FOSFORO UV Liquiform Ref.
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Instrucciones de Uso
Finalidad . Sistema para la determinación del Fósforo inorgánico por Precauciones y cuidados especiales
fotometría en ultravioleta, con reacción de punto final.
Se deben aplicar los cuidados habituales de seguridad en la manipulación
Uso profesional. de los Reactivos.
[Solo para uso diagnóstico in vitro.] El Reactivo de Color es cáustico y puede producir quemaduras. En caso
de contacto con los ojos y piel, se debe lavar inmediatamente con gran
Principio . El Fósforo inorgánico reacciona con el molibdato de cantidad de agua y buscar auxilio médico. Se deben utilizar los equipos de
amonio en presencia de ácido sulfúrico, resultando la formación de un protección adecuados para el manejo de reactivos cáusticos.
complejo fosfomolíbdico no reducido. La absorbancia a 340 nm del
complejo formado es proporcional a la concentración de fósforo en la La vidriería debe ser adecuadamente lavada y enjuagada porque el fósforo
muestra. inorgánico es un componente común de la mayoría de los detergentes.
Un fuerte indicio de deterioro se indica por una absorbancia mayor a
Fósforo inorgánico + H2SO4 + Molibdato de Amonio
1,500 cuando el Reactivo de Color es medido a 340 nm contra agua
Complejo Fosfomolibdato no reducido
destilada.
Características del sistema . El método directo para la Material necesario y no suministrado
determinación del fósforo inorgánico en el suero y la orina desarrollado
por Daly y Ertinghausen y modificado por Labtest, supone un avance 1. Fotómetro capaz de medir con exactitud la absorbancia a 340 nm;
metodológico eficiente y confiable.
2. Pipetas para dispensar muestras y reactivos;
El sistema es compuesto de un reactivo único listo para uso, con 3. Baño-Maria o incubador para mantener temperatura constante a
estabilidad que garantiza el desempeño consistente en su forma liquida 37 ºC.
original y mantenimiento de las condiciones óptimas de la reacción. 4. Cronómetro.
Se utilizan solamente 0,01 mL de muestra y el sistema permite la
obtención de resultados en tan sólo 5 minutos, por el método manual. Muestra
Los datos de repetitividad y de la reproducibilidad demuestran que el Cada laboratorio debe crear un Procedimiento Operacional Estándar
sistema Fosforo UV Liquiform posee una robustez extremamente (POE) que establezca procedimientos adecuados para la toma,
deseable y valiosa para un sistema analítico. preparación y almacenamiento de las muestras. Destacamos que los
errores debidos a la muestra pueden ser mayores que los errores
El método es fácilmente aplicable en analizadores automáticos capaces ocurridos durante el procedimiento analítico.
de medir una reacción de punto final a 340 nm.
Como la ingestión de glucosa reduce el valor del fósforo inorgánico, se
Metodología . Daly y Ertingshausen modificado. debe obtener la muestra de sangre después de un ayuno de 8 horas. Se
puede utilizar suero, plasma (heparina) y orina. Plasmas citratados,
Reactivos oxalatados, fluorados o con EDTA dan resultados falsamente
disminuidos.
1. ( - Reactivo de Color - Almacenar entre 2 - 8 ºC.
Contiene ácido sulfúrico 600 mmol/L; molibdato de amonio 2,0 mmol/L;
y surfactante.
La concentración del fósforo en suero o plasma es estable por 2 días entre
15 - 25 ºC, por 1 semana entre 2 - 8 ºC y por 3 semanas cuando
congelado. En orinas acidificadas con HCl, el fósforo es estable hasta
6 meses entre 2 - 8 ºC.
2. < - Estándar - 5,0 mg/dL - Almacenar entre 2 - 8 ºC.
Los reactivos no abiertos, conservados en las condiciones
El fósforo inorgánico en muestras de sangre total puede aumentar o
disminuir con el tiempo dependiendo del tipo de muestra, temperatura, y
especificadas, son estables hasta la fecha de expiración impresa en su
duración de almacenamiento. Valores en el plasma o en el suero
rótulo. Durante la manipulación, los reactivos están sujetos a
aumentan debido al contacto prolongado con las células a temperatura
contaminaciones de naturaleza química y microbiana que pueden
ambiente o a 37 ºC.
provocar disminución de la estabilidad.
