Índice
Introducción..............................................................................................................2
Planteamiento del problema.....................................................................................3
Justificación..............................................................................................................3
Objetivo general....................................................................................................... 4
Objetivos específicos............................................................................................... 4
Marco teórico............................................................................................................5
Metodología..............................................................................................................8
Resultados y análisis de resultados.......................................................................11
Conclusiones..........................................................................................................13
Referencias bibliográficas......................................................................................14
1
Introducción
Esta práctica se llevó a cabo el día lunes 24 de agosto del 2023 el propósito a
través de esto ya realizado a través de diferentes técnicas se logrará observar y
analizar los diversos tipos de crecimiento de microorganismos que hay en los
alimentos en este caso se usaron tres tipos de productos que fue leche
pasteurizada, carne, y un alimento preparado(quesadilla) esto dividido para tres
equipos, a lo que mi equipo nos tocó analizar el producto de la leche pasteurizada.
Así mismo obteniendo los cultivos y viendo si el producto utilizado (leche
pasteurizada) logra cumplir lo que establecen las normas con las que se van a
trabajar que son NOM-110-SSA1-1994 y la NOM-092-SSA1-1994.
2
Planteamiento del problema
Como tal la microbiología abarca demasiados temas que suceden entre los seres
vivos, cuando se trata o como propósito es analizar un alimento es importante
saber la morfología y estructura microbiana que tiene para poder relacionarlo con
la gran importancia que tienen las industrias alimentarias.
¿Para qué se lleva a cabo esta práctica?
Es importante el estudio de los diferentes tipos de medio de cultivo que existen ya
que están relacionados con nosotros mismos y bajó las normas es muy importante
saber que estamos consumiendo por otro lado de igual manera poder tener más
conocimiento poder observar y estudiar más a fondo el tipo de colonias.
Justificación
Es importante ya que en zona agroindustrial es importante hacer todos los
estudios necesarios del alimento desde su materia prima y también durante todo el
proceso esto para obtener un producto bueno, de igual manera teniendo un buen
control del alimento es caso que se encuentren posibles deterioros.
Aplicar las técnicas para poder estudiar los microorganismos es algo importante ya
que teniendo el medio de cultivo(agar nutritivo) solo es cuestión que en
condiciones asépticas poder incorporar el alimento y hacer las observaciones para
poder hacer posibles estudios.
3
Objetivo general
Identificar análisis para la obtención de diferentes tipos de microorganismos de un
producto, de igual manera hacer el análisis mediante las normas vigentes
establecidas de uso alimentario esto a través de la observación de un alimento
(leche pasteurizada).
Objetivos específicos
Hacer el buen uso de los materiales y equipos dentro del laboratorio.
Tener un buen desempeño a través del análisis del alimento.
Trabajar de buena manera bajo las normas establecidas de uso alimentario.
4
Marco teórico
En la naturaleza, los microorganismos se encuentran formando poblaciones
mixtas con otros tipos de microorganismos. Los cultivos de estas mezclas se
llaman por ello cultivos mixtos. Sin embargo, el conocimiento de los
microorganismos se consigue mediante el estudio de cepas aisladas, cultivadas
en el laboratorio en cultivos puros (o axénicos). En ocasiones el estudio
molecular conduce a la caracterización de los microorganismos, aún en
poblaciones mixtas. Sin embargo, la identificación bacteriana y la caracterización
completa solo es posible tras el aislamiento de la bacteria y la obtención de
cultivos puros. Por ello el primer problema al estudiar una bacteria es su
aislamiento del resto de los microorganismos presentes (en una muestra
patológica, de agua, de suelo, de alimentos, etc.). Una vez que se ha logrado el
aislamiento es posible obtener la bacteria de interés en cultivo puro.
Es la separación de un determinado microorganismo del resto de microorganismos
que le acompañan. El método más usual es la siembra por estría sobre un medio
de cultivo sólido adecuado dispuesto en una placa de Petri.
Para ello se toma una pequeña cantidad de muestra con un asa de platino y se
reparte sobre la superficie del medio de cultivo. Sobre el medio quedan separadas
e inmovilizadas las células bacterianas. Tras la incubación en condiciones
adecuadas, cada célula viable origina una colonia visible resultado de sucesivas
divisiones celulares. Cada colonia bacteriana tiene unas características
determinadas en cuanto a su forma, borde, elevación, tamaño, consistencia, etc.
Los tipos de bacterias presentes en la muestra original es visible como tipos
diferentes de colonias. A partir de colonias separadas suficientemente es posible
obtener un cultivo puro de cada uno de los tipos de bacterias presentes en la
muestra original.
