TEMA 11.

PRINCIPIOS BASICOS DE CITOGENETICA

La citogenética es la rama de la genética centrada en el estudio de la estructura, función u

comportamiento de los cromosomas metafásicos

La citogenética humana aplica estos estudios al diagnóstico, pronostico y evolución de

enfermedades con base genética

• EL CROMOSOMA

El cromosoma de una célula eucariota es una estructura organizada formada por la

asociación de una molécula lineal de ADN y un conjunto de proteínas

El estudio citogenético se lleva a cabo en el periodo de metafase del ciclo celular, cuando
el cromosoma adquiere el máximo grado de compactación y es visible e identificable al
microscopio

ESTRUCTURA DEL CROMOSOMA METAFASICO

Cromátidas: dos filamentos lineales y paralelos, exactamente iguales, que se mantienen

unidos mediante complejos proteicos llamados cohesinas. Cada cromátida es una de las
dos moléculas de ADN idénticas resultantes de la replicación del ADN previa a la división
celular, en su máximo grado de superenrollamiento

Centrómero o constricción primaria: estrechamiento que divide el cromosoma en dos

brazos. Su posición es característica de cada cromosoma y va a permitir clasificarlos en
tipos morfológicos. Es una región rica en ADN repetitivo (ADN satélite). Es debido a que
sobre el se ensambla un complejo proteico, el cinetocoro, donde se unen los microtúbulos
que forman el huso mitótico, permitiendo la correcta separación de las cromáticas hacia
los polos opuestos

Constricciones secundarias/tallo: son estrechamientos de las cromátidas, menos

profundas que el centrómero.

Son regiones donde la cromátida esta menos condensada. La constricción 2aria mejor
conocida es la generadora por la presencia de las secuencias de ADN que forman parte del
nucleolo, por lo que reciben el nombre de organizadores nucleolares

Solo aparece en 1 o varios cromosomas del cariotipo y está situada en una región
intermedia (no terminal) del cromosoma. Estas regiones intermedias están próximas a los
telómeros, ya que las constricciones 2arias separan un pequeño fragmento terminal de la
cromátida del resto de esta; estos fragmentos terminales son llamados satélites y
aparecen, por ejemplo, en los extremos de los brazos cortos de
los cromosomas 13, 14, 15, 21 y 22

Telómeros: son los extremos de las cromátidas. Están

constituidas por miles de repeticiones de una misma secuencia
y tienen importantes funciones:

- En la replicación del cromosoma

- En su interacción con la membrana nuclear
- En la protección frente a nucleasas
- En la estabilidad estructural del cromosoma
- Están relacionadas con el envejecimiento celular y con algunos tipos de cáncer
TIPOS DE CROMOSOMAS

Se clasifican según la posición del centrómero. Vistos con el microscopio, los cromosomas
metafásicos se observan como estructuras alargadas divididas en dos brazos por el
estrechamiento del centrómero. La longitud de cada brazo la marca la posición del
centrómero

- Brazo corto/brazo P
- Brazo largo/brazo Q

La forma de los cromosomas es importante para el estudio del

cariotipo ya que nos permite identificar y comparar
cromosomas de forma individualizada

El cariotipo o formula cromosómica es el patrón

cromosómico de cada especie

El idiograma o cariograma es la representación grafica del

cariotipo: cromosomas homólogos ordenados por parejas
según su morfología, tamaño, posición del centrómero y

INDICE CENTROMERICO

Teniendo en cuenta la longitud de ambos brazos se define el índice centromérico del

cromosoma como la relación entre la longitud del brazo corto y la longitud total del
cromosoma

Ic = (p)/ (p+q) x 100

Atendiendo a este parámetro se clasifican en 4 tipos morfológicos:

- Metacéntrico (mc): el centrómero se sitúa en la región central del cromosoma y los

dos brazos son aproximadamente iguales.
Ic= 45-50
- Submetacentrico (smc): el centrómero se encuentra desplazado del centro, por lo
que los dos brazos son desiguales
Ic= 25-45
- Acrocéntrico (ac): el centrómero se encuentra próximo a un extremo, por lo que el
brazo corto es muy pequeño (son los que pueden contener la constricción
secundaria en el brazo corto)
Ic= menor de 25
- Telocéntrico (tc): el centrómero se encuentra en el extremo, por lo que solo hay
brazo largo
Ic= 0
EL NUMERO DE CROMOSOMAS

