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Composición química, propiedades antioxidantes y actividad

antimicrobiana de propóleos mexicanos
Chemical composition, antioxidant properties and antimicrobial activity of Mexican propolis

Betsabé Rodríguez Pérez1*, María Margarita Canales Martínez2, José Guillermo Penieres Carrillo3,
Tonatiuh Alejandro Cruz Sánchez1
1Laboratorio de Bioprospección Microbiológica, Unidad de Investigación Multidisciplinaria (UIM), Facultad de Estudios Superiores Cuautitlán,

Universidad Nacional Autónoma de México. Carretera Cuautitlán-Teoloyucan Km. 2.5, San Sebastián Xhala, Cuautitlán Izcalli, Estado de México,
México. C.P. 54714. *Correo electrónico: berope380@[Link]
2Laboratorio de Farmacognosia, Unidad de Biotecnología y Prototipos (UBIPRO), Facultad de Estudios Superiores Iztacala,

Universidad Nacional Autónoma de México.

3Laboratorio de Química Verde, Facultad de Estudios Superiores Cuautitlán. Universidad Nacional Autónoma de México.

*Autor de correspondencia

Resumen
En México, los propóleos se ofertan por su actividad antioxidante y su actividad antimicrobiana, por lo cual es necesario realizar
su análisis utilizando la norma de calidad mexicana. El objetivo del presente estudio fue analizar la composición química de ocho
propóleos mexicanos colectados de diferentes municipios de los estados de México, Michoacán, Guanajuato, Veracruz y Puebla,
para evaluar su actividad antioxidante y también su actividad antimicrobiana contra cepas de referencia de Staphylococcus aureus,
Escherichia coli y Candida albicans. Las muestras provenientes de los municipios del Estado de México y Michoacán presentaron
flavonoides, fenoles y terpenos que les confieren una mayor actividad antioxidante y acción antimicrobiana. Las muestras de los
municipios de Puebla, Veracruz y Guanajuato contienen terpenos en bajas cantidades, provocando disminución de la actividad
biológica e incumplimiento de las especificaciones de calidad. Se demostró la importancia del estudio de la composición química
de los propóleos que se asocia a su actividad biológica en pruebas específicas.

Palabras clave: Propóleos mexicanos; composición química; actividad antioxidante; actividad antimicrobiana.

Abstract
In Mexico, propolis is offered for its antioxidant activity and antimicrobial activity, so it is necessary to perform its analysis using
quality standards. The objective of the present study was to determine the chemical composition of eight propolis from different
municipalities of the states Estado de Mexico, Michoacan, Guanajuato, Veracruz, and Puebla. To demonstrate its biological activity,
the antioxidant activity was evaluated, and with reference strains of Staphylococcus aureus, Escherichia coli, and Candida albicans
the antimicrobial activity was evaluated. The samples from the municipalities of the states Estado de Mexico and Michoacan
presented flavonoids, phenols, and terpenes which confer both an increased antioxidant activity and antimicrobial action. Samples
from the municipalities of the states of Puebla, Veracruz, and Guanajuato contain terpenes in low quantities, resulting in decreased
biological activity and non-compliance with quality specifications. The importance of studying the chemical composition of
propolis associated with its biological activity in specific tests was demonstrated.

Keywords: Mexican propolis; chemical composition; antioxidant activity; antimicrobial activity.

Recibido: 13 de noviembre de 2018 Aceptado: 27 de mayo de 2019 Publicado: 15 de enero de 2020

Como citar: Rodríguez-Pérez, B., Canales-Martínez, M. M., Penieres-Carrillo, J. G., & Cruz-Sánchez, T. A. (2020). Composición química, propiedades
antioxidantes y actividad antimicrobiana de propóleos mexicanos. Acta Universitaria 30, e2435. doi. [Link]

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 ISSN online 2007-9621
Rodríguez-Pérez, B., Canales-Martínez, M. M., Penieres-Carrillo, J. G., & Cruz-Sánchez, T. A.
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Introducción
El propóleo es un material resinoso que elaboran las abejas Apis mellifera a partir de resinas de distintas
especies botánicas y que son modificadas con sus secreciones salivales para transportarlas al interior de la
colmena con el fin de utilizarlo como material de construcción, bloqueo de agujeros y grietas, como
defensa química contra los microorganismos y como embalsamador de intrusos que han muerto en la
colmena y que son demasiado grandes para ser eliminados por ellas (Bankova, 2005; Bankova et al., 2016;
Silva-Carvalho, Baltazar & Almeida-Aguiar, 2015)).

La actividad biológica de los propóleos se debe a su composición química, la cual depende de la

vegetación de donde las abejas recolectan la resina, la ubicación geográfica del apiario, el clima y la época
de recolección. Diferentes estudios demuestran que contienen en promedio 55% de resinas y bálsamos, de
30% a 40% de cera de abeja, de 5% a 10% de aceites esenciales o volátiles, 5% de polen y de otros materiales
orgánicos y minerales (Peña, 2008; Sforcin & Bankova, 2011).

Los propóleos colectados en Europa, Norte de América y Norte de Asia tienen su origen en los
álamos y abedules, encontrando flavonoides como pinocembrina, pinobanksina, crisina, galangina,
acacetina y apigenina como su principal componente. En Inglaterra, Irlanda y China se muestra una
composición muy similar a la observada en el continente europeo, con la diferencia de la presencia del
éster fenetílico del ácido caféico (CAPE, por sus siglas en inglés), flavonoides (3-O-[(S)-2-metilbutiroil])
pinobanksina y 6-cinamilcrisina (Bankova, de Castro & Marcucci, 2000). Las zonas tropicales, como Brasil,
Venezuela, Uruguay, México y Cuba, se caracterizan por poseer una alta biodiversidad botánica, pero no
presentan álamos y abedules, ya que estos árboles no son especies nativas de estos países y, por tanto, las
abejas tienen que buscar otras fuentes de exudados y resinas para la elaboración de propóleos.

La fracción resinosa del propóleo está integrada por compuestos fenólicos y flavonoides que son
muy importantes a nivel terapéutico (Sosa-López, Cabrera & Álvarez, 2016) y que presentan un efecto
sinérgico que es esencial para las actividades biológicas benéficas tanto en humanos como en animales:
antibacteriana, antifúngica, antiviral, antioxidante, inmunomoduladora, entre otras (Fischer et al., 2007;
Graça, Nunes, Dandle, Cavaco & Antunes, 2014; Soto-Vásquez, 2015).

Los flavonoides son compuestos conformados por dos anillos fenilo, A y B, unidos a través de un
anillo C de pirano con grupos funcionales adicionales, lo que genera diferentes tipos de flavonoides, como
las chalconas, flavanonas, flavonas, flavonoles, proantocianidinas, antocianidinas, flavandioles,
isoflavonas y auronas, compuestos que le dan las características antioxidantes, antimicrobianas,
cicatrizantes, antiinflamatorias (Cheng, Han, Wu & Lou, 2014; Falcone, Ruis & Casati,2012; Limón et al.,
2010; Panché, Diwan & Chandra, 2016), antiparasitarias, citotóxicas (Peñarrieta, Tejeda, Mollinedo, Vila &
Bravo, 2014) o insecticidas (Morgado et al., 2014).

Por otro lado, se estima que existen más de 300 compuestos químicos que se han detectado en los
propóleos de diversos orígenes de la República Mexicana y que el contenido de fenoles y flavonoides es un
parámetro importante que determina la calidad de su actividad biológica; por ello, las normas de calidad
nacionales e internacionales establecen valores mínimos de aceptación, cuanto mayor sea el porcentaje de
estos compuestos, mejor será la calidad del producto (Hernández-Zarate et al., 2017; Lotti et al., 2010).

