Excresion viral, la salida de viriones infecciosos
PROCESOS QUE INVOLUCRAN LA INTERACCION DEL VIRUS CON LA CELULA, ES
DECIR LA INFECCION
CICLO DE MULTIPLICACION VIRAL, TODOS LOS EVENTOS QUE INVOLUCRAN
DESDE QUE INGRESA A LA CELULA HASTA QUE GENERA LA PROGENIE, EN LA
REALIDAD NO OCURREN UNO PRIMERO Y DESPEUS EL OTRO, SE VAN DANDO
EN FORMA ENCADENADA
Se usan los huevos embrionarios de gallina para la producción de particulas
virales tambien se pueden usar lineas celulares continuas o cultivos primarios,
pueden ser en suspensión o en adherencia
Método de redi muench para cuantificar virus o algo asi, agarra el stock viral,
infectas células y después al leer se dice cual es positivo o negativo y se
determina la dosis infectiva 50 donde el 50% del stock esta infectado.
Controlar la infección viral implica controlar cuantas partículas virales voy a
poner por celula porque quiero controlar la producción de
Multiplicidad de infección, numero de partículas infecciosas agregadas por
celula
COMO EL VIRUS INTERACCIONA CON LA CELULA
Interacciona con el receptor celular, coalisiones celula virus y ligando viral de
uniones virus. Adsorción UNION DEL VIRUS A LA CELULA.
La presencia de los receptores funcionales determina si la celula es o no
suceptivle a un virus
Una celula resistente es aquella que no presenta receptores
Susepctible y permisiva para una infección sea infecciosa.
Actividad fusogenica,
Una proteína del virus interacciona con el receptor, es una interacción débil,
cuando varios ligandos
Fusión de membrana en virus envueltos péptido de fusión con el virus
VIRUS DESNUDO, CAPSIDE QUE SE REPITEN 4-5 PROTEINAS, TODA LA CAPSIDE
ES CAPAZ DE UNIRSE A LA MEMBRANA
HAY ALGO LLAMADO RBD que es muy importante que permite la
transmisibilidad?
Efectos citopáticos, efectos que suceden en la celula que están relacionados
con la actividad viral, generan cuerpos de inclusión
El efecto citopático No es caracteristico del virus.
Genera células multinucleadas
Infección aguda, sistema inmunologico resuelve las rápidas y autilimitadas, el
propio sis delimita
Y otra mas
Hay infecciones líticas, la celula se rompe
Infección abortivas, producción de células defectivas
Infección aguda, HERPES, el fueguitoooo
Infección transformante
11-03-2024
MORFOLOGÍA Y ESTRUCTURA VIRAL
Taxonomía viral
Actualmente se agrupan según sus propiedades biológicas, principalmente
ácidos nucleicos y según sus estructuras virales.
1. Grupos taxonómicos, el comité internacional de taxonomía viral
a. Orden, familia, subfamilia y genero
b. Rango de huésped: procariota o eucariota
c. Característica morfológica
d. Naturaleza del genoma: arn adn, segmentado
2. Se usa la clasificación de Baltimore: Se basa en el mecanismo de
producción de ARNm que mecanismos tiene que pasar el virus para
llegar al ARNm
Los grupos son ADN doble hebra, simple hebra
Existen 15 niveles de clasificación de los virus
MORFOLOGIA Y ESTRUCTURA VIRAL
Definiciones
Subunidad, una única cadena polipeptídica pegada
Protomero unidad estructural asimétrica
Capsómero unidad morfológica estructuras visibles en MET
Cápside: cubierta proteica que envuelve el genoma
Nucleocápside ácido nucleico + proteina, empaquetado dentro del virión
Envoltura: bicapa lipídica derivada de la célula hospedera
Virión: partícula viral infectiva, no todos los virus tienen capacidades infectivas.
Estructuras metaestables son los virus
La estructura viral es un compromiso entre estabilidad e inestabilidad
Estables para sobrevivir en el ambiente extracelular.
Inestables para liberar su genoma en células susceptibles.
Métodos para estudiar la estructura viral
1. Microscopia electrónica de transmisión MET
a. Se asocia a una tinción
b. No te permite interpretar la estructura de manera detalladamente
2. Microscopia electrónica de criofractura
3. Cristalografía de rayos x
4. Espectrometría de resonancia magnética nuclear
5. Reconstrucción tomográfica
VIRUS DESNUDOS PAPILOMA, ADENOVIRUS
1. Genoma
a. ARN
b. ADN
2. Capside proteica
VIRUS ENVUELTOS, VIRUS DE LA RABIA, INFLUENZA
1.