El numero total de cromosomas por célula es específica para cada especie y se denomina
“dotación cromosómica”

- Las especies, individuos y células cuyo genoma esta formado por 2 juegos
cromosómicos se denominan diploides (2n)
- Las células que solo tienen 1 juego cromosómico, como los gametos, son
haploides (n)

De la unión de 2 gametos, cada 1 con 1 juego completo de cromosomas (n), se originan

organismos diploides (2n)

La especie humana tiene 23 pares de cromosomas (23 heredados del padre y 23 de la

madre) n=23

Las células somáticas humanas normales tienen 46 cromosomas

➔ 22 pares homólogos o autosomas (numerados del 1-22 por tamaño con la

excepción del cromosoma 21 que es más corto que el 22)
➔ 1 par de cromosomas sexuales (XX/XY)

• EL CICLO CELULAR

Es el conjunto de actividades y cambios que experimenta una

célula desde su aparición, como consecuencia de la división
de una célula parental, hasta que se transforma en dos células
hijas mediante una nueva división celular

En términos temporales, el ciclo celular es el tiempo que

transcurre entre la finalización de dos divisiones celulares
consecutivas

LA INTERFASE

Es el periodo que transcurre entre dos mitosis consecutivas, entre el final de una división
celular y el inicio de la siguiente. Su duración es muy variable, dependiendo de los distintos
tipos celulares, pudiendo durar desde horas hasta meses.

En este periodo, la célula crece y se prepara para una nueva división celular.

En la interfase, la asociación de ADN+proteínas (cromatina) se estructura en forma de

fibras de cromatina en diferentes fases de condensación, indistinguibles al microscopio

o Periodo G1

Es un periodo de crecimiento celular, que se inicia al finalizar la mitosis y se prolonga hasta

que se inicia la replicación del ADN.

Es la fase más larga y variable, característica de cada estripe celular. De hecho, la mayoría
de las células de un organismo pluricelular adulto no se dividen constantemente, sino que
abandonan el ciclo celular en G1 o se quedan en G0, estas células diferenciadas que
abandonan el ciclo celular y no se dividen se dicen que están en reposo (G0) o que las
células entran en quiescencia (inactivas). Pero bajo ciertos estímulos podrían volver
 o Periodo S

Es la fase en la que se replica todo el ADN para que cada cromosoma quede constituido
por dos moléculas idénticas de ADN que permanecen unidas mediante cohesinas.

En esta fase, los cromosomas permanecen con un nivel de organización correspondiente

a la fibra de cromatina.

La duración es de unas pocas horas (5-10h)

o Periodo G2

Donde se expresan los genes que codifican todas las proteínas implicadas en la división
celular. Es el periodo mas corto (3h) y termina con la duplicación del centrosoma

LA MITOSIS

Es el proceso por el cual a partir de una célula parental se obtienen dos células hijas con la
misma dotación genética. Es un proceso rápido (2h) que se desencadena a continuación
de la fase G2 de la interfase. La división celular termina con la citoquinesis y la separación
de las dos células hijas

o Profase

Durante esta fase las fibras de cromatina empiezan a condensarse, comenzando a ser
visibles al microscopio.

Se estructuran los cinetocoros en el centrómero de cada cromátida. Los centrosomas se

separan a cada polo opuesto de la célula y se polimerizan los microtúbulos que forman las
fibras del huso acromático, dispuestas entre ambos centrosomas.