La evaluación de la actividad antioxidante de los propóleos es importante (Silva-Carvalho, Baltazar

& Almeida-Aguiar, 2015) por ser de origen natural para la prevención y tratamiento de diversas
enfermedades de origen oxidativo (Farré, Frasquet & Sánchez, 2004) como ateroesclerosis (Fang et al., 2013),
cáncer (Hernández et al., 2007), diabetes mellitus (Rivera-Yáñez et al., 2017), hipertensión arterial y daño

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renal (Teles et al., 2015), enfermedades hepáticas (Elejalde, 2001), por su capacidad de inhibir radicales libres
y por quelación de iones metálicos (Geckil, Ates, Durmaz, Erdogan & Yilmaz, 2005).

Zavaleta, Muñoz, Blanco, Alvarado-Ortiz & Loja (2005) reportan que la actividad antioxidante no
siempre está en relación con la concentración de polifenoles, sino a la posición del(los) grupo(s) hidroxilo
en los anillos A y B y las características estructurales son relevantes (Limón et al., 2010; Quiñones, Miguel &
Aleixandre, 2012; Vargas-Sánchez et al., 2014b) y, en menor medida, por los ácidos grasos insaturados
provenientes de la abeja. Estudios realizados por Quiñones et al. (2012) y Vargas-Sánchez et al. (2014a) han
demostrado que los flavonoides catequina o quercetina poseen una mayor capacidad para neutralizar
radicales libres y evitan la formación de las especies reactivas de oxígeno (ROS, por sus siglas en inglés) por
el grupo fenólico presente en su estructura.

La actividad antimicrobiana es una de las propiedades fundamentales de los propóleos, su acción

bacteriostática y bactericida está basada en la inhibición de ácidos nucleicos y degradación de la
membrana citoplasmática, y principalmente se le atribuye a flavonoides como pinocembrina, quercetina
naringenina, acacetina, apigenina, crisina, galangina, kaempferol y pinobanskina (Vargas-Sánchez et al.,
2014b), así como alteración en los canales iónicos a consecuencia de reacciones de fosforilación y
desfosforilación, disminuyendo la inhibición de la motilidad bacteriana, factor importante en la virulencia,
y que ha sido demostrado por Farnesi, Aquino-Ferreira, De Jong, Bastos & Soares (2009).

En México se han realizado estudios del efecto antifúngico contra cepas de Candida albicans,
indicando que el ácido cafeico, flavonoides y ésteres fenólicos son los principales responsables de esta
actividad biológica, provocando cambios en la morfología del hongo (Londoño et al., 2010; Quintero-Mora
et al., 2008).

Tolosa & Cañizares (2002) obtuvieron y caracterizaron extractos etanólicos de propóleos de

diferentes localidades de Campeche, evaluando su acción antimicrobiana sobre S. aureus, S. typhi, P.
aeruginosa y S. pyogenes. La especie bacteriana más sensible fue P. aeruginosa con una concentración
mínima bactericida promedio de 3.33 mg/mL y para S. typhi de 9.82 mg/mL. Además, identificaron
compuestos como fenoles, triterpenos, taninos, alcaloides, flavonoides, lactonas, saponinas y aminas.

En 1989, la Organización Mundial de la Salud (OMS) realizó un estudio a los productos naturales con
alto contenido de fenoles y flavonoides, como los propóleos, porque contribuyen a reforzar la prevención
y reducir el riesgo de padecer enfermedades metabólicas, cardiovasculares, entre otras (Bedascarrasbure,
2006; Farré et al., 2004).

En México, el apicultor recolecta propóleos y los oferta con fines antimicrobianos, por lo que es
importante realizar el análisis de su composición química para determinar la presencia de compuestos
fenólicos y flavonoides, compuestos relacionados con la calidad y actividad biológica de esta resina, como
lo establecen las normas de calidad. Si la actividad biológica es baja o nula, los propóleos serán de baja
calidad, teniendo así un impacto económico para el apicultor. Actualmente, los propóleos son estudiados
y utilizados en la industria farmacéutica, agrícola, cosmética y alimentaria, principalmente, ya que se
buscan nuevas alternativas para desarrollar tratamientos contra enfermedades infecciosas provocadas por
la multi-resistencia de los microorganismos frente a los antibióticos o antifúngicos convencionales y
encontrar soluciones que ofrezcan alternativas terapéuticas a un bajo costo.

El objetivo del presente estudio fue analizar la composición química de ocho propóleos de cinco
estados de la República Mexicana, para evaluar su actividad antioxidante y también su actividad
antimicrobiana frente a cepas de referencia de Staphylococcus aureus, Escherichia coli y Candida albicans,

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para fundamentar su utilización como una alternativa en la prevención o el tratamiento de enfermedades

infecciosas y su posible uso en diferentes enfermedades metabólicas.

Materiales y Métodos
Recolección de propóleos

La recolección de los propóleos en greña se efectuó por los apicultores en apiarios de los municipios de
Cuautitlán Izcalli, Estado de México (19° 41’ norte, 99° 11' oeste, 2260 m s.n.m.) (abril, 2013); El Oro, Estado
de México (19° 43' norte, 99° 58' oeste, 3200 m s.n.m.) (septiembre, 2013); Villa del Carbón, Estado de México
(19° 54' norte, 99° 39' oeste, 2600 m s.n.m.) (septiembre, 2012); Tlalpujahua, Michoacán (19° 18’ norte, 100°
08’ oeste, 2500 m s.n.m.) (mayo, 2013); San José Iturbide, Guanajuato (21° 07’ norte, 100° 32’ oeste, 2100 m
s.n.m.) (abril, 2013); Tianguismanalco, Puebla (19° 04’ norte, 98° 35’ oeste, 2220 m s.n.m.) (noviembre, 2010
y noviembre, 2012); y Tlacotalpan, Veracruz (18° 36’ norte, 95° 39’ oeste, y 1000 m s.n.m.) (noviembre, 2012).
Después de la recolección, se mantuvieron protegidos de la luz y en refrigeración (4 °C) hasta su utilización.

Caracterización del propóleo en greña

Las pruebas realizadas en el presente trabajo se realizaron con base a los parámetros establecidos en la
Norma Oficial Mexicana: Propóleos, producción y especificaciones para su procesamiento: NOM-003-
SAG/GAN-2017 (Diario Oficial de la Federación [DOF], 2017); a excepción del estudio cromatográfico.

Existen otras normas de calidad a nivel mundial que evalúan parámetros de calidad, que pueden
aplicarse a cualquier muestra de propóleo sin importar su origen vegetal y el contenido de metabolitos
secundarios de las plantas; estos incluyen el contenido de ceras, contenido de agua, impurezas mecánicas,
contenido de cenizas, punto de fusión o resinas solubles en etanol (Bankova et al., 2016; Rodríguez, 2015).
El contenido de ceras se relaciona con la época de recolección, la manipulación del apicultor, la especie de
abeja propolizadora o el método de obtención (Delgado, Andrade & Ramírez, 2015). La humedad excesiva
puede favorecer el desarrollo de mohos y levaduras; las impurezas mecánicas pueden depreciar la calidad
del producto; la cantidad de cenizas se relaciona con la presencia de contaminantes como metales (plomo,
hierro, cobre) (Palomino, Martínez, García, Gil & Durango, 2010). En este trabajo no se evaluaron estos
parámetros físicos y químicos debido a que los propóleos fueron obtenidos utilizando mallas plásticas
como lo indica la normativa mexicana, por lo que presentan mejor calidad, con pocas impurezas y libres
de contaminantes, pero se considera importante realizar estas evaluaciones para futuras investigaciones.

