Terapia génica y medicina
traslacional
Diana M. Monsalve
Ph.D Biología Molecular y Clínica del Cáncer
Centro de Estudio de Enfermedades Autoinmunes
¿Qué es la terapia génica?
AAV libera el gen Célula diana
dentro de la
célula Receptores
Gen Gen encapsulado
en el AAV
Proteínas
secretadas
Terapia génica
Sustitución/adición
Generalidades
Supresión de la expresión génica Modificación génica
Aumento artificial de la expresión
Enfermedades TERAPIA GÉNICA
hereditarias o
adquiridas
Hemofilias, Fenilcetonuria, IDSC
Fibrosis quística, Distrofia muscular,
Cáncer-p53
Regulación génica
Inserción del gen en Revertir una alteración
ubicación inespecífica génica por mutación
reversa
Terapia génica de silenciamiento
Terapia con iRNA
Silenciamiento génico
https://www.alnylam.com/our-science/the-science-of-rnai
Terapia génica de silenciamiento
Terapia RNA interferente corto - siRNA
Charbe NB, et al.,, Acta Pharm Sin B. 2020
Terapia génica de silenciamiento
Terapia micro RNA - miRNA
Gurtan AM and Sharp PA. J Mol Biol. 2013
Terapia génica de silenciamiento
siRNA miRNA
Endógeno-genes específicos
Origen y Exógeno-genes sintéticos
20-25 nt – varias enzimas
procesamiento 20-25 nt- enzima Dicer
(Dicer)
Acoplamiento perfecto de Acoplamiento imperfecto de
Modo de acción
bases con su ARNm diana bases con los ARNm dianas
Múltiples objetivos de ARNm
Número de Un objetivo de ARNm
y puede regular la expresión
objetivos específico
de varios genes diferentes
Desarrollo embrionario,
Defensa antiviral y la
diferenciación celular,
Funciones biológicas regulación de genes
proliferación celular y
específicos.
apoptosis.
Terapia génica de silenciamiento
Terapia inhibición de la expresión
“Terapia antisentido - ASO”
https://www.als.org/research/als-research-topics/genetics/antisense-therapy-for-als
Terapia génica de silenciamiento
Modulación del splicing
“Terapia antisentido - ASO”
https://www.als.org/research/als-research-topics/genetics/antisense-therapy-for-als
Terapia génica de reemplazo y de adición
Edición génica
Khorkova et al., Nat Rev Drug Discov, 2023.
Butt et al.,Genes (Basel). 2022
Consideraciones en la terapia génica
Conocer y entender la causa de la enfermedad.
Conocer la estructura y función del gen a introducir.
Eficiencia de la transferencia del gen en células blanco.
Prevención y control de la respuesta inmune.
Riesgo de efectos secundarios (uso de vectores virales).
Ensayos en animales.
Ensayos clínicos.
Tipos de terapia génica
Terapia génica somática Terapia génica germinal
Heredable
No
heredable
Introducción de ADN puede ser in-
vivo o ex-vivo / Enf. No realizada en humanos
Monogénicas/Cáncer sólo en ratones
VENTAJAS DESVENTAJAS
- Técnicas más sencilla que - Menor grado de control sobre todo
in vitro en el proceso de transferencia
Terapia
- La eficiencia global es menor
in vivo
- Difícil conseguir un alto grado de
especificidad tisular
- Permite la elección del - Mayor complejidad y costos
tipo de célula a tratar - Imposibilidad de transferir en
Terapia - Mantener control sobre aquellos tejidos que no son
ex vivo todo el proceso susceptibles de crecer en cultivo
- Mayor eficiencia de la - Problemas de contaminación por
transferencia génica manipulación celular
Transferencia génica
Transferencia génica: transducción o transfección: Es la
introducción de material genómico foráneo en una célula.
Para lograr un efecto biológico adecuado:
1.Introducir correctamente la secuencia en la célula.
2.Lograr la expresión o el silenciamiento del gen.
Se requiere:
1. Adecuado sistema de vehiculización o transferencia.
Transferencia génica
Métodos Físicos
Físicos
Butt et al.,Genes (Basel). 2022
Transferencia génica
bombardeo de partículas de DNA recubiertas con tungsteno, oro (“gene gun”)
Físicos
Inyección a chorro (“Jet gun”)
Butt et al.,Genes (Basel). 2022
Transferencia génica
Presión hidrostática: utilizada en ratones
Físicos
Masaje mecánico
Técnica Ventajas Desventajas
Electroporación Rápido, efectivo, reproducible Requiere cirugía, riesgo de
y permite la entrega de daño al ADN debido a la
grandes cantidades de ADN exposición a alto voltaje y
altamente localizado
Sonoporación No invasivo, capaz de alcanzar La eficiencia es relativamente
tejidos y órganos profundos, baja y las células diana pueden
objetivos locales específicos dañarse
Microinyección Permite la entrega de grandes Se requiere una técnica de
cantidades de material manejo especial y no se puede
genético, es conveniente, utilizar para la transfección de
simple, rentable, menos un gran número de células
tóxico y reproducible
Inyección con aguja Fácil de realizar y requiere una La eficacia terapéutica es
pequeña cantidad de ADN bastante baja y es difícil de
llevar a cabo
Técnica Ventajas Desventajas
Gene Gun No tóxica, altamente efectiva Limitada a células superficiales
y permite la entrega de genes y no se puede utilizar para la
a células difíciles de entrega de genes a células que
transfectar requieren penetración
profunda
Jet Gun No invasivo, seguro y Causa daño local en los tejidos
fácilmente controlable y su eficiencia es baja
Entrega génica Sencillo y muy eficiente en la El volumen de inyección
hidrodinámica entrega de genes a las células requerido es muy grande y
del hígado. clínicamente no factible
Masaje mecánico Sencillo, no invasivo y fácil de La eficiencia es baja y su
aplicar aplicación aún no está
disponible para humanos
Transferencia génica
Métodos Químicos
Butt et al.,Genes (Basel). 2022
Entrega gen terapéutico - Métodos No virales
Butt et al.,Genes (Basel). 2022
Transferencia génica
Métodos
Biológicos-Virus
• Ser reproducible y estable.