2.
3.
COMPONENTES DE LOS VIRUS
GENOMA VIRAL
Información codificada en el genoma viral
1. La replicación del genoma viral
2. Ensamblado y empaquetado del genoma
3. Regulación y momento del ciclo de replicación
4. Evasión de las defensas del hospedero
5. Propagación a otras células huésped
EL GENOMA VIRAL PUEDE SER
Que quiere decir que el arn esté segmentado, o sea donde se guarda el
ADN, en
Dentro de los virus que tienen ADN monocatenario que puede ser lineal o
circular, el coso es el mecanismo que tiene que llevar a cabo el virus para
llegar al ARN mensajero
En caso de circoviridae
- a partir del AND monocatenario de polaridad positiva se sintetiza el ADN
complementario y apartor de ese adn DOBLE HEBRA SE DA EL ARN
MENSAJERO.
El parvovirus tiene secuencias palindromicas y es lineal
El genoma del circo virus es circular
En el caso del adn DOBLE HEBRA, los herpes virus, adeno, etc etc
De ese adn se sintetiza el arn mensajero, se da lugar a los arnm
En el caso de pox tiene un loop terminal con invertidos terminales
En los herpes virus, tiene 3 sitios de inicio de la replicacion dentro del
genoma y cada uno de los segmentos estan flanqueados por invertidos
repetidos terminales
ADN bicatenario circular
COMPLETO papiloma viriade
Adn bicatenario circular con gaps
ARN monocatenario polaridad positiva
Coronoviridae
Flaviridae
Piconaviridae
Que les pasa a los retrovirus, pasa de arn polaridad positivo a adn negativo
monocatenario y luego adn bicatenario
ARN monocatenario polaridad negativa
Segmentado, todos sus genes están divididos en esos 8 segmentos
Arn monocatenario polaridad ambisense
PROTEINAS VIRALES ESTRUCTURALES
1. De la cápside: helicoidal o icosaédrica, recubre el genoma viral,
constituye el mator numero de proteínas presentes. Permite el
transporte entre células del genoma
a. En el caso del virus desnudo reconocen a la célula target
b. Simetría helicoidal, el genoma viral recubierto de proteínas
i. Es abierta, es una hebra de genoma, recubierta por
proteinas virales
ii. Los protomeros NO forman capsómeros, la longitud de la
hélice está determinada por la longitud del ácido nucleico
iii. ¿Como interacciona la proteína con el ADN, es una unión
covalente, no covalente?
iv. Dentro tenemos virus desnudos y envueltos
v. Ese protomero que está ahí interaccionando con el ADN,
también como interacciona entre el mismo, ¿o sea la
simetría helicoidal forma otra estructura?
c. Simetría icosaédrica
i. Los protomeros forman capsómeros que se disponen en el
espacio según la simetría de un icosaedro, con 20 caras
triangulares 12 vértices que convergen en 5 caras
triangulares
d. Simetrías complejas
e. FAGOS, grupos más complejos debido a sus variaciones
estructurales
f. MORFOGENESIS: proceso de armado de las partículas virales
mediante el ensamblaje del ACIDO NUCLEICO CON LA C’APSIDE
i. VIRUS PEQUEÑOS (AUTOENSAMBLAJE) las proteínas tienen
capacidad de autoensamblar,
ii. VIRUS COMPLEJOS: polio, necesitan darse sucesivos clivajes
de moléculas precursoras para que se den las proteínas,
1. Se sintetiza ARN, luego poliproteína, precursora de la
proteína, luego se da un clivaje pq el virus genera
una proteasa, luego se cliva sucesivamente y ahí se
dan los elementos de la cápside.
2. FAGOS, autoensamblaje. Pero no siempre, se va
haciendo ensamblajes de los distintos componentes.
iii. EMPAQUETADO DEL GENOMA VIRAL
1. LA INCORPORACION DEL GENOMA REQUIERE DE LA
DISCRIMINACION DE UNA GRAN CANTIDAD DE
ACIDOS NUCLEICOS
2. Empaquetamiento por proteínas celulares de unión al
adn
2. PROTEINAS NO ESTRUCTURALES, generalmente asociadas con actividad
enzimática por ejemplo las ADN polimerasa estas son proteínas que no
están presentes en las células hospederas
a. Pox virus, todo su sitio replicativo ocurre en el citoplasma, por eso
trae la arn polimerasa adn dependiente
3. De la envoltura / glicoproteínas
a. Adquirida de la membrana celular durante el ensamblaje y
brotamiento
b. varia considerablemente en tamaño, morfología, complejidad,
composición lipídica y en el número de proteínas
i. o sea, la envoltura es de la célula, ¿? LIPIDOS DE ORIGEN
CELULAR
c. las proteínas son glicosiladas y no glicosiladas
d. estas proteínas son las encargadas de que se da la infección,
determinan el rango de huésped y la especificidad.
