MICROBIOLOGÍA DE LOS ALIMENTOS

“Año del Bicentenario, de la consolidación de nuestra Independencia, y de la

conmemoración de las heroicas batallas de Junín y Ayacucho”

Universidad Nacional Pedro Ruiz Gallo

Facultad de Ciencias Biológicas
Especialidad de Microbiología

Microbiología de los Alimentos

Informe de practica 5

Tema: Método de recuento de colonias: Siembra

en superficie, goteo y profundidad.

Alumno:
✓ Ortiz Carrasco Luis Fernando

Ciclo Académico: 2024-II

Docente: Dra. Graciela Olga Albino Cornejo

Lambayeque
2024

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I. INTRODUCCIÓN:

Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros

componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los

microorganismos. La diversidad metabólica de los microorganismos es muy amplia;

por ello, la variedad de medios de cultivo es también muy grande, no existiendo un

medio de cultivo universal adecuado para todos ellos.

El crecimiento de una población bacteriana puede ser entendido desde diferentes

perspectivas y de acuerdo a éstas se puede llegar a determinar la medida del crecimiento

mediante diversas metodologías (Ramírez et al., 2017)

El recuento en placa es uno de los métodos más utilizados para determinar cuál es el

número de microorganismos viables en un medio líquido. Cuando la concentración es

baja se procede a filtrar la muestra a través de una membrana que será pasada al medio

de cultivo, en una placa de Petri. Los microorganismos retenidos en la membrana se

desarrollarán formando colonias, permitiendo su cuantificación. Cuando la

concentración es alta, se procede a la preparación de diluciones seriadas en una

secuencia de 1:10, alcanzándose diluciones de 10-7 o mayores. Pequeñas alícuotas de

esas diluciones son sembradas en medio nutritivo en placa, donde las bacterias se

desarrollan formando colonias.

II. OBJETIVOS:

● Determina bacterias aerobias mesófilas viables de los alimentos por el método

del número de unidades formadoras de colonias (ufc)

● Se familiariza con procedimientos normalizados para determinar la

numeración de microorganismos.

● Realizar el recuento de colonias utilizando el método de siembra en superficie,

goteo y profundidad.

III. MARCO TEÓRICO:

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Sembrar o inocular es introducir artificialmente una porción de muestra (inóculo) en un

medio adecuado, con el fin de iniciar un cultivo microbiano, para su desarrollo y
multiplicación. Una vez sembrado, el medio de cultivo se incuba a una temperatura
adecuada para el crecimiento.

Las reglas fundamentales para efectuar la siembra exigen:

○ Que se efectúen asépticamente

○ Que los medios de cultivo y el instrumental a utilizar estén esterilizados
○ Que se realicen solo los manipuleos indispensables
○ Que se trabaje fuera de toda corriente de aire. De ser posible utilizando un
mechero o bien Flujo laminar.

Tipos de siembra (placa)

● Método de siembra en superficie.

Se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo fundido, se deja solidificar
y se coloca sobre la superficie el inóculo. Con ayuda de una espátula de
Drigalsky se extiende el inóculo hasta su absorción total por el medio de cultivo.
Este tipo de siembra se recomienda para microorganismos aerobios estrictos
● Método de siembra por goteo.

Cuando se desea realizar una siembra masiva se puede utilizar la espátula de

Driglaski. En este caso la gota de muestra liquida se esparce con la espátula por
toda la superficie del medio de cultivo sólido imprimiéndo un movimiento en
espiral. La siembra masiva también se puede realizar con un hisopo grueso
embebido de un cultivo liquido, procediendo a su deslizamiento sobre toda la
superficie de una placa de agar.

● Método de siembra en profundidad.

Se coloca el inóculo en una placa o caja de Petri y sobre el mismo se vierte el

medio de cultivo previamente fundido. Este método se utiliza para
microorganismos aerobios

IV. MATERIALES:

Material biológico: alimento (Jugo de Papaya).

Material de laboratorio:

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● Medio de cultivo PCA (agar plate count)

● Diluyente: agua peptonada al 0.1%.

● Placas estériles.

● Tubos de dilución estériles.

● Un frasco estéril

● Pipetas de 1 ml estériles.

● Pipeta de 10 ml estéril

● 1 micropipeta regulada a 20 uL

● Espátula de vidrio estéril Drgalsky

● Mecheros de alcohol o Bunsen

● Bolsa hermética

● Incubadora calibrada 30°C

● Homogeneizador de tubos

● Baño de agua

● Autoclave

● Balanza

V. PROCEDIMIENTO:

● Pesar 10g. de muestra y diluir en 90 ml de agua peptonada.

● Luego pasar un 1 ml a cada tubo con 9 ml de agua peptonada al 0,1 %, hacer

lo mismo progresivamente hasta llegar a la dilución 10-6. .

● Sembrar de acuerdo al método

1. Método de profundidad

➢ Colocar en cada placa 1 ml de dilución

➢ Luego agregar el agar PCA (10-12ml).

➢ Homogenizar colocando la placa sobre la mesa (20 movimientos: 5 en sentido

ajugas del reloj, 5 de derecha a izquierda, 5 en sentido contrario y de arriba hacia

abajo).
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➢ Llevar a incubar a 30º C.

➢ Hacer 2 lecturas a las 24 y 48 hrs.

2. Método de superficie.

➢ Servir el medio agar PCA en 6 placas.

➢ Colocar 0.1 ml de dilución de cada tubo en cada placa.

➢ Con una espátula de Drigalsky expandir el 0.1 de dilución sobre la superficie del

medio.

➢ Llevar a incubar a 30º C.

➢ Hacer 2 lecturas a las 24 y 48 hrs.

3. Método por goteo

➢ Servir el medio agar PCA en 3 placas.

➢ Colocar 0.02 ml de solución de la dilución 10-1

a 10-6 en cada placa (dividir la

placa en dos partes). Llevar a incubar a 30º C.

➢ Hacer 2 lecturas a las 24 y 48 hrs.

VI. RESULTADOS:
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CONTEO X TIEMPO

MÉTODO 24 H 48H

TOTAL PROMEDIO TOTAL PROMEDIO

EN PROFUNDIDAD

10-1 A INCONTABLE INCONTABLE

—--- —---
10-1 B INCONTABLE INCONTABLE

10-2 A INCONTABLE INCONTABLE

—---- —----
10-2 B INCONTABLE INCONTABLE

10-3 A 154 138 146 198 170 184

135 189
10-3B 140 105 123 220 165 193

POR GOTEO

10-2 160 160 198 198

10-3 140 140 188 188

POR SUPERFICIE

10-1 INCONTABLE INCONTABLE

—---- —----
10-2 INCONTABLE INCONTABLE

10-3 111 118 115 143 150 147

De los resultados obtenidos se interpretó de la siguiente manera:

● Para el método de conteo por profundidad:

• Como se puede observar en el cuadro solo se pudo realizar el conteo en la

dilución 10-3, de las diluciones se sacó el promedio por horas y cuadrantes.

• En la dilución 10-3 se obtuvo (en promedio) a las 24 h. 135 colonias y a las

48 h. 189 colonias.

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Ufc/gr de N° de Factor de
= x Resultado
muestra colonias dilución
4
Ufc/gr de 3 19x
= 189 x = 10
muestra 10
ufc/gr
El recuento de bacterias aerobias mesófilas viables es igual de 19 x 104ufc/gr en la

muestra líquida de jugo de papaya.

● Para el método de conteo por Goteo.

○ Se realizó el conteo en las dos diluciones 10-2 y 10-3, de los cuales se obtuvo

el promedio por horas.

○ En la dilución 10-2 se obtuvo (en promedio) a las 24 h. 160 colonias y a las

48h. 198 colonias.

○ En la dilución 10-3 se obtuvo (en promedio) a las 24 h. 140 colonias y a las 48

h. 188 colonias.

○ Para que los resultados de las diluciones estén bien la dilución menor debe

contener a la mayor en 2 veces, así que dividimos: La solución más cercana a 2

es la de 24h, y se tomaría la dilución más alta (10-2 ). Entonces el número de

UfC/ ml de muestra es: 160 x10-2 = 16 x 10- 3 . ufc/ml.

○ Por lo tanto, el número de M.O aerobios mesófilos viables de jugo de papaya

es: 16 x 10-3 .ufc/ml.

● Para el método de Superficie:

○ En este método se obtuvo que a las 24 horas se contaron un promedio de 115

colonias y a las 48 h un promedio de 147.

○ El promedio de ambos conteos es de 131. Entonces el número de UFC/ml de

muestra es 13 x 10-4 . ufc/ml.

○ Por lo tanto, el número de microorganismos aerobios mesófilos obtenidos por

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A LAS 24H A LAS 48H

10-2 160 10-2 198

= 1.15 = 1.05
10-3 140 10-3 188
Este método equivale a 13 x 10-4 . ufc/ml de muestra de jugo de papaya

adquirida en el Mercado de Inca – La victoria.

VII. CONCLUSIONES:

● Se determinó las bacterias aerobias mesófilos mediante tres métodos dando

como resultado: para el método de conteo por profundidad, por lo tanto, el

número de M.O aerobios mesófilos viables de jugo de papaya es: 16 x 10-

[Link]/ml; Para el método de Superficie el número de microorganismos aerobios

mesófilos obtenidos por este método equivale a 13 x 10-4. ufc/ml de muestra de

jugo de papaya adquirida en el Mercado de Inca – La victoria. Asimismo, para

el método de conteo por Goteo el número de M.O aerobios mesófilos viables en

jugo de papaya es: 16 x [Link]/ml.

● Se concluye que los tres métodos estudiados son muy importantes en

microbiología de alimentos.

VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:

Ramírez, J., Parra, A., Alvarez-Aldana, A. (2017). Análisis de técnicas de recuento de

Microorganismos. Universidad Libre Seccional Pereira.

[Link]

1lisis%20de%[Link]?sequence=1&isAllowed=y

Técnicas y tipos de sembrado. (s. f.). scientist-site. Recuperado 28 de enero de 2023, de

[Link]