ENZIMAS
ENZIMAS:
■ ¿Qué son las enzimas?:
Las enzimas son:
■ Proteínas;
E S
■ Catalíticas;
■ Específicas;
■ Susceptibles de ser reguladas…
DIFERENCIAS ENTRE ENZIMAS Y
CATALIZADORES:
ENZIMAS: CATALIZADORES:
■ Química: Proteínas Inorgánicos
■ Termolabilidad: Sí No
■ Especificidad: Sí No
■ Regulación: Sí No
■ Eficiencia: Alta Baja
■ Se consumen: No Sí
ANALOGÍAS ENTRE
ENZIMAS Y CATALIZADORES:
■ Aceleran la velocidad de la reacción
química por ellos catalizada…
■ No modifican la constante de equilibrio
(Keq) de la reacción catalizada…
ENZIMAS:
Características generales:
■ Gracias a su carácter proteico, que les
permite adoptar estructura terciaria y
cuaternaria, las enzimas son las únicas
moléculas que pueden adaptarse a la
sustancia o sustrato al cual se unen y
modifican…
■ Por ser proteínas, son termolábiles…
CATÁLISIS ENZIMÁTICA:
Estado activado Sin enzima
Energía
de
activación
Estado Con enzima
inicial
G
Estado
Evolución de la reacción final
ESPECIFICIDAD
ENZIMÁTICA:
■ La especificidad enzimática puede ser:
■ A)De sustrato (Ej. Glucoquinasa):
Glucosa + ATP Glucosa 6 P + ADP
■ B)De reacción (Ej. Fosfatasas):
Glucosa 6 P + H2O Glucosa + Pi
ENZIMAS ALOSTÉRICAS:
■ Las enzimas tienen un sitio específico de
unión al sustrato (S) y algunas poseen un
sitio de unión para moléculas
reguladoras (A) (enzimas alostéricas)…
A
S
MECANISMO DE ACCIÓN
ENZIMÁTICA:
E + S ES
ENZIMA SUSTRATO COMPLEJO
ENZIMA-
SUSTRATO
MECANISMO DE ACCIÓN
ENZIMÁTICA:
P
ES E +
P
LUGAR DE SUSTRATO:
■ El lugar de sustrato posee dos sitios:
■ A) de unión;
■ B) catalítico (sitio o centro activo).
Sitio de unión:
E S Reconoce y fija
Sitio catalítico:
transforma
UNIÓN ENZIMA-SUSTRATO:
E + S
ADAPTABILIDAD INDUCIDA
CLASIFICACIÓN DE LAS
ENZIMAS:
■ Transferasas;
■ Hidrolasas;
■ Oxido-reductasas;
■ Isomerasas;
■ Liasas;
■ Ligasas...
TRANSFERASAS:
■Catalizan la transferencia de un grupo
de átomos de un sustrato a otro.
Ejemplos:
■ Las AMINOTRANSFERASAS:
(ó transaminasas)
■ transfieren grupos amino…
■ Las QUINASAS:
■ transfieren grupos fosfato…
1.TRANSFERASAS:
CO.O - CO.O - CO.O- CO.O-
+
+H3N C H
+ C O C O H3N C H
CH2 CH2 CH2 +CH2
CO.O- CH2
L-aspartato -
CO.O
- Oxalacetato CH2
CO.O
Alfa-ceto-
glutarato L-glutamato
ASPARTATO AMINOTRANSFERCAOS.AO-
(GOAT)
2.HIDROLASAS
Catalizan la ruptura de un enlace químico
mediante la adición de una molécula de agua.
O
-
CH2.O P O CH2.OH + Pi
-
O
Unión éster H2O
fosfórico
3. ÓXIDO-REDUCTASAS:
■ Catalizan reacciones de transferencia de
átomos de hidrógeno ó electrones. Ej: las
deshidrogenasas…
CO.O- + NAD+ CO.O- + NADH2
OH C H C O
CH3 CH3
LACTATO DESHIDROGENASA
4.ISOMERASAS
■ Son las que interconvierten isómeros de
cualquier tipo, ópticos, geométricos o de
posición…Ej: triosa fosfato isomerasa:
CH2.OH H C O
C O H C OH
CH2O.P CH2O.P
Dihidroxiacetona P Gliceraldehído 3 P
C3 H5 O6 P
5.LIASAS:
■ Catalizan la ruptura de enlaces químicos,
excluyendo enlaces peptídicos, por un proceso
distinto al de la hidrólisis. Ej: la aldolasa…
CH2.O.P CH2.O.P
H C OH H C OH Dihidroxi-
acetona P
HO C H CH2.OH
H C OH H C O
+
Gliceralde-
H C OH Aldolasa H C OH hído 3 P
CH2.O.P CH2.O.P
Fructosa 1-6 di P
6.LIGASAS
■Catalizan la formación de enlaces entre
C y O, N, S ú otros átomos,
generalmente, utilizando energía de
hidrólisis del ATP…
■ Ej: Glutamina sintetasa
■ L-GLUTAMATO + NH + +ATP +H O
4 2
■ L-GLUTAMINA + ADP + Pi
ACTIVIDAD
ENZIMÁTICA:
■ Es la cantidad de sustrato transformado
en la unidad de tiempo. La unidad de
medida es la Unidad Internacional.
