MANUAL DE LABORATORIO

BIOQUÍMICA I
FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS Y DE LA SALUD
UNIVERSIDAD MARIANO GÁLVEZ DE GUATEMALA

EDICIÓN 2025
Este Manual de Laboratorio ha sido realizado gracias a la ayuda de los docentes titulares y de laboratorio del curso de
Bioquímica I, del Campus Central, el cual cuenta con la aprobación de:

Dr. Rafael Espada

Decano
Facultad de Ciencias Médicas y de la Salud

Dra. Patricia Salazar

Vicedecana
Facultad de Ciencias Médicas y de la Salud

Su fin es exclusivamente académico y su circulación restringida a los docentes y estudiantes de la Facultad de Ciencias
Médicas y de la Salud, en sus distintas sedes de la Universidad Mariano Gálvez de Guatemala.

© Derechos Reservados 2024

Universidad Mariano Gálvez de Guatemala Facultad de Ciencias Médicas y de la Salud Carrera de Medicina
3a. Avenida 9-00 zona 2, Interior Finca El Zapote, Guatemala, Centro América
Tel.: +502 2411-1800

Se prohíbe la reproducción total o parcial de este documento, podrá efectuarse mediante la autorización expresa de la Facultad de Ciencias
Médicas y de la Salud, Universidad Mariano Gálvez de Guatemala.

2
 INDICE

INTRODUCCIÓN Y BIENVENIDA 4
NUESTROS VALORES 5
CALENDARIZACIÓN DE PRÁCTICAS DEL LABORATORIO 6
Practica No. 0 7
INTRODUCCIÓN AL TRABAJO DENTRO DEL LABORATORIO DE BIOQUÍMICA NORMATIVA DE COMPORTAMIENTO
Y DE TRABAJO

Práctica No. 1 13
Manejo de Soluciones Fisiológicas

Practica No. 2 16
Uso del potenciómetro para medición del pH

Practica No. 3 19
Relación entre estructura y función en una proteína

Practica No. 4 22
Métodos de identificación de monosacáridos y almidón

Practica No. 5 26
Propiedades físicas y químicas del almidón

Practica No. 6 29
Identificación de Pentosas y Cetosas

Practica No. 7 33
Introducción a la Espectrofotometría y Curvas de calibración

Practica No. 8 42
Determinación de glucosa en muestra sanguínea

Práctica No. 9 45
Curva de tolerancia a La glucosa

Práctica No. 10 48
Prueba de la Hemoglobina Glucosilada (HbA1) como control del nivel de glucosa en sangre

ANEXOS 50

3
 INTRODUCCIÓN Y BIENVENIDA

Bienvenidos al laboratorio del curso de bioquímica I; este es el inicio de su interesante viaje de conocimiento respecto
a los procesos biológicos que permiten la vida y la salud, relacionados con moléculas y metabolismo bioquímicos.

El presente manual tiene como objetivo servir como guía práctica para la realización de las actividades experimentales
y de análisis que complementarán su aprendizaje y comprensión de los temas del curso. A lo largo del semestre
aprenderá conceptos teóricos-prácticos clave en el análisis de valores bioquímicos obtenidos al evaluar las vías
metabólicas relacionadas con carbohidratos.

Las prácticas incluidas en este manual están diseñados para complementar y reforzar los conocimientos adquiridos en
las clases magistrales y permitirán aplicar y entrenar su capacidad de análisis y correlación clínica. Cada actividad incluye
un breve contexto teórico, así como instrucciones paso a paso para guiarlos en la realización de las técnicas, mediciones
y análisis requeridos. Encontrarán también información sobre el equipamiento necesario, los reactivos a utilizar y los
procedimientos de seguridad que deben seguirse rigurosamente dentro del laboratorio.

Les recomendamos leer completamente cada protocolo antes de comenzar la práctica. No duden en consultar a sus
docentes en caso de cualquier duda o problema durante la realización de los experimentos. Es importante que se
familiarice con lo que se va a realizar y se sienta preparado para aprovechar las oportunidades de aprendizaje y, en
caso necesario, responder de forma pronta a cualquier dificultad que se presente; esto les permitirá sacar el máximo
provecho al laboratorio.