Especificaciones físicas

Previo a las pruebas organolépticas, las muestras se acondicionaron eliminando las impurezas visibles que
acompañan al propóleo, tales como virutas de madera, restos de abejas, pinturas, vegetales, entre otros. La
evaluación del color se realizó mediante la observación de la muestra empleando un microscopio
estereoscópico y diferenciando las tonalidades predominantes presentes en esta. La descripción del aroma
fue por la detección de dos tipos: olor a madera (resinoso) o a cera (balsámico). El sabor se identificó como
dulce, amargo, picante o insípido. La consistencia se evaluó al tocar la muestra con los dedos,
describiéndola como maleable o rígida. Estas pruebas fueron realizadas por el personal responsable de la
evaluación de los propóleos del Laboratorio de Análisis de Propóleos de la Facultad de Estudios Superiores
Cuautitlán de la Universidad Nacional Autónoma de México (UNAM), con base en la normatividad
mexicana y que cuentan con la preparación suficiente para realizarlos.

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Obtención del Rendimiento de los extractos secos

El rendimiento de los extractos se determinó por diferencia de peso con relación al peso seco inicial del
propóleo (Gutiérrez, 2011). El cálculo del rendimiento de cada propóleo estudiado se realizó empleando la
siguiente ecuación:

Peso del extracto (g)

% de rendimiento = × 100
Peso inicial de la muestra (g)

Especificaciones químicas

Preparación de los extractos etanólicos (EEP)

La preparación de los extractos etanólicos se realizó mediante el siguiente procedimiento: se pesaron 50 g
de la muestra seca en una balanza analítica (marca AND, modelo HR200, Japón), enseguida se agregaron
150 mL de alcohol etílico al 70%, posteriormente, la mezcla se sometió a extracción en un ultrasonicador
(Branson, CPX1800H, Danbury, Estados Unidos), el producto se filtró utilizando un sistema de filtración al
vacío. Finalmente, el filtrado se concentró utilizando un rotovapor (Science MED, SM100-PRO, Finlandia)
posteriormente se dejó la muestra a sequedad utilizando una bomba de vacío y el extracto seco se protegió
de la luz y se refrigeró a 4 °C hasta su utilización (DOF, 2017; Trusheva, Trunkova & Bankova, 2007).

Contenido de compuestos fenólicos

La determinación de los compuestos fenólicos se realizó por el ensayo de Folin-Ciocalteu. Los reactivos y
solventes utilizados fueron obtenidos de Sigma-Aldrich. Las muestras por evaluar se prepararon a una
concentración de 0.05 mg/mL. Para la determinación se construyó una curva de calibración de 6.25 µg/mL
a 200 µg/mL empleando al ácido gálico como estándar (Sigma-Aldrich). El procedimiento fue el siguiente:
a 1 mL de extracto etanólico de propóleo (EEP) se adicionaron 6 mL de agua destilada, 500 µL de reactivo
de Folin-Ciocalteu y se dejó reaccionar durante 5 min; después, se añadieron 1.5 mL de Na2CO3 al 20% y se
aforó con agua destilada a 10 mL. La mezcla se dejó reaccionar por 2 h; al terminar este tiempo, se midieron
las absorbancias de las muestras a una longitud de onda de 760 nm en un espectrofotómetro de absorción
UV-VIS (DLAB, SP-UV1000, China). El contenido de fenoles se expresó en porcentaje (%) (DOF, 2017).

Contenido de flavonoides

El contenido de flavonoides se determinó por el método colorimétrico del cloruro de aluminio (AlCl3). Los
reactivos y solventes utilizados fueron obtenidos de Sigma-Aldrich. Para llevar a cabo esta determinación,
se realizó una curva de calibración de 1 µg/mL a 90 µg/mL utilizando quercetina como estándar de
referencia. El procedimiento fue el siguiente: a 1 mL de la solución del EEP (0.05 mg/mL) se añadió 1 mL de
metanol grado reactivo más 1 mL de AlCl3 al 2% y se dejó reaccionar por 10 min. Al terminar el tiempo de
reacción, se determinó la absorbancia a una longitud de onda de 415 nm en un espectrofotómetro de
absorción UV-VIS (DLAB, SP-UV1000, China). Los resultados se expresaron en porcentaje (%) (DOF, 2017).

Propiedades antioxidantes

Índice de oxidación
El índice de oxidación se determinó de acuerdo con la NOM-003-SAG/GAN-2017 (DOF, 2017). El
procedimiento fue el siguiente: a 20 mg de EEP se añadieron 5 mL de alcohol etílico al 70%, se dejó
reaccionar por 1 h y a continuación se aforó a 100 mL con agua destilada, se agitó y filtró a gravedad

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utilizando papel Whatman No. 4. Se tomó una alícuota de 10 mL de la solución anterior y se aforó a 100 mL
con agua destilada. Nuevamente, se tomó una alícuota de 2 mL de la solución anterior y se añadió 1 mL de
H2SO4 al 20% y se agito por un minuto. Finalmente, se agregó una gota de KMnO4 0.1N, sin tocar las paredes,
y se registró el tiempo (en segundos) que tardó en desaparecer el color violeta del KMnO4.

Capacidad antioxidante (CA50)

La evaluación de la capacidad antioxidante se determinó por la concentración requerida por la muestra

para disminuir la absorbancia del DPPH• al 50% expresada en µg/mL, utilizando el método del radical libre
1,1-difenil-2-picrilhidrazilo (DPPH•).

Las concentraciones por evaluar fueron de 1 µg/mL a 250 µg/mL a partir de una concentración
inicial de 1 mg/mL. Como control negativo se utilizó metanol y como control positivo quercetina a las
mismas condiciones que los EEP. El procedimiento fue el siguiente: se tomaron 250 µL del EEP y se añadió
750 µL de la solución de DPPH• (100 µM). Se protegió de la luz, dejando reaccionar la mezcla durante 30
min; al término de este tiempo, se determinó la absorbancia a 540 nm en un espectrofotómetro de
absorción UV-VIS (DLAB, SP-UV1000, China). Se calculó el porcentaje de reducción mediante la siguiente
fórmula:

9:;<=:>?@A> BCD EFFG•

x 100
9:;<=:>?@A> BC D> ICJ@D> (EFFG• K LLF)

La baja absorbancia de la mezcla de reacción indica alta actividad antioxidante (Barrón-Yánez,

García-Mateos, Soto-Hernández, Colinas-León & Kite, 2011; DOF, 2017).

Cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas (CG-EM)

El análisis cromatográfico de los extractos etanólicos fue realizado en un cromatógrafo de gases (6850)
acoplado a un espectrómetro de masas (modelo 5975C, Agilent Technologies®, Pennsylvania, USA). La
columna capilar fue una HP-5MS (30 m × 0.25 mm) y grosor de película de 0.25 mm (J&C Scientific, Agilent
Technologies®, Pennsylvania, USA). Como gas acarreador se utilizó Helio. El tipo de inyección fue en modo
Split y el volumen de inyección de 1 µL. Las condiciones de separación utilizadas fueron al inicio una
temperatura de 70 °C por 2 min con dos incrementos de rampa. El primero de 20 °C por minuto hasta
alcanzar los 230 °C; el segundo fue de 8 °C por minuto hasta llegar a los 280 °C manteniéndose por 5 min.
El tiempo total de análisis fue 21.25 min. El rango de masa detectado fue de 35 m/z a 750 m/z, la muestra
fue ionizada por impacto electrónico a 70 eV y la temperatura alcanzada por la fuente de ionización fue de
230 °C. La identificación de los compuestos fue llevada a cabo por comparación con la biblioteca de la base
de datos NIST versión 8.0 (Rivera-Yáñez et al., 2017).

Evaluación de la actividad antimicrobiana

La evaluación antimicrobiana se realizó empleando los siguientes microorganismos: Staphylococcus

aureus ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 8739 y Candida albicans ATCC 10231, proporcionados por el
Laboratorio de Bioprospección Microbiológica de la Unidad de Investigación Multidisciplinaria de la
Facultad de Estudios Superiores Cuautitlán, UNAM.

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Preparación de la suspensión de microorganismos

La suspensión de los microorganismos se realizó de la siguiente manera. Se tomó una asada de las colonias
a evaluar y se sumergió en caldo Mueller-Hinton (MH) (Bioxon, Ciudad de México, México) para las
bacterias y caldo Sabouraud (Bioxon, Ciudad de México, México) para la levadura. Las muestras se
incubaron a 37 °C por 24 h para las bacterias y a 37 °C por 48 h para la levadura. Se estandarizó al tubo 0.5
del nefelómetro de MacFarland: (1-2) x 108 UFC/mL utilizando un espectrofotómetro UV-Vis (DLAB, SP-
UV1000) a una longitud de onda de 625 nm con lecturas de absorbancia entre 0.08-0.12 (Barry et al., 2009,;
Londono et al., 2010; Rex et al., 2009).

Microdilución en caldo

La microdilución en caldo se realizó mediante la determinación de la concentración mínima inhibitoria

(CMI), la concentración bactericida mínima (CBM) y la concentración fungicida mínima (CFM) utilizando
la técnica de microdilución en caldo. Para lograr lo anterior, se realizaron diluciones seriadas del EEP de
0.012 mg/mL a 30 mg/mL en caldo MH (Bioxon, Ciudad de México, México). Como testigo positivo se
empleó caldo MH con microorganismo y un testigo negativo con caldo MH sin el microorganismo. Para
detectar la actividad respiratoria del microorganismo, se utilizó una solución al 0.08% de sal de tetrazolio
oxidada (TTC) que genera un pigmento rojo (formazán) en presencia del microorganismo. Este
procedimiento se realizó de la siguiente manera: 50 µL de TCC se añadieron a cada pozo inoculado, se
mezcló utilizando un agitador de placas y se incubó a 37 °C por 30 min. Transcurrido este tiempo, se
observó la formación de un precipitado insoluble de color rojo que representó la CMI. Donde no existió
desarrollo, la solución permaneció de color claro, indicando la CBM o CFM. Para confirmar los resultados,
se determinó si el efecto era bactericida o fungicida, al tomar una muestra del cultivo con un asa y
sembrarla en una placa de agar MH que se mantuvo en incubación durante 37 °C por 24 h para las bacterias
y por 48 h para el caso de la levadura. Se consideró que el crecimiento en la placa era indicativo de un efecto
bacteriostático o fungistático, en tanto que la ausencia del mismo correspondía a un efecto bactericida o
fungicida (Balouiri, Sadiki & Ibnsouda, 2016; Koneman, Allen, Dowell & Sommers, 2006; Quintero-Mora et
al., 2008;).

Análisis estadístico

Los datos obtenidos en las especificaciones químicas se analizaron mediante la prueba estadística de
análisis de varianza (Anova), empleando un nivel de significancia de p < 0.05 utilizando el programa
estadístico GraphPadPrism 7.04.

Resultados
Especificaciones físicas

Las características físicas están relacionadas con la fuente vegetal, el método de recolección y el clima de
la región donde es recolectado. La tabla 1 muestra la vegetación más abundante en los sitios circundantes
a las colmenas de cada localidad de donde se obtuvieron las muestras de propóleos analizadas en este
estudio.

Las muestras recolectadas en los municipios de los estados de México, Guanajuato y Puebla
presentaron un color marrón con tintes verdes y amarillos; las muestras de Michoacán y Veracruz
presentaron un color marrón claro con tintes amarillos y verdosos. Las muestras de Estado de México

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presentaron un olor resinoso y el resto olor balsámico. El sabor de todas las muestras fue amargo. El 62.5%
de las muestras presentó consistencia maleable y el resto rígidas (tabla 1), observando que existen
diferencias en las características de las muestras.

Tabla 1. Vegetación circundante a las colmenas donde se extrajeron las muestras de propóleos
analizadas y las características físicas de cada muestra.

Regiones de Especies de plantas Nombre

Color Aroma Sabor Consistencia
recolección predominantes común

Eucalyptus globulus
Eucalipto
Labill.
Marrón
Cuautitlán Izcalli, Ricinus communis L. Higuerilla
verdoso, tintes Resinoso Amargo Maleable
Estado de México
amarillos
Callistemon citrinus Cepillo o
(Curtis) Skeels escobillón rojo

Pinus sp Pino

Pinus teocote Schltdl. Ocote

El Oro y Villa del

Quercus rugosa Née Encino Marrón con
Carbón, Estado de Balsámico Amargo Maleable
tintes amarillos
México
Fraxinus excelsior L. Fresno

Eucalyptus globulus
Eucalipto
Labill.
Marrón
Tlalpujahua-Senguio, Pinus pseudostrobus
Pino verdoso, tintes Balsámico Amargo Maleable
Michoacán Lindl.
amarillos

Pinus sp Pino Marrón

Tianguismanalco,
verdoso, tintes Balsámico Amargo Rígida
Puebla Quercus rugosa Née Encino amarillos

Opuntia ficus-indica L. Nopal

Acacia farnesiana (L.)

San José Iturbide, Huizache Marrón verdoso,
Willd. Resinoso Amargo Maleable
Guanajuato tintes amarillos
Prosopis glandulosa
Mezquite
Torr.

Schinus molle L. Pirul

Quercus rugosa Née Encino

Fraxinus excelsior L. Fresno

Salix alba L. Sauce Marrón verdoso,

Tlacotalpan, Veracruz Resinoso Amargo Rígida
Populus alba L. Álamo tintes amarillos

Citrus sinensis (L.)

Naranjo
Osbeck

Citrus limonum Risso Limón

Fuente: Elaboración propia (INAFED, 2015; INEGI, 2009).

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En la figura 1 se muestran las tonalidades de los propóleos en greña a simple vista (1A a 8A) y las
tonalidades más definidas de cada muestra, al utilizar un microscopio estereoscópico (1B a 8B). La
extracción del propóleo en greña con etanol al 70% se realizó en las condiciones establecidas por la norma
de calidad, para evitar alteraciones en los metabolitos secundarios (DOF, 2017). Las tonalidades de las
muestras van del ámbar claro al café como se muestran en la figura 1 (1C a 8C).

Figura 1. Aspecto de los propóleos obtenidos de las diferentes regiones de la República mexicana. A: Propóleo en greña; B: Vista microscópica
(0.8X); C: Extracto etanólico. (1): Cuautitlán Izcalli, Estado de México; (2) Villa del Carbón, Estado de México; (3) El Oro, Estado de México; (4)
Tlalpujahua-Senguio, Michoacán; (5) Tianguismanalco 2010, Puebla; (6) Tianguismanalco 2012, Puebla; (7) San José Iturbide, Guanajuato; (8)
Tlacotalpan, Veracruz.
Fuente: Elaboración propia.

Especificaciones químicas

En la tabla 2 se muestran los resultados del análisis químico de los ocho propóleos estudiados y el
rendimiento de los extractos. Se pueden observar dos grupos, uno formado por las muestras del Estado de
México (Cuautitlán Izcalli) y Michoacán, que presentaron niveles altos de fenoles y flavonoides, y el otro
constituido por las muestras del Estado de México (Villa del Carbón y El Oro), Guanajuato, Veracruz y
Puebla, con niveles más bajos.

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Tabla 2. Especificaciones químicas de ocho propóleos de la República Mexicana aplicando la Norma

Oficial Mexicana NOM-003-SAG/GAN-2017.