Por último, también desaparece el nucleolo y la membrana nuclear se disuelve y los

cromosomas, en un estado de condensación muy elevado, se dispersan por el citoplasma

o Metafase

Los cromosomas se anclan a las fibras del huso mitótico en los cinetocoros e inician un
movimiento de migración hacia la región ecuatorial de la célula. A la vez continúan su
proceso de condensación

Al final de la metafase, todos los cromosomas, en su grado máximo de compactación, se

sitúan en el plano medio de la célula formando la placa ecuatorial. En ella, se sitúan con
los cinetocoros perpendiculares a un hipotético eje que uniera ambos centrosomas, por lo
que cada cromátida queda orientada hacia uno de los polos celulares

o Anafase

Los microtúbulos anclados a los cinetocoros se acortan por despolimerización, generando

una tensión que origina la separación de las dos cromátidas hermanas que forman cada
cromosoma.

La separación se inicia en la región del centrómero y se extiende hacia los extremos. Así,
las cromátidas procedentes de los cromosomas metacéntricos adquieren forma de V,
mientras que las procedentes de cromosomas submetacéntricos y acrocéntricos
adquieren forma de L
 o Telofase

Las fibras del huso mitótico se despolimerizan y desaparecen; se forma una nueva
membrana nuclear y aparecen los nucleolos en los nuevos núcleos

Los cromosomas se van des condensando, volviendo al estado de fibra de cromatina no

visible al microscopio.

Al final de la telofase, la célula tiene la apariencia de una célula binucleada con ambos
núcleos nuevos en polos opuestos

o Citoquinesis

Es el proceso por el cual se reparte el citoplasma y los orgánulos que contiene entre las dos
células hijas

Se inicia al finalizar la telofase y finaliza con la formación de dos células hijas

genéticamente iguales entre si y a la célula parental

En las células animales, se produce mediante estrangulamiento de la región ecuatorial

provocado por un anillo de proteínas contráctiles.

• TINCION Y BANDEO CROMOSOMICO

La visualización microscópica de cromosomas rquiere que estén con el mayor grado de

compactación, lo que ocurre desde el final de la profase hasta el final de la metafase

METODOS DE TINCION

o Las tinciones convencionales:

Utilizan Giemsa u orceína y tiñen los cromosomas de manera uniforme e intensa. Lo

que permite contarlos, ordenarlos por tamaño y posición del centrómero y calcular el
Ic. Pero no permite la identificación individual de cada cromosoma ni la detección de
anomalías estructurales

o El bandeo cromosómico:

Tiñen los cromosomas de forma discontinua, definiendo bandas transversales y

generando patrones de bandeo específicos de cada cromosoma. Se consigue la
identificación inequívoca de los cromosomas y la detección de anomalías
estructurales

Bandeo G:

Es el más utilizado y se realiza tratando preparaciones metafásicas envejecidas con

tripsina y haciendo después una tinción con Giemsa.

Cada cromosoma se tiñe con un patrón especifico de bandas oscuras (G+) → rica en AT,
genes de replicación temprana y muchos genes y bandas claras (G-) → rico en GC y pocos
genes de replicación tardía
Bandeo R:

Se obtiene un patrón de bandas que es el negativo de las bandas G. se obtiene tratando las
preparaciones con calor (incubación en tampón de Sorensen a 85º) y tiñéndolas a
continuación con Giemsa

Bandas claras (R-): ricas en AT; Bandas oscuras (R+): ricas en GC

Bandeo Q:

Es una técnica de bandeo fluorescente en la que se utiliza quinacrina para teñir los
cromosomas. Al analizar las preparaciones con un microscopio de fluorescencia se
observa un patrón de bandas de distinta intensidad. Las bandas mas brillantes coinciden
con las bandas G+ (ricas en AT)

Bandeo C:

Se tiñen las regiones de los cromosomas ricas en heterocromatina (tipo de cromatina que
esta condensada (inactiva) en todos los momentos del ciclo vital de la célula)

Se obtienen bandas oscuras (bandas C) que tiñen:

- centrómeros de todos los cromosomas

- regiones pericentroméricas del brazo 1 de los cromosomas 1, 9 y 16
- región distal del brazo q del cromosoma Y

para obtener bandas C, las preparaciones se tratan secuencialmente, con HCl, un álcali
(BaOH) y calor (tampón SSC a 60-65º) y finalmente se tiñen con Giemsa

• EL IDIOGRAMA Y NOMENCLATURA DE BANDAS

El idiograma es la representación grafica

simplificada de un cromosoma teñido con una
técnica de bandeo. Es una especie de mapa
cromosómico en el que se especifica la posición del
centrómero, la relación entre el brazo largo y el
corto, la existencia de tallo y satélite y el patrón de
bandas característico de una técnica concreta de
bandeo. El más característico es el idiograma de
bandas G.

