Finalidad - Metodología - Reactivos 1. - : Uso Profesional
Finalidad - Metodología - Reactivos 1. - : Uso Profesional
La reducción de la absorbancia a 340 nm, resultante de la oxidación de la 3. * - Reactivo 3 - Almacenar entre 2 - 8 ºC.
coenzima NADH, se monitorea fotométricamente, siendo directamente Contiene Tris 20 mmol/L; piridoxal fosfato 11,1 mmol/L; azida sódica
proporcional a la actividad de la ALT en la muestra. 0,095%.
Como ningún test conocido puede asegurar que las muestras de sangre 3. Ajustar el cero del fotómetro a 340 nm con agua destilada o
no transmitan infecciones, todas ellas deben ser consideradas como desionizada.
potencialmente infecciosas. Por lo tanto, al manipularlas, se deben seguir
las normas establecidas para la bioseguridad. 4. Adicionar 0,200 mL del Reactivo 2, homogeneizar y transferir
inmediatamente a una cubeta termostatizada a 37 ± 0,2 ºC. Esperar 1
Para descartar los reactivos y el material biológico sugerimos aplicar las minuto.
normas locales, estatales o federales de protección ambiental.
5. Registrar la absorbancia inicial (A1) y disparar simultáneamente el
cronómetro. Después de 2 minutos registrar la absorbancia (A2).
Interferencias
Valores de Bilirrubina hasta 19 mg/dL, Hemoglobina hasta 180 mg/dL, Para verificar la linealidad de la reacción, registrar la absorbancia a
Triglicéridos hasta 640 mg/dL no producen interferencias significativas. intervalos de 1 minuto y verificar si la diferencia de absorbancia por
minuto es equivalente.
Para evaluar la concentración aproximada de hemoglobina en una
muestra hemolizada se puede proceder del siguiente modo: Diluir Determinación de la actividad enzimática sin la
0,05 mL de la muestra en 2,0 mL de NaCl 150 mmol/L (0,85%) y medir la utilización del piridoxal fosfato
absorbancia a 405 ó 415 nm ajustando el cero con agua desionizada o
destilada. Preparación del reactivo de trabajo . Transferir el contenido de un frasco
de Reactivo 2 a un frasco de Reactivo 1 y homogeneizar suavemente.
Hemoglobina (mg/dL) @ Absorbancia405 x 601 El reactivo de trabajo es estable 14 días entre 2 - 8 ºC y 24 horas entre
Hemoglobina (mg/dL) @ Absorbancia415 x 467 15 - 25 ºC cuando no hubiera contaminación química o microbiana.
Anotar la fecha de expiración. Opcionalmente se puede preparar un
Las muestras fuertemente lipémicas y ictéricas poseen absorbancia
volumen menor de reactivo de trabajo mezclando 1 par te de Reactivo 2
elevada a 340 nm. Cuando la actividad enzimática en estas muestras está
con 4 partes de Reactivo 1 (ejemplo: mezclar 0,200 mL de Reactivo 2 y
muy aumentada, puede darse un consumo bastante rápido del sustrato
0,800 mL de Reactivo 1).
sin haber disminución significativa en la absorbancia. Por lo tanto, si se
obtuvieran valores bajos de actividad enzimática en estas muestras se
debe repetir la determinación utilizando la muestra diluida con NaCl
0,85%.
Para preservar el desempeño, los reactivos deben permanecer fuera de la DA/minuto Muestra o Calibrador = (A1 - A2)/2
temperatura de almacenamiento solamente el tiempo necesario para
obtener el volumen a utilizar. Evitar la exposición a la luz solar directa. Actividad del Calibrador
Factor =
Procedimiento de la muestra DA/min Calibrador
1. En un tubo rotulado ‘‘Muestra’’ o ‘‘Calibrador’’, pipetear 1,0 mL del ALT (U/L) = DA/min Muestra x Factor
reactivo de trabajo.
Ejemplo
2. Ajustar el cero del fotómetro a 340 nm con agua destilada o
desionizada. Muestra
A1 = 1,925 A2 = 1,851
3. Adicionar 0,100 mL de muestra o calibrador de enzimas,
homogeneizar y transferir inmediatamente a una cubeta termostatizada a 1,925 - 1,851
37 ± 0,2 ºC. Esperar 1 minuto. DA/min Muestra = = 0,037
2
El resultado de la medición es lineal entre 3,5 y 400 U/L. Para valores Método Método
Comparativo Labtest
mayores, diluir la muestra con NaCl 150 mmol/L (0,85%). Realizar una
nueva medición y multiplicar el resultado obtenido por el factor de Número de muestras 40 40
dilución. Intervalo de concentraciones
8,2 - 256,2 8,0 - 262,7
(U/L)
Media de las estimativas
Control interno de la calidad . El laboratorio debe mantener un 102,4 105,5
(U/L)
programa de control interno de calidad que defina claramente los
Método Labtest = 1,036 x
reglamentos aplicables, objetivos, procedimientos, criterios para Ecuación de regresión
Método Comparativo - 0,589
especificaciones de la calidad y límites de tolerancia, acciones
Coeficiente de correlación 0,999
correctivas y registro de las actividades. Deben utilizarse materiales de
control para monitorear la imprecisión de la medición y los desvíos de la
Utilizando la ecuación de regresión, el error sistemático total (bias)
calibración. Se sugiere que las especificaciones del coeficiente de
estimado es igual a 2,9% para un nivel de decisión igual a 89 U/L y 3,3%
variación y del error total sean basados en los componentes de la
para un nivel de decisión igual a 272 U/L. Estos errores son menores que
variación biológica (VB)4,5,6.