Capacidad
Rendimiento Fenoles Flavonoides Índice de
Muestra antioxidante
(%) (%) (%) oxidación (s)
(μg/mL)
Cuautitlán
50.9 19.1 ± 2.90a 4.04 ± 2.7a 168 ± 1.8a 86.6 ± 0.003a
Izcalli, Estado de México
Villa del Carbón, Estado de
30.9 6.9 ± 0.001b 0.67 ± 1.8b 283 ± 0.0016b 52.6 ± 0.01b
México
El Oro, Estado de México 38.5 6.4 ± 0.003b 1.94 ± 2.4c 70 ± 0.0013c 48.0 ± 0.015b
Tlalpujahua-Senguio, 18.3 ±
43.2 2.87 ± 2.6d 377 ± 0.0029d 26.0 ± 0.02c
Michoacán 0.003a
Tianguismanalco
39.4 5.0 ± 0.001c 0.34 ± 0.5e 2975 ± 2.4e 189.3 ± 0.24d
2010, Puebla
Tianguismanalco
34.2 4.0 ± 0.002c 0.29 ± 0.4e 3347 ± 1.4f 277.9 ± 1.04e
2012, Puebla
San José
25.5 5.2 ± 0.001c 0.99 ± 0.7b 1479 ± 0.0002g 83.5 ± 0.03a
Iturbide, Guanajuato
1.2 ±
Tlacotalpan, Veracruz 39.4 0.51 ± 0.5b 2894 ± 1.24e 950.4 ± 1.09f
0.0002d
Parámetro establecido en No establecido en Mínimo Mínimo Mínimo Hasta
la NOM la NOM 5% 0.5% 22 s 100 μg/mL

Fuente: Elaboración propia. * Cada valor es la media ± desviación estándar, n = 3.

Letras diferentes indican diferencias significativas (p < 0.05).

La cantidad de compuestos fenólicos de las muestras de Puebla, 2012, y Veracruz no cumplen las
especificaciones de la norma de calidad. Respecto a la cantidad de flavonoides, las dos muestras de Puebla
no presentan una cantidad superior a 0.5%, por lo que no cumplen con esta norma. Estos resultados difieren
con lo reportado por Lozina, Peichoto, Acosta & Granero (2010), quienes mencionan que las tonalidades de
los extractos etanólicos están relacionadas con el contenido de los compuestos fenólicos y flavonoides,
porque las muestras de Puebla presentan un color ámbar y la muestra de Veracruz, un color amarillo.

Por otro lado, la cantidad de estos metabolitos y la capacidad antioxidante del propóleo están
relacionadas. Una determinación rápida de esta actividad es el índice de oxidación para detectar la
presencia de compuestos de naturaleza fenólica, o con grupos funcionales oxidables (Delgado et al., 2015)
al utilizar permanganato de potasio (KMnO4) como agente oxidante de color violeta intenso, que se vuelve
incoloro al reducirse el catión Mn7+ en una solución ácida (Graham, 2004; Palomino et al., 2010; Skoog,
Holler & Crouch, 2005). Los resultados muestran que ninguna muestra cumple con lo establecido en la
norma de calidad mexicana (mínimo 22 s), al obtener tiempos con rangos de 70 s a 1479 s, observando
diferencias significativas entre los propóleos.

Para la capacidad antioxidante (CA50) se emplea el radical DPPH• monitoreando su reducción por
un antioxidante con la disminución en la absorbancia y cambio de coloración de morado a amarillo. Los
resultados de la capacidad antioxidante de los diferentes propóleos estudiados indican que las muestras del
Estado de México, Michoacán y Guanajuato cumplen los requisitos de la norma de calidad con valores por
debajo de los 100 µg/mL, lo que indica la presencia de compuestos antioxidantes.

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Análisis por cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas

Los resultados del análisis de cada muestra de propóleo mediante cromatografía de gases acoplada a
espectrometría de masas (CG-EM) se muestran en las tablas 3 a 9, donde se indican aquellos compuestos
que tuvieron una identificación certera (> 90%) con relación a la base de datos del equipo. Se detectaron
ácidos grasos, alcoholes, cetonas, flavonoides, terpenos e hidrocarburos en diferente abundancia
porcentual. En las figuras 2 a 8 se muestran los cromatogramas obtenidos para cada muestra analizada.

Tabla 3. Constituyentes del propóleo de Cuautitlán Izcalli, Estado de México caracterizado por CG-
EM

TR %
Compuesto propuesto Clasificación
Pico Actividad biológica Referencia
por la base de datos química
(min) Total
Fragancias en cosméticos,
1 10.259 0.45 Palmitato de etilo Ácido graso NCBI (2018)
saborizante
Éster etílico del ácido Cebador de feromonas en Leoncini et al.,
2 11.025 0.47 Ácido graso
oleico las abejas 2004
López, Ming &
Antimicrobiana,
Neil, 2002;
3 12.467 58.48 Pinocembrina Flavonoide antioxidante,
Rasul et al.
antiparasitaria.
2013
Antimicrobiana, During &
4 13.162 9.55 Tectocrisina Flavonoide antioxidante, Larondelle,
antiinflamatoria 2013
1-(3-aminopropil) Anticancerígena, analgésica, García et al.
5 13.298 2.6 Cetona
azaciclotridecan-2-ona plaguicida 2007

Fuente: Elaboración propia.

Tabla 4. Constituyentes del propóleo de Villa del Carbón, Estado de México, caracterizado por CG-
EM.

Compuesto
TR %
Pico propuesto por la Clasificación química Actividad biológica Referencia
(min) Total
base de datos
Jiang et al. 2011;
1 4.71 1.97 Borneol Terpeno Antimicrobiana Santoyo et al.
2005
Sanhueza, Nieto
Promotor del factor
2 10.948 0.84 Ácido vaccénico Ácido graso & Valenzuela,
de crecimiento
2002
Antimicrobiana, López, Ming &
3 12.456 3.78 Pinocembrina Flavonoide antioxidante, Neil, 2002;
antiparasitaria Rasul et al. 2013

Zhang, Xiong &

4 16.361 1.48 Taraxasterol Terpeno Antiinflamatoria
Liu, 2012

Fuente: Elaboración propia.

Tabla 5. Constituyentes del propóleo de El Oro, Estado de México, caracterizado por CG-EM.

TR %
Compuesto propuesto
Pico Clasificación química Actividad biológica Referencia
por la base de datos
(min) Total

1 4.265 3.18 Alcohol feniletílico Alcohol Antimicrobiana NCBI (2018)

López-Mejía,
Antimicrobiana, López-Malo
2 6.087 3 2-Metoxi-4-vinilfenol Fenol
antioxidante & Palou,
2014

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Cadideno: 7-epi-α-
3 8.206 0.25 Terpeno Antimicrobiano NCBI (2018)
cadineno

Cadideno: cadina-3,9-
4 8.449 0.36 Terpeno Antimicrobiano NCBI (2018)
dieno

(1E) -1-Etiliden-7a-
5 8.592 1.07 Hidrocarburo Lipogénesis NCBI (2018)
metilperhidroindeno
6 10.159 1.89 Ácido palmítico Ácido graso Lipogénesis NCBI (2018)

Producción de lípidos y
7 10.408 0.35 Hexadecanal Ácido graso NCBI (2018)
ácidos grasos

8 10.954 0.58 Ácido oleico Ácido graso Cardioprotector NCBI (2018)

Metil éster del ácido
9 10.978 0.48 7,10,13- Ácido graso No referido No referido
hexadecatrienoico
10 11.031 0.52 Ácido esteárico Ácido graso Tensoactivo NCBI (2018)

11 11.263 0.4 1,19-Eicosadieno Hidrocarburo Antibacteriano NIST

Cho et al.
12 12.111 10.23 Cardamonina Chalcona Antimicrobiana
2009

Inhibidor de la Stasiuk,
acetilcolinesterasa; Bartosiewicz
13 12.283 0.7 3-Pentadecilfenol Fenol
tratamiento para el
Alzheimer

& Kozubek,
2008

López, Ming
Antimicrobiana,
& Neíl, 2002;
14 12.45 22.67 Pinocembrina Flavonoide antioxidante,
antiparasitaria
Rasul et al.
2013
Antimicrobiana, During &
15 12.8 11.95 Tectocrisina Flavonoide antioxidante, Larondelle,
antiinflamatoria 2013

Antimicrobiana,
Shimizu et al.
16 13.37 2.23 Sakuranetina Flavonoide antioxidante,
2012
antiinflamatoria

Fuente: Elaboración propia.

