Carbapenemasas Deteccion
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fabiola.duran.escobarCARBAPENEMASAS
Sospecha:
IMI: ≤22 mm o MIC ≥ 2(Vitek)en todas las enterobacterias excepto tribu Proteae
MER: ≤ de 22mm o MIC ≥ 1(Vitek)en tribu Proteae
ERT: ≤21 mm(OXA)
PTZ: ≤15mm (OXA)
FEP: ≤de 24 mm tribu Proteae(OXA)
PTZ: ≤20mm tribu Proteae (OXA)
CLASE TIPO ENCUENTRA CARACTERISTICAS INHIBIDAS DX
A KPC Klebsiella Todos los Acido Disco combinado con acido
betalactamicos, boronico boronico,HODGE
cloxacilina
SME Serratia no afecta a C3G, C4G DCMbrit mero con
IMI Enterobacter y Monobactam cloxacilina,boronico,TPZ,EDTA
NCM-A
B NDM No especifico Sensibles al EDTA Disco combinado con EDTA,
VIM aztreonam siempre buscar BLEE
IMP
NDM
D 0XA-48 Enterobacterias No afecta a C3G, C4G Resistecia
y Monobactam al FOX y
oxa
OXA Actua sobre Cefoxitin y Puede formar huevo entre IMI y
163(A.Latina) ceflosporina y oxacilina CAZ(blee tipo GES),Blue carba
monobactamicos,pero Negativo
suele salir sensible a
carbapenemes
Blgo: Jhonatan Ipanaque Chozo
CBP:12135
CUANDO SE DEBE SOSPECHAR DE UNA CARBAPENEMASA TIPO OXA
A. Métodos confirmatorios para determinar tipos de carbapenemasas
1. Sinergias: Distancias ajustadas entre discos:
Distancia (centro a centro): RADIO DEL ATB1(IMI) +RADIO INHIBIDOR(EDTA o
BORONICO) + 5mm
2. Discos combinados: DCM Brit, sirve para halos ≤22 mm
B. Métodos confirmatorios para determinar solo presencia de carbapenemasas
1. Método de inactivación de Carbapenem modificado
Se utiliza asa de 1ul para Enterobacterias y 10 ul para Pseudomonas aeruginosa y
Acinetbacter baumannii.
Inocular en 2 ml de caldo TSB (tripticasa soya).
Colocar un disco de meropenem e incubar por 4 horas a 35°C
Preparar una suspensión equivalente a 0.5 de Mc Farland de E. coli ATCC 25922
en solución salina y luego inocular en una placa de agar Muller hinton
Retirar el disco de meropenem y colocarlo en la placa con la E. coli ATCC,además
colocar un disco de meropenem como prueba.
Incubar de 18 – 24 horas a 35° C (Medio ambiente)
Interpretación
Blgo: Jhonatan Ipanaque Chozo
CBP:12135
Mayor igual a 19: negativo
Mayor igual a 19 con presencia de colonias dentro del halo: Indeterminado
16 – 18 mm sin colonias dentro de la zona: indeterminado
16 – 18 mm con colonias dentro de la zona: Positivo
6 – 15 mm: Positivo
2. Método de inactivación de carbapenem simplificado (Oxoid, Hampshire, Reino
Unido).
Enterobacterias.
Colocar 1- 3 colonias de las bacterias que han sido previamente cultivadas
en Agar Sangre sobre un disco de Imipenem.
Preparar una suspensión equivalente a 0.5 de Mc Farland de E. coli ATCC
25922 en solución salina y luego inocular en una placa de agar Muller hinton
Pseudomonas aeruginosa y Acinetobacter baumannii
Colocar 1- 3 colonias de las bacterias que han sido previamente cultivadas
en Agar Sangre sobre un disco de Imipenem.
Preparar una suspensión equivalente a 0.5 de Mc Farland de E. coli ATCC
25922 en solución salina
Luego de E. coli ATCC 25922 diluir 1:10 en solución salina y se inoculó en
la placa MHA.
Ambos
Colocar sobre las placas de E.coli ATCC el disco de imipenem, por el lado
que tiene impregnado las bacterias. Colocar un disco adicional de Imipenem
como prueba.
Incubar de 16 – 18 horas a 35° C (Medio ambiente)
Lectura
6 - 20 mm o crecimiento de colonias satélites en un diámetro de 22 mm : Positivo
23 – 25 : Indeterminado
Mayor de 26 mm: Negativo
Blgo: Jhonatan Ipanaque Chozo
CBP:12135
PREDIFUSION PARA COLISTIN
Colocar una tableta de COL 10 µg, sobre la superficie seca de una placa de agar MH, sin
inocular. Nota: en una misma placa se podrán colocar hasta dos tabletas para evaluar dos
cepas distintas (foto)
2. Incubar la placa 2hs en estufa a 35-37ºC.
3. Retirar la placa de la estufa y con un suave golpe, remover la tableta del agar.
4. Dejar la placa pre-difundida a temperatura ambiente durante 18-22hs. antes de usar.
5. Pasado este período de tiempo la placa puede usarse o conservarse en frio (4ºC) durante
una semana.