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Es importante separar suero o plasma hasta una hora después de la Mezclar y incubar en baño de agua a 37 ºC durante 5 minutos. Medir las
recogida. absorbancias de la Prueba y del Estándar a 340 nm, ajustando el cero con
el Blanco. La absorbancia es estable por 30 minutos.
Cuando el contacto del suero o plasma con los hematíes es prologado, se
libera fósforo del interior de los mismos, aumentando así su El procedimiento sugerido para la medición es adecuado para fotómetros
concentración. Separar el suero o plasma hasta 1 hora después de la cuyo volumen mínimo de lectura es igual o mayor que 1,0 mL. Se debe
toma de muestra. hacer una verificación de la necesidad de ajuste del volumen para el
fotómetro utilizado. Los volúmenes de muestra y reactivo pueden ser
Muestras hemolisadas producen resultados falsamente elevados debido modificados proporcionalmente, sin perjuicio para el desempeño de la
a la contaminación del plasma o suero con el fósforo de los hematíes. prueba, manteniéndose inalterado el procedimiento de cálculo. En caso
Esta interferencia no se corrige utilizando el Blanco de Muestra, ya que no de reducción de los volúmenes, es fundamental que se observe el
es solamente una interferencia fotométrica. volumen mínimo necesario para la lectura fotométrica. Volúmenes de la
muestra menores a 0,01 mL son críticos en aplicaciones manuales y se
La orina debe recogerse en un frasco conteniendo 20 mL de HCl 6 M deben utilizar con cautela porque aumentan la imprecisión de la medición.
(50% v/v) y centrifugarse antes de su uso. Durante la recolección la
muestra debe ser bien homogeneizada para evitar la precipitación de Calculos
complejos de fosfato.
Abs de la Prueba
Como ningún test conocido puede assegurar que muestras de sangre no Fósforo (mg/dL) = x 5,0
transmiten infecciones, todas ellas deben ser consideradas como Abs del Estándar
potencialmente infectivas. Así siendo, deberán ser manipuladas
siguiendo las normativas establecidas para biosseguridad.
Ejemplo
Para deshacerse de los reactivos y del material biológico sugerimos
Abs de la Prueba = 0,190
aplicar las normativas locales, regionales o nacionales de protección
Abs del Estándar = 0,247
ambiental.
0,190
Interferencias Fósforo (mg/dL) = x 5,0 = 3,8
0,247
Muestras con concentraciones de bilirrubina por encima de 4 mg/dL y
triglicéridos por encima de 400 mg/dL, producen resultados falsamente mg/dL x Vol. Urinario (mL)
elevados. La acción de estos interferentes puede ser mitigada con el uso Orina (mg/24 horas) =
del Blanco de muestra, que es aplicable para valores de bilirrubina hasta 100
32 mg/dL y triglicéridos hasta 900 mg/dL.
Debido a la gran reproducibilidad que puede ser obtenida con la
Blanco de muestra . Mezclar 1,0 mL de NaCl (0,85 %) con 0,01 mL metodología, se puede utilizar el método del factor:
de la muestra. Medir la absorbancia a 340 nm, ajustando el cero con agua
destilada o desionizada. Restar la absorbancia obtenida de esa manera de 5,0
la absorbancia de la prueba y calcular la concentración. Este sistema de Factor de calibración =
corrección sólo se puede aplicar en los casos en que la muestra produce Absorbancia del Estándar
una interferencia fotométrica.
5,0
Factor = = 20,2
Procedimiento
0,247
Dosaje de la orina . Cuando la muestra de 24 horas no fuera acidificada
durante su recolección, adicionar 20 mL de HCl 6 M, mezclar, esperar Fósforo (mg/dL) = Abs. de la Prueba x Factor = 0,190 x 20,2 = 3,8
60 minutos y tomar una alícuota para el ensayo. La muestra previamente
acidificada debe ser bien mezclada y diluida 1:10 (0,1 mL de Calibración . El Estándar es trazable al Standard Reference Material
muestra + 0,9 mL de agua desionizada) antes de la utilización. Multiplicar (SRM) 186 I del National Institute of Standards and Technology (NIST).
el resultado obtenido por 10.
Calibraciones manuales
Disponer de 3 tubos de ensayo y proceder como se detalla: Obtener el factor de calibración al usar nuevo lote de reactivos o cuando el
control interno de la calidad indicar.
Blanco Prueba Estándar
Muestra (suero o orina) 0,01 mL Sistemas automáticos
Estándar 0,01 mL Branco de reactivos: água o solución de cloreto de sódio 150 mmol/L
Reactivo de Color 1,0 mL 1,0 mL 1,0 mL (0,85%);
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Estándar: usar calibradores proteicos. Las concentraciones de fósforo en similar, utilizando 40 muestras con valores situados entre 2,5 y
los productos de la línea Calibra de Labtest son trazables al SRM 186 I del 10,0 mg/dL. La comparación resultó en la ecuación de regresión y =
NIST. 1,013x - 0,135 con un coeficiente de correlación r = 0,995. El error
sistemático total (constante y proporcional) verificado en el nivel de
Intervalo de calibraciones decisión (5,0 mg/dL) fue igual a 0,200 mg/dL ó 4,0 %. Como las muestras
Se recomienda la calibración cuando haya cambio de lote o cuando lo fueron seleccionadas aleatoriamente en pacientes ambulatorios y
indica el control de calidad interno. paciente hospitalizados, se puede inferir que el método tiene una
especificidad metodológica adecuada.
Linealidad Repetitividad - imprecisión intra-ensayo
El resultado de la medición es lineal hasta 20 mg/dL. Para valores más
N Promedio DP CV (%)
altos, diluir la muestra con NaCl 0,85 % realizar una nueva medición y
Muestra 1 20 3,0 0,06 2,1
multiplicar el resultado obtenido por el factor de dilución. Diluir la muestra
Muestra 2 20 7,0 0,12 1,6
de modo tal que el valor encontrado se sitúe entre 4,0 y 8,0 mg/dL. Se
sugiere la verificación de la linealidad metodológica y fotométrica como
mínimo semestralmente, utilizando muestras con valores de hasta
20,0 mg/dL. Reproducibilidad - imprecisión total
N Promedio DP CV (%)
Control interno de la calidad . El laboratorio debe mantener un Muestra 1 20 3,2 0,15 4,7
programa de control interno de calidad que defina con claridad los Muestra 2 20 7,7 0,16 2,1
reglamentos aplicables, objetivos, procedimientos, criterios para
especificaciones de la calidad y límites de tolerancia, acciones
correctivas y registro de las actividades. Controles deben ser utilizados Sensibilidad metodológica . Una muestra proteica que no
para evaluar la imprecisión e desviaciones de calibración. Se sugiere que contenía fósforo inorgánico fue utilizada para calcular el límite de
las especificaciones para el coeficiente de variación máximo y el error detección del ensayo, habiendo sido encontrado un valor igual a
total sean basados en los componentes de la variación biológica (VB).8,9 0,14 mg/dL, equivalente a la media de 20 ensayos más dos desviaciones
estándar. Utilizándose la absorbancia del Patrón como parámetro, se
Se sugiere utilizar las preparaciones estabilizadas de la línea Qualitrol de verificó que el límite de detección fotométrica es 0,02 mg/dL,
Labtest para el control interno de la calidad en ensayos del laboratorio correspondiendo a una absorbancia igual a 0,001.
clínico.
Efectos de la dilución de la matriz . Dos muestras con valores
Intervalo de referencia9 . Estos valores deben ser utilizados iguales a 11 y 15 mg/dL fueron utilizadas para evaluar la respuesta del
únicamente a modo de orientación. Se recomienda que cada laboratorio sistema en las diluciones de la matriz con solución fisiológica. Usando
estabelezca, en la población atendida, su propia banda de valores de factores de dilución que variaron de 2 a 8, se hallaron recuperaciones del
referencia. 93 al 100%.
Suero (mg/dL) Significación Clínica . Aunque la insuficiencia renal crónica y el
Niños 4,0 a 7,0 hipoparatiroidismo sean las dos causas más comunes de
Adultos 2,5 a 4,5 hiperfosfatemia, varias condiciones pueden causar hiperfosfatemia
transitoria y asintomática.
