Urocultivo

Fundamento
Este es el procedimiento de laboratorio que está diseñado para demostrar el o los agentes
causales de una infección de las vías urinarias. Este tipo de padecimiento ocurre a todas
edades y ataca a ambos sexos, con mayor incidencia en la mujer. Hay infecciones inaparentes
que no dan síntomas, hasta procesos agudos sistémicos, con manifestaciones clínicas muy
importantes. El diagnóstico de los primeros se hace muy difícil y solo la demostración de
bacterias en la orina pone en claro el problema; en el segundo, el diagnóstico no es difícil, pero
es necesario el estudio bacteriológico para confirmar el agente causal; este paso es también
importante en el control terapéutico y post-terapéutico de la infección.
Son las bacterias llamadas “normales” en el intestino humano las causantes de las infecciones
de vías urinarias. Escherichia coli es la bacteria que se detecta con mayor frecuencia en los
cultivos positivos, aproximadamente en 80% de los casos; en menor proporción se identifican
Enterococcus spp., Klebsiella spp., Enterobacter spp. y Proteus spp. Por lo tanto, los medios de
cultivo deberán ser escogidos con el propósito de demostrar estas bacterias.
La uretra humana es colonizada normalmente por diversas bacterias de la piel y por
contaminación fecal sobre todo en la mujer debido a la cercanía del ano a la vulva y hábitos
higiénicos defectuosos. Es importante diferenciar una “contaminación” de una “infección” de
las vías urinarias, sobre todo en las infecciones inaparentes de una cistitis o una píelo nefritis.
Ante la sospecha de una infección urinaria es necesaria la realización de un cultivo de orina
(urocultivo) que permite cuantificar el número de bacterias presentes en la muestra porque es
necesario no solo identificar la bacteria, sino cuantas bacterias hay. Como Kass y colaboradores
demostraron, hay una relación muy estrecha entre la cuenta bacteriana en la orina y la
existencia de una lesión en el aparato urinario.
a. Menor de 10 000 UFC/ml, solo se reportan S. aureus o S. agalactiae.
b. Entre 10 000 y 100 000 UFC/ml se reporta la cuenta exacta.
c. Mayor de 100 000 UFC/ml se reporta: mayor a 100 000 UFC/ml
También la interpretación va a depender del muestreo, de la inoculación y la cantidad de
patógenos encontrados:
a. 1 patógeno: <10 000 UFC/ml, no procesar; ≥10 000 UFC/ ml (o ≥1 000 UFC/ml en
mujeres entre 14 y 30 años de edad), identificar y pruebas de susceptibilidad.
b. 2 patógenos: <10 000 UFC/ml, no procesar; ≥10 000 UFC/ml, identificar y realizar
pruebas de susceptibilidad.
c. 3 patógenos: un cultivo mixto en población ambulatoria sin complicaciones puede
indicar contaminación al momento de la recolección.
Si el paciente presenta síntomas de infección urinaria, y se encuentran uno o dos tipos
diferentes de colonias bacterianas, procédase a la identificación y determínese la sensibilidad.
En paciente asintomático o con leucocituria, un recuento bacteriano dentro de estos límites es
muy sugestivo de infección. Si el recuento, la calidad de la muestra de orina o la interpretación
de los síntomas del paciente ofrecen dudas, obténgase otra muestra y repítanse las pruebas.
NOTA: si en las muestras de orina se encuentran más de dos especies bacterianas, indíquese en
el informe: “muestra probablemente contaminada; rogamos nos envíen otra muestra de orina
limpia y recién emitida.”

Materiales
 Vaso estéril  Porta y cubre objetos
 Tinción gran  Medios de cultivo: EMB y Agar
 Portaobjetos Sangre
 Tira reactiva de EGO  Asa bacteriológica