6. Para inocularla, hisopar la superficie del agar pre-difundido con una suspensión
bacteriana
equivalente al 0,5 de Mc Farland del aislamiento a ensayar. Incubar en aerobiosis a 35-
37ºC por 18-20hs.
7. Medir la zona de inhibición generada e interpretar de acuerdo a las recomendaciones del
fabricante:
MARCA DE CATEGORIA ACINETOBACTER P.AERUGINOSA ENTEROBACTERIAS
DISCO
ROSCO Susceptible ≥20 ≥16 ≥16
Resistente ≤13 ≤11 ≤11
OXOID Susceptible ≥16 ≥16 ≥20
Resistente ≤11 ≤11 ≤17
BBL Susceptible ≥16 ≥16 ≥16
Resistente ≤11 ≤11 ≤11
Blgo: Jhonatan Ipanaque Chozo
CBP:12135
Resistencia a las fluoroquinolonas
Gram negativos
ADN Girasa (gen gyr A,gyr B, Par C)
Gram Positivos:
Topoisomerasa(grlA,grlB,Par E)
Plasmidos (qnr), este complejo se une a la ADN girasa
Blgo: Jhonatan Ipanaque Chozo
CBP:12135
Betalactamasas de espectro Extendido
CTX= ≤27
E. coli, klebsiella spp,P.mirabilis,Salmonella spp, Shigella spp
CAZ= ≤22
Ceftazidima detecta más eficientemente las BLEE derivadas de TEM, SHV y PER-2;
mientras que cefotaxima detecta mejor las de tipo CTXM.
A. Métodos basados en la utilización de inhibidores de ß-lactamasas(método francés)
Técnica de la doble difusión con discos: se basa en la sinergia de doble disco. Se utiliza
una placa de agar Mueller-Hinton inoculada con una suspensión bacteriana sobre la que se
colocan los discos de cefalosporina y el disco con el inhibidor de betalactamasa a
determinada distancia (30 mm o 20 mm si se desea aumentar la sensibilidad) de los discos
de ácido clavulánico. Si aparece una ampliación entre los halos de inhibición en alguno de
los antimicrobianos y el disco con el inhibidor de betalactamasa se considera que existe
BLEE.En las enterobacterias productoras de AmpC inducible, puede utilizarse la
aproximación de cefepima (CFP) _ ampicilina/ ácido clavulánico (AMC)
B. Prueba de combinación de discos(método Americano)
Utilización de discos con cefalosporinas de 3º generación, sola y con ácido clavulánico.
Actualmente, se cuenta con discos de ceftazidima/ac. Clavulánico (30/10mg),
cefotaxima/ac. clavulánico (30/10mg) y cefpodoxima/ac. clavulánico (10/10 mg). Se
confirma la presencia de BLEE cuando el halo de inhibición de la combinación es = 5 mm
respecto de la cefalosporina sola
Nota : Existen BLEE tipo GES que se caracterizan por hidrolizar cefalosporinas. Sin
embargo, a diferencia de la mayoría de las BLEE, GES-1 no hidroliza el aztreonam y se
presentan con mayor frecuencia en aislamientos de Pseudomonas. Fenotipicamente se
pueden detectar colocando un disco de IMI cerca del disco de CAZ, evaluar sinergia en la
intersección de ambos.
Blgo: Jhonatan Ipanaque Chozo
CBP:12135
Betalactamas tipo Amp C
El ácido borónico y la cloxacilina inhiben la actividad de las betalactamasas de clase C.
Existen numerosos estudios que confirman su utilidad para detectar microorganismos que
poseen simultáneamente una BLEE y una betalactamasa de tipo AmpC. La prueba se
realiza adicionando ácido 3-amino-fenil-borónico en discos que contienen cefotaxima o
ceftazidima con/sin ácido clavulánico. También se puede emplear la técnica de difusión con
doble disco que revelaría un efecto sinérgico entre la cefoxitina o el cefotetán y el ácido
borónico,
Nota: La resistencia a cefoxitin se debe también a mecanismos de impermeabilidad, es mas
frecuente en Klebsiella. En caso de no haber sinergia debe corroborarse con el disco de
cefotetan,una bacteria productora de AmpC suele resistencia al cefoxitin y
cefotetan.Cuando existe fenómeno de impermabilidad el Cefotetan es sensible.
Amp C Cromosomica inducible
Blgo: Jhonatan Ipanaque Chozo
CBP:12135
Metodo para determinar Resistencia a Vancomicina y Teicoplanina en cocos gram
positivos
Blgo: Jhonatan Ipanaque Chozo
CBP:12135
Staphylococcus resistentes a ala meticilina
El disco de FOX es únicamente usado para Staphylococcus spp, para el caso de
S.pseudo intermedius y S.schleiferi debe usarse el disco de OXA.
Blgo: Jhonatan Ipanaque Chozo
CBP:12135
Blgo: Jhonatan Ipanaque Chozo
CBP:12135
