ADN COMO PORTADOR DE LA INFORMACIÓN GENÉTICA
En 1928 F. Griffith investigó varias cepas de bacterias Streptococcus neumoniae causante
de la neumonía humana. Observó dos cepas:
Cepa S (lisa), con cápsula, es virulenta y causa la muerte.
Cepa R (rugosa), sin cápsula, no virulenta.
Si inyectaba bacterias no virulentas vivas (R) junto con bacterias virulentas muertas (S) los
ratones morían y además de su cadáver se obtenían bacterias S vivas.
Dedujo que las bacterias S muertas podían transmitir un “factor transformante” a las R
convirtiéndolas en patógenas. La presencia de este factor transformante hacia que las
bacterias R vivas sintetizaran la cápsula transformándose en bacterias virulentas S.
Avery, Macleod y MacCarthy en 1944 demostraron que solo los extractos de bacterias S
muertas que contenían ADN eran capaces de producir dicha transformación. Dedujeron
que el ADN, y no las proteínas, era la molécula portadora de la información genética.
Hersey y Chase en 1952 confirmaron estas conclusiones trabajando con el bacteriófago
T2.
Obtuvieron virus cuyas cápsidas contenían proteínas
con azufre radiactivo S35 .
Realizaron otro cultivo de virus T2 cuyo ADN contenía
fósforo radiactivo P32.
Cuando los fagos con proteínas marcadas infectaban
las bacterias, el marcaje no aparecía ni en las
bacterias ni en los nuevos virus quedando tan solo
las cápsidas vacías.
Sin embargo, al infectar las bacterias con fagos que
contenían ADN con P32, el marcaje radiactivo se
detectaba tanto en le interior de las bacterias como
en los nuevos virus.
Así demostraron que es el ADN, y no las proteínas, la
molécula que contiene la información genética de los
organismos.
HIPÓTESIS SOBRE LA DUPLICACIÓN DEL ADN
Se propusieron tres hipótesis:
1. SEMICONSERVATIVA (formulada por Watson y Crick). Cada hebra sirve como molde
para la síntesis de una nueva hebra, quedando al final las dos dobles hélices formadas
por una hebra antigua (que actuó de molde) y una hebra nueva (copia).
2. CONSERVATIVA. Tras la duplicación quedarían las dos hebras antiguas juntas y las dos
hebras nuevas forman una doble hélice.
3. DISPERSIVA. Las hebras resultantes estarán formadas por fragmentos de doble hélice
de ADN antiguo y ADN nuevo.
EXPERIMENTO DE MESSELSON Y STAHL (1957)
Cultivaron bacterias (Escherichia coli) en un medio con nitrógeno pesado (N15) y como el
ADN con N15 pesa más que el sintetizado con N14, ambos se pueden separar por
centrifugación de modo que el más ligero queda más arriba que el ADN “pesado”.
Se pasaron las bacterias cultivadas con N15 a un medio con N14 .Después de media hora
extrajeron el ADN y lo centrifugaron observando que ocupaba una posición intermedia
entre el ADN con N15 y el ADN con N14.
Se dedujo que era un ADN híbrido y se descartó la hipótesis conservativa.
Si las bacterias se dejaban en N14 durante dos divisiones ,aprecian dos bandas de ADN
en el tubo de ensayo de la centrífuga, uno híbrido y otro ligero.
Si se dejaba durante tres divisiones la proporción de ADN híbrido era más pequeña. Esto
descartaba la hipótesis dispersiva y demostraba la hipótesis la hipótesis
semiconservativa.
SÍNTESIS DE ADN
Para la síntesis de ADN in vitro (R. Kornberg 1956) es necesario:
•ADN polimerasa enzima capaz de unir unos 1000 nucleótidos por minuto.
Es incapaz de iniciar una cadena de novo, solo añade nucleótidos al extremo de una cadena
preexistente.