e. Proteínas de fusión clase 1 y 2 glicosiladas, se asocian a virus
envueltos, están en la superficie de la membrana.
i. De clase 2 son un dinero
ii. De clase 1, se presentan en la superficie del virus como
trimero
iii. La spike es un trimero , de clase 1
iv. Primera proteína reconocida por el sistema inmune pq
están afuera.
f. PROCESO DE FORMACION DE PARTICULAS
Es la segunda etapa del ciclo replicatiov, el virus ya ingreso,
estamos viendo el egreso,
4. Que interaccionan con el genoma
NO ESTRUCTURALES
14-03-2024
GENETICA VIRAL
Viviana ramas
[Link]@[Link]
Nos mostro dos experimentos, el primero de hershey
Usaron fagos y marcaron radiactivamente los fosforos del ADN y por otro lado
el algo de las proteínas, es el fago T4, CAPAZ estaría bueno leer este paper
Con este experimento demostraron que es el ADN quien transfiere el material
genético
Experimento de Frankel si era el ARN o era el ADN
Experimento virus del mosaico del tabaco
CUANTAS CLASES DE GENOMAS VIRALES EXISTEN
Baltimore determino que habían 6 clases de genomas
Esquema de David Baltimore
En el grupo 7 hay ciertas particularidades, tiene una enzima y a partir del ARN
hace ADN, es decir una retrotranscripcion.
DEFINICIONES
No todos los ARN+ SON ARNm , los retrovirus No hacen eso
El ARNm es ARN de polaridad positiva
La informacion que codifica el genoma viral>
Genes que producen se;ales regulatorias requeridas para la replicacion
del genoma, ensamblado
Sintesis de proteinas, hay virus que pueden codificar y sintetizar parte de las
proteinas Virus gigante tupav
La informacion que NO codifica el genoma viral
NINGUN VIRUS TIENE LA MAQUINARIA COMPLETA PARA LA SINTESIS DE
PROTEINAS, NECESITAN DEL RIBOSOMA PARA SU TRADUCCION
En virus gigantes se ha descubierto metabolismo energetico, genes que
codifican para el metabolismo energetico o de biosintesis de proteinas de
membrana BUSCAR
No contiene telomeros ni centromeros AUN
GRUPO 1 – VIRUS DE ADN DOBLE CADENA
Se replica usando una adn POLIMERASA dependiente de adn algunos usan la
del huesped, otras llevan consigo, no usan arn como intermediario durante la
replicacion, es decir la ADN polimerasa es la que se va a encargar de replicar
ese genoma para hacer nueva progenia, mas diversos y mas frecuentes.
El adn se escribe a ARN mensajero Y ESE ES EL QUE USAN LOS RIBOSOMAS
PARA FORMAR LA CAPSIDE Y DEMAS
En el caso de ADNOVIRUS la polimerasa es propia
En caso de la polio usa la del huesped
GRUPO 2 – VIRUS SIMPLE HEBRA DE ADN
La adn polimerasa del huesped ve que ese material es incorrecto, lo polimerisa
y hace la doble hebra y ese ADN bicatenario es el que va a ser transcripto a
ARN mensajero y ese es el que se lee por los ribosomas y se vuelve capside
NO IMPORTA SI ES ADN DE POLARIDAD NEGATIVA O POSITIVA PORQUE LA ADN
POLIMERASA DEL HUESPED LO QUE VA A HACER ES REPARAR LO NOTA COMO
QUE ESETA MAL PQ ES UNA HEBRA SOLA
LA PROGENIE VA A SER CUANDO LA ADN POLIMERASA HACE LA DOBLE
CADENA, LLAS CAPSIDES AGARRAN ADN POSITIVOS O NEGATIVOS.
CIRCOVIRIDAE
PARVOVIRIDAE
GRUPO 7 ADN DOBLE CADENA CON BRECHAS
TIENE GAPS ESTE GRUPO TIENE GENOMA DE ADN DOBLE CADENA QUE SE
COPIAN A ARN POR LA RETROTRANSCRIPTASA QUE TRAE CONSIGO EL VIRUS,
Hay algo con respecto al gap, los nucleotidos que se llevo dentro de la capside
sson los que terminan de replicar el genoma
Pero ni idea, hay que buscar
GENOMAS ARN
Pueden ser doble o simple hebra, pueden ser segmentados, de polaridad
negativa, positiva, hay
Las celulas no son capaces de replicar arn por eso los virus necesitan tener
estrategias para replicar su genoma arn polimerasa arn dependiente, o la
producen o la llevan consigo o necesitan una retrotranscriptasa de ARN a ADN
Grupo 3 arn doble cadena
No dependen de las polimerasas celulares, tienen estas polimerasa ene l virion,
Rotavirus y picobirnavirus genoma segmentado.