Orina: 400 a 1300 mg/24 horas. Como el músculo contiene mucho fosfato, es evidente que la
rabdomiólisis produce hiperfosfatemia grave.
La excreción de fosfato urinário cambia con la edad, masa muscular, Otras condiciones que promueven la liberación del fosfato intracelular y
dieta, función renal, concentración de paratohormona y hora del dia. conllevan a la hiperfosfatemia incluyen la hipertermia maligna y la
quimioterapia antiblástica.
Conversión: Unidades Convencionales (mg/dL) x 0,323 = Unidades SI La hiperfosfatemia puede ocurrir después de la administración repetida
(mmol/L). de enemas de retención o laxantes conteniendo fosfato.
Niveles disminuidos de fósforo se encuentran en el hiperparatiroidismo,
Características del desempeño7 en la intoxicación por plomo y en la alimentación parenteral.
La excreción urinaria varía con la dieta y es esencialmente equivalente a la
Exactitud . En dos muestras con concentraciones de fósforo ingesta dietética.
inorgánico en los niveles de decisión, se añadieron cantidades diferentes
de analitos, obteniéndose recuperaciones de entre el 96 y el 106%. El Observaciones:
error sistemático proporcional medio, obtenido en un valor de 4,0 mg/dL,
fue igual a 0,04 mg/dL ó 1,0%. 1. La limpieza y secado del material utilizado son factores fundamentales
para la estabilidad de los reactivos y obtención de resultados correctos.
Especificidad . El método propuesto fue comparado con un método
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2. El agua utilizada en el laboratorio debe tener la calidad adecuada a Presentación
cada aplicación. Así siendo, para preparar reactivos y usarla en las
Producto Referencia Contenido
mediciones, debe tener resistividad ³ 1 [Link] o conductividad
1 2 X 100 mL
£ 1 microsiemens/cm y concentración de silicatos < 0.1 mg/L (agua tipo 12-200
1 X 5,0 mL
II). Para el enjuague del material de vidrio, el agua puede ser del tipo III, Fosforo UV Liquiform
1 4 X 100 mL
con resistividad ³ 0.1 megaohms o conductividad £ 10 microsiemens. 12-400
1 X 5,0 mL
En el enjuague final utilizar agua tipo II. Cuando la columna desionizadora
está con su capacidad saturada ocurre la producción de agua alcalina con Fosforo UV Liquiform 1 4 X 23 mL
12-4/23
liberación de varios iones, silicatos y sustancias con gran poder de Labmax 560/400 1 X 5,0 mL
oxidación o reducción que deterioran los reactivos en pocos días o
Para informaciones sobre otras presentaciones comerciales consulte el
incluso horas, alterando los resultados de modo imprevisible. Por ello, es
sitio [Link] o póngase em contacto con el SAC.
fundamental establecer un programa de control de la calidad del agua.
El número de tests en aplicaciones para sistemas automáticos
3. El uso de detergente iónico para la limpieza del material puede ser una depende de los parámetros de programación.
fuente de contaminación con iones fosfato.
Informaciones al consumidor
4. Para una revisión de las fuentes fisiopatológicas y medicamentosas
de interferencia en los resultados y en la metodología se sugiere [Términos y Condiciones de Garantía]
consultar: <[Link]/>.
Labtest garantiza la correcta performance del equipo hasta su fecha de
Referencias vencimento si há sido conservado de acuerdo a las instrucciones que
figuram em el rótulo.
1. Balon M, Fernández C, Muñoz MA.: Direct Determination of Inorganic
Phosphorus in Serum with a Single Reagent. Clin Chem 1983; 29:372.
2. Daly JA, Ertingshausen G.: Direct method for determining phosphate in
Labtest Diagnóstica S.A.
serum with the "Centrifichem". Clin Chem 1972; 18:263.
CNPJ: 16.516.296/0001-38
Av. Paulo Ferreira da Costa, 600 - Vista Alegre - CEP: 33240-152
3. Inmetro: Boas Práticas de Laboratório Clínico e Listas de Verificacao
Lagoa Santa, Minas Gerais - Brasil - [Link]
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