Actúa añadiendo nucleótidos al extremo 3´libre y la nueva hebra de ADN crece en dirección
5´ 3´
•Dexosirribonucleótidos trifosfato de A, T, G y C (proporcionan energía al proceso)
•ADN patrón que sirve como molde.
•ADN cebador
•Mg2+
SÍNTESIS DE ADN o REPLICACIÓN DEL ADN
Podemos diferenciar 3 fasess: iniciación, elongación y corrección de errores.
A) INICIACIÓN
Consiste, básicamente, en el desenrollamiento y apertura de la doble hélice. Se inicia en una
región del ADN denominada oriC o punto de iniciación. Es una zona donde abundan las
secuencias de bases GATC.
• El punto de iniciación es reconocido por unas proteínas específicas que se unen a él. Las
enzimas helicasas rompen los enlaces de hidrógeno entre las bases nitrogenadas y la
doble hélice se abre como una cremallera.
• Cuando la doble hélice se abre se produce desenrollamiento en esa zona, lo que crea en
las zonas próximas unas tensiones que podrían provocar un mayor enrollamiento. La
acción de otras enzimas, las girasas y las topoisomerasas, evita esas tensiones
rompiendo y soldando de nuevo la hélice de ADN en estos puntos.
• Las proteínas SSB (del inglés Single
Strand Binding-DNA, proteínas de
unión a la cadena sencilla) se unen a
las hebras molde e impiden que se
vuelva a enrollar.
• En el lugar de origen de replicación, alrededor de oriC, se ha formado un ojo o burbuja
de replicación en la que hay dos zonas, con forma de Y, denominadas horquillas de
replicación, donde se van a sintetizar las nuevas hebras de ADN. La burbuja de
replicación se va extendiendo a lo largo del cromosoma en los dos sentidos, de ahí que se
diga que la replicación es bidireccional.
Recuerda que la ADN-polimerasa
sintetiza ADN en dirección 5´ 3´
B) ELONGACIÓN
En esta fase se sintetiza una nueva hebra de ADN complementaria y antiparalela a la hebra
molde o patrón. Además de las enzimas que actúan en la fase de iniciación intervienen las
ADN polimerasas y las ARN polimerasas
Hay varios tipos de las ADN polimerasas (I, II y III), su función es doble:
1. Actividad polimerasa: Unen entre sí los nucleótidos que formarán el ADN. Para ello,
recorren la hebra molde, seleccionan el desoxirribonucleótido cuya base es
complementaria con la de la hebra molde, y lo unen. La energía para el nuevo enlace se
obtiene de la hidrólisis de los dos grupos fosfato del nucleótido entrante.
2. Actividad exonucleasa: Eliminan nucleótidos, cuyas bases nitrogenadas están mal
apareadas, así como fragmentos de ARN.
En primer lugar, una ARN polimerasa
llamada primasa sintetiza un fragmento
de ARN formado por unos 10 nucleótidos,
denominado primer, que actúa como
cebador.
Después la ADN polimerasa, partiendo
del primer, sintetiza una hebra de ADN en
sentido 5´ 3´ a partir de nucleótidos
trifosfato.
Esta nueva hebra con crecimiento continuo HEBRA CONDUCTORA O LIDER
Si la replicación del ADN es bidireccional y
la ADN polimerasa solo sintetiza ADN en
dirección 5´ 3´ ¿Cómo se produce la
síntesis en sentido contrario?
La solución fue dada por OKAZAKI (1968)
al descubrir unos fragmentos de
nucleótidos que llevan su nombre.
El mecanismo de síntesis de la HEBRA RETARDADA
consiste en una síntesis discontinua de pequeños
fragmentos de ADN de unos mil nucleótidos cada uno de
ellos con un cebador de ARN sintetizado por la primasa.
Cada uno de esos fragmento recibe el nombre de
fragmento de Okazaki.
