concentración de sustrato (en
milimoles por litro) a la que la velocidad de la reacción es la
mitad de la V máxima. En este punto, la mitad de las
moléculas de enzima se encuentran formando complejo ES.
Se definió una ecuación para calcular la velocidad de la
reacción enzimática según las distintas concentraciones de
sustrato. La ecuación de Michaelis y Menten describe
como varía la velocidad de reacción con la concentración de sustrato:
V0 es la velocidad inicial de la reacción.
Vmax es la velocidad máxima.
[S] es la concentración de sustrato.
La Km refleja la afinidad de un enzima
por su sustrato. Km es la cte. de
Michaelis-Menten.
La Km refleja la afinidad de un enzima por su sustrato.
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7.2- INFLUENCIA DE LA TEMPERATURA
Si a una reacción enzimática se le suministra energía
calorífica, las moléculas aumentan su movilidad y los
encuentros moleculares, aumentando la velocidad a la que se
forma el producto, hasta alcanzar un valor máximo alrededor
de los 40ºC. Si aumentamos la temperatura por encima de
ese valor, la actividad disminuye rápidamente porque la
enzima se desnaturaliza, pierde su estructura secundaria,
terciaria y cuaternaria, perdiendo su actividad enzimática.
7.3- INFLUENCIA DEL PH
Las enzimas presentan dos valores de pH entre los cuales son eficaces y dentro de este rango un pH
óptimo para el que su actividad es máxima; por encima y por debajo de ese rango de pH, las enzimas
se desnaturalizan y dejan de actuar. Como se observa, cada enzima tiene un valor óptimo de pH.
Pequeñas variaciones de pH en torno al valor óptimo provocan el descenso brusco de la actividad;
generalmente se debe a que un cambio de pH altera las cargas de los aa del centro activo, lo que hace
que se vea alterada su capacidad de unión al sustrato.
7.4- INHIBIDORES
Son sustancias que disminuyen la actividad de una enzima o la inhiben completamente y que por lo
tanto pueden ser beneficiosos o perjudiciales. La inhibición puede ser:
Inhibición ireversible. El inhibidor se une de forma
permanente (enlace covalente) al centro activo de la enzima, la
modifica químicamente alterando su estructura e inutilizándola.
Muchos venenos son inhibidores irreversibles.
Inhibición reversible. No se inutiliza el centro activo, sino que
se le impide funcionar durante un tiempo, porque el inhibidor
solo se une por enlaces débiles al enzima y no lo destruye.
Según la forma de actuación, se diferencian varios tipos:
-Inhibición reversible competitiva: el inhibidor es una
molécula de estructura similar al sustrato, compitiendo
con él por unirse al centro activo. Si el inhibidor se une
la enzima queda bloqueada y el sustrato no se une
hasta que el inhibidor se separe.
-Inhibición reversible no competitiva: el inhibidor se
une al enzima fuera del centro activo, lo que modifica la
estructura de la enzima e impide la unión del sustrato.
-Inhibición reversible acompetitiva: el inhibidor se une
al complejo enzima-sustrato impidiendo la formación del
producto.
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La velocidad de la reacción en presencia de un inhibidor reversible competitivo disminuye al
aumentar la concentración del inhibidor. Por el contrario, si la concentración de S aumenta con respecto
a la de inhibidor, aumenta la Velocidad de la reacción.
En el caso del inhibidor reversible no competitivo, un aumento de la concentración de S no da la
recuperación de la actividad.
8.- ENZIMAS ALOSTÉRICAS
Las enzimas regulan la actividad química de las células. Así mismo, la actividad de las enzimas también
debe ser coordinada. Una manera de hacerlo es controlar la activación de las moléculas de enzima,
por ejemplo mediante alosterismo.
Una enzima alostérica es una enzima que, además del centro activo posee otro lugar llamado sitio
alostérico al que se une de manera reversible una molécula que actúa como regulador. Al igual que el
centro activo, el sitio alostérico es específico para cada regulador. La unión del regulador modifica la
estructura tridimensional de la enzima y llega a afectar la configuración del sitio activo por lo que
aumenta o disminuye su actividad, según el caso.
Estos enzimas adoptan dos configuraciones, inactiva y activa; el paso de una a otra se consigue por la
unión o separación del regulador. Algunos reguladores alostéricos mantienen a la enzima en su forma
inactiva. Otros reguladores funcionan como activadores y dan como resultado una enzima activa.
El alosterismo es una de las principales formas de regulación en la célula debido a que puede producir
cambios rápidos y fácilmente reversibles en la actividad de las enzimas, muy importante en
metabolismo.
