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Revista de investigación biomédica, 2019 33(5): 333–342

Artículo original

Caracterización de levaduras orales aisladas de individuos sanos atendidos

en diferentes clínicas odontológicas colombianas

Raúl Eduardo Rivera1, Alejandra Zuluaga2 , Karen Arango2 , Itzjak Kadar1 , Paola Andrea Pinillos1 ,
Luis Fernando Montes1 , Eugenia Catalina Cepeda1 , Ernesto González1 , Pedro Antonio Alfonso1 ,
Andrea Alejandra Villalba1 , Luis Fernando Casanova1, Adolfo Pérez1, Armando Roa1, Martha Jhoana Arias1,
Jorge Orlando Francisco Cuellar1 , Lorena Pedraza1, Adiel Alberto Vasquez1 , Blanca Lynne Suárez1 ,
Beatriz L. Gomez2,3, Catalina De Bedout2, Luz Elena Cano2,4
1Grupo de Investigación en Salud Bucal, Facultad de Odontología, Universidad Antonio Nariño, Armenia, Quindío 630001, Colombia; 2Unidad
de Micología
Médica y Experimental, Corporación de Investigaciones Biológicas (CIB), Medellín, Antioquia 050034, Colombia; 3Facultad de Medicina y
Ciencias de
la Salud, Universidad del Rosario, Carrera, Bogotá 111221, Colombia; 4Facultad de Microbiología, Universidad de Antioquia,
Medellín, Antioquia 050036, Colombia.

Abstracto

El objetivo de este estudio fue identificar las levaduras más frecuentes en la cavidad oral de individuos adultos sin trastornos
inmunológicos y asociar la presencia de estas levaduras orales con diferentes características de cada individuo. Se obtuvieron muestras
de enjuague bucal de 96 adultos sanos y se cultivaron en medios Sabouraud dextrosa agar y CHROMagar. Las levaduras se identificaron
mediante secuenciación de la región D1/D2 del gen 28S rRNA . Se analizó la probable asociación entre las características sociodemográficas,
índice de masa corporal, antecedentes médicos familiares y personales, higiene bucal, hábitos de consumo de tabaco y/o alcohol y la
presencia de hongos orales. Se emplearon tablas de contingencia y regresión logística para evaluar las posibles relaciones entre la
presencia de hongos orales y colonización mixta con estas variables. El 57,3% de los individuos sanos presentó levaduras orales y el
21,8% presentó colonización mixta. Las levaduras más prevalentes fueron Candida albicans (52%), C. parapsilosis (17,9%) y C. dubliniensis
(7,57%). Las levaduras con colonización mixta más frecuente fueron C. albicans y C. parapsilosis. No se encontraron relaciones entre las
variables analizadas. Sin embargo, la presencia de colonización mixta se relacionó con la presencia de prótesis dentales (P<0,006),
aparatología dental (P=0,016) e índice de O’Leary (P=0,012). Este es el primer estudio que caracteriza levaduras orales en individuos
sanos colombianos, determinando las levaduras orales más prevalentes C. albicans, C. parapsilosis y C. dublinensis y una asociación de
colonización mixta con el uso de prótesis y aparatología dental y mala higiene.

Palabras clave: levadura oral, especies de Candida , epidemiología microbiana

Autor para correspondencia: Raúl Eduardo Rivera, Grupo de Número CLC: R372, Código de documento: A
Investigación en Salud Bucal, Facultad de Odontología, Universidad Los autores no declararon ningún conflicto de intereses.
Antonio Nariño, Av. Bolívar # 49 Norte­30, Armenia, Quindío 630001,
Este es un artículo de acceso abierto bajo la licencia Creative Commons Atribución
Colombia. Tel/Fax: +573128693374/+5767494981, Correo
(CC BY 4.0), que permite a otros distribuir, remezclar, adaptar y desarrollar a partir
electrónico: [email protected].
de este trabajo para uso comercial, siempre que se cite correctamente el trabajo
Recibido el 20 de julio de 2018, revisado el 11 de diciembre de 2018, aceptado 28
original.
Febrero 2019, Epub 03 Mayo 2019

© 2019 por la Revista de Investigación Biomédica. https://doi.org/10.7555/JBR.33.20180067

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334 Rivera RE et al. J Biomed Res, 2019, 33(5)

Introducción residentes en los 32 Departamentos (Estados) del país, quienes

fueron encuestados y evaluados clínicamente.
En la actualidad, se han logrado grandes avances en el A pesar de esta importante cobertura, los datos correspondientes
conocimiento de la prevalencia y diversidad de las comunidades sobre colonización fúngica oral no fueron publicados.

microbianas asociadas a casi todas nuestras superficies mucosas Sin embargo, los resultados de este estudio revelaron un aumento
y, como resultado, los estudios sobre la microbiota han influido en de la enfermedad periodontal, fluorosis leve, edentulismo, lesiones

procesos que van desde la digestión hasta el comportamiento, protésicas y estomatitis, esta última fuertemente asociada con la

aumentando así su importancia como componente fundamental de candidiasis oral y la colonización fúngica[10] .