Tabla 6. Constituyentes del propóleo de Tlalpujahua-Senguio, Michoacán, caracterizado por CG-

EM.

TR %
Compuesto propuesto por la Actividad
Pico Clasificación química Referencia
base de datos biológica
(min) Total

Ácido dodecanóico (ácido Antimicrobiana, Mora, 2003; Ruzin &

1 7.903 0.45 Ácido graso
laúrico) antiviral Novick, 2000

(1E) -1-Etiliden-7a-
2 8.586 0.47 Hidrocarburo Lipogénesis PubChem, 2018
metiloctahidro-1H-indeno

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Fragancias en
3 10.265 1.68 Palmitato de etilo Ácido graso cosméticos, NIST, 2011
saborizante
Mulyaningsih, Sporer,
Zimmermann,
4 10.722 15.75 Aromadendreno Terpeno Antimicrobiana
Reichling & Wink,
2010
Barbosa & Mandarim
de-Lacerda, 2010;
Antimicrobiana,
Dilika, Bremner &
modulador
5 10.96 0.95 Ácido oleico Ácido graso Meyer, 2000;
hormonal,
Naughton, Hanson,
antioxidante
Mathai & McAinch,
2018
Cebador de
6 11.037 5.37 Éster etílico del ácido oleico Ácido graso feromonas en las Leoncini et al., 2004
abejas

Gaviria, Quijano, Pino

7 11.957 27.06 Esclareno Terpeno Antibacteriana
& Madriñán, 2011

8 12.117 10.53 Cardamonina Chalcona Antimicrobiana Cho et al. 2009

1,1,7-
Antagonista de
9 12.159 0.72 Trimetildecahidroespiro[ciclo- Terpeno NIST, 2011
calcio
propa[e]azuleno-4,2'-oxirano]
Antimicrobiana, López, Ming & Neil,
10 12.45 7.61 Pinocembrina Flavonoide antioxidante, 2002; Rasul et al.
antiparasitaria 2013

11 12.628 0.73 Eicosano Hidrocarburo No referido No referido

12 14.847 0.36 3,5,7,4'-Tetrametoxiquercetina Flavonoide No referido No referido

Antimicrobiana,
antiinflamatoria,
13 16.023 4.15 Lupenona Terpeno antioxidante, Ahn & Oh, 2013
antipirética,
antiparasitaria

Fuente: Elaboración propia.

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Tabla 7. Constituyentes del propóleo de Tianguismanalco 2012, Puebla, caracterizado por CG-EM.

Compuesto
TR % Clasificación Actividad
Pico propuesto por Referencia
(min) Total química biológica
la base de datos
Ácido Mora, 2003;
Antimicrobiana,
1 7.915 1.25 dodecanoico Ácido graso Ruzin & Novick,
antiviral
(ácido laúrico) 2000

Fragancias en
Palmitato de
2 10.259 0.62 Ácido graso cosméticos, NIST, 2011
etilo
saborizante

Kuppuswamy,
Antimicrobiana; Jonnalagadda &
3 10.687 0.93 11-Nonadecanol Alcohol
citotóxica Arockiasamy,
2013
Promotor del
Sanhueza et al.,
4 10.948 4.97 Ácido vaccénico Ácido graso factor de
2002
crecimiento
Barbosa &
Antimicrobiana,
Mandarim de-
modulador de las
Lacerda, 2010;
5 11.025 1.40 Ácido oleico Ácido graso respuestas
Dilika et al.
hormonales,
2000; Naughton
antioxidante
et al. 2018
Giriwono et al.
Antibacteriana, 2013; Inoue et
6 14.58 17.85 Geranilgeraniol Terpeno antiinflamatoria, al. 2005;
antiparasitaria. Menna-Barreto
et al. 2008
Ahn & Oh, 2013;
Antimicrobiana,
Polanco-
antiinflamatoria,
Hernández et al.
7 16.011 15.70 Lupenona Terpeno antioxidante,
2013; Talla et al.
antipirética,
2013
antiparasitaria

Antioxidante,
analgésica, Almeida et al.
8 16.213 12.67 α-Amirina Terpeno
hiperglucemiante e 2012
hipolipemiante
Antimicrobiana, Gallo &
antiparasitaria, Sarachine, 2009;
9 16.533 16.31 Lupeol Terpeno
antiinflamatoria, Santiago &
antioxidante Mayor, 2014

Fuente: Elaboración propia.

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Tabla 8. Constituyentes del propóleo de San José Iturbide, Guanajuato, caracterizado por CG-EM.

Compuesto
TR % Clasificación Actividad
Pico propuesto por la Referencia
(min) Total química biológica
base de datos
Mora, 2003;
Antimicrobiana,
1 7.897 4.4 Ácido laúrico Ácido graso Ruzin & Novick,
antiviral
2000

2 10.147 1.15 Ácido palmítico Ácido graso Lipogénesis NCBI (2018)

Mulyaningsih et
3 10.319 0.33 Aromadendreno Terpeno Antimicrobiana
al., 2010
Pino, Meléndez &
Stashenko, 2009;
4 12.432 5.02 Selineno Terpeno Antimicrobiana
Sitarek et al.
2017

Fuente: Elaboración propia.

Tabla 9. Constituyentes del propóleo de Tlacotalpan, Veracruz, caracterizado por CG-EM.

Pico TR % Compuesto
Clasificación Actividad
(min) Total propuesto por la Referencia
química biológica
base de datos
Santoyo et
al. (2005);
1 5.132 0.21 Verbenona Terpeno Antimicrobiana
Jiang et al.
(2011)
Antitumoral,
Fenol y Flores et al.
2 11.809 0.46 Ferruginol antibacteriana,
terpeno (2001)
gastroprotector
3 13.293 1.42 Escualeno Terpeno Antibacteriana NIST, 2011
Muhammad
4 16.231 9.76 12-Oleaneno Terpeno Antibacteriana
et al. (2000)
4,8a-Dimetil-6-(1-
metiletenil)-
Hidrocarburo
5 16.385 5.19 3,5,6,7,8,8a- No referido No referido
hexahidro-2(1H)-
naftalenona
Biosíntesis de
estanoles y Machado et
6 16.504 5.98 Cicloartenol Terpeno
esteroles, al. (2016)
antiinflamatoria

Fuente: Elaboración propia.

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Figura 2. Cromatograma de gases correspondiente al propóleo de Cuautitlán Izcalli, Estado de México.

Fuente: Rodríguez (2015).

Figura 3. Cromatograma de gases correspondiente del propóleo de Villa del Carbón, Estado de México.
Fuente: Rodríguez (2015).

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Figura 4. Cromatograma correspondiente del propóleo de El Oro, Estado de México.

Fuente: Rodríguez (2015).

Figura 5. Cromatograma de gases correspondiente al propóleo de Tlalpujahua-Senguio, Michoacán.

Fuente: Rodríguez (2015).

Figura 6. Cromatograma de gases correspondiente al propóleo de Tianguismanalco 2012, Puebla.

Fuente: Rodríguez (2015).

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Figura 7. Cromatograma de gases correspondiente al propóleo de San José Iturbide, Guanajuato.

Fuente: Rodríguez (2015).

Figura 8. Cromatograma de gases correspondiente al propóleo de Tlacotalpan, Veracruz.

Fuente: Rodríguez, 2015.