Lo de ARN polimerasa ARN dependiente es importante.
GRUPO 4 SIMPLE HEBRA DE POLARIDAD POSITIVA,
Directamente pueden ser traducidos por los ribosomas,
No se replica usando ADN intermedio
La replicacion se da en el citoplasma, no esta pendiente del ciclo celular
CORONAVIRUSSSSSS
ALGUNOS GENOMAS ESTAN UNIDOS COVALENTEMENTE, ES DECIR TIENEN UNA
PROTEINA UNIDA COVALENTEMENTE AL ARN DEL GEN, LA SPIKE DEL
CORONAVIRUS
GRUPO 5 ARN SIMPLE HEBRA DE POLARIDAD NEGATIVA
NECESITAN UN ADN INTERMEDIO PARA SU REPLICACION, EL ARN VIRAL ES
NEGATIVO POR ENDE NECESITA OBTENER LA FORMA POSITIVA PARA QUE LOS
RIBOSOMAS LA RECONOZCAN Y PUEDA SER TRADUCIDA SUS PROTEINAS
Tenemos orthomixoviridae
Grupo 6, retrovirus
Virus de arn simple cadena polaridad positiva, se replica en la celula huesped
mediante la transcripcion inversa, es decir, mediante la formacion de ADN a
partir del molde de ARN
MECANISMOS DE GENERACION DE DIVERSIDAD
EXISTEN DIVERSOS MECANISMOS DE GENERACION DE DIVERSIDAD
MUTACIONES
RECOMBINACION
REORDENAMIENTO
las mutaciones
pueden ser sinonimas, es decir silenciosas no producen ningun cambio cuando
se traducen a proteinas, las proteinas no mutan, las proteinas cambias pq el
que muto es el acido nucleico
esta mal decir “la proteina esta mutada’ lo que esta mutado es el arn de donde
vino esa proteina.
O sea lo que pasa es que las mutaciones que generan mas progenie son las
que se ven, y las que dejan progenie son aquellas que se adapten mejor al
medio, no es una cuestion de “muto tal proteina para que sea mas resistente al
frio” sino que ese error al azar le permitio generar una proteina mas resistente
que le llevo a sobrevivir en el ambiente inospito
Las mutaciones se dan con mas frecuencia en virus de arn , porque la ARN
polimerasa NO tiene actividad correctora de pruebas.
Podemos inducir mutaciones, por mutagenos quimicos in vitro e in vivo,
Ahora se hace mutagenesis dirigida, por adn recombinante usan enzimas de
restriccion
Tambien se puede hacer por recombinacion, que puede o no ser homologa.
Lo de eleccion de copa solo sucede en virus de arn y
La celula es infestada con 2 virus de arn , la arn polimerasa empieza a
polimerisar el virus 1 y despue cambia la polimerasa y va al virus 2 y queda
una combinacion de los virus parentales.
En ARN SEGMENTADO puede suceder el reordenamiento
Cuando mas de un virus infecta a una celula, en el citoplasma celular estan
todos los fragmentos de ambos virus y lo que ocurre es que se pueden
reordenar y encapsidar de manera aleatoria de un virus y otro virus y la
progenie va a ser una mezcla de ambos virus, esto ocurre con las pandemias
de virus H1N1 del 2009 del cerdo y cosas asi
CUASIESPECIES
Distribucuin dinamica de genomas relacionados pero NO son identicos, sujetos
al proceso continuo de variacion gen’etica y que actua como unidad de
selección (91-99% de similaridad nucleot’idica)
MANIPULACION GENETICA DE LOS VIRUS
Obtener la progenie viral , infeccion, transfectar celulas cual es la diferencia??
En uno uso el virus completo y en el otro solo el material genetico dentro de
una celula
Como se hace la vacuna de rabia?
Un plasmido por cada segmento, los 8 de la influenza, cada uno aislado en
distintos plasmidos y de ahí trajeron a la vida el virus de 1918 es decir el H1N1.