Procedimiento
Recolección de muestra
Orina de micción media
1. Lavar el área periuretral tres veces con abundante agua y jabón, limpiar muy bien entre
los pliegues de la piel y secar con una toalla limpia.
2. Después de completar la higiene, las mujeres deben retraer los labios vaginales y los
hombres el prepucio.
3. Empezar a orinar en el sanitario, detener el flujo de orina por un momento y obtener
una muestra de orina del chorro medio de la micción en un recipiente de plástico estéril
y de boca ancha.
4. Detenerse nuevamente y terminar de orinar en el sanitario, es decir, no debe recolectar
ni la primera ni la última parte del chorro de orina.
5. Tapar muy bien el recipiente y llevarlo al laboratorio inmediatamente, en menos de dos
horas.
Se recomienda obtener la primera orina de la mañana. De no ser esto posible, se considera
representativa aquella muestra que haya permanecido en la vejiga por lo menos 4 horas, con la
finalidad de evitar resultados falsos negativos.
No se debe inducir la micción del paciente mediante la ingesta de abundantes líquidos, ya que
esto provocará que la muestra se encuentre diluida y, en consecuencia, con menor número de
bacterias.
Bolsa de recolección de orina pediátrica
1. Lavar cuidadosamente el área de los genitales y perineal.
2. Colocar la bolsa de plástico para la recolección de la muestra alrededor del meato
urinario.
3. Presionar la bolsa para que se adhiera sobre la piel.
 4. Transferir la muestra a un recipiente estéril cortando la esquina inferior de la bolsa de
recolección.
En el caso de los recién nacidos, bebés o niños pequeños, es difícil recolectar la muestra de
orina; el método recomendado para obtener una muestra precisa de urocultivo consiste en la
recolección de orina mediante sondeo directo. La recolección de orina con bolsa pediátrica
puede ser la única forma de obtener una muestra de orina en este grupo de edad. Aunque el
laboratorio debe desalentar la recolección de muestras en bolsas como procedimiento de
rutina para el cultivo de orina, este tipo de muestra debe analizarse si es la única que puede
obtenerse
Transporte de muestra
Transportar la orina al laboratorio después de la recolección en un recipiente estéril. Si la orina
no puede enviarse al laboratorio dentro de los primeros 30 minutos posteriores a la
recolección, debe refrigerarse a 4 ºC por un máximo de 24 horas. Nunca debe congelarse.
 Si no es posible la refrigeración y las muestras se demoran en el transporte, se puede
utilizar tubos de transporte con conservantes como ácido bórico.
Procesamiento de muestra
 Examen general orina
Antes de realizar un urocultivo se recomienda el análisis completo de la muestra, en el cual se
realiza la evaluación macroscópica, microscópica y físico-química, mediante el uso de una tira
reactiva. Se describe la densidad, el aspecto y color, pH, cuerpos cetónicos, proteína, nitritos,
urobilinógeno, bilirrubina, glucosa y se hace el conteo de glóbulos rojos y blancos, lo cual nos
puede indicar una posible infección.
 Identificación directa
La tinción de Gram puede ser útil para determinar rápidamente el tipo, el recuento de bacterias
y células en la orina de pacientes hospitalizados, ya que ayuda a diferenciar rápidamente la
causa de la sepsis y la terapia al inicio del diagnóstico.
Procedimiento:
1. Colocar 10 µl de orina bien mezclada, no centrifugada en un portaobjetos.
2. Realizar la tinción de Gram.
3. Determinar el número de bacterias por campo mediante objetivo de inmersión (X 1
000). Una bacteria observada por campo se correlaciona con una concentración de 105
UFC/ml.
4. En caso de observar células epiteliales escamosas en gran proporción y de diferente
morfología microbiana, se sospecha de contaminación.

 Cultivo microbiológico semi-cuantitativo

Procedimiento:
 1. Atemperar los medios de cultivos, agar EMB y Agar sangre.
2. Flamear el asa calibrada de 0.001 µl y dejar enfriar sin tocar ninguna superficie.
3. Mezclar suavemente la muestra de orina evitando la formación de espuma.
4. Abrir el recipiente e introducir el asa verticalmente, permitiendo cargar el volumen
total.
5. Sembrar en los diferentes medios haciendo una línea en un cuadrante y posteriormente
sembrar en cuatro zonas o realizar una línea en el centro de la placa y estriarla en toda
la superficie. (Imagen 1)