Psteriormente la ADN polimerasa va eliminando el cebador
y sustituyéndolo por ADN. Finalmente interviene la ADN
ligasa que suelda todos los fragmentos obtenidos.
C) CORRECCIÓN DE ERRORES:
Durante la replicación es frecuente que se produzcan errores y se incorporen nucleótidos
que no tengan correctamente apareadas sus bases. La ADN polimerasa actúa entonces
como exonucleasa y elimina los nucleótidos mal apareados.
Aunque el mecanismo de errores es muy eficiente, a veces queda alguno sin corregir. Esos
errores pueden ser importantes en la evolución.
REPLICACIÓN EN LOS EUCARIOTAS
La replicación del ADN en los organismos eucariontes es muy parecida a la de los
procariontes, salvo diferencias derivadas, en parte, de la mayor complejidad del material
genético de los eucariotas. Las principales diferencias son:
1. Los cromosomas de eucariotas contienen moléculas de ADN muy largas. Para abreviar el
proceso, la replicación se inicia de manera simultánea en varios puntos de cada cromosoma
denominados replicones.
2. El proceso de replicación del ADN se va completando
normalmente hasta llegar al extremo del cromosoma, el
telómero. Cuando se elimina el último ARN cebador la hebra
retardada quedará incompleta ya que la ADN polimerasa no
podrá rellenar el
hueco, al ser incapaz de sintetizar en dirección 3´- 5´. Para poder
completar esta cadena, la polimerasa necesitaría un extremo
hidroxilo 3´ libre donde iniciar un nuevo fragmento. Este hecho
hace que el telómero se vaya acortando un poco cada vez que la
célula se divide, fenómeno que se asocia a los procesos de
envejecimiento y muerte celular.
3. Existen 5 tipos de ADN polimerasas (α, β, γ,
δ y ε). La γ interviene en la replicación del ADN
mitocondrial.
4. En los cromosomas de los organismos
eucariotas el ADN se encuentra asociado a las
histonas, proteínas básicas que no tienen los
procariotas, y que durante la replicación se
duplican. Las histonas, junto con el ADN,
forman un nucleosoma. Parece ser que los
nuevos nucleosomas se incorporan a la hebra
retardada, mientras que los viejos se quedan
en la conductora.
DOGMA CENTRAL DE LA BIOLOGÍA MOLECULAR
SÍNTESIS DEL ARN: TRANSCRIPCIÓN
La síntesis del ARN o transcripción ocurre en el interior del núcleo de las células eucariotas.
Como requisitos previos necesita:
a) Una cadena de ADN que actúe como molde. De las dos cadenas de nucleótidos que
forman el gen, sólo una, la denominada molde, se transcribe.
b) Enzimas ARN-polimerasas. En los procariotas sólo existe una, mientras que en los
eucariotas existen tres.
c) Ribonucleótidos trifosfato de A, G, C y U. Se unen mediante un enlace éster entre el
ácido fosfórico situado en la posición 5´ de un ribonucleótido trifosfato y el grupo –OH
situado en posición 3´del último ribonucleótido de la cadena de ARN en formación.
EL PROCESO DE LA TRANSCRIPCIÓN
La transcripción consta de 3 etapas: la iniciación, la elongación y la terminación. Tras ella
se produce la maduración del ARN.
INICIACIÓN:
Comienza cuando la ARN-polimerasa
reconoce en el ADN que se va a
transcribir una señal (secuencias de
nucleótidos) CENTRO PROMOTOR.
La ARN-polimerasa se une al promotor y
hace que la doble hélice de ADN se abra
para permitir que quede expuesta la
secuencia de bases del ADN y se puedan
incorporar los ribonucleótidos que se
van a unir.
ELONGACIÓN:
Es la adición de sucesivos ribonucleótidos para formar el ARN.
La ARN-polimerasa avanza a lo largo de la cadena de ADN “leyéndola” en sentido 3´- 5´,
mientras que el sentido de síntesis del ARN es 5´ 3´.