Un sistema internacional de nomenclatura de las bandas del idiograma es el ISCN, que

permite identificar un área concreta de un cromosoma para poder definir alteraciones
cromosómicas estructurales.

Permite denominar con un código cada una de las bandas G (G+ y G-) observadas en
cromosómicas metafásicos.

Según este sistema, los brazos de cada cromosoma se dividen en regiones numeradas
consecutivamente. Cada región se divide a su vez, en bandas numeradas
consecutivamente, y estas se pueden dividir en subbandas también numeradas
consecutivamente
Criterios:

- El cromosoma se representa siempre

con el brazo corto en posición
superior y el largo en posición inferior
- El centrómero va a ser en toda la
nomenclatura el punto de referencia
- Las regiones de cada brazo se
numeran de centrómero a telómero,
es decir la región 1 es la más próxima
al centrómero y la del número más
alto la más cercana al telómero.
- Las bandas de cada región se
numeran también por su proximidad
al centrómero. Cuando la banda se
encuentra subdividida se coloca un
punto decimal después del número
de banda original, seguido del
número designado de la subbandas
- La división entre regiones se señala
siempre en mitad de una banda que
será siempre la banda 1 de la región
más alejada del centrómero

El bandeo G de cromosomas metafásicos

humanos tiene una resolución aproximada
de 400 bandas. Pero si el bandeo se realiza
sobre cromosomas con un grado de
compactación menor (profase tardía) se
obtienen resoluciones mayores, de 550-850 bandas

• MUTACIONES/ VARIANTES GENÉTICAS Y TIPOS

Las mutaciones cromosómicas o variaciones son cambios en la secuencia o en la

estructura del ADN que ocurren espontáneamente de manera súbita y que determinan una
modificación en la información genética de una célula, pudiendo originar un cambio en su
fenotipo

Se clasifican según:

- Las células afectadas

- Su consecuencia
- Extensión del material genético alterado

Si la mutación se produce en una célula somática: todas las células que derivan de ella
por sucesivas mitosis heredan esa mutación, originando un clon de células con un
genotipo diferente al de las demás células de ese organismo. Este tipo de mutaciones no
se transmiten a la descendencia y no tienen referencia a nivel evolutivo, pero si en la
aparición de enfermedades neoplásicas
La presencia en un organismo de dos o mas poblaciones celulares con diferente genotipo
se denomina mosaicismo

Si la mutación se produce en células germinales: se puede transmitir a la siguiente

generación a través de gametos portadores de la mutación. En este caso, todas las células
del descendiente portaran la mutación, pudiendo afectar al fenotipo del individuo. Este tipo
de mutaciones están en la base de la evolución de una especie

MUTACIONES/VARIACIONES GENICAS

Son aquellas que afectan a uno o varios nucleótidos, es decir, tienen una extensión
reducida

o Sustituciones:

Una mutación génica por sustitución es la mutación puntual: es la mas simple y consiste
en la sustitución de un único nucleótido por otro.

Según el cambio pueden ser:

- de transición: sustitución purina (A, G) por otra purina, o de una pirimidínica (G, T)
por otra pirimidínica
- de transversión: sustitución de una pirimidínica por una purina y viceversa

cuando la mutación puntual se produce en una región codificante (exón) hay tres
posibilidades:

- mutación silenciosa: el cambio de nucleótido origina en el ARNm un codón

sinónimo, la proteína no experimenta ninguna modificación
- mutación de sentido erróneo (missense): el cambio de nucleótido origina un
codón en el ARNm que codifica para un aminoácido distinto. La nueva proteína
mutada varia en un único aa´respecto de la proteína normal y las consecuencias
fisiológicas depende de la importancia de la funcionalidad de la proteína
- mutación sin sentido: (nonsense): el cambio de nucleótido origina un codón de
terminación de ARNm produciéndose una proteína truncada, mas corta, que
normalmente no es funcional

o inserciones y deleciones

las inserciones suponen una ganancia de material genético y las deleciones una pérdida
de material genético. Estas se pueden producir en diferentes regiones del genoma,
alterando la secuencia de codones y como consecuencia provocando la alteración de toda
la secuencia a partir del punto donde se producen