Imagen 1
Incubación
1. Incubar las placas durante la noche de 35 a 37ºC en aerobiosis.
2. En muestras obtenidas por punción suprapúbica se realiza cultivo anaeróbico, en casos que
se sospecha una infección bacteriana que no presenten crecimiento en medios aeróbicos,
se procede a incubarlos en anaerobiosis.
Revisión de medios de cultivo
1. Examinar los cultivos 18 horas después de haber sido sembrados. Permanecerán en
incubación hasta 48 horas aquellos que cumplan con una o más de las siguientes
condiciones:
a. Muestras recolectadas mediante una técnica invasiva, como punción vesical
suprapúbica o mediante sondeo directo.
b. Presencia de colonias pequeñas o escasas, apenas perceptibles.
c. Los resultados de los cultivos no se correlacionan con los hallazgos de la tinción de
Gram ni la sospecha clínica.
d. Pacientes que están inmunocomprometidos, incluidos aquellos con trasplante de
órganos.
e. Cuando se sospecha que el agente infeccioso sea un hongo o levadura.
2. Contar las colonias de cada placa en los cultivos positivos. El número de UFC se multiplica
por 1 000 para determinar la cantidad de microorganismos por ml de la muestra original.
 Cuando las colonias están confluyentes y no se pueden contar el número máximo, de
acuerdo con la literatura establecida, usando el asa de 0.001 es de > 100 000 UFC/ml.
3. Realizar pruebas primarias para la identificación a nivel especie

EMB AGAR SANGRE

(incubación de 18 – 36 hrs) Azida de sodio
(incubación de 18 – 36 hrs)
Colonias Colonias NO Colonias grandes Colonias pequeñas
fermentadoras fermentadoras de hemolíticas hemolíticas o no
De lactosa colonias
E. coli Proteus Staphylococcus Streptococcus
Enterobacter Providencia aureus faecalis
Klebsella Hafnia o difteroides
Edwardsiella Citrobacter epidermidis
Serratia
Salmonella
Arizona
Pseudomonas
Alcalígenes

Interpretación
La interpretación va a depender del muestreo, de la inoculación y la cantidad de patógenos
encontrados:
Tipo de orina: micción media
Inoculación: 1 µl
Número de aislamientos:
 1 patógeno: <10 000 UFC/ml, no procesar; ≥10 000 UFC/ ml (o ≥1 000 UFC/ml en
mujeres entre 14 y 30 años de edad), identificar y pruebas de susceptibilidad.
 2 patógenos: <10 000 UFC/ml, no procesar; ≥10 000 UFC/ml, identificar y realizar
pruebas de susceptibilidad.
 3 patógenos: un cultivo mixto en población ambulatoria sin complicaciones puede
indicar contaminación al momento de la recolección.
Tipo de orina: punción suprapúbica o catéter
Inoculación: 10 µl
Número de aislamientos: cualquier recuento es indicativo de infección
 En niños, los recuentos de colonias de un patógeno potencial entre 10 000 y 50 000
UFC/ml suelen considerarse significativos.
Resultado negativo
Si no se observa crecimiento en los medios, reportar “Cultivo de orina negativo” o “No existe
crecimiento de uropatógenos”.
Resultado positivo
Cuenta de Kass
 Menor de 10 000 UFC/ml, solo se reportan S. aureus o S. agalactiae.
 Entre 10 000 y 100 000 UFC/ml se reporta la cuenta exacta.
 Mayor de 100 000 UFC/ml se reporta: mayor a 100 000 UFC/ml
Se reporta identificación bioquímica y sensibilidad de la bacteria aislada.
Los cultivos mixtos se informan con el recuento en UFC/ml seguido de “Múltiples bacterias
presentes; posible contaminación; sugerir una nueva recolección, con entrega oportuna al
laboratorio, si está clínicamente indicado”.
Cuando se observa una inhibición antimicrobiana, no se reporta el recuento, pero se reporta “El
recuento de colonias no es confiable debido a la inhibición antimicrobiana”.
Reportar Streptococcus agalactiae en mujeres en edad fértil, independientemente del
recuento.
Falsos positivos
 Combinación con secreción vaginal.
 Orina no refrigerada y, por lo tanto, mal conservada.
 Contaminación de los antisépticos utilizados para la obtención de la muestra.
 Errores del laboratorio.
Falsos negativos
 Estar bajo tratamiento antibiótico o haberlo tomado recientemente.
 Arrastrar los antisépticos a la orina en su obtención, obstrucción urinaria completa.
 Lesión renal localizada.
 Orina con pH menor de 5 o mayor de 8.5.
 Gérmenes infrecuentes que requieren medios especiales de cultivo.

Bibliografía
Escuela de QCB (Revisión 2024). Manual de laboratorio Bacteriología. Químico Clínico Biólogo,
Universidad de Montemorelos.
González Escalante L, Casillas Vega N. Infecciones del tracto respiratorio superior. In: Casillas
Vega N, Mendoza Olazarán S, Flores Aréchiga A. eds. Procedimientos de Microbiología Médica
Diagnóstica. McGraw-Hill Education; 2020.
[Link]
Elaborado por: PQCB Jonathan Villarreal