Agar Cromogénico para Salmonella Cat.
1122
Para el aislamiento de Salmonella spp en muestras clínicas y alimentos.
Información práctica
Aplicaciones Categorias
Aislamiento selectivo Salmonella
Industria: Clínica / Alimentación
Principios y usos
El Agar Cromogénico para Salmonella es un medio cromogénico selectivo, utilizado para la detección e identificación presuntiva de especies de
Salmonella a partir de muestras clínicas, alimentos y aguas. Los medios tradicionalmente utilizados para diferenciar especies de Salmonella del resto de
la familia Enterobacteriaceae, que se basan en su capacidad para producir sulfuro de hidrógeno y su incapacidad para fermentar la lactosa, no son
realmente adecuados ya que hay más de 2.000 especies de Salmonella que no tienen estas características.
La peptona de caseína y el extracto de carne proporcionan nitrógeno, vitaminas, minerales y aminoácidos esenciales para el crecimiento. La mezcla
cromogénica, junto con el citrato de sodio, ayuda a inhibir organismos Gram positivos, Proteus y coliformes. El agar bacteriológico es el agente
solidificante. La adición del suplemento inhibe la flora acompañante, evitando posibles resultados falsos positivos.
Para identificar especies de Salmonella, este agente cromogénico se basa en la combinación de dos sustratos cromogénicos que facilitan la rápida
identificación. Las colonias magentas son el resultado de la hidrólisis de uno de los sustratos cromogénicos por la especie Salmonella debido a la
incapacidad de utilizar otro sustrato cromogénico. Los microorganismos que producen la enzima que escinde el segundo sustrato cromogénico
producirán colonias azul verdosas. Por lo tanto, los organismos que no son Salmonella aparecerán de ese color azul verdoso, o sin teñir. El suplemento
se agrega cuando se desea más selectividad. El suplemento inhibe la flora acompañante, especialmente Pseudomonas, que podría aparecer del mismo
color que las colonias Salmonella.
Este medio puede ser utilizado como segundo medio de elección para la detección de Salmonella en alimentos y aguas de acuerdo a la ISO 6579 e ISO
19250 respectivamente.
Fórmula en g/L
Agar bacteriológico 12,8 Peptona de caseína 5
Mezcla cromogénica 5,81 Extracto de carne 5
Citrato de sodio 8,5
Fórmula típica g / L * Ajustada y/o suplementada según sea necesario para cumplir con los criterios de rendimiento.
Preparación
Suspender 37,1 gramos de medio en un litro de agua destilada y precalentada a 80 ºC. Mezclar bien y disolver por calentamiento con agitación
frecuente. Hervir durante un minuto hasta disolver por completo. EVITAR EL SOBRECALENTAMIENTO. NO AUTOCLAVAR. Enfriar a 45-50 ºC y, si se
desea, agregar asépticamente dos viales de Suplemento Cromogénico Salmonella (Cat. 6043). Verter en placas de Petri.
Instrucciones de uso
» Para diagnóstico clínico, el tipo de muestra es fecal y del tracto rectal.
- Inocular la muestra sobre la superficie de las placas de Agar Cromogénico para Salmonella, haciendo estrías para obtener colonias aisladas.
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- Incubar a una temperatura de 35±2 ºC durante 18-24 horas.
- Examinar el color de las colonias.
» Para otros usos no amparados por el marcado CE:
* Para la detección de Salmonella spp. en alimentos, alimentos para animales, heces de animales y muestras ambientales de acuerdo a ISO 6579:
- Preenriquecimiento en medio líquido no selectivo:
Inocular el Agua Peptonada Tamponada (Cat. 1402) con la muestra o diluciones, e incubar a 34-38 ºC durante 18±2 h.
- Enriquecimiento en medios selectivos:
Inocular, con el cultivo obtenido en la etapa de pre-enriquecimiento, El Caldo Soja Rappaport (Vassiliadis) (Cat. 1174) o en el Medio Semisólido
Rappaport Vassiliadis Modificado (MSRV) (Cat. 1376), y el Caldo MKTTN (Cat. 1173).
El Caldo Soja Rappaport y el Medio Semisólido Rappaport Modificado se incuban a 41,5 ºC durante 24±3 h, y el Caldo MKTTN a 34-38 ºC durante 24±3
h.