■ Una Unidad Internacional (UI) es la
cantidad de enzima capaz de
transformar un micromol de sustrato en
un minuto…
FACTORES QUE MODIFICAN
LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA:
■ Concentración de enzima;
■ Temperatura;
■ pH;
■ Concentración de sustrato…
CONCENTRACIÓN DE
ENZIMA:
v
Velocidad
de la
reacción
Concentración de enzima
TEMPERATURA:
Temperatura tºC
óptima
pH:
pH óptimo pH
CONCENTRACIÓN DE
SUSTRATO:
v
Vmáx
½ Vmáx
Km Concentración de
sustrato
CONCLUSIONES:
■ El Km de una enzima es la concentración
de sustrato para la cual se alcanza la
mitad de la velocidad máxima de la
reacción;
■ Es un índice inverso de la afinidad de la
enzima por su sustrato: a mayor Km
menor afinidad y viceversa…
ECUACIÓN DE MICHAELIS-
MENTEN:
v Vmáx . (S) 1 Km + (S)
Km + (S) v Vmáx . (S)
1 Km . 1 + 1
v Vmáx (S)
Vmáx
y = a . x + b
Ecuación de la recta
REPRESENTACIÓN
DE LINEWEAVER-BURK:
1/v y a
b
1/Vmáx
-1/Km 1/(S) x
COFACTORES ENZIMÁTICOS
■ Algunas enzimas sólo pueden realizar su
función catalítica en asociación a otra
molécula no proteica más pequeña
denominada cofactor enzimático;
■ Los cofactores enzimáticos son tres:
■ GRUPOS PROSTÉTICOS;
■ COENZIMAS;
■ ACTIVADORES METÁLICOS…
COFACTORES ENZIMÁTICOS:
■ En los grupos prostéticos, la unión de los
mismos a la enzima es fuerte (covalente),
manteniéndose unida al finalizar la
reacción química.Ej:biotina, FMN, FAD.
■ En las coenzimas, la unión es débil y se
separan de la enzima al finalizar la
reacción química. Ej: NAD, NADP.
HOLOENZIMAS
:
H O LO E N Z I MA
APOENZIMA COENZIMA
PROTEÍNA NO PROTEÍNA
(TERMOLÁBIL) (TERMOESTABLE)
COFACTORES ENZIMÁTICOS:
SU RELACIÓN CON VITAMINAS:
■ Tanto los grupos prostéticos , como las
coenzimas se relacionan estructuralmente
con vitaminas. Por ejemplo:
■ PPT(pirofosfato de tiamina):Tiamina (B1);
■ PAL(fosfato de piridoxal):Piridoxina (B6);
■ FAD(flavinaadeninadinucleótido):B2;
■ NAD(nicotinamidaadeninadinucléotido);
■ CoA (coenzima A): Pantoténico…
ACTIVADORES METÁLICOS:
■ Fe: catalasas, peroxidasas, citocromos;
■ Cu: citocromo oxidasa, tirosinasa;
■ Zn: alcohol deshidrogenasa; anhidrasa;
■ Mg: quinasas;
■ Mn: carboxilasas;
■ Se: glutation peroxidasa;
■ Mo: xantino-oxidasa…
REGULACIÓN ENZIMÁTICA:
■Una enzima puede ser regulada por:
■ Concentración de sustrato, enzima, pH;
■ Alosterismo;
■ Modificación covalente;
■ Genética: inducción; represión;
■ Hormonal…
REGULACIÓN
ALOSTÉRICA:
Sitio alostérico
Sitio de unión
del sustrato
Modulador
alostérico
E
REGULACIÓN ALOSTÉRICA:
EFECTO HOMOTRÓPICO:
■ A
ENZIMA 1
■ B
ENZIMA 2
■ C
ENZIMA 3
■ D
REGULACIÓN ALOSTÉRICA:
EFECTO HETEROTRÓPICO:
■ A E
ENZIMA 1
■ B F
ENZIMA 2
■ C G
ENZIMA 3
■ D H
MODIFICACIÓN
COVALENTE:
■ HORMONA
■ RECEPTOR
■ SEGUNDO MENSAJERO
■ FOSFORILACIÓN ENZIMÁTICA
■ ACTIVACIÓN/INACTIVACIÓN
MODIFICACIÓN
COVALENTE:
ATP ADP
Enzima QUINASA
Enzima
Inactiva Activa
FOSFATASA
OH O-P
Pi H2 O
REGULACIÓN GENÉTICA:
Represión:
O
Gen represor Gen estructural
Sitio
Proteína
Promotor
represora
ENZIMA
REGULACIÓN GENÉTICA:
Inducción:
O
Gen represor Gen estructural
Proteína
represora +
ENZIMA
Inductor
CONCLUSIONES:
■ REGULACIÓN ALOSTÉRICA =
■ MODULACIÓN:
■ ESTIMULACIÓN ó INHIBICIÓN
■ Es un mecanismo rápido...