el error sistemático analítico de la especificación óptima basada en la
variacón biológica4 que es £ ± 5,7%.
Intervalo de referencia3,7 . Los siguientes valores deben ser
usados sólo como orientación. Se recomienda que cada laboratorio Ensayos realizados sin piridoxal fosfato
establezca su propio intervalo de referencia en la población atendida.
Método Método
Edad Masculino (U/L) Feminino (U/L) Comparativo Labtest
1 - 30 días 20 - 54 21 - 54
Número de muestras 40 40
1 - 6 meses 26 - 55 26 - 61 Intervalo de concentraciones
7 - 12 meses 26 - 59 26 - 55 8,2 - 256,2 10,8 - 243,3
(U/L)
1 - 3 años 19 - 59 24 - 59 Media de las estimativas
4 - 11 años 24 - 49 24 - 49 102,4 99,4
(U/L)
12 - 15 años 24 - 59 19 - 44 Método Labtest = 0,958 x
Adultos 11 - 45 10 - 37 Ecuación de regresión
Método Comparativo - 1,284
Coeficiente de correlación 0,998
Conversión: Unidades Convencionales (U/L) x 16,7 = Unidades SI
(nkat/L). Utilizando la ecuación de regresión, el error sistemático total (bias)
estimado es igual a 2,6% para un nivel de decisión igual a 80 U/L y 3,7%
Características de desempeño8 para un nivel de decisión igual a 282 U/L. Estos errores son menores que
el error sistemático analítico de la especificación óptima basada en la
Estudios de recuperación . A dos muestras con concentraciones variacón biológica4 que es £ ± 5,7%.
de alanina amino transferasa iguales a 100 y 227 U/L le fueron
adicionadas cantidades medidas de la enzima, obteniéndose los Estudios de precisión . Los estudios de precisión fueron
siguientes resultados: realizados en el sistema Labtest/Labmax 240â, utilizando muestras con
valores de actividad iguales a 89 y 272 U/L para el procedimiento con
Actividad (U/L) piridoxal fosfato y 80 y 282 U/L para el procedimiento sin piridoxal
fosfato.
Recuperación
Inicial Adicionada Esperada Encontrada
(%)
100 41 141 140 99,2 Ensayos realizados con piridoxal fosfato
227 41 268 275 102,6
Repetitividad - imprecisión intra-ensayo
El error sistemático proporcional medio estimado es igual a 0,7 U/L para N Media DE (U/L) CV (%)
el nivel de decisión 80 U/L y 2,5 U/L para el nivel de decisión 281 U/L. Muestra 1 20 89 1,43 1,6
Muestra 2 20 272 2,61 1,0
Estudios de comparación de métodos . El método propuesto
fue comparado con el método de referencia de la IFCC3, obteniéndose los
Reproducibilidad - imprecisión total
siguientes resultados:
N Media DE (U/L) CV (%)
Muestra 1 20 89 2,31 2,6
Muestra 2 20 272 7,40 2,7
Ensayos realizados sin piridoxal fosfato 2. El agua utilizada en el laboratorio debe tener la calidad adecuada para
cada aplicación. Así, para preparar reactivos y usar en las
Repetitividad - imprecisión intra-ensayo mediciones, debe tener resistividad ³1 megaohm.cm o conductividad
N Media DE (U/L) CV (%) £1 microsiemens/cm y concentración de silicatos <0,1 mg/L (agua tipo
Muestra 1 20 80 1,20 1,5 II). Para el enjuague del material de vidrio el agua puede ser del tipo III, con
Muestra 2 20 282 2,19 0,8 resistividad ³0,1 megaohms o conductividad £10 microsiemens. En el
enjuague final, utilizar agua tipo II. Cuando la columna desionizadora está
con su capacidad saturada produce agua alcalina con liberación de varios
Reproducibilidad - imprecisión total
iones, silicatos y substancias con gran poder de oxidación o reducción
N Media DE (U/L) CV (%) que deterioran los reactivos en pocos días o incluso horas, alterando los
Muestra 1 20 80 1,40 1,8 resultados de modo imprevisible. Por ello es fundamental establecer un
Muestra 2 20 282 3,31 1,2 programa de control de la calidad del agua.
Fabricado em
Elaborado en
Manufactured on