Esperamos que aprenda mucho y disfrute de esta experiencia práctica. ¡Mucho éxito en sus estudios y que tengan un
excelente semestre!

4
 NUESTROS VALORES

Integridad
Respeto
Actuar
Profesional

Espíritu de Nuestros Valores

servicio
Excelencia

Ciudadanía
Innovación

5
 Practica No. 0

INTRODUCCIÓN AL TRABAJO DENTRO DEL LABORATORIO DE BIOQUÍMICA

NORMATIVA DE COMPORTAMIENTO Y DE TRABAJO

Introducción
Trabajar dentro de un laboratorio de cualquier índole supone un grado de responsabilidad del cual muchos
estudiantes no están conscientes. Es necesario que cualquier persona que se encuentre dentro de las instalaciones del
laboratorio sepa comportarse de forma adecuada. Un mal comportamiento no solamente tendrá implicaciones
disciplinarias, sino podría también tener serias implicaciones de salud y seguridad. Es absolutamente necesario que
tanto el instructor como el estudiante que trabaja dentro del laboratorio sepan que una acción fuera del comportamiento
adecuado puede desencadenar un serio accidente que puede afectar tanto la salud y seguridad propia como la de los
demás. Para evitar este tipo de situaciones, se ha diseñado una práctica de introducción para dar a conocer al
estudiante lo que se espera de él o ella durante el transcurso de los laboratorios.

Se dará a conocer al estudiante varios documentos que incluyen las reglas generales de comportamiento dentro del
laboratorio. La siguiente semana se hará una prueba corta escrita sobre el contenido de estos documentos y se evaluará
también el cumplimiento de los reglamentos expuestos.

Objetivos
Que el estudiante:
1. Conozca la responsabilidad que adquiere al trabajar en del laboratorio de Bioquímica I.
2. Conozca el trabajo que se espera de él o ella antes, durante y después de realizarse un laboratorio de Bioquímica
3. Se comprometa con los Laboratorios del Instituto a guardar compostura tanto en su rendimiento académico
como en su comportamiento personal, de manera que pueda obtener el mayor provecho de su experiencia en
el laboratorio.

Alcance
Que el estudiante:
1. Identifica el trabajo que se espera de él o ella antes, durante y después de realizarse una actividad del laboratorio
de Bioquímica I.
2. Comprende las normas de bioseguridad obligatorias en el laboratorio de Bioquímica I

Reglamento para el estudiante

Para que un estudiante tenga derecho a participar en las sesiones del Laboratorio de Bioquímica, debe cumplir con
las siguientes reglas:

1. Estar inscrito en el curso teórico de Bioquímica I.

2. Guardar un comportamiento adecuado en las actividades del laboratorio, adhiriéndose completamente al
REGLAMENTO DEL LABORATORIO establecido por el I2QB3 y la normativa interna de laboratorio del curso. El faltar al
buen seguimiento de las normas tiene consecuencias que pueden llegar hasta el retiro definitivo del laboratorio.
Ver reglamento de I2QB3 en anexo 1.
3. Asistir al laboratorio de manera PUNTUAL. El alumno que no se presente puntualmente a la puerta del laboratorio,
perderá el derecho de presentar examen corto. El alumno que se presente después de haberse presentado las
instrucciones para el laboratorio, perderá el derecho de ingresar a la práctica.
4. De no asistir o participar en una práctica, el alumno pierde automáticamente el derecho a presentar todos los
componentes de la nota de esa práctica, teniendo un cero inmediato. Sin embargo, si el alumno justifica su
ausencia (razones médicas o por luto) con reconocimiento y autorización de Coordinación de la carrera, la nota de
ese laboratorio será eliminada del promedio para obtener la nota final. Independientemente que su ausencia sea
justificada o no, es responsabilidad del alumno ponerse al día con el contenido de la práctica perdida.
5. Haber cumplido con las tareas preparativas de cada práctica, las cuales incluyen, pero no se limitan a, la información
solicitada en el cuaderno, una lectura a conciencