NH3

AMONIACO
Enzimático-UV
Determinación cuantitativa de Amoniaco 3. Pipetear en la cubeta:
IVD Blanco RT Estándar Muestra
Muestra ---- ---- 0,1 mL
Conservar a 2-8ºC Agua destilada 0,1 mL ---- ----
USO PREVISTO Estándar ---- 0,1 mL ----
Para determinación cuantitativa in vitro de Amoniaco en plasma. Reactivo (R1) 1,0 mL 1,0 mL 1,0 mL
4. Mezclar, y dejar reposar durante 5 min. Leer la absorbancia inicial de la
PRINCIPIO DEL METODO(1, 4, 5) muestra y del blanco (A1).
El amoniaco se combina con α-cetoglutarato y NADPH en presencia de 5. Añadir entonces:
glutamato deshidrogenasa (GLDH) para producir glutamato y NADP+. El GLDH (R2) 0,01 mL 0,01 mL 0,01 mL
correspondiente descenso de absorbancia a 340 nm es porporcional a la 6. Mezclar e incubar durante 5 min. Leer la absorbancia final de la muestra y
concentración de amoniaco en plasma. blanco (A2).
GLDH
α-cetoglutarato + NH3+NADPH glutamato+ NADP+ CALCULOS
Ablanco = Blanco A1 - Blanco A2
SIGNIFICADO CLINICO Amuestra = Muestra A1 - Muestra A2
La principal fuente de difusión de amoníaco es el tracto gastrointestinal. En
condiciones normales, el amoniaco es metabolizado a urea por las enzimas Amuestra - Ablanco
del hígado. Varias enfermedades, tanto congénitas como adquiridas, Conc. de = x Conc. estándar
causan incrementos de amoníaco (hiperamonemia). La causa principal de Amoniaco Aestandar - Ablanco
hiperamonemia en los bebés es la deficiencia hereditaria
de enzimas del ciclo de la urea. Las enfermedades de hiperamonemia CONTROL DE CALIDAD
adquiridas son causadas por enfermedad hepática, insuficiencia renal, y Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados:
síndorme de Reye. Un nivel alto de amoníaco es tóxico para el sistema Control de Amoniaco 4x2 mL ref.1002240. Se debe ensayar el control al menos
nervioso central. una vez al día. Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia,
se debe revisar el instrumento, los reactivos y la técnica.
REACTIVOS
Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer
NADPH 0,26 mmol/L correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias.
R 1a
α-cetoglutarato 3,88 mmol/L
Reactivo
VALORES DE REFERENCIA(2)
R1b 0,15 mol/L Amoniaco en plasma: 10 - 47 μmol/L
Trietanolamina pH 8,6
Tampón 0,17 - 0,80 μg/mL
R2 GLDH ≥1200 U/mL 0,017 - 0,080 mg/dL
Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio establezca
sus propios valores de referencia.
La concentración del estándar de amoniaco es la
CAL
que viene indicada en la etiqueta del vial.
CARACTERISTICAS DEL METODO
OPCIONAL Control de Amoniaco 4x2 mL ref.1002240 Linealidad: El método es lineal hasta 1180 μmol/L (20 μg/mL, 2 mg/dL).
Si la concentración de la muestra es superior al límite de linealidad, diluir 1/2 con
PRECAUCIONES
ClNa 9 g/L y multiplicar el resultado final por 2.
R1b: H315-Provoca irritación cutánea. H319-Provoca irritación ocular
Sensibilidad: La mínima concentración detectable con un nivel de precisión
grave.
aceptable, se determinó como 23,4 µmol/L (0,39 µg/mL).
Seguir los consejos de prudencia indicados en la FDS y etiqueta del
Precisión:
producto.
Intraserie (n=43) Interserie (n=43)
PREPARACION Media (µmol/L) 66,86 162,23 403,26 66,86 162,23 403,26
- R1a – R1b Reconstituir el contenido de un vial de R1a con 5 mL de R1b SD 2,86 3,16 4,10 4,72 10,49 11,69
tampón. CV (%) 4,3 1,9 1,0 7,1 6,5 2,9
- R2 – CAL Listos para su uso. Exactitud: Los reactivos SPINREACT (y) no muestran diferencias sistemáticas
- Para la utilización de este reactivo en analizadores automáticos, se debe significativas cuando se comparan con otros reactivos comerciales (x).
diluir R2 con 20 mL de R1b. Los resultados obtenidos con 56 muestras de pacientes con concentraciones de
16,57 hasta 881 µmol/L fueron los siguientes:
CONSERVACION Y ESTABILIDAD
Coeficiente de regresión (r)2: 1,0.
R1 (reactivo reconstituido con el tampón) es estable 5 días a 15-25 ºC o 3
Ecuación de la recta de regresión: y= 1,02x – 7,33.
semanas a 2-8 ºC, conservado en ausencia de contaminación bacteriana.
Las características del método pueden variar según el analizador utilizado.
El resto de componentes del kit son estables hasta la fecha de caducidad
indicada en la etiqueta del vial, cuando se mantienen los frascos bien
INTERFERENCIAS(3)
cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su contaminación. No usar
reactivos fuera de la fecha indicada. La hemólisis interfiere en el ensayo.

MATERIAL ADICIONAL NOTAS

- Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 340 nm. 1. A fin de evitar contaminaciones se recomienda utilizar material de plástico
- Baño termostatable a 37ºC ( 0,1ºC) de un solo uso.
- Cubetas de 1,0 cm de paso de luz. 2. SPINREACT dispone de instrucciones detalladas para la aplicación de
- Equipamiento habitual de laboratorio (Nota 1). este reactivo en distintos analizadores.
MUESTRAS (2) BIBLIOGRAFIA
Plasma heparinizado o EDTA plasma. 1. Dewan, J.G., Biochem J., 1938; 32: 1378.
Extraer sangre sin hemólisis y almacenar en baño de hielo. Separar el 2. Mondzac, A., Ehrlich, G.E., Seegmiller, J.E., J Lab Clin. Med., 1965; 66: 526.
plasma o suero de los eritrocitos dentro de los 30 minutos después de la 3. Howanowitz, J.H., Howanowitz, P.J., Skrodzki, C.A., Iwanski, J.A: Clin.
extracción. El ensayo de amoniaco se debe realizar inmediatamente. El Chem., 1984; 30:906.
plasma se puede conservar 2 horas a 2-8 ºC. 4. Neely, W.E., Phillipson, J., Clin Chem, 1988; 34:1868.
5. Pesh-Iman, M., Kumar, S., Willis, C.E., Clin. Chem., 1978; 24:2044.
PROCEDIMIENTO
1. Condiciones del ensayo:
PRESENTACION
Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 340 nm
*Cubeta: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .1 cm paso de luz
Temperatura constante: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 25/30/37ºC Ref: 1001410 Cont. R1a:8  5 mL,R1b:1 x 60 mL,R2:1 x 1 mL,CAL:1 x 5.5 mL
*Se sugiere usar cubetas desechables en lugar de cubetas de flujo, para
evitar posibles contaminaciones en analizadores manuales.
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.

BSIS81-E 23/01/18 SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: [email protected]