la fisiología. El término microbiota se ha utilizado en estudios

recientes para Algunos de estos estudios han proporcionado cifras aproximadas

indican que otros microorganismos, específicamente los hongos, sobre la prevalencia de la colonización fúngica oral por Candida

también son importantes y se utiliza el término "micobiota" en spp. en Colombia a pesar de que no se dispone de investigaciones

referencia a este componente fúngico[1] . El microbioma oral sobre las diferentes especies de hongos asociadas a esta
colonización o de datos que contengan
humano es la microflora que tiene
Se carecía de información sobre los aspectos biológicos, clínicos y
recibió la mayor atención. Se muestrea fácilmente y parece estar
epidemiológicos del problema, por lo que, considerando la falta de
fuertemente asociada con importantes enfermedades de
información sobre los hongos que habitan en la cavidad bucal, se
colonización oral como caries dentales y enfermedad de las encías
propuso un estudio multicéntrico con el objetivo de identificar las
(periodontitis) con la identificación de aproximadamente 600
levaduras más frecuentes encontradas en la cavidad bucal de
especies bacterianas prevalentes en la cavidad oral humana [2­3] .
individuos adultos libres de trastornos relacionados con el sistema
A pesar del hecho de que la cavidad oral humana está habitada por
inmune y asociar la presencia de estas levaduras bucales con
muchos microorganismos diferentes, incluidos virus, bacterias y
diferentes características de los individuos que acudieron a 9
hongos, los estudios sobre la microbiota oral se han centrado
diferentes clínicas odontológicas adscritas a la Universidad Antonio
principalmente en los componentes bacterianos; sin embargo,
Nariño y ubicadas en varias ciudades de Colombia.
recientemente se ha evaluado la micobiota oral de la boca sana y
se ha demostrado que contiene 74 especies cultivables y no
cultivables.
Materiales y métodos
géneros de hongos cultivables[4] . Además, también se ha
encontrado que el número de géneros bacterianos y fúngicos entre Declaraciones éticas
individuos no infectados e infectados por VIH osciló entre 8­14 y
De todas las personas que aceptaron participar en el estudio se
1­9, respectivamente, con especies del género Candida
obtuvo el consentimiento informado, según el reglamento 008430
predominando en ambos grupos[5] .
de 1993 del Ministerio de Salud de Colombia. El estudio fue
aprobado por los Comités de Ética de la Universidad Antonio Nariño.
En Colombia, los trabajos sobre hongos orales aún no han sido
explorados en personas inmunocompetentes. Sin embargo, existe
un estudio disponible en pacientes diabéticos tipo 2, centrado en la
identificación de levaduras orales en el cual los resultados mostraron Participantes del estudio
que las especies del género Candida fueron los microorganismos
Se obtuvieron muestras de enjuague bucal de 96 pacientes
más prevalentes (71%) con predominio de C. albicans (48,7%).
adultos sanos que asistieron a las clínicas odontológicas de la
Además, también se identificaron otros géneros representados por
Universidad Antonio Nariño en nueve ciudades colombianas
Rhodotorula, Trichosporon, Saccharomyces, Cryptococcus y
(Armenia, Bogotá DC., Cúcuta, Ibagué, Neiva, Palmira, Villavicencio,
Kloeckera (16,8%)[6] . Adicionalmente, algunos estudios en
Popayán y Bucaramanga).
pacientes con VIH han establecido que la candidiasis oral es la
Se incluyeron únicamente pacientes sin enfermedades sistémicas,
segunda lesión más prevalente, después de la gingivitis, que que no estuvieran recibiendo o no hubieran recibido tratamiento
presenta esta población (7,27%[7] , 12,8%[8] y 35,5%[9]). Sin farmacológico con antibióticos, antimicóticos o corticoides durante
embargo, en estos estudios no se identificaron especies de los últimos 6 meses. Inicialmente, se realizó un examen bucal por
levaduras asociadas a esta patología. un clínico que evaluó la presencia de prótesis dentales y de lesiones
en las mucosas y luego se obtuvo la siguiente información
Además, en 2014 durante el IV Estudio Nacional de Salud Bucal, demográfica de cada paciente: edad, género, nivel socioeconómico,
ENSAB IV (IV Estudio Nacional de Salud Bucal) liderado por el ocupación, índice de masa corporal, antecedentes médicos
Ministerio de Salud y Protección Social de Colombia con el propósito familiares y personales, hábitos de higiene bucal, hábitos de
de determinar el estado de salud bucal de cerca de 20 000 consumo de tabaco y alcohol, así como la
colombianos
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Caracterización de levaduras orales en clínicas odontológicas colombianas 335

Existencia de enfermedad inmunosupresora. especie Clustal

enW (https://embnet.vital­it.ch/software/ClustalW.html).
Genbank usando

Recolección de muestras
Los árboles filogenéticos se generaron utilizando el método
Las personas que acudían a la clínica eran recibidas por la UPGMA[13] en el software Molecular Evolutionary Genetics
mañana antes del desayuno o de cepillarse los dientes, y se les Analysis (MEGA), versión 7 (disponible en: http://
indicaba que hicieran un enjuague bucal con 10 mL de solución www.megasoftware.net/). El árbol de consenso bootstrap se
salina durante aproximadamente 30 segundos, y arrojaran el infirió a partir de 500 réplicas[14] y las distancias evolutivas se
contenido de la boca en un Falcon de 50 mL. calcularon utilizando el método de máxima verosimilitud

tubo. Las muestras recolectadas se centrifugaron a 3 500 r/min compuesta[15] .