• Permitir la inserción de
material genético.
• Reconocer y actuar sobre
células específicas.
• Poder regular la expresión del
gen terapéutico.
• Carecer de elementos que
induzcan una respuesta
inmune.
• Ser inocuo o que sus posibles
efectos secundarios sean
mínimos.
Entrega gen terapéutico - Métodos Viral
El vector es la clave del éxito de la terapia génica
Lundstrom K. Viral Vectors in Gene Therapy: Where Do We Stand in 2023? Viruses. 2023
Ventajas Desventajas
Proporcionar una mayor eficiencia en Puede desencadenar respuestas
la transferencia génica tanto en inmunes severas y reacciones
entornos in vivo como in vitro. inflamatorias
Persisten durante períodos de tiempo Su capacidad de clonación es muy
más largos en la mayoría de los casos limitada
Pueden dirigirse a un gran número de Producidos mediante métodos de
células. producción complejos.
Hay una gran variedad de virus Pero su capacidad de tropismo hacia
disponibles para elegir algunas células específicas puede ser
baja
Finalidad de la terapia génica
Terapia de adición o
gen funcional
sustitución
Célula con gen no Célula funcionando
funcional normalmente
Terapia de Inhibición
gen
El nuevo gen bloqueará
el gen alterado
Célula con gen Célula funcionando
alterado normalmente
Finalidad de la terapia génica
gen suicida
Célula alterada muere
Destrucción de células específicas
Célula alterada gen suicida genera
productos tóxicos
Sistema inmune ataca
Marcador génico a las células
marcadas
Célula alterada muere
Célula alterada Marcadores se
expresan en la
superficie celular
Edición del ADN por CRISPR
Repeticiones Palindrómicas Cortas Agrupadas y Regularmente Interespaciadas
Entrega de CRISPR a célula diana
Das, S et al. Mol Cancer. 2022.
Uso de la terapia génica
Arabi F, et al., Biomed Pharmacother. 2022.
Ensayos clínicos en terapia génica activos
Arabi F, et al., Biomed Pharmacother. 2022.
Uso de terapia génica en cáncer
• Inmunoterapia:
CART
• Terapia de genes
suicidas
• Terapia anti-
angiogénesis
(VAA-endostatina)
• Terapia de iRNA
• Silenciamiento de
oncogenes
• Virus oncolíticos –
p53
• Edición
CRISPR/Cas9
Singh, V et al., Cancer Gene Ther. 2022
Uso de terapia génica enfermedad monogénica –
Fibrosis quística
Allan KM, et al., Front Pharmacol. 2021
Uso de terapia génica en Infecciones - VIH
Falkenhagen A, Mol Ther Nucleic Acids. 2018
Resumen
Altos costos de la terapia génica
• Si la terapia celular implica manipulación genética
• Tipo de producto
• Si es un tratamiento autólogo o alogénico
• Tamaño de mercado
• Años de investigación experimental en laboratorios y en fases de investigación clínica
• Gastos estructurales de salas blancas, gestión de producto y farmacovigilancia necesaria para el
producto aprobado
GRACIAS
CASO CLÍNICO 1
Jesse Gelsinger fue el primer caso fallido de terapia génica en el mundo. Jesse fue
diagnosticado de deficiencia de ornitina decarboxilasa (OTC), una enfermedad genética
hereditaria que afecta al ciclo de la urea. La falta o el bajo nivel de esta enzima provoca que
se acumule amonio en la sangre, que cuando llega a ciertos niveles puede producir coma,
daño cerebral y consecuentemente la muerte. A sus 17 años, recibió una prueba clínica de
terapia génica en el Instituto de Terapia Génica de la Universidad de Pennsylvania. Esta
terapia consistió en la inyección de un vector adenoviral que portaba el gen OTC que
contrarrestaba su enfermedad. Seleccione el tipo de terapia utilizada con este paciente:
A. Técnicas in vivo
B. Técnicas in vitro
C. Técnicas ex vivo
D. Técnicas in situ
E. Técnicas in silico
CASO CLÍNICO 2
Mujer de 42 años de edad con cefalea de 10 días de evolución, inestabilidad a la marcha, la
exploración neurológica mostró una dismetría derecha y una maniobra de Romberg positiva
y secuelas de una parálisis facial. Se practicó tomografía computarizada craneal hallando un
proceso expansivo que ocupaba hemifosa posterior derecha. La resonancia magnética
cerebral confirmó los hallazgos de la tomografía computarizada. Se encontró una lesión de 4
cm de diámetro con un componente sólido y otro quístico. El estudio anatomo-patológico
diagnosticó un Glioblastoma multiforme (grado IV, clasificación de la OMS). Las células
tumorales presentaron positividad por inmunohistoquímica para el oncogen BCL-6. Según lo
anterior, los avances de la terapia génica permitirían en este paciente:
A. Aumentar la inmunogenicidad del tumor introduciendo antígenos foráneos.
B. Bloquear la expresión de oncogenes mediante terapia antisentido.
C. Eliminación de las células tumorales mediante adenovirus oncolíticos.
D. Transferencia de genes con efecto antiangiogénico.
E. Introducir genes de resistencia a fármacos para reducir la toxicidad de la quimioterapia.