La enzima selecciona el ribonucleótido trifosfato cuya base es complementaria con la de
la cadena de ADN que actúa como molde y lo une, mediante un enlace éster, al siguiente
nucleótido, desprendiéndose un grupo pirofosfato (Ppi).
En los EUCARIOTAS, tras la unión de los 30 primeros ribonucleótidos se añade en el
extremo 5´una “CAPERUZA” (formada por metil-guanosin-fosfato), que durante la
traducción será una señal de reconocimiento del inicio de lectura.
TERMINACIÓN:
La ARN-polimerasa reconoce en el ADN unas
señales de terminación que indican el final de la
transcripción.
Esto implica el cierre de la burbuja formada en el
ADN y la separación de la ARN-polimerasa del ARN
transcrito.
En los PROCARIOTAS, la señal de
terminación es una secuencia de bases
palindrómicas (secuencias que tienen la
misma lectura de izquierda a derecha y de
derecha a izquierda)
En los EUCARIOTAS, con posterioridad a la
separación del ARN una enzima (poli-A
polimerasa) añade en el extremo final 3´ una
secuencia formada por unos 200 nucleótidos de
adenina, llamada COLA DE POLI-A, que al parecer
interviene en los procesos de maduración y
transporte del ARN fuera del núcleo.
MADURACIÓN DEL ARN:
A veces, los ARNm no se pueden traducir directamente en proteínas, sino que necesitan
un procesamiento previo o maduración postranscripcional.
Organismos procariotas:
El ARNm de los procariotas puede ser directamente traducido y a partir de él se forma una
proteína funcional NO HAY MADURACIÓN.
Sin embargo, cuando se transcribe el ADN que
codifica los ARNt y los ARNr se forma una larga
molécula de ARN que contiene numerosas copias
de las secuencias del ARNr o el ARNt. Esta larga
molécula es posteriormente cortada en fragmentos
más pequeños por enzimas específicas, para dar
lugar a los distintos ARNt y ARNr.
Organismos eucariotas:
En los eucariotas la maduración es más compleja. Cada gen consta de varios fragmentos
denominados INTRONES y EXONES, intercalados unos con otros.
Los intrones son secuencias de bases que se transcriben pero que no se traducen,
es decir, no codifican una secuencia de aminoácidos.
Los exones son las secuencias que se transcriben y se traducen, es decir, tienen
información para formar una cadena polipeptídica.
Organismos eucariotas:
Así pues, el ARN transcrito primario está formado por
intrones y exones.
Su maduración consiste en la eliminación de los
primeros y la unión de los segundos mediante un
mecanismo que se conoce con el nombre de SPLICING
(empalme).
El proceso de splicing comienza cuando las secuencias
intrónicas forman unos bucles que provocan el
acercamiento de los extremos de los exones y
continúa con el corte de los intrones y la unión de los
exones, para formar un ARNm que ya está en
condiciones de salir del núcleo.
TRANSCRIPCIÓN PROCARIOTAS TRANSCRIPCIÓN EUCARIOTAS
• Interviene un tipo de ARN polimarasa • Intervienen 3 tipos de ARN polimerasas
• El ARNm no tiene CAPERUZA , ni cola de • El ARNm tiene una CAPERUZA en posición
POLI-A 5´ una cola de POLI-A en posición 3´.
• El ARN trnascrito no precisa maduración. • El ARN transcrito sufre en el núcleo un
proceso de maduración (eliminación de
intrones).
• Los ARNm se empiezan a traducir según • Los ARNm deben ser transportados al
van siendo sintetizados. La transcripción y la citoplasma para participar en el proceso de
traducción son simultáneas en el espacio y la traducción
en el tiempo.
CÓDIGO GENÉTIC0
El CÓDIGO GENÉTICO es la relación entre la secuencia de bases del ARN y la secuencia de
aminoácidos en las proteínas.