durante 30 minutos a 4 °C para separar las células (pellet) de

los componentes solubles extracelulares (sobrenadante). Análisis estadístico

Se utilizó el análisis de correspondencias y tablas de

Medio de cultivo y aislamientos de almacenamiento contingencia mediante el software Infostat versión 2010[16] para
evaluar la asociación entre las variables edad, género, nivel
Los pellets celulares se sembraron directamente en placas de
socioeconómico, ocupación, índice de masa corporal,
Petri con medio de agar dextrosa Sabouraud® (Becton Dickinson
antecedentes médicos familiares y personales, hábitos de higiene
and Co. BDTM, referencia 221988, EE. UU.) y CHROMagar
bucal, hábitos de consumo de tabaco o alcohol y presencia de
Candida® (CHOMagar Microbiology, París, Francia). Las placas
hongos bucales. Posteriormente, se realizó un análisis de
se incubaron a 25 °C durante 20 días con lecturas semanales
regresión logística para evaluar las posibles relaciones entre la
para evaluar los cultivos positivos. Las colonias de levaduras
presencia de hongos bucales, colonización mixta o tipo de
aisladas que crecían en las placas se recolectaron con un asa y
levadura con las variables edad, género, nivel socioeconómico,
se suspendieron en tubos estériles con agua destilada a 4 °C y
ocupación, índice de masa corporal, antecedentes médicos
se congelaron en medio de leche (leche desnatada, BDTM,
familiares y hábitos de higiene bucal personales, así como hábitos
referencia 232100) a −20 °C. El almacenamiento se realizó por de consumo de tabaco y/o alcohol (significancia de P<0.05) en el
ambos métodos para reducir el riesgo de perder los software estadístico STATGRAPHICS Centurion .
microorganismos durante el proceso.
versión 16.1.15.

Identificación molecular
Resultados
Se extrajo ADN genómico del aislado
Colonias cultivadas en los medios de cultivo descritos Demografía de los participantes y frecuencia de las levaduras
anteriormente mediante un kit QIAamp DNA mini (QIAGEN, orales
Germantown, MD, EE. UU.), siguiendo las recomendaciones del
Un total de 96 individuos (64 mujeres y 32 hombres) de nueve
fabricante. El marcador molecular utilizado fue la región D1/D2
ciudades colombianas fueron incluidos en el estudio siendo su
del gen 28S rRNA que se amplificó siguiendo las directrices origen el siguiente: 21 Armenia (21,9%), 10 Bogotá DC. (10,4%),
internacionales para la identificación molecular de hongos 10 Cúcuta (10,4%), 10 Ibagué (10,4%), 10 Neiva (10,4%), 10
aplicadas para la identificación de especies de Candida [11–12] . Palmira (10,4%), 10 Villavicencio (10,4%), 8 Popayán (8,3%) y 7
Los productos amplificados de la región D1/D2 (~600 pb) se Bucaramanga (7,3%) (Tabla 1).
enviaron a Macrogen (Maryland, EE. UU.) para secuenciación
bidireccional de Sanger y el tamaño del producto de amplificación La colonización de la cavidad oral por levaduras según género
se evaluó mediante electroforesis en gel de agarosa. Se utilizó el fue de 59,4% en mujeres y 53,1% en hombres, entre los cuales
software Sequencher 5.0 (Gene Code Corporation) para la 26,3% y 11,8% presentaron colonización mixta, respectivamente.
edición y alineamiento de las secuencias. Luego se realizó una Los rangos de edad con mayor frecuencia de levaduras orales
búsqueda de cada secuencia para establecer similitud con cepas fueron 72,7% (>60 años), 66,7% (25­35 años) y 63,3% (48­59
conocidas de acuerdo con las siguientes bases de datos: NCBI años). De acuerdo al índice de masa corporal, 84,6% de los
(BLAST) (National Center for Biotechnology Information), CBS­ individuos se categorizaron con peso normal (54,2%) y sobrepeso
KNAW (Fungal Biodiversity Centre) y Mycobank (International (34,4%), y presentaron levaduras orales en 61,5% y 54,5%. Por
Mycological Association). Los ensayos se realizaron por triplicado. otro lado, se encontró un mayor conteo de levaduras en individuos
Para confirmar el nombre de especie asignado a cada levadura, de nivel socioeconómico medio a bajo, mientras que los únicos
alineamos las secuencias de ADN obtenidas con las secuencias dos individuos de nivel medio alto no tenían levaduras orales
de ADN informadas para cada aisladas.

Aunque la mayoría de la población del estudio informó estar

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336 Rivera RE et al. J Biomed Res, 2019, 33(5)

Tabla 1 Frecuencia de levaduras orales y colonización mixta encontrada en 96 individuos sanos atendidos en consulta en clínicas odontológicas.
De nueve ciudades diferentes de Colombia en 2013

Presencia de levaduras orales Armenia Bogotá Bucaramanga Cúcuta Ibagué Neiva Palmira Popayán Villavicencio Total [n (%)]

No 5 6 4 7 5 5 4 2 3 41 (42,7)

Sí 16 4 3 3 5 5 6 6 7 55 (57.3)
Colonización mixta
4 1 1 0 1 0 0 3 2 12 (21.8)
(más de una especie identificada)
Total 21 10 7 10 10 10 10 8 10 96