Evaluación de la actividad antimicrobiana

Los resultados de la evaluación de la actividad antimicrobiana se presentan en la tabla 10. En la figura 9 se

ejemplifica la evaluación de la concentración mínima inhibitoria (CMI) y concentración mínima
bactericida (CMB) para el caso de S. aureus frente al extracto de propóleo de Michoacán y de Cuautitlán
Izcalli, Estado de México. En los pozos donde hay microorganismos, se observa disminución en el color y
la formación de un botón rojo en el fondo de la concavidad representando la CMI y, donde no hay
desarrollo, la solución permanece de color amarillo y representa la CMB. En la figura 10 se muestra la
confirmación del resultado bacteriostático y bactericida.

Se observó que todas las muestras presentan actividad antimicrobiana frente a los tres
microorganismos evaluados. Las muestras de Puebla y Veracruz presentan una baja actividad
antimicrobiana, al requerir concentraciones elevadas del extracto para actuar sobre los microorganismos.

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Tabla 10. Actividad antimicrobiana de los propóleos frente a cepas de referencia de S. aureus, E. coli
y C. albicans.

S. aureus E. coli C. albicans

ATCC 6538 ATCC 8739 ATCC 10231
Muestra
CMI CMB CMI CMB CMI CMF
(mg/mL) (mg/mL) (mg/mL) (mg/mL) (mg/mL) (mg/mL)
Cuautitlán Izcalli,
0.19 0.37 3.75 15.00 0.75 1.50
Estado de México
Villa del Carbón,
0.46 0.93 7.50 30.00 24.00 > 24.00
Estado de México
El Oro, Estado de
0.93 1.87 7.50 30.00 1.80 7.50
México
Tlalpujahua-
Senguio, 0.37 0.75 7.50 30.00 0.75 3.00
Michoacán
Tianguismanalco
30.00 > 30.00 15.00 30.00 7.50 30.00
2010, Puebla
Tianguismanalco
15.00 30.00 15.00 >30.00 3.75 15.00
2012, Puebla
San José Iturbide,
0.46 0.93 3.75 15.00 12.00 24.00
Guanajuato
Tlacotalpan,
30.00 > 30 15.00 30.00 15.00 30.00
Veracruz

Fuente: Elaboración propia.

Figura 9. Determinación de la Concentración Mínima Inhibitoria (rojo) y Concentración Mínima Bactericida (negro) de Staphylococcus aureus
ATCC 6538 frente al propóleo de Tlalpujahua-Senguio (Michoacán) y de Cuautitlán Izcalli, Estado de México, por microtécnica de dilución en
caldo.
Fuente: Elaboración propia.

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Figura 10. Confirmación de la Concentración Mínima Inhibitoria y Concentración Mínima Bactericida de Staphylococcus aureus ATCC 6538
frente al propóleo de Tlalpujahua-Senguio (Michoacán) y de Cuautitlán Izcalli, Estado de México.
Fuente: Elaboración propia.

Discusión
La gran diversidad vegetal y climática de México son factores que han propiciado la producción de
propóleos con una gran variedad de colores, aromas y sabores, características que en conjunto se
denominan propiedades organolépticas (Ramírez-Arriaga, Martínez-Bernal, Ramírez & Martínez-
Hernández, 2016).

Estudios realizados en muestras de propóleos de los diferentes estados de la República Mexicana

muestran una gran variación en colores, texturas, grados de humedad, dependientes del lugar de origen,
la vegetación y el tipo de clima (Delgado et al., 2015; Hernández et al., 2016).

Los propóleos en greña estudiados presentaron tonalidades en marrón verdoso con tintes amarillos,
parámetro que no puede estandarizarse por ser dependiente del origen vegetal. El aroma en su mayoría fue
balsámico, que se relaciona con compuestos aromáticos y volátiles de mezclas complejas entre alcoholes,
aldehídos, cetonas y ésteres o terpenos, estos últimos presentes en especies de la familia Pinaceae
(Salamanca, Correa & Principal, 2007) localizados alrededor de los apiarios de El Oro y Villa del Carbón en
el Estado de México, de Michoacán y de Puebla.

La principal fuente botánica de Cuautitlán Izcalli, Estado de México, es de árboles de eucalipto

(Eucalyptus globulus L.), higuerilla (Ricinus communis L.) y cepillo (Callistemon citrinus), como lo reporta
Londoño et al. (2010), y le proporcionan aroma resinoso al propóleo.

La variación en la vegetación presente en cada localidad hace que sea importante utilizar métodos
palinológicos con el fin de determinar qué flora fue visitada por las abejas para recolectar la materia prima
(resina, cera y polen) para formar los propóleos (Ramírez-Arriaga et al., 2016; Vargas-Sánchez, Peñalba-
Garmendia, Sánchez-Escalante, Torrescano-Urrutia & Sánchez-Escalante, 2016).

Por otro lado, el índice de oxidación en los propóleos es influenciado por el contenido de
compuestos fenólicos (Bedascarrasbure, 2006). Los resultados indican que ninguna muestra cumple con
lo establecido en la norma de calidad mexicana (mínimo 22 s), considerando que es una prueba visual, la

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cual presenta inconvenientes básicos como la distinción de colores por el ojo humano y, como factor
añadido, el subjetivismo. Es por ello que se realiza la determinación de la actividad antioxidante por
técnicas espectrofotométricas (Skoog et al., 2015). Al comparar los resultados de la cantidad de flavonoides
de este estudio (0.29% a 2.87%) con los reportados por Hernández-Zarate et al. (2017), en propóleos de
Guanajuato (1.32% a 37%) existe diferencia en la cantidad de flavonoides que se atribuye al tipo de
vegetación de la cual las abejas recolectan las resinas, principalmente. Kumazawa, Hamasaka & Nakamaya
(2004) indican la diferencia observada en la composición química de propóleos de diferentes orígenes
geográficos y lo difícil que resulta esto al evaluar la calidad de un propóleo.

Por otro lado, es de consideración la estructura química de los flavonoides para una mayor
capacidad antioxidante, como son: la presencia en el anillo B de la estructura catecol u orto-dihidroxi; la
presencia de un doble enlace en la posición 2 y 3 del anillo C, y la presencia de un grupo hidroxilo en las
posiciones 3 y 5 del anillo A (Limón et al., 2010; Quiñones et al., 2012; Vargas-Sánchez et al., 2014b).

Los propóleos de Cuautitlán Izcalli, Estado de México y de Michoacán presentaron el mayor

porcentaje de fenoles y flavonoides. En las tres muestras del Estado de México y de Michoacán se detectó
la presencia de pinocembrina (5,7-dihidroxiflavanona), que es uno de los principales flavonoides aislados
de plantas de zonas templadas como Pinus sp., Eucalyptus sp. (Rasul et al., 2013) y árboles de la especie de
Populus (álamos) reportados por primera vez por Lugo-Sepúlveda, Martínez-Robinson, Morales, De la Rosa
& Noriega (2009). Este flavonoide se caracteriza por presentar dos grupos hidroxilo libres en posiciones 5 y
7 (anillo A), confiriéndole la actividad antioxidante.

En este sentido, Lugo-Sepúlveda et al. (2009) indican que la Yerba blanca (Encelia farinosa) es la
principal fuente botánica de los propóleos de Sonora, logrando identificar cuatro flavonoides principales:
pinocembrina, xantomicrol, crisina y galangina en la planta y en los propóleos de Caborca, Sonora, con
gran potencial antioxidante.

Los principales compuestos detectados en las muestras de Puebla fueron triterpenos pentacíclicos
como el lupeol, la lupenona y la β-amirina, provenientes de las resinas del tronco de los pinos (Ormeño &
Fernández, 2012) y que han sido identificados en propóleos de Brasil vinculados a actividades
antiinflamatorias, anticancerígenas y antivirales (Bracho, Rodríguez & Llanes, 2009), pero que mostraron
baja actividad antioxidante.