El descifrado del código se inició en 1955, se debe a Severo Ochoa (Premio Nobel 1959)
que utilizó la enzima polinucleótido-fosforilasa para la síntesis de ARNm a partir de
nucleótidos que hubiera en el medio.
Unió varios nucleótidos con la base U y repitiendo esta secuencia varias veces ,en
presencia de distintos aminoácidos, comprobó que siempre se formaba un polipéptido de
fenilalanina. Estaba claro que el triplete UUU llamaba al aminoácido fenilalanina.
Experiencias similares permiten descubrir el resto de los tripletes. De este modo se
descifró todo el código genético.
Las proteínas están formadas por 20 tipos de aminoácidos distintos, mientras que solo hay
4 tipos de nucleótidos.
La relación no se puede establecer 1 nucleótido 1 aminoácido, ni 2 nucleótidos 1 aa
(V'4,2 = 42 = 16) ya que resultan 16 combinaciones que son insuficientes para 20 aa.
Por lo tanto 3 nucleótidos 1 aa (V'4,3 = 43 = 64) que resultan 64 combinaciones y nos
sobran tripletes para nombrar a los 20 aminoácidos, pero se demostró que muchos
aminoácidos responden a más de un triplete y que hay tripletes que no llaman a ningún
aminoácido, los cuales se conocen como “stop, paro o sin sentido”.
CARACTERISTICAS DEL CÓDIGO GENÉTICO
1) Es universal es válido para todos los seres vivos. (Hay excepciones)
2) Disposición lineal cada tres nucleótidos corresponden a un aminoácido específico.
3) El código está degenerado exceptuando el Triptófano y la Metionina existen dos o
más codones para cada aminoácido. Ello es así puesto que el número de tripletes es
superior al de aminoácidos existentes en las proteínas. Los distintos codones que
codifican para un mismo aminoácido se denominan codones sinónimos.
4) Existe un codon de iniciación AUG (que también codifica Metionia) y tres de
terminación UAG, UAA y UGA llamados codones sin sentido, de paro o stop.
Todas las proteínas comienzan por la Metionina pero posteriormente esta Metionina que
ocupa la posición inicial puede ser eliminada.
LA TRADUCCIÓN. BIOSÍNTESIS DE PROTEÍNAS
Para que tenga lugar el proceso de traducción o síntesis de proteínas es necesario:
Ribosomas donde se realiza la síntesis proteica.
ARN mensajero que lleva la información para sintetizar cada proteína.
Aminoácidos que son los componentes de las proteínas.
ARN de transferencia (ARNt) que aporta los aminoácidos en el orden preciso.
Enzimas y energía (GTP) necesarias en toda reacción de biosíntesis.
En el ribosoma se distinguen tres lugares diferentes
de unión a los ARNt:
El sitio P (peptidil) se sitúa la cadena
polipeptídica en formación;
El sitio A (aminoacil) entran los aminoácidos
(unidos al ARNt )que se van a unir a la cadena
proteica.
El sitio E se sitúa el ARNt antes de salir del
ribosoma.
ACTIVACIÓN DE LOS AMINOÁCIDOS
La activación consiste en la unión de un aminoácido con el ARNt que le corresponde.
Interviene la enzima aminoacil-ARNt-sintetasa, que da lugar a un complejo denominado
aminoacil-ARNt.
La reacción requiere energía, que es aportada por la molécula de ATP.
Aminoácido + ATP + Enzima + ARNt Aminoacil-ARNt + Ppi + AMP + EnzimaW
La unión del aminoácido y su ARNt se realiza entre el grupo
carboxilo del aminoácido y el grupo –OH del extremo 3´ del ARNt.
Existen al menos 20 aminoacil-ARNt-sintetasas, una para cada
aminoácido.
TRADUCCIÓN
1. INICIACIÓN
• La síntesis se inicia cuando la subunidad pequeña del ribosoma y el ARNm se unen en un
punto localizado cerca del codón AUG, que es el codón iniciador.