no fumadores (91,7%) o consumidores de alcohol (78,1%), entre C. albicans y C. parapsilosis fue la más
Las frecuencias de hongos orales fueron similares en los fumadores. común (5 sujetos). También observamos co­colonización entre
(50%) y no fumadores (58%), así como en aquellos C. albicans, C. intermedia, C.
que consumieron alcohol (52,4%) y los que no lo hicieron tropicalis, C. glabrata y C. fermentati, así como
(58,7%). Estos hallazgos también fueron evidentes para otros otra co­colonización entre C. dublinensis y C.
variables como hábitos de higiene bucal, presencia de parapsilosis con C. glabrata, C. lusitaniae y
prótesis o aparatos, estado, color y textura de Geotrichum candidum (Cuadro 3).
mucosa oral e índice de O’Leary (Tabla 2).
Análisis de datos
Secuenciación de ADN e identificación molecular de
El análisis de correspondencia se realizó en el
levadura oral
características sociodemográficas, índice de masa corporal,
Se utilizó el método UPGMA para construir un Historial médico familiar y personal, higiene bucal,
dendrograma de secuencias basado en secuencia Consumo de tabaco y/o alcohol, hábitos y
similitud para saber cómo son las secuencias presencia de hongos bucales. Se demostró una posible
agrupados y cómo se relacionan. El porcentaje de asociación entre edad, antecedentes médicos familiares y uso
árboles replicados en los que se agruparon los taxones asociados de prótesis dentales o aparatos dentales, presencia de
Juntos en la prueba bootstrap (500 réplicas) fue levadura oral, colonización mixta, especies de levadura de
se muestra junto a las ramas. La evolución individuos con sólo un microorganismo ( ) y de
Las distancias se calcularon utilizando el Máximo aquellos con dos ( ) encerrados por el círculo rojo en
Método de verosimilitud compuesta y ocurrió en el Figura 3.
unidades del número de sustituciones de bases por sitio. De igual forma, el resultado de las tablas de contingencia
El análisis involucró 112 secuencias de nucleótidos. Codón evidenció estas asociaciones y, adicionalmente, incluyó
Las posiciones incluidas fueron 1.º, 2.º, 3.º y no codificantes. una asociación entre el índice de O'Leary con mixto
Las posiciones que contenían lagunas y datos faltantes fueron colonización y especies de levaduras de individuos que
Eliminados. Quedaron 409 puestos en la final. tenían un solo hongo en la cavidad oral y aquellos con
Conjunto de datos. El grupo obtenido de todas las especies de levadura. dos (Tabla 4).
secuencias encontradas en este estudio con las especies de levadura Para confirmar estas asociaciones, se realizó una regresión logística.
Las secuencias de Genbank nos permitieron confirmar una El análisis se realizó con presencia de levadura oral.
Identificación correcta de las especies de levaduras presentes en la cavidad oral. y la colonización mixta como variables independientes
cavidad de pacientes sanos (Fig. 1). por el método de pasos (valor de corte, 0,05). Asociación con la
En este estudio, entre 67 aislados de la enfermedad oral recolectados presencia de levadura oral con cualquier variable
levadura, 35 eran C. albicans, 29 no C. albicans y No se encontró ningún estudio. Sin embargo, la mezcla
un aislado de otras levaduras, incluida Pichia kluyvery, La colonización se asoció con el uso de técnicas dentales.
Geotrichum candidum y Rhodotorula mucilaginosa. aparatos (P=0,016), uso de prótesis dental
La levadura oral más prevalente fue C. albicans (52%), (P=0,006), el índice de O'Leary (P=0,012) y el índice ajustado
Entre los aislamientos que no eran C. albicans se encontraban C. parapsilosis odds ratio (IC del 95 %) para el uso de aparatos dentales
(18%), C. dubliniensis (7%), C. glabrata (6%), C. fue de 8,88 (1,33–59,35), utilizó prótesis dental 7,19
tropicalis (3%), C. intermedia (3%) y otras menos (0,52–3,43), índice de O'Leary cuestionable 0,04 (0,00–
Las levaduras comunes encontradas fueron C. lipolytica, C. 0,65) y deficiente en el índice de O'Leary 0,02 (0,00 –0,38)
lusitaniae, C. haemulonni, C. fermentati, Pichia (Tabla 5).
kluyvery, Rhodotorula mucilaginosa y Geotrichum
candidum con una frecuencia de 1,5% cada una (Fig. 2). Discusión
Para los individuos que tuvieron una colonización mixta, dos
Se identificaron especies de levaduras y se produjo la co­colonización. Se ha demostrado que al menos 15 diferentes
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Caracterización de levaduras orales en clínicas odontológicas colombianas 337

Tabla 2 Frecuencia de levaduras orales y colonización mixta según los grupos analizados en 96 individuos sanos estudiados en
Clínicas dentales de nueve ciudades de Colombia en 2013

Presencia de levaduras orales

Variables Categoría n (%)
No [n (%)] Sí [n (%)] Colonización mixta [n (%)]

Género Femenino 64 (66,7) 26 (40,6) 38 (59,4) 10 (26.3)

Masculino 32 (33.3) 15 (46,9) 17 (53.1) 2 (11,8)

Edad 13−24 16 (16.7) 9 (56.3) 7 (43,8) 0 (0.0)

25−35 18 (18.8) 6 (33.3) 12 (66,7) 2 (16,7)

36−47 21 (21.9) 12 (57,1) 9 (42,9) 3 (33.3)

48−59 30 (31.3) 11 (36,7) 19 (63.3) 5 (26.3)

>60 11 (11.5) 3 (27.3) 8 (72,7) 2 (25,0)

Índice de masa corporal Bajo peso: delgadez severa 1 (1.0) 0 (0.0) 1 (100,0) 1 (100,0)

Peso normal 52 (54.2) 20 (38,5) 32 (61,5) 7 (21.9)

Sobrepeso 33 (34,4) 15 (45,5) 18 (54,5) 4 (22.2)

Obesidad: tipo 6 (6.3) 3 (50,0) 3 (50,0) 1 (33.3)

Obesidad: tipo 2 (2.1) 1 (50,0) 1 (50,0) 0 (0.0)

Obesidad: tipo III 2 (2.1) 2 (100,0) 0 (0.0) 0 (0.0)

Estatus socioeconómico Bajo­bajo 23 (24.0) 12 (52,2) 11 (47,8) 2 (18.2)

Bajo 28 (29.2) 13 (46,4) 15 (53,6) 4 (26,7)

Medio­bajo 29 (30.2) 9 (31,0) 20 (69,0) 4 (20,0)

Medio 14 (14.6) 5 (35,7) 9 (64.3) 2 (22.2)

Medio­alto 2 (2.1) 2 (100,0) 0 (0.0) 0 (0.0)

Fumar Sí 8 (8.3) 4 (50,0) 4 (50,0) 0 (0.0)