El éxito del aislamiento, de la separación sobre el medio de cultivo, depende de la
superficie sobre la que se ha distribuido la muestra. Es muy importante realizar el
mayor número de estrías posible. En las primeras estrías aparecerán colonias
confluentes o una masa continua de microorganismos. En las estrías finales
deberán aparecer colonias separadas unas de otras. El aislamiento requiere un
5
reducido inóculo de partida. La sucesiva disminución del tamaño de la población
sobre el asa (por descarga sobre el medio de cultivo) al recorrer el medio de
cultivo, debe asegurar que finalmente algunas células queden suficientemente
separadas (aisladas unas de otras) sobre la superficie.
El aspecto de las colonias, su coloración, tamaño, etc. permiten diferenciar
diferentes bacterias, aunque son propiedades generales muy influenciadas por las
condiciones de cultivo, por lo que a continuación se realiza una descripción muy
general. Las colonias pueden ser opacas, translucidas o transparentes. Algunas
producen pigmentos fluorescentes cuando se iluminan con luz ultravioleta. Otras
aparecen con superficie pulverulenta, otras son lisas, o rugosas, o poseen anillos
concéntricos. En ocasiones el olor es también característico. (INTRODUCCION ,
2010)
Agar nutritivo
El agar nutritivo es un medio de cultivo usado normalmente como rutina para
todo tipo de bacteria. Es muy útil porque permanece sólido incluso a
relativamente altas temperaturas. Además, el crecimiento bacteriano en
este agar lo hace en la superficie, por lo que se distinguen mejor
las colonias pequeñas.
En un caldo de nutrientes, la bacteria crece en el líquido, y aparece como una
sustancia espesa, con colonias difícilmente observables.
El agar nutritivo contiene normalmente (p/v):1
0,5% de peptona;
0,3% de extracto de carne/extracto de levadura;
1,5% de agar;
0,5% de cloruro de sodio;
agua destilada;
pH casi neutro (6,8) a 25 °C.
El caldo nutritivo se hace exactamente igual, excepto por la omisión del agar.
(wikipedia , 2022)
6
Medios de cultivos
Según lo que se quiera hacer crecer, el medio requerirá unas u otras condiciones.
Generalmente se presentan desecados en forma de polvo fino o granular antes de
ser preparados; ya preparados pueden encontrarse en estado sólido, semisólido o
líquido. El objetivo último del cultivo es variado: antibiograma, identificación,
multiplicación.
Uno de los sistemas más importantes para la identificación
de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias
artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los
microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos
es el Cultivo. Se han preparado más de diez mil medios de cultivo diferentes.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial
debe reunir una serie de condiciones como: temperatura, grado de humedad y
presión de oxígeno adecuadas, así como un grado correcto de acidez o
alcalinidad. Existen rangos de temperatura dónde la tasa máxima de crecimiento
se encuentra entre 20 y 42 °C. A esas bacterias se las conoce como mesófilas. 1
Un medio de cultivo debe contener los nutrientes mínimos para establecer un
medio que contenga solamente los componentes necesarios para el crecimiento2
y debe estar exento de todo microorganismo contaminante.
Los virus, por ejemplo, son obligados parásitos intracelulares, por lo que
necesitan un medio que contenga células vivas. (wikipedia, 23 dic 2022)
7
Metodología
Materiales
Material de laboratorio Equipo de Laboratorio Reactivos
• 7 cajas Petri
• 2 pipeta 10 ml • 1 baño María • Alcohol etílico 72°
• 8 pipetas de 1 ml • 1 parrilla con agitación • Agar Nutritivo
• 2 perilla • 1 balanza digital • Agua destilada
• 1 portapipetero • 1 autoclave • Muestra de alimento.
• 1 porta caja Petri. • 1 incubadora
• 3 tubo de ensaye 15x150 mm • 1 campana de flujo laminar
• 1 gradilla • Contador de colonias
• 1 matraz Erlenmeyer 500ml • Licuadora
• 1 probeta de 100 ml
• 1 espátula
• 1 agitador magnético.
• 1 vaso de precipitado de 100 ml.
• 2 mechero alcohol.
• 1 encendedor
• Papel estraza
• Algodón
• Papel Aluminio
• Gasas
• Cinta testigo o masking.
• 2 bolsas de poli papel
8
Preparación de material para esterilizar
Para empezar esta práctica empezamos cubriendo los materiales con el papel
estraza que fueron las cajas Petri, las pipetas y los tubos de ensaye así mismo
mientras se terminaba de cubrir los materiales por otro lado se empezó a preparar
el agar nutritivo, se realizaron los cálculos necesarios para poder ver la cantidad
de agar a utilizar que las instrucciones marcaban que se ocupaban 23g por litro al
cual nosotros solo requeríamos usar 240ml 23/1000= 0.023*240 y el cual nos dio
como resultado 5.52g.
El protocolo indicaba que se ocuparía 140ml de agar ya preparado a esto mismo
usar un recipiente 2 veces mayor al cual quedó un total de 280ml de agar nutritivo
el cual se iba a distribuir para los 3 equipos.