• A continuación entra en el sitio P del ribosoma un primer aminoacil-ARNt, aquel cuyo
anticodón esté formado por 3 bases (UAC) complementarias del codón iniciador.
Este primer ARNt lleva unido el aminoácido Nformilmetionina (f-Met) en las bacterias,
mientras que en los eucariotas es la Metionina (Met).
• La subunidad pequeña del ribosoma, el ARNm y el primer aminoacil-ARNt forman el
complejo de iniciación, al que con posterioridad se une la subunidad grande del ribosoma.
• Intervienen proteínas llamadas FACTORES DE INICIACIÓN y GTP.
2. ELONGACIÓN alargamiento de la cadena proteica.
• Al sitio A llega el segundo aminoacil-ARNt cuyo anticodon es complementario al 2º codon
• El siguiente paso es la formación de un enlace peptídico entre el aminoácido que ocupa
el sitio P (Metionina) y el nuevo aminoácido que ocupa el sitio A. La reacción de formación
del enlace peptídico está catalizada por la enzima peptidil-transferasa.
• A continuación se produce la translocación del ribosoma el desplazamiento del
ribosoma a lo largo del ARNm en sentido 5´ 3´. Como este desplazamiento es
exactamente de tres bases, el primer ARNt abandona el ribosoma, y el peptidil-ARNt pasa
a ocupar el sitio P, quedando el sitio A libre.
• Otro aminoacil-ARNt se incorpora al sitio A, de manera que el proceso de alargamiento
de la cadena proteica puede continuar, repitiéndose el ciclo.
•Intervienen proteínas llamadas FACTORES DE ELONGACIÓN y GTP.
3. TERMINACIÓN
• La terminación de la cadena proteica tiene lugar cuando el ribosoma llega a un lugar del
ARNm donde se encuentra un codón de terminación (UAA, UAG o UGA)
• Estos tripletes no son reconocidos por ningún ARNt y sí por unos FACTORES DE
LIBERACIÓN de naturaleza proteica que se sitúan en el sitio A y hacen que la peptidil-
transferasa separe, por hidrólisis, la cadena polipeptídica del ARNt.
• Una vez completada la traducción, la proteína formada, el ARNm y el ARNt abandonan
el ribosoma, que se separa en sus dos subunidades hasta el momento en que se inicie
una nueva síntesis.
A medida que se van sintetizando, las proteínas adquieren la estructura secundaria y
terciaria que les corresponde, mediante la formación de enlaces de hidrógeno y enlaces
disulfuro entre los aminoácidos que la forman.
REGULACIÓN DE LA ACCIÓN DE LOS GENES: HIPÓTESIS DEL OPERÓN
Todas las células de un organismo pluricelular, excepto los gametos,
poseen la misma información genética. Ahora bien, no todos los genes
se encuentran activos durante el ciclo celular.
Uno de los modelos de regulación de la expresión génica mejor
conocidos en procariotas es el modelo del operón, descrito en los años
cincuenta por Jacob y Monod en Escherichia coli.
Un operón se compone de los siguientes elementos:
Promotor (p): secuencia de nucleótidos del ADN a la que se une la
ARN polimerasa para iniciar la transcripción de un gen o un conjunto de
genes.
Genes estructurales: codifican la síntesis de proteínas implicadas en
un mismo proceso metabólico. Se transcriben sin interrupción, de
modo que el ARNm resultante lleva la información para varias
proteínas y recibe el nombre de ARNm policistrónico.
Operador (o): secuencia de nucleótidos situada entre el promotor y
los genes estructurales.
Gen regulador (r): situado en cualquier lugar del cromosoma bacteriano y codifica la
proteína que actúa de represor. Cuando la proteína represora se asocia al operador
impide físicamente que la ARN-polimerasa se pueda unir al ADN y con ello imposibilita la
transcripción. Cuando el represor se separa, la transcripción ya es posible.