- En un exón: normalmente se produce un cambio en el marco de lectura, a partir de

ese punto cambian todos los codones del ARNm, por lo que se sintetiza una
proteína muy diferente y habitualmente no funcional.
Una excepción es cuando se insertan o delecionan en un numero de nucleótidos
múltiplo de 3 respetando el marco de lectura
- En las regiones de corte y empalme del pre-ARNm: impiden la correcta
maduración del ARNm y origina proteínas alteradas
 - En regiones reguladoras: el gen no presenta mutaciones, pero su expresión estará
alterada

MUTACIONES/VARIACIONES CROMOSOMICAS

Afectan al numero de cromosomas o a la estructura de grandes regiones de uno o varios

cromosomas. Estas pueden detectarse en preparaciones citogenéticas, mediante la
observación de cromosomas metafásicos por microscopia óptica. Pueden ser:

o alteraciones cromosómicas numéricas

- Poliploidía: consiste en la existencia de mas de dos juegos cromosómicos
completos. (triploidía → 3 juegos cromosómicos; 69XXX; 3n, tetraploidía → 4n…)
- Aneuploidía: consiste en la falta o exceso de uno o varios cromosomas, sin llegar
al juego cromosómico completo (monosomía (-), trisomía (+) → 47, XX, +21,
tetrasomia…)

o Alteraciones cromosómicas estructurales

- Deleción (del): consiste en la perdida de un fragmento de cromosoma y en
consecuencia de la información genética que contenía.

Deleción intersticial: se pierde un fragmento de brazo cromosómico entre el

centrómero y un telómero

Deleción terminal: se pierde un fragmento mayor o menor del extremo de un brazo que
incluye el telómero

- Duplicación (dup): consiste en la repetición o duplicación de un fragmento del

cromosoma

Según la localización de la duplicación:

- En tándem: el fragmento repetido está a

continuación del original
- Desplazada: entre ambos fragmentos repetidos hay
otra región del cromosoma

Según la orientación del fragmento repetido

- Directa (dir): el fragmento repetido tiene la misma

orientación que el original
- Invertida (inv): el fragmento repetido se invierte respecto al original
o Inversión (inv): surge cuando un fragmento en el cromosoma sufre 2 roturas y esta
es reconstruido de manera invertida. Consiste en que un segmento cromosómico
cambia su orientación y se sitúa en posición invertida respecto de un cromosoma
normal
- Pericéntrica: el segmento cromosómico invertido incluye el centrómero, por lo que
afecta a los dos brazos
- Paracéntricas: el segmento invertido no incluye el centrómero y afecta a una región
de un único brazo

o Translocación (t): consiste en el intercambio de uno o dos fragmentos

cromosómicos entre dos cromosomas no homólogos
- Translocación no reciproca (ins): se produce cuando un segmento de cromosoma
se inserta en otro. Hay un cromosoma donante y un cromosoma receptor
- Translocación reciproca (t): cuando dos cromosomas intercambian sendos
fragmentos cromosómicos. Ambos son donantes y receptores

- Translocación robertsoniana: se produce entre dos cromosomas acrocéntricos,

estando los puntos de ruptura en las regiones pericentroméricas. De esta manera
se origina un cromosoma aberrante, pero funcional, con los dos brazos largos y otro
con los dos brazos cortos. Este ultimo se pierde, dejando a la célula con un
cromosoma menor, aunque el fenotipo puede ser normal
o Cromosoma en anillo (r): ocasionada por una doble deleción terminar (se pierden
los telómeros) más una circularización (fusión de los extremos) del resto del
cromosoma

o Isocromosomas (i): es un cromosoma aberrante que tiene los dos brazos iguales
con orientaciones invertidas, es decir, uno es la imagen especular del otro usando
como referencia el plano del centrómero