Teniendo listo el agar se llevó a la parrilla con agitador magnético esto mismo
esperaríamos unos 10 minutos hasta que cambiara a un color más claro.
Teniendo listo todos los materiales y el agar se incorporaron los materiales a una
bolsa polipapel y el agar por sí solo.
Se introdujeron todos los materiales para poder esterilizar a la autoclave la cual
tenía que estar a 121 ºC a 15 lb de presión por 15 minutos.
9
Ya transcurrido el tiempo se apagó la autoclave, con mucho cuidado se dejó
liberar por la válvula todo el vapor para poder abrirlo.
Preparación de la muestra
Empezamos sacando todos los materiales ya listos llevamos todo a la campana de
flujo laminar ya que ahí íbamos a hacer la siembra en placa se tomó una muestra
del alimento (leche pasteurizada) y se marcaron 3 tubos de ensaye para las
diluciones, se tomó un total de leche de 10ml al cual se añadió 90ml esto mismo
quedaría como la primera dilución de 10-1, por siguiente de este mismo se tomó
1ml el cual se pasó a un tubo con tapón de rosca el cual contenía 9ml de diluyente
y este tubo correspondía a la dilución de 10-2, este mismo procedimiento se aplicó
para la dilución de 10-3.
Siembra en placa
Empezamos marcando 4 cajas Petri las cuales serían de 10-1,10-2 ,10-3 y de
testigo, tomando 1ml de la dilución 10-1 del tubo de ensaye y en condiciones
asépticas se sembró en una caja Petri posteriormente se añadieron 20 ml del agar
nutritivo que tenía una temperatura de 40-45 ºC este mismo procedimiento se hizo
para sembrar la dilución de 10-2 y 10-3, en la muestra testigo solo se añadió el
agar por si solo y en una superficie plana se hicieron 6 movimientos en la caja
Petri en sentido del reloj, 6 en sentido contrario, 6 arriba y abajo, 6 derecha a
izquierda; esto con la finalidad de distribuir la muestra. Por último, se dejó
solidificar el agar y se incubó a 37°C por 24 horas.
10
Resultados y análisis de resultados
Transcurridas las 24 horas, se llevó a cabo el conteo de las colonias presentes y
reportó de acuerdo a normatividad. En esta misma se llevó a cabo la descripción
de las diferentes características del crecimiento de microorganismos en las cajas
Petri y de igual forma se hizo el conteo de Unidades Formadoras de
Colonias(UFC), esto bajo las normas proporcionadas.
Muestras
Características
por:
Muestra 101 Muestra 102 Muestra 103 Testigo
Tamaño ¿1mm-2mm ¿1mm-3mm <1mm-3mm -
puntiforme
Forma circular Circular Circular -
Borde Entero, Ondulado Ondulado -
ondulado
Transparencia Transparente Transparente Transparente -
Brillo Sin brillo Brillante Sin brillo -
Color No No No -
pigmentadas pigmentadas pigmentadas
Textura Lisa, rugosa Lisa Lisa -
Elevación Plana Plana-convexa Plana -
Consistencia Suave Suave Suave -
11
Unidades formadoras de colonias,1 UFC/ ml, de bacterias aerobias en placa en
agar nutritivo, incubadas _24_ horas a _37_ ºC.
Colonias Contadas
UFC/g o
ml
Ejemplo 1:100 1:1000 1:10000
Dilución 10-1 >250 127 0 127000
Dilución 10-2 7 0 700” valor
estimado”
Dilución 10-3 9 0 900” valor
estimado”
Testigo 0 0
12
Según la NORMA Oficial Mexicana NOM-092-SSA1-1994, Bienes y servicios.
Método para la cuenta de bacterias aerobias en placa solo el ejemplo 1 es el
elegido ya que se encuentra dentro del rango.
Conclusiones
Como tal basándonos en el objetivo de esta práctica fue un poco más sencilla
hacerla ya que era la segunda vez que lo realizábamos pero más sin embargo
hubo unas pequeñas complicaciones en los cálculos tanto con la cantidad en
gramos del agar y también en mililitros porque al distribuirse con los compañeros
unos tenían más que otros de igual manera al momento de sembrar en placas en
caso de mi equipo no era muy cómodo poder trabajar dentro de la campana de
flujo más sin embargo las cajas Petri no presentaron crecimiento y la muestra
testigo estuvo limpia. De igual manera para poder hacer los cálculos al contar las
colonias fue un poco complicado ya que no debería ser erróneo y tenía que ser
bajo las normas ya que esto en el lado agroindustrial podría traer consecuencias.
13
Referencias bibliográficas
INTRODUCCION . (16 de AGOSTO de 2010). Obtenido de [Link]
iv/[Link]
wikipedia . (10 de enero de 2022). Obtenido de wikipedia:
[Link]
wikipedia. (23 dic 2022). Obtenido de wikipedia: [Link]
14