No 88 (91,7) 37 (42,0) 51 (58,0) 12 (23,5)

Beber alcohol Sí 21 (21.9) 10 (47,6) 11 (52,4) 1 (9.1)

No 75 (78,1) 31 (41.3) 44 (58,7) 11 (25,0)

Cepillado de dientes (una vez al día) Sí 88 (91,7) 38 (43,2) 50 (56,8) 10 (20,0)

No 8 (8.3) 3 (37,5) 5 (62,4) 2 (40,0)

Rendimiento dental Sí 48 (50,0) 18 (38,5) 30 (62,5) 5 (16.7)

No 48 (50,0) 23 (47,9) 25 (52,1) 7 (28,0)

Prótesis dental Sí 32 (33.3) 12 (37,5) 20 (62,5) 8 (40,0)

No 64 (56,3) 29 (45.3) 35 (54,7) 4 (11.4)

Aparatología dental Sí 37 (38,5) 13 (35.1) 24 (64,9) 9 (37,5)

No 59 (61,5) 28 (47,5) 31 (52,5) 3 (9,7)

Estado de la mucosa oral Normal 64 (56,3) 26 (40,6) 38 (59,4) 9 (23.7)

Anormal 32 (33.3) 15 (46,9) 17 (53.1) 3 (17,6)

Mucosa coloreada Normal 84 (87,5) 35 (41,7) 49 (58,3) 12 (24,5)

Anormal 12 (12.5) 6 (50,0) 6 (50,0) 0 (0.0)

Textura mucosa Normal 89 (92,7) 37 (41,6) 52 (58,4) 11 (21.2)

Anormal 7 (7.3) 4 (57,1) 3 (42,9) 1 (33.3)

Índice de O'Leary Aceptable 5 (5.6) 2 (40,0) 3 (60,0) 0 (0.0)

Cuestionable 26 (29.2) 12 (46,2) 14 (53,8) 4 (28,6)

Deficiente 58 (65,2) 25 (43.1) 33 (56,9) 5 (15.2)

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338 Rivera RE et al. J Biomed Res, 2019, 33(5)

gi|478476064 RM
gi|374843697 RM
RM55220 POP­UP

gi|717324940 RM

CH54952
gi|404553684 CH BUC
gi|404553686 CH

55654

55473
gi|404553711 CH

NEI
CA 55214 (A) POB

VIL
CA

CA
CA 55219 (A)
CA PO

(A)
55652 VIL PAL
CA 54883 CA 56589 ARM PAL
gi|190333665 GC CA 54884 CA 56600 BRAZO
PAL 54888
BRAZO 56598
California (A) IBA 54877
California
Número de identificación fiscal 54878
California

33 13
1

13
California BRAZO 56597
89 13 3 CA 54892 PAL
23
California
gi|158562087 GC 2 CA 55915 CUC
13
GC54950 (B) BUC 100 CA 55215 (A) PO
13
gi|312370306 GC 23 0 32 CA 56596 ARM
13 CA 56591 (A) BRAZO
CL 54950 (A) BUC
33
gi|873468550 CL 89 13 0 2 CA 56607 ARM

gi|28372354 100 CA 54873 IBA

CL 20 13 2 CA 56605 BRAZO
gi|695133830
CI CL 100 CA 55472 NEI
56592 13 3
BRAZO
gi|717324968 CI 23 2 CA 55648 (A) VIL
13
18 CA 55221 POBLACIÓN
gi|219879222 CI 0
11 gi|988207918 CA
gi|717324970 CI 3
100 3
CI 56591 (B) BRAZO 18 13 CA 55477 NEI
59 100 0 CA 56588 (A) BRAZO
PK55656 VIL 29
gi|164452792 Pieza 3 CA 55478 (A) NEI
100 28 92 2 gi|988207950 CA
gi|406352384 PK 70 13
29 CA 55218 POY
gi|48596766 PB 16 22 99 13 2
CG 55214 (B) POP 7 CA 54252 (B) PANTANO
64 0 CA

CG 54872 IBA 100 100 54874

0 0
Asociación Internacional de Abogados

CA
56601
CG 55657 VIL 15 100
51 3 gi|988207919
BRAZO
California California

CG 56608 (B) BRAZO

68 18
gi|158149050 CG 24100 California
54257 BOG

gi|695133793 CG 60 99 1 10 54258 BOG

67 CA 56593 ARM
gi|695133799 CG 23 23 10
CLI 55655 VIL 100 100 11 CD 56608 (A) BRAZO
1 gi|448278517gi|158149046
CD CD
gi|162951316 CLI
23
1710 100 68
CD 56590 BRAZO
gi|663440474 CD CD 55470 (B) NEI
100

gi|118123423 CLI
CF 0 0 5
CD 54948 BUC
CP 54877 (B)IBA CD 55470 (A) NEI
gi|350264099 CLI
18 0
100 CP 55215 (B) POP
CP 56588 (B) BRAZO