■ REGULACIÓN GENÉTICA =
■ REPRESIÓN ó INDUCCIÓN
■ Es un mecanismo lento…
ISOENZIMAS:
■ Son formas moleculares distintas de una
misma especie enzimática. Ejemplo:
■ LACTATO DESHIDROGENASA:
PIRUVATO LACTATO
NADH2 NAD+
ISOENZIMAS:
Lactato deshidrogenasa:
H H H H LDH 1 Corazón
M H H H LDH 2
M M H H LDH 3
M M M H LDH 4
M M M M LDH 5 Músc.esq.
ISOENZIMAS
Creatínfosfoquinasa:
■ CREATINA FOSFOCREATINA
ATP ADP
CPK-MM: M M M Músculo esq.
CPK-MB: M B B CORAZON
CPK-BB: B B B Cerebro
ZIMÓGENOS:
■ PEPSINÓGENO:
H2N CO.O-
AUTOCATÁLISIS
pH BAJO
• PEPSINA
INHIBICIÓN ENZIMÁTICA:
■Un inhibidor enzimático es una sustancia
química capaz de bloquear de manera
reversible ó irreversible la acción de una
enzima…
■ Clasificación:
■ Reversible (competitiva; no competitiva);
■ Irreversible…
INHIBICIÓN ENZIMÁTICA
REVERSIBLE COMPETITIVA:
■ El inhibidor tiene una estructura
química parecida al sustrato de la
enzima, por lo tanto compite con él por el
sitio activo de la enzima…
Inhibidor competitivo
E
Sustrato
INHIBICIÓN ENZIMÁTICA
REVERSIBLE COMPETITIVA:
E S S S I
P
E + S ES E +
P
INHIBICIÓN ENZIMÁTICA
REVERSIBLE COMPETITIVA:
E S
I I I
E + I EI
INHIBICIÓN ENZIMÁTICA
REVERSIBLE COMPETITIVA:
■ Sin inhibidor
Con inh.
Vmax 1
Sin inh
v
Con inh.
1/Vmax
Km Km ap -1/Km 0 1/(S)
-1/Km ap
EJEMPLO DE INHIBICIÓN COMPETITIVA
XANTINO-OXIDASA:
HIPOXANTINA XANTINA AC.URICO
OH OH
N N
N N
H H
OH N
N N N
H H
HIPOXANTINA ALOPURINOL
INHIBICIÓN ENZIMÁTICA
REVERSIBLE COMPETITIVA:
■ CONCLUSIONES:
■ Sustrato e inhibidor tienen parecida
estructura química;
■ Ambos compiten por el sitio activo de la
enzima;
■ Se modifica el Km pero no la Vmax de la
reacción;
■ El inhibidor puede ser desplazado
aumentando la concentración del sustrato…
INHIBICIÓN ENZIMÁTICA
REVERSIBLE NO COMPETITIVA:
■ Los inhibidores se unen a la enzima en
un lugar distinto al sustrato y
disminuyen la velocidad máxima de la
reacción, sin modificar el Km…
E + I + S I ES
INHIBICIÓN ENZIMÁTICA
REVERSIBLE NO COMPETITIVA:
E+S ES E+P
+ +
I I
EI + S ESI
INHIBICIÓN ENZIMÁTICA
REVERSIBLE NO COMPETITIVA:
1 Sin inh
Vmax. v
1/Vmax Con inh
Vmax.ap Con inh. 1/Vmax.ap.
.
Km (S) -1/Km 0 1/(S)
INHIBICIÓN ENZIMÁTICA
REVERSIBLE NO COMPETITIVA:
■ Ejemplos:
■ Cu, Hg y Ag inhiben enzimas uniéndose
a grupos –SH que son indispensables
para la actividad de algunas enzimas…
■ EDTA (etiléndiaminotetraacético):
■ Quelante de cationes bivalentes…
INHIBICIÓN ENZIMÁTICA
REVERSIBLE NO COMPETITIVA:
■ CONCLUSIONES:
■ Sustrato e inhibidor tienen diferente
estructura química;
■ Ambos NO compiten por el sitio activo de la
enzima;
■ Se modifica la Vmax de la reacción
(disminuye), pero NO el Km;
■El inhibidor NO puede ser desplazado
aumentando la concentración del sustrato…
INHIBICIÓN ENZIMÁTICA
IRREVERSIBLE:
ACETILCOLINA ACETATO + COLINA
H2 O
ACETILCOLINESTERASA
SH
MALATHION