Otra propiedad de los propóleos es su actividad antimicrobiana (Vargas-Sánchez et al., 2014a). Los
resultados de los propóleos del Estado de México indican mayor sensibilidad de S. aureus, debido a que las
resinas colectadas por las abejas provienen de las especies del género Eucalyptus (Londono et al., 2010),
reconocido por su actividad antibacteriana (Yáñez & Cuadro, 2012)

Velázquez et al. (2007) evaluaron la actividad antimicrobiana de propóleos del desierto de Sonora.
No se presentó efecto sobre E. coli y P. aeruginosa, únicamente sobre S. aureus, que se relaciona con la
presencia de pinocembrina, acacetina, éster fenetílico del ácido cafeíco (caffeic acid phenethyl ester
[CAPE]), crisina, galangina, pinobanksina y naringenina.

En otro estudio realizado por Vargas-Sánchez et al. (2014a) sobre la composición química de un
extracto de propóleo comercial, detectaron compuestos como el ácido cinámico, crisina, quercetina,
pinocembrina y kaempferol con potencial antimicrobiano y antioxidante para la aplicación del propóleo
en la prevención del deterioro oxidativo de alimentos.

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Los resultados del presente trabajo confirman la baja sensibilidad de las especies Gram negativas
comparadas con las Gram positivas. La bacteria E. coli requiere concentraciones más elevadas de propóleo,
como lo mencionan Probst, Sforcin, Rall, Fernandes & Fernandes (2011), ya que la estructura de la pared de
las bacterias Gram negativas presenta una membrana externa compleja con dos bicapas lipídicas que
actúan como barreras físicas entre los microorganismos y el medio ambiente, lo que evita las interacciones
de la célula bacteriana con sustancias dañinas, razón por la que se requieren concentraciones mayores para
su inhibición. Las bacterias Gram positivas presentan solo una membrana relativamente permeable, lo que
las hace más susceptibles a las interacciones con el medio ambiente.

Los flavonoides detectados en los propóleos estudiados fueron la pinocembrina (flavanona) y la

tectocrisina (flavona), y un precursor de flavonoide, la cardomonina (chalcona). Xie, Yang, Tang, Chen &
Ren (2015) investigaron que las flavononas requieren la presencia de sustituyentes hidroxilo en la posición
2’,4’ o 2’,6’ en el anillo B, en la posición 5,7 del anillo A o un grupo alifático de cadena larga en la posición 6
u 8; las flavonas requieren de una cadena orto-alquilamino en C-7; las chalconas de sustituyentes hidroxilo
en 2’ o 4’ del anillo A para ser lipofílico, para presentar actividad antioxidante.

Los mecanismos antimicrobianos de los flavonoides que han sido propuestos son inhibición de la
motilidad, inhibición de la síntesis de ácidos nucleicos, inhibición de las funciones de la membrana
citoplasmática, inhibición del metabolismo energético, inhibición de la unión y formación de biopelículas,
inhibición de las porinas y atenuación de la patogenecidad (Akca et al., 2016; Xie et al., 2015).

La actividad de los propóleos contra C. albicans mostraron un efecto fungistático a bajas

concentraciones en el propóleo de Cuautitlán Izcalli, Estado de México (1.5 mg/mL), en comparación con
Quintero et al. (2008) donde reportan la actividad antifúngica de ocho extractos etanólicos de propóleos
provenientes de diferentes regiones de México frente a cepas de C. albicans, de referencia (ATCC 10231) y
36 cepas de origen clínico, determinando la concentración mínima inhibitoria (CMI) por el método de
dilución en agar, realización de curvas de crecimiento en caldo glucosado de Sabouraud solo y con
diferentes concentraciones de los extractos etanólicos de propóleos. Los resultados mostraron que los
propóleos de Cuautitlán Izcalli y Amatepec (Estado de México) tuvieron mayor actividad biológica con
acción fungicida de 0.6 mg/mL frente a la levadura, y concluyen que puede ser utilizado como tratamiento
alternativo de candidiasis.

Por otro lado, Flores, Moreno, Londoño & Cruz (2016) reportan la eficacia del propóleo de Cuautitlán
Izcalli, Estado de México, como tratamiento de las lesiones en piel en caballos producidas por C. albicans,
debido a la capacidad de inducir la inhibición del tubo germinativo impidiendo la transición de levadura a
micelio, cambios en la pared celular de las levaduras, con sitios de gemación irregulares y perturbación de
la división, resultando en defectos en la textura de la pared de las células hijas (Londoño et al., 2010).

La presencia de compuestos con actividad antifúngica en los propóleos de Tlalpujahua-Senguio y

El Oro, como la pinocembrina y el 2-metoxi-4-vinilfenol, provocan la sensibilidad de la levadura con una
CMF de 3.0 mg/mL y 7.5 mg/mL, respectivamente, compuestos que se encuentran en especies de pinos
alrededor de los apiarios, presentaron 5% o más de compuestos fenólicos y 0.5% o más de flavonoides, como
lo establece la normativa mexicana. Los propóleos de Puebla y Veracruz tuvieron una disminuida actividad
antimicrobiana debido a que presentan valores mínimos de estos compuestos bioactivos.

Con estos importantes datos, los resultados de este estudio muestran que los componentes
químicos de los propóleos estudiados son compuestos con actividad antimicrobiana y antioxidante, y estas
están relacionadas con la cantidad presente de cada compuesto en el propóleo, como lo han reportado
diferentes estudios.

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Varios investigadores han reportado que los mecanismos antioxidantes propuestos son mediante
secuestro de radicales libres, o actuando como substrato para radicales, tales como superóxido e hidroxilo,
y quelación de iones metálicos y que el mecanismo antimicrobiano involucra la inhibición de ácidos
nucleicos y degradación de la membrana citoplasmática (Vargas-Sánchez et al., 2014b); sin embargo, no
hay reportes relacionados con respecto al mecanismo de acción de los propóleos mexicanos, pero es
evidente que los resultados anteriores sugieren que su actividad biológica se debe a la combinación y
sinergia de los diferentes compuestos químicos que los integran (Lotti et al., 2010; Morgado et al., 2014),
siendo necesario estudios en microscopía electrónica, genética y biología molecular, que nos permitan
apreciar el daño estructural en los microorganismos evaluados para proponer un posible mecanismo de
acción.

Conclusiones
Se realizó el estudio de la composición química de ocho propóleos de la República Mexicana, identificando
la variedad de los compuestos más abundantes en cada uno. Las muestras con niveles elevados de
flavonoides son las provenientes del Estado de México y Michoacán, presentando propiedades
antioxidantes elevadas y actividad antimicrobiana contra Staphylococcus aureus, Escherichia coli y
Candida albicans. Los propóleos de los municipios de Puebla, Guanajuato y Veracruz no contienen
cantidades importantes de fenoles y flavonoides; en consecuencia, presentan una disminución en las
propiedades evaluadas y no cumplen las especificaciones de la norma de calidad de México para ser
ofertados como producto con actividad antimicrobiana.

Las propiedades biológicas de los propóleos están relacionadas con la variabilidad de los
compuestos fenólicos y de flavonoides, lo que se puede relacionar con factores como la vegetación, el
clima, el tipo de abeja, entre otras, por lo que se recomienda continuar con la investigación acerca del
origen botánico de los propóleos de la República Mexicana. Es importante, en México, fomentar la
producción y evaluación de propóleos que garantice sus propiedades, principalmente químicas y
antimicrobianas, beneficiando así al sector apícola y al usuario de este producto.

Agradecimientos
Los autores agradecen el apoyo recibido de los proyectos: UNAM-DGAPA, PAPIIT IT 200915, PAPIIT
IN217118, FESC:PIAPIC 1632, PIAPI 1802, IN223719. Betsabé Rodríguez Pérez es estudiante de doctorado en
el Programa de Producción y Salud Animalde la Universidad Nacional Autónoma de México (UNAM) con
beca del Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología, México (Conacyt) (No. 511917).

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