gi|87298854 CF CF 5 6
5 CP 55219 (B) PO
CD 56603 (A) BRAZO
0

CP 56603 (B) BRAZO

6 CP 55653 VIL
5

CP 55923 CUC
4

CP 54885 PAL CP 55654 (B) VI

gi|988207920 CP Brazo CP 56602
CP 54886 PAL gi|988207945CP
PC449702889|español

gi|751129755 Connecticut
CP 55917 CUC
CP 54875 ABI

(B)VIL 55648
Connecticut

CF gi|751129756
BOG 54259

Connecticut

(A) BOG 54252

gi|988207947 CT
gi|988207928
Connecticut
gi|988207948

Fig. 1 Alineamiento de secuencias de ADN de especies de levaduras encontradas en la cavidad oral de pacientes sanos con secuencias de
especies de levaduras reportadas en la colección Genebank (NCBI) utilizando el método UPGMA en el software Mega 7. Cada levadura
identificada está representada por un círculo de color lleno, el nombre de la especie CA: C. albicans, CD: C. dubliniensis, CP: C. parapsilosis,
CT: C. tropicalis, CLI: C. lipolytica, CF: C. fer­mentati, CG: C. glabrata, PK: Pichia kluyvery, CI: C. intermedia, CL: C. lusitaniae, GC: Geotrichum
candidum, CH: C. haemulonni, RM: Rhodotorula mucilaginous; el código de la muestra y el lugar de origen del individuo del cual se aisló la
levadura: Armenia (ARM), Bogotá DC. (BOG), Cúcuta (CUC), Ibagué (IBA), Neiva (NEI), Palmira (PAL), Villavicencio (VIL), Popayán (POP) y
Bucaramanga (BUC). El círculo de color indica las secuencias de control obtenidas del Genbank para cada especie de levadura.

Las especies de Candida pueden causar enfermedades humanas C. albicans, especie que comprende entre el 70% y el 80% de
y más del 90% pueden producir infecciones invasivas, a saber, todos los aislamientos orales, seguida de C. glabrata con un 5%
C. albicans, C. glabrata, C. tropicalis, C. parapsilosis y C. Kruse: y C. tropicalis con un 8%[18] . Sin duda, Candida albicans es la
sin embargo, las infecciones de las mucosas por Candida spp. levadura más común en la cavidad oral. Sin embargo, la
como la orofaringe, el esófago y la vagina no se consideran frecuencia de otras levaduras, incluidas las no C. albicans ,
clásicamente invasivas[17] . Las infecciones fúngicas invasivas puede variar según el tipo de paciente y los métodos utilizados
en la cavidad oral son menos frecuentes e incluyen aspergilosis para su aislamiento e identificación.
(Aspergillus spp.), criptococosis (Cryptococcus neoformans), En este caso, una identificación molecular de las levaduras orales
histoplasmosis (Histoplasma capsulatum) , paracoccidioidomicosis recuperadas de pacientes sanos permitió definir una prevalencia
(Paracoccidioides brasiliensis), geotricosis (Geotrichum del 55,3% de colonización oral por levaduras, siendo C. albicans
candidum), blastomicosis (Blastomyces dermatitidis) y la especie más común (52%) seguida de C. parapsilosis (17,9%),
mucorrmicosis (Mucoraceae spp.), comúnmente diagnosticadas C. dubliniensis (7,5%), C. glabrata (6%) y las únicas levaduras
en pacientes inmunodeprimidos, situación a diferencia de las diferentes a las especies de Candida , a saber , Pichia kluyvery,
infecciones fúngicas superficiales causadas principalmente por Geotrichum candidum y Rhodotorula mucilaginosa tuvieron una
Candida spp. siendo las más frecuentes frecuencia muy baja (1,5%).
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Caracterización de levaduras orales en clínicas odontológicas colombianas 339

Candida dubliniensis 7,5%

Candida glabrata 6,0%

Candida tropicalis 3,0%

Candida intermedia 3,0%
Candida
Candida lipolítica 1,5%
parapsilosis
18,0% Candida lusitaniae 1,5%

Candida haemulonni 1,5%

Otros 10,5% Candida fermentati 1,5%

Candida albicans Geotrichum candidum 1,5%
52,0%
Pichia Kluyvery 1,5%

Rhodotorula mucilaginosa 1,5%

Fig. 2 Distribución de especies de levaduras identificadas en la cavidad oral de 96 individuos sanos estudiados en clínicas dentales de nueve ciudades de Colombia en
2013.

de estos pacientes, el 21,8% presentaron colonización mixta generada Se encontraron diferencias significativas en relación a las levaduras
por solo dos especies de levaduras, estaban relacionadas con el uso orales identificadas en 9 ciudades colombianas[19] .
de prótesis dentales y aparatología dental e índice de O’Leary Cavaleiro et al en 2013 utilizaron la técnica tRNA­PCR
cuestionable o deficiente. huella digital y secuenciación del dominio 28S rDNA D1/D2 para
Xu y Mitchellin en 2003 analizaron en 722 personas sanas de las identificar todas las levaduras aisladas de cultivos CHROMagarTM
cuales eran 239 chinos y 483 norteamericanos, el cultivo de saliva en Candida de hisopos orales que se habían recolectado de 178
CHROMAgar, utilizando el análisis API 20C para la identificación de pacientes, en quienes las levaduras más frecuentes fueron C. albicans
levaduras y la amplificación de (D1/D2) del ARNr 28S para diferenciar (66%), C. glabrata (9%), C. tropicalis (4,5%), C. parapsilosis (4,5%) y
C. albicans de C. dubliniensis, hallazgo que reveló que la prevalencia C. lusitaniae (4,5%), mientras que las levaduras no Candida fueron
de levaduras orales en la población china fue de 66.9%, grupo donde Pichia norvegensis, Torulaspora delbrueckii, Debaryomyces hansenii,
las 3 especies más comunes fueron C. parapsilosis (39.4%), C. Trichosporon cutaneum y Rhodotorula mucilaginous[20] . Identificamos
guilliermondii (21.3%), y C. famata (11.9%) con una cuarta en nuestro trabajo G. candidum, P. kluyvery y R. mucilaginous en un
correspondiente a C. albicans (9.4%). paciente. Varios autores categorizaron estos aislamientos como
especies transitorias debido a exposiciones ambientales accidentales
a ciertos alimentos, agua o suelo, entre otros. Además, estos
Esto fue diferente en los individuos americanos en los que la mayor resultados determinaron que el 19,4% de los pacientes tenían
prevalencia (90,6%) correspondió a C. albicans, seguida de C. colonización por múltiples especies de levaduras, dos, tres o incluso
parapsilosis (3,1%) y C. tropicalis (2,6%). A pesar de estas diferencias, cuatro levaduras diferentes en el mismo paciente con la
la microflora de levaduras orales no estuvo determinada por la etnia
como se observó en nuestro trabajo porque no

