TEMA 4: DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO DE LAS ENFERMEDADES INFECCIOSAS

Control de calidad del laboratorio de microbiología clínica, riesgos en el laboratorio de microbiología

clínica (leer)

RIESGO BIOLÓGICO

Clasificación de agentes biológicos según riesgo RD 664/97

1. Grupo 1: Es poco probable que cause infección en individuos sanos. Ambientales, del microbiota o de interés
industrial
Ej: E. coli K12, B. sutilis, S. epidermidis, Lactobacillus, S. cerevisiae
2. Grupo 2: Puede causar una enfermedad de buen pronóstico frente a los que existe tratamiento eficaz o vacuna. Poco
probable que se transmita a la colectividad.
La mayoría de patógenos; S. enterica, S. aureus N. gonorrhoeae
3. Grupo 3: Puede causar enfermedades graves , supone un serio peligro para el trabajador con riesgo de propagación.
Se posee terapéutica, aunque de eficacia variable Mycobacterium tuberculosis Yersinia pestis VIH o hepatitis B y C
4. Grupo 4: Causa enfermedades grave, supone serio peligro para los trabajadores, alto riesgo de propagación y sin
tratamiento eficaz.
Virus del Ébola, fiebre hemorrágica de Crimea, Marburg, viruela

MEDIDAS DE CONTENCIÓN

• Procedimientos estándar: Manuales de seguridad y PTN o normas de higiene personal

• Barreras primarias:
- Protocolo de limpieza de superficies
- Protocolos de inmunización (vacunación)
- EPPs o EPIs (equipos de protección personal, mascarillas). Según el microorganismo se emplean unos
microorganismos u otros.
- Campanas de laboratorio: Cabina de gases, cabinas de flujo laminar, cabinas de seguridad biológica (CSB)

• Barreras secundarias: diseño y construcción de las instalaciones.

- Localización - Superficies interiores y de trabajo
- Acceso - Señalización
- Lavamanos, lavaojos, duchas de emergencia.

NIVELES DE CONTENCIÓN BIOLÓGICA (NCB)

• BSL-1 o NCB-1:
- Un laboratorio de prácticas convencional.
- Se emplean las medidas tradicionales (como lavado de manos).
• BSL-2 o NCB-2:
- Poyata convencional con barreras primarias adecuadas: Uso de cabinas y centrífugas de seguridad (aerosoles)
- Manuales accesibles y descontaminación rutinaria
- Barreras secundarias de BSL-1 pero con autoclave propio
• BSL-3 o NCB-3:
- Acceso limitado con antelaboratorio y bien señalizado o Manual BS y descontaminación (deshechos y ropa).
- Equipos adicionales.
- Centrífuga propia y campana
• BSL-4 o NCB-4:
- Cambio de ropa, ducha descontaminante y tratamiento de materiales
- Barreras primarias: cabinas Clase III o inferiores con traje de P positiva
- Barreras secundarias: edificio aislado con sistema de circulación de aire. Medidas de retención secundaria.
- Antelaboratorio con ducha, lavado de pelo, ropa tratada de una forma determinada. El
material tiene que descontaminarse

GESTIÓN DE RESIDUOS

• Minimización, segregación y correcta eliminación

• Contenedores de residuos
- En cada área de trabajo
- Según material (líquidos, vidrio, objetos punzantes)
- Bien identificados
• Esterilización: para reutilizar los materiales
- Autoclave
- Externalización a empresas autorizadas
o Almacenamiento intermedio
o Contenedores cerrados
o Correcta identificación

DIAGNÓSTICO

TIPOS:

Diagnóstico DIRECTO: Diagnóstico INDIRECTO

• Se busca el patógeno o componentes específicos • Se busca la respuesta inmunitaria frente al

(Ag, material genético…) patógeno
• Muestra clínica del lugar de la infección
• Muestra clínica: suero, LCR, orina…
• Técnicas:
Cultivo microbiológico (permite aislamiento) • Técnicas:
Moleculares (PCR, proteómica…) Serológicas: respuesta humoral (Ac)
Inmunológicas (detección de Ag) Citometría de flujo: respuesta celular (CD4+,
CD8+)

MUESTRA CLÍNICA: El tipo de muestra recomendada varía según infección

Pautas para tomar la muestra:

• Indicación clara • En el momento adecuado:

• Representativa § Antes de antibioterapia
• Debe contener al patógeno (mejor del margen que § Según curso de enfermedad
del centro) § 2 muestras de serología
• En cantidad suficiente • Identificación y etiquetado adecuado
• Contaminación mínima de microbiota § Datos de filiación del paciente
§ Historia clínica y datos clínicos-
epidemiológicos
§ Tipos de muestra y procedí empleado
1. PUS Y EXUDADOS DE:
AEROBIOS
• Torundas (escobillón o hisopo) de materiales como dacrón, alginato cálcico o poliéster y de diseño específico
según microorganismo
*Neisseria spp: polvo de carbón (4ºC)
• En recipientes con cierre adecuado
• Medio de transporte: Stuart, Amies
ANAEROBIOS
• Jeringa • Recipientes prereducidos
2. ORINA: Tubo estéril de boca ancha y con cierre hermético
3. HECES
• Tubo estéril de boca ancha y con cierre hermético.
• Medios de transporte: Cary Blair o Hanks (virus)
• Fijador (formol) si parásitos
4. ESPUTO: Tubo estéril de boca ancha y con cierre hermético
5. LÍQUIDOS Y ASPIRADOS: Tubo estéril con cierre hermético
6. SANGRE Y LCR
• Jeringa • Anticoagulante (sangre): SPS (EDTA, heparina)
7. MUESTRAS SEROLÓGICAS
• Jeringa • Coagulante (suero): silicato o gelatina

RECEPCIÓN Y PROCESAMIENTO

1. Recepción: Requisitos para su procesamiento:

• Correcta identificación
• Cantidad suficiente.
• Calidad adecuada (conservación).
2. Pre-procesamiento:
• Centrifugación → Sangre, LCR...
• Fluidificación con enzimas proteolíticas → Secreciones respiratorias
• Homogeneización → Biopsias
• Decontaminación: Virus, Micobacterias.
3. Análisis macroscópico: Información sobre patología:
• Turbidez (orina, LCR).
• Presencia de sangre (orina, heces) o pus
4. Examen microscópico:
• Informa sobre calidad de la muestra → Células de descamación (contaminación).
• En ocasiones permite el diagnóstico etiológicoà Vaginosis bacteriana, Angina de Plaut-Vincente
5. Tipos microscopía:
• Convencional • Fluorescencia:
- Examen en fresco - CFW
- Tinción negativa: Cápsula - Auramina/rodamina
- Tinción diferencial: Gram, AAR - Naranja de acridina
- Tinción Giemsa: Borrelia • Electrónica: virus

6. Cultivo microbiológico
• Permite aislamiento • Esencial datos clínicos y de la muestra
- Pruebas de identificación - Selección de medios de cultivo
- Antibiograma o Medios selectivos o diferenciales
o Células o líneas celulares (virus)
- Condiciones de incubación
o T emperatura
o Aerobiosis, Microaerofilia o Anaerobiosis
o Tiempo de incubación
7. Métodos no convencionales
• Métodos moleculares • Métodos inmunológicos (directos e indirectos)
- PCR - EIA
- Sondas para hibridación in situ - IC
- RFLP - Aglutinación
• Métodos proteómicos

PRODIM: Programas de optimización del diagnóstico microbiológico.

§ Actuación coordinada orientada a optimizar el

uso de las técnicas diagnósticas con objeto de
propiciar la toma de decisiones terapéuticas y
preventivas adecuadas y coste-efectivas
§ Prueba diagnóstica adecuada, en el paciente
adecuado y en el momento óptimo
§ Máxima eficacia clínica, diagnóstico de calidad
y coste-efectivo

PROA: Optimización del uso de antimicrobianos

SISTEMAS DE GESTIÓN DE CALIDAD (ha dicho que no le interesa)

• Concepto de sistema de gestión de calidad: dirige y controla la calidad de una organización

• Concepto de control de calidad:
- Operaciones técnicas y actividades que cumplen requisitos
- Protocolos estandarizados
- Registro
• Objetivo:
- Mejorar atención
- Mayor satisfacción del usuario.
- Capacidad de adaptación
• Modelos y normativas: siguen normas ISO, AENOR
• Adaptación de todos los sistemas de calidad (mínimo): Autorización administrativa (Autonomías)
• Adaptación voluntaria:
- Certificación:La emite un tercero al laboratorio como organización
- Acreditación: e acredita a la entidad o persona física para una tarea concreta