UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN CRISTOBAL DE
HUAMANGA
DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE INGENIERÍA QUÍMICA
FISICOQUÍMICA (QU-385)
CINÉTICA ENZIMÁTICA
Docente: Dr. Fernando PÉREZ CHAUCA
La cinética enzimática estudia la velocidad de
las reacciones catalizadas por las enzimas.
CINÉTICA Los estudios cinéticos proporcionan información
ENZIMÁTICA directa acerca del mecanismo de la reacción
catalizada y de la especifidad de la enzima.
Catalizador de origen biológico y de
naturaleza proteica, que aceleran la reacción
al disminuir la energía de activación.
ENZIMA Las enzimas presentan masas moleculares
comprendidos de 15000 a 40000 g/mol. Están
constituidas por pequeñas unidades de
aminoácidos de masas moleculares de
aproximadamente 70 g/mol.
CARACTERÍSTICAS DE LA CINÉTICA ENZIMÁTICA
Estudia a las enzimas como un catalizar biológico.
Un estudio cinético adecuado proporciona una información válida
acerca del mecanismo de una reacción enzimática.
Proporciona conocimiento de los parámetros cinéticos, como la
constante de Michaelis-Menten, velocidad máxima y las constantes
de equilibrio en una reacción con inhibición, permitiendo así, evaluar
la importancia de una reacción enzimática particular.
CARACTERÍSTICAS DE LA CINÉTICA ENZIMÁTICA
Da medida, de como está afectada la velocidad de una reacción
enzimática, por cambios en el pH, fuerza iónica o por la unión de
ligandos, los cuales pueden regular la actividad enzimática.
En las reacciones enzimáticas, generalmente la cantidad de enzima
usada es del orden del 1 %.
ECUACIÓN DE MICHAELIS-MENTEN
𝑽𝒎á𝒙 [𝑺ሿ
Reacción global 𝑽𝒐 =
𝑲𝒎 + [𝑺ሿ
Ecuación de una
Mecanismo hipérbola rectangular
𝑽𝐨 : velocidad inicial
𝑽𝒎á𝒙 : velocidad máxima
Vmáx = K2 [E]o
𝑲𝒎 : Constante de Michaelis-Menten
[S]: concentración de sustrato
ECUACIÓN DE
MICHAELIS-MENTEN
𝑽𝒎á𝒙 [𝑺ሿ 𝒂 [𝑺ሿ
𝑽𝒐 = 𝑽𝒐 =
𝑲𝒎 + [𝑺ሿ 𝐛 + [𝑺ሿ
ECUACIÓN DE 𝑽𝒎á𝒙 [𝑺ሿ
MICHAELIS-MENTEN 𝑽𝒐 =
𝑲𝒎 + [𝑺ሿ
CARACTERÍSTICAS DE LA ECUACIÓN DE MICHAELIS-MENTEN
1. A concentraciones muy bajas de sustrato
𝑽𝒎á𝒙 [𝑺ሿ
Km >˃ [S] 𝑽𝒐 =
Km
𝑽𝒐 = 𝑲 [𝑺ሿ Reacción de primer orden
ECUACIÓN DE 𝑽𝒎á𝒙 [𝑺ሿ
MICHAELIS-MENTEN 𝑽𝒐 =
𝑲𝒎 + [𝑺ሿ
2. A concentraciones altos de sustrato
[S] >˃ Km
𝑽𝒐 = 𝑽𝒎á𝒙 = 𝑲2 [E]o
𝑲2 𝑪𝒐𝒏𝒔𝒕𝒂𝒏𝒕𝒆 𝒅𝒆 𝒊𝒏𝒎𝒆𝒓𝒔𝒊ó𝒏
Reacción de orden cero
DETERMINACIÓN DE Km Y Vmáx
Métodos de linearización de la ecuación de Michaelis-Menten
A. Método de Lineweaver-Burk (Inversa de la ecuación de M-M)
𝑽𝒎á𝒙 [𝑺ሿ 1 𝑲𝒎 + [𝑺ሿ
𝑽𝒐 = =
𝑲𝒎 + [𝑺ሿ 𝑽𝒐 𝑽𝒎á𝒙 [𝑺ሿ
1 𝑲𝒎 1 1 𝑲𝒎 1 1
= + = +
𝑽𝒐 𝑽𝒎á𝒙 [𝑺ሿ 𝑽𝒎á𝒙 𝑽𝒐 𝑽𝒎á𝒙 𝑺 𝑽𝒎á𝒙
Y= m x + b
A. Método de Lineweaver-Burk
1 𝑲𝒎 1 1
= +
𝑽𝒐 𝑽𝒎á𝒙 𝑺 𝑽𝒎á𝒙
Y = m x + b
DETERMINACIÓN DE Km Y Vmáx
B. Método de Eadie-Hofstee
𝑽𝑜
𝑽𝒐 = − 𝑲𝒎 + 𝑽𝒎á𝒙
𝑺
Y = m x + b
DETERMINACIÓN DE Km Y Vmáx
C. Método de Hanes
𝑺 1 𝑲𝒎
= 𝑺 +
𝑽𝒐 𝑽𝒎á𝒙 𝑽𝒎á𝒙
Y = m x + b
Los inhibidores son compuestos que reducen la
rapidez de una reacción catalizada por enzimas.
INHIBICIÓN DE El estudio de la inhibición enzimática da
REACCIONES conocimiento acerca de la especifidad y
CATALIZADAS POR naturaleza de los grupos funcionales de los
sitios activos de la enzima.
ENZIMAS
Los inhibidores pueden actuar con los sustratos
(combinados con ellos), donde algunos de ellos
están limitados en su efecto inhibidor a una única
enzima; otros afectan a un gran número de
enzimas.
TIPOS DE INHIBICIÓN
A. INHIBICIÓN IRREVERSIBLE (→) E + I → EI
El inhibidor reacciona con la enzima produciendo un complejo no
deseable, al ser una reacción irreversible la enzima queda inactiva.
B. INHIBICIÓN REVERSIBLE ( ) E + I EI
El inhibidor reacciona con la enzima produciendo un complejo
completamente reversible.
INHIBICIÓN ENZIMÁTICA
ESQUEMA GENERAL ECUACIÓN GENERAL
𝟏 𝑲𝒎 𝑰 𝟏 𝟏 𝑰
= 𝟏+ + 𝟏+
𝑽𝑶 𝑽𝒎á𝒙 𝑲𝑬𝑰 𝑺 𝑽𝒎á𝒙 𝑲𝑬𝑺𝑰
TIPOS
1. INHIBICIÓN COMPETITIVA
INHIBICIÓN ENZIMÁTICA
REVERSIBLE
2. INHIBICIÓN NO COMPETITIVA
3. INHIBICIÓN ACOMPETITIVA
INHIBICIÓN POCO COMPETITIVA
1. INHIBICIÓN COMPETITIVA
El sustrato S y el inhibidor I, compiten por llegar al mismo sitio activo.
ESQUEMA ECUACIÓN
1 𝑲𝒎 𝑰 1 1
= 1+ +
𝑽𝑶 𝑽𝒎á𝒙 𝑲𝑬𝑰 𝑺 𝑽𝒎á𝒙
1. INHIBICIÓN COMPETITIVA
GRÁFICA
2. INHIBICIÓN NO COMPETITIVA
El inhibidor no competitivo se une a la enzima en un sitio diferente al sitio de unión
con el sustrato; en consecuencia se puede unir tanto a la enzima libre como al
complejo enzima-sustrato.
ESQUEMA GENERAL
ECUACIÓN GENERAL
𝟏 𝑲𝒎 𝑰 𝟏 𝟏 𝑰
= 𝟏+ + 𝟏+
𝑽𝑶 𝑽𝒎á𝒙 𝑲𝑬𝑰 𝑺 𝑽𝒎á𝒙 𝑲𝑬𝑺𝑰
2. INHIBICIÓN NO COMPETITIVA
GRÁFICA
3. INHIBICIÓN ACOMPETITIVA
Un inhibidor acompetitivo no se une a la enzima libre, más bien se une en forma
reversible con el complejo ES, para formar un complejo ESI.
ESQUEMA GENERAL
ECUACIÓN GENERAL
𝟏 𝑲𝒎 𝟏 𝟏 𝑰
= + 𝟏+
𝑽𝑶 𝑽𝒎á𝒙 𝑺 𝑽𝒎á𝒙 𝑲𝑬𝑺𝑰
3. INHIBICIÓN ACOMPETITIVA
GRÁFICA
EFECTO DE LA T EN LAS REACCIONES ENZIMÁTICAS
La elevación de temperatura
incrementa la velocidad de una
reacción catalizada por enzimas
hasta una temperatura óptima.
Sin embargo, debido al incremento
de la T se desnaturaliza la enzima.
Los límites de actividad de las
enzimas están comprendidas de 10
a 50 ºC.
EFECTO DE LA T EN LAS REACCIONES ENZIMÁTICAS
𝑬𝒂 1
𝑳𝒏𝑲𝒎 = + 𝑳𝒏 𝑨
𝑹 𝑻
𝑲𝒎 (1ሻ 𝑬𝒂 1 1
𝑳𝒏 = + −
𝑲𝒎 (2ሻ 𝑹 𝑻1 𝑻2
𝑽𝒎á𝒙 (1ሻ 𝑬𝒂 1 1
𝑳𝒏 = + −
𝑽𝒎á𝒙 (2ሻ 𝑹 𝑻1 𝑻2
EFECTO DEL pH EN LAS REACCIONES ENZIMÁTICAS
La mayoría de las enzimas son muy
sensibles a los cambios de pH.
Desviaciones de pocas decimas por
encima o por debajo del pH óptimo
pueden afectar drásticamente su
actividad.
Para mantener el pH intracelular, se
requieren de amortiguadores
fisiológicos.
GRACIAS