Tabla 3 Frecuencia de individuos con colonización mixta por levaduras orales (con dos especies diferentes) en la población estudiada en clínicas odontológicas de nueve
ciudades de Colombia en 2013

Especies de levaduras orales Individuos con colonización mixta (n)

Candida albicans + Candida parapsilosis 5

Candida albicans + Candida intermedia 1

Candida albicans + Candida tropicalis 1

Candida albicans + Candida glabrata 1

Candida albicans + Candida fermentati 1

Candida dubliniensis + Candida parapsilosis 1

Candida dubliniensis + Candida glabrata 1

Candida lusitaniae + Geotrichum candidum 1

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340 Rivera RE et al. J Biomed Res, 2019, 33(5)

3.37 Endocrino

Candida dubliniensis

Candida glabrata

Candida intermedia
Candida intermedia Candida parapsilosis Cáncer­Diabetes
1.41
25­35
Infección mixta
Candida parapsilosis
Levadura oral
Rhodtorula mucilaginosa NR med fam hist Candida tropicalis
Candida albicans
Sin abolladuras Apara Diabetes­Cardiovascular 48­59
13­24 Candida fermentati
Sin prótesis
Diabetes sin levadura Dent Apara Cardiovascular
36­47 Cáncer Geotrichum candidum
Prótesis de Candida
­0,56 Sin levadura spl tropicalis
Sin infección mixta Cáncer­Cardiovascular>60
Pichia kluyvery
No hay levadura oral Cáncer­tiroides Candida glabrata
Cardiovascular­trigliceridos­respiratorio Candida haemulonni

Artritis cardiovascular
­2,52

Cáncer­Endocrino

−4,48
­1,71 ­0,41 ­0,89 2.19 3,50

EDAD Prótesis APARATOLOGÍA DENTAL ESPECIES DE LEVADURA

INFECCIÓN MIXTA HISTORIA FAMILIAR MÉDICA ESPECIES DE LEVADURA Levadura oral

Fig. 3 Análisis de correspondencia entre edad, antecedentes médicos familiares, uso de prótesis o aparatos dentales, presencia de
levaduras, colonización mixta y especies de levaduras representadas por solo un microorganismo ( ) y las que tenían dos ( ) en 96 sanos
Individuos estudiados en clínicas odontológicas de nueve ciudades de Colombia en 2013. El círculo negro representa la variable relacionada con la ausencia de
levaduras orales y el círculo rojo representa la variable relacionada con la presencia de levaduras orales.

Tabla 4 Asociación estadísticamente significativa entre los resultados de identificación de levaduras, variables sociodemográficas y orales en 96
Individuos sanos colombianos estudiados en clínicas odontológicas de nueve ciudades de Colombia en 2013 (significancia de P<0,05)

Variables Chi­cuadrado de Pearson Valor p

Especies de levadura de envejecimiento 73,25 0,0109

Colonización mixta y prótesis dental 6.86 0,0088

Prótesis dentales y especies de levaduras ( ) 21.67 0,0414

Colonización mixta y aparatos dentales 7.7 0,0055

Colonización mixta e índice de O'Leary 7.61 0,0548

Especies de levadura ( ) e índice de O'Leary 55.04 0,0220

Tabla 5 Resultados de regresión logística de la asociación entre la colonización mixta de levaduras orales y las variables estudiadas en 96
Individuos sanos colombianos estudiados en clínicas odontológicas de nueve ciudades de Colombia en 2013 (significancia de P<0,05)

Intervalo de confianza 95 %
Variables Valor p Error estándar Razón de probabilidades

Límite inferior Límite superior

Aparatología dental usada 0,016 0,95 8.88 1.33 59,35

Prótesis dentales usadas 0,006 0,73 7.19 0,52 3.43

Índice de O'Leary: cuestionable 0,012 1.45 0,04 0.00 0,65

Deficiencia del índice de O'Leary 0,012 1.47 0,02 0.00 0,38

La co­colonización más común es la de C. albicans. Los sustratos acrílicos y el epitelio oral han demostrado que
y C. glabrata se encontraron en tres pacientes. De manera similar, en La coinfección de C. albicans y C. glabrata mejora
En nuestro estudio la frecuencia de colonización mixta fue su capacidad de formar biopelículas mejorando así su
21,8%. Sin embargo, sólo dos especies de levadura fueron invasividad y aumento del daño tisular incluso
identificado en el mismo paciente, principalmente C. albicans con Aunque sean filogenéticamente, genéticamente y
C. parapsilosis en 5 pacientes. Estudios previos sobre fenotípicamente muy diferentes[21–23] . Además, más
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Caracterización de levaduras orales en clínicas odontológicas colombianas 341

Recientemente se ha reportado su ocurrencia en pacientes con Proporcionando ayuda con el idioma y asistencia para la redacción.
enfermedad periodontal[24] . Aunque estudios más recientes han
propuesto que, durante la formación de biopelículas en
candidiasis experimental, parece existir una relación competitiva Referencias
entre C. albicans, C. glabrata y C. Krusey[25] , no se ha registrado
información sobre la existencia de tal sinergismo entre C. albicans Underhill DM, Iliev ID. La micobiota: interacciones entre [1] hongos
y C. parapsilosis y podría haberse visto por primera vez en comensales y el sistema inmunitario del huésped[J]. Nat Rev Immunol, 2014,
Colombia a juzgar por los resultados de este estudio. 14(6): 405–416. [2]
Dewhirst FE, Chen T, Izard J, et al. La cavidad oral humana

microbioma[J]. J Bacteriol, 2010, 192(19): 5002–5017.