- Plaqueo en medios sólidos selectivos:
A partir de los cultivos enriquecidos selectivamente, inocular dos agares de aislamiento selectivo; Agar XLD (Cat. 1274) y cualquier otro medio selectivo
complementario al agar XLD (Agar cromogénico de Salmonella (Cat. 1122), Agar Verde Brillante (Cat. 1143), Agar Bismuto Sulfito (Cat. 1011), Agar
DCLS (Cat. 1045), Agar Citrato Desoxicolato (Cat. 1067), Agar Hektoen Entérico (Cat. 1030), Agar Salmonella Shigella (Cat. 1064) y Agar XLT4 (Cat.
1159)).
Incubar las placas de XLD invertidas a 34-38 ° C durante 24±3 h.
Incubar el segundo medio selectivo de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
- Confirmación:
Subcultivar colonias presuntivas de Salmonella y confirmar su identidad mediante pruebas bioquímicas y serológicas.
Nota: De acuerdo con el Anexo D de ISO 6579-1: 2017, para la detección de subespecies entéricas serovares Typhi y Paratiphy, se debe añadir el
medio Caldo Selenito Cistina (Cat. 1220) como medio de enriquecimiento selectivo y el Agar Bismuto Sulfitor (Wilson Blair) debe seleccionarse como
segundo medio selectivo (Cat. 1011).
* Para la detección de Salmonella spp. en muestras de agua de acuerdo a ISO 19250:
- Preenriquecimiento en medio no selectivo:
Inocular el Agua Peptonada Tamponada (Cat. 1402) con la muestra o diluciones, e incubar a 34-38 ºC durante 18±2 h.
- Enriquecimiento en medios selectivos:
Inocular, con el cultivo obtenido en la etapa de preenriquecimiento, el Caldo Soja Rappaport (Vassiliadis) (Cat. 1174) y el Caldo MKTTN (Cat. 1173).
El Caldo Soja Rappaport se incuba a 41,5±1 ºC y el Caldo MKTTN a 34-38 ºC, ambos durante 24±3 h.
- Plaqueo en medios sólidos selectivos:
A partir de los cultivos enriquecidos selectivamente, inocular dos agar de aislamiento selectivo; Agar XLD (Cat. 1274) y cualquier otro medio selectivo
complementario al agar XLD (Por ejemplo, Agar Brillante Verde (Cat. 1143) o Agar Sulfito Bismuto (Cat. 1011))
Incubar las placas XLD invertidas a 34-38 ºC durante 24±3 h.
Incubar el segundo medio selectivo de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
- Confirmación:
Subcultivar colonias presuntivas de Salmonella y confirmar su identidad mediante pruebas bioquímicas y serológicas.
Control de calidad
Solubilidad Apariencia Color del medio deshidratado Color del medio preparado Final pH (25ºC)
Pueden aparecere precipitados Polvo fino Beige Ámbar, ligeramente opalescente 7,2±0,2
Test microbiológico
Condiciones de incubación: (35±2 ºC / 18-24 h).
Microrganismos Especificación Reacción característica
Salmonella enteritidis ATCC 13076 Buen crecimiento Colonia magenta
Proteus vulgaris ATCC 13315 Crecimiento inhibido Colonia incolora
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Buen crecimiento Colonia magenta
Salmonella typhi ATCC 19430 Buen crecimiento Colonia magenta
Escherichia coli ATCC 25922 Crecimiento parcialmente inhibido Colonia incolora
Salmonella dyarizoneae ATCC 29934 Buen crecimiento Colonia magenta
Almacenamiento
Temp. Min.:2 ºC
Temp. Max.:8 ºC
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Bibliografía
Journal Clinical Microbiology, Vol. 41 nº 7 p. 3229-3232. July 2003 Robert Cassar and Paul Cuschieri.
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Gallioto di camillo, p. Et. Al. (J. Clinil Microbiol. March 1999.
International Standard UNE-EN-ISO 6579. Food Microbiology for human consumption and Animal Feed. Horizontal Method for the detection of
Salmonella spp.
ISO 19250 water quality-detection of Salmonella spp
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