18-03-2024
MULTIPLICACION VIRAL
Moleculas defectivas, vs moleculas abortvas
Virus : parasito intracelular obligatorio
Virion: particula viral infecciosa. Fase extracelular, metabólicamente inactiva
Virus defectivo: particuals sin capacidad de replicarse
Virus satélites: virus asociados a otros virus, se necesitan de otros virus para
que se de el ciclo de ese virus
La particula viral se puede detectar por inmuniensayos,
Genes codificados en ambisense o sea de un sentido y del otro se ve en genes
doble hebra.
Susceptible: aquella celula que poseen loos receptores specificos que necesita
el virus para el reconocimiento
Permisiva, celuals que permiten la replicación exitosa de un virus en particular,
depende delos componentes intracelulares
RECEPTOR CELULAR: molecula celular a la que se le une el virus en el inicio de
la replicación
Tambien hay un Co receptor, es decir para algunos virus la unión con el
receptor celular no es suficiente por eso está el correceptor, para que ocurra la
infección
En la superficie
Las proteínas de la superficie celuar es ocupada por el ligando viral cambia el
perfil proteico de la celula, este hecho marca a la celula para que quede en
alerta o genera una alarma en el sistema inmunologico, a su vez cambia su
conformación proteica, para volverse resistente a ls virus
Proteínas que habitualmente participan del reconocimiento de virus
Toda la cápside es como un gran ligando que forma el capsómero, en cada
conjunto de proteína tenemos el que hace unión con el receptor
La unión de varios ligandos con la membrana celular hace que sea irreversible
EN EL CASO DE LA INFLUENZA
Lo que le da la especificidad es el enlace o glucosídico y que carbonos están
interaccionando en ese enlace en la unión entre la galactosa y el acido siálico
este enlace puede ser 2-3 o 2-6 y la neuroamidasa es una de las proteínas que
tiene influenza en su superficie, es capaz de reconocer esos enlaces y cliva,
eso permite que el virus se libere. Eso le da especificidad al virus.
HIV
Interacción CD4 y la proteína de superficie del HIV, encajan y se da la
interacción gracias a un residuo aminoacídico
Covid
A medida que iba mutando, iba aumentando la cantidad de residuos
aminoacídicos que interaccionaban con la proteína.
Aumentaba el punto de interacción con la celula y el virus
ETAPAS DE LA REPLICACION
Paso 1: encontrar la celula correcta, evento aleatorio
Paso 2: unirse al receptor especifico en la superficie celular (mas de un
receptor puede estar involucrado)
Paso 3: transferir el genoma
ETAPAS de la replicación
1. Adsorción
2. Entrada
3. Síntesis de macromoléculas
4. Enzamblaje
5. Maduración y liberación
ADSORCION
Interacción especifica entre el ligando viral y receptor
Determinada por el tropismo celular del virus
Ocurre gracias a la colision aleatoria entre el virus y la celula
El proceso puede ser altamente selectivo, un solo receptor viral en la celula o
no (promiscuo), DEPENDIENDO del viruos y de la distribución del receptor
Es un evento dependiente del pH PORQUE cambia el punto isoeléctrico de la
proteína, etc etc.
La temperatura no es tan crucial para el virus
LA ADSORCION ES EL EVENTO IRREVERSIBLE
ENTRADA
La entrada NO es un evento pasivo, REQUIERE ENERGIA, usa el de la celula
Según el tipo de virus la entrada puede ocurrir de distintas formas
- Entrada de virus envuelto
o Entrada por fusión de membrana: es decir una reorganización de
molecular entre los lipidios de la envoltura viral y los de la
membrana para que la nucleocápside quede expuesta en el
citoplasma, participa una proteína viral que tenga actividad
fusogenica.
o PARAMIXOVIRIDAE
o HIV
- Entrada por endocitosis viropexia
o Ingreso a través de endosoma, no usan exclusivamente los virus
envueltos, sino que también los virus desnudos
o Igual hay una fusión de membranas a nivel endosoma
La membrana viral pasa a formar parte de la membrana citoplasmática
Por lo general el genoma viral nunca queda 100% expuesto, están protegidos
por proteínas virales
- ENTRADA VIRUS DESNUDO
o Endocitosis, tambien tienen 2 destinos posibles, el citosol o el
núcleo
o La acidificación del medio es un evento crucial para el desamblaje
de la cápside para que pueda quedar expuesto el genoma
Que son las clatrinas
Fase de eclipse
SINTESIS DE MACROMOLECULAS
TODOS CODIFICAN LA arn polimerasa dependiente de arn POLIMERASA VIRAL
PROTEINA BPG DE CEBADOR EN EL ARN
INTERNAL RIBOSOMAL SITE IRES
1 de abril de 2024
INMUNIDAD ANTIVIRAL