A pesar de que la colonización oral es común, varios factores Chen T, Yu WH, Izard J, et al. El microbioma bucal humano [3]

predisponentes como la edad, el uso de prótesis dentales, la mala Base de datos: un recurso accesible en la web para investigar la información

higiene bucal y el estado inmunológico del paciente cooperan[26] . taxonómica y genómica de los microbios orales[J]. Base de datos (Oxford),

En este estudio realizado en Año 2010: baq013.

individuos sanos, ninguna de las variables analizadas (alcoholismo, Ghannoum MA, Jurevic RJ, Mukherjee PK y otros. [4]

tabaquismo, prótesis bucales, aparatos bucales, hábitos de Caracterización del microbioma fúngico oral (micobioma) en individuos
sanos[J]. PLoS Pathog, 2010, 6(1): e1000713.
higiene bucal o anormalidades de las mucosas) mostró asociación
de Mukherjee PK, Chandra J, Retuerto M, et al. Análisis del micobioma oral [5]
con la presencia de hongos en la cavidad bucal, nuestros
pacientes infectados por VIH: identificación de Pichia como antagonista de
resultados solo apuntaron a que sí existe una relación entre la
hongos oportunistas [J]. PLoS Pathog, 2014, 10(3):
higiene bucal y la posibilidad de tener una colonización mixta,
e1003996.
como la observada en personas que usan prótesis dentales o
Suárez BL, Álvarez MI, de Bernal M, et al. Especies de Candida [6] y otras
portan aparatos dentales, y que tienen de 7 a 8 veces más
levaduras en las cavidades bucales de pacientes diabéticos tipo 2 en Cali,
posibilidades de presentar colonización mixta. Para Colombia,
Colombia[J]. Colomb Méd, 2013, 44(1): 26–30.
existe un reporte sobre las levaduras encontradas en la cavidad APLICACIÓN Padilla. Prevalencia de lesiones en cavidad oral en [7]
bucal de pacientes diabéticos tipo , en quienes se encontró
pacientes con VIH /Sida en HERES Salud EU de la ciudad de Santa Marta
colonización mixta con dos y tres levaduras diferentes, y al igual
en el periodo 2006­2007. Universidad Nacional de Colombia. 2011[EB/OL].
que en nuestros resultados, que la colonización mixta de dos http://www.bdigital.unal.edu.co/7000/1/597683.2011.pdf .
levaduras más comunes fue entre C. albicans y C. parapsilosis (5
individuos). Aunque ya se ha estudiado la sinergia entre C. Becerra NEM, Figueroa MMB, Schanowsky FAB, et al. [8]
albicans y C. glabrata , no existen reportes de sinergia entre C. Frecuencia de lesiones en cavidad oral de pacientes con VIH/sida en el
albicans y C. parapsilosis, lo cual podría depender de las Hospital Universitario San Ignacio de Bogotá, Colombia (2005­2010)[J].
poblaciones evaluadas con la posibilidad de que no se encuentre Universidad Odontol, 2012, 31(66): 51–58. [9]

en otras poblaciones. Ricardo JH, Cobos MR, Caballero AJD. Lesiones orales en pacientes con

VIH/SIDA asociadas a terapia antirretroviral y carga viral[J]. Salud Uninorte,

2012, 28(3): 373–381.

Finalmente, este es el primer estudio que aborda levaduras en la Minsalud. estudio nacional de salud bucal. ENSAB [R]. [10]

cavidad oral de personas sanas colombianas que caracteriza las Bogotá: Ministerio de Salud y Protección Social, 2014: 381. [11]

especies con base en técnicas moleculares y permite desde el White TJ, Bruns S, Lee S, et al. Amplificación y secuenciación directa de
genes de ARN ribosómico fúngico para filogenética[M]//Innis MA, Gelfand
contexto microbiológico, comprender mejor la epidemiología y
DH, Sninsky JJ, et al.
biología de las especies de levaduras que habitan la cavidad oral
Protocolos de PCR: una guía de métodos y aplicaciones.
humana.
Ámsterdam: Elsevier, 1990: 315­322.
Expresiones de gratitud Sullivan DJ, Moran GP, Pinjon E, et al. Comparación de la [12] epidemiología,
mecanismos de resistencia a fármacos y virulencia de Candida dubliniensis y
Esta investigación fue apoyada por el Fondo Antonio Nariño.
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Universidad en colaboración con la Biología
Corporación de Investigación CIB (CIB) y las siguientes investigaciones:
Sneath PHA, Sokal RR. Taxonomía numérica: principios y práctica de la
Angela Restrepo Moreno, del CIB, por su apoyo y asesoramiento
clasificación numérica[M]. San Francisco: W.
científico; María Dolly García, del H. Freeman, 1973: 263−268.
Grupo de Investigación y Asesoría en Estadística de la [14] Felsenstein J. Límites de confianza en las filogenias: un enfoque que utiliza
Universidad del Quindío, soporte estadístico; Jorge el bootstrap[J]. Evolución, 1985, 39(4): 783–791. [15]
Enrique Gómez, Néstor Iván Cardona y Aylan Tamura K, Nei M, Kumar S. Perspectivas para inferir filogenias muy grandes
Farid Arenas, del Grupo GEPAMOL, Centro de mediante el método de unión de vecinos [J]. Proc Natl Acad Sci USA, 2004,
Investigación Biomédica, Universidad del Quindío, para 101(30): 11030–11035.
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