Universidad Autónoma de Chihuahua
Campus parral
Medicina Genómica
Arleene Calderon 353822
Abisai Hernandez 343569
La poderosa complementariedad del DNA como
herramienta básica en medicina genómica
Los microarreglos de ADN constituyen una herramienta analítica muy eficaz en el
estudio de la expresión génica, ya que permiten analizar un gran número de
secuencias en cada prueba. Generalmente, estos microarreglos se fundamentan en
la hibridación de ácidos nucleicos, lo que implica la unión de dos cadenas
complementarias de ADN para formar una estructura de doble hélice. Facilitan
análisis comparativos y simultáneos de la expresión de cientos de genes en un
único experimento.
Estas técnicas se basan en chips de ADN, que son un conjunto de puntos de ADN
adheridos a una superficie, como cristal, plástico o sílice. En cada uno de estos
puntos se encuentra una pequeña cantidad de una secuencia específica de ADN,
diseñada para hibridar con la secuencia de un gen de interés, que se detecta
mediante una molécula fluorescente llamada fluoróforo. Debido a la diversidad de
muestras, cada tipo celular se marca con una molécula fluorescente diferente, lo
que resulta en colores distintos durante el análisis.
La lectura de estos puntos indica qué genes están siendo expresados y cuáles no,
información que se analiza utilizando software especializado. El color verde
representa el control, mientras que el rojo indica niveles elevados de expresión. La
coloración verde o amarilla sugiere una expresión reducida, mientras que el rojo o
naranja señala una expresión aumentada.
Procedimiento básico para trabajar con microarreglos
1. Marcar la muestra del tejido de interés con una molécula fluorescente.
2. Aislar el ARNm de las células y copiarlo mediante síntesis in vitro para
convertirlo en ADNc (ADN complementario).
3. Desnaturalizar el ADNc para obtener hebras simples a partir de las dobles.
4. Colocar estas hebras en el microarreglo, donde se atraerán a las hebras fijas,
formando una doble hélice similar a la del ADN, en un proceso conocido
como hibridación.
5. Lavar el microarreglo para eliminar las hebras simples que no completaron la
hibridación.
6. Escanear el microarreglo con un láser para cuantificar la fluorescencia de
cada gen.
Si los niveles de fluorescencia son bajos, se puede inferir que pocas copias se han
hibridado, indicando que el gen de interés tiene baja actividad en la célula. Por el
contrario, niveles altos de fluorescencia sugieren que el gen está altamente activo.
Tipos de microarreglos según los soportes utilizados
● Microarreglos en portaobjetos:
○ Utilizan portaobjetos de cristal o plástico como soporte.
○ La señalización de las muestras se realiza mediante fluorescencia.
○ Contienen un gran número de sondas.
○ Ventajas: La hibridación ocurre en una cámara pequeña, lo que
permite trabajar con volúmenes menores y una mayor concentración
de sondas, que pueden sintetizarse en el laboratorio, facilitando la
hibridación de varias muestras simultáneamente.
● Gen-Chip:
○ Contienen más de 50,000 sondas y son los que tienen mayor número
y densidad de sondas.
○ Su ventaja radica en su alta reproducibilidad debido a las condiciones
estandarizadas.
○ Desventajas: Requieren escáneres y software específicos
proporcionados únicamente por el fabricante, y contienen fragmentos
internos de 25 nucleótidos en lugar de las secuencias completas de los
genes.
● Chips microelectrónicos:
○ Compuestos por un conjunto de electrodos cubiertos con una fina capa
de agarosa que contiene motivos de afinidad para inmovilizar las
sondas mediante el sistema biotina-estreptavidina.
○ La incorporación de campos eléctricos controlables proporciona un
nuevo grado de control para depositar tanto las sondas como las
muestras, aumentando la concentración sobre las sondas y, por ende,
la efectividad de la hibridación.
Aplicaciones de los microarreglos
Los microarreglos se utilizan en investigaciones, especialmente en microbiología,
para caracterizar cepas de microorganismos y establecer la presencia de factores
de virulencia en bacterias clínicas. Esta técnica permite la detección de genes
específicos o regiones de microorganismos.
● Detección de variantes genéticas: Los microarreglos pueden identificar
variantes como deleciones, duplicaciones o polimorfismos de nucleótido
único (SNPs) asociados con enfermedades genéticas, siendo útiles en
diagnósticos y predicciones de riesgos.
● Perfiles de expresión génica: Principalmente se utilizan para generar
perfiles transcripcionales y comprender mejor las respuestas de los
microorganismos a cambios ambientales.
● Estudios de patogenicidad: Proporcionan información sobre las
interacciones metabólicas y los genes bacterianos expresados durante
infecciones.
● Resistencia bacteriana: En bacterias productoras de β-lactamasas, se
utilizan oligonucleótidos inmovilizados para identificar polimorfismos en los
genes.
● Farmacogenómica: Permiten identificar polimorfismos que afectan la
metabolización de fármacos, facilitando la personalización de tratamientos.
Ventajas y desventajas de los microarreglos
Ventajas: Permiten detectar múltiples microorganismos (bacterias, virus, parásitos y
hongos) simultáneamente, analizando genotipos de resistencia y factores de
patogenicidad.
Desventajas: La detección de un gen de resistencia no garantiza que esté activo,
por lo que es necesario también analizar la expresión del ARN mensajero.
Bibliografías
https://biblat.unam.mx/hevila/EpistemusCienciatecnologiaysalud/2019/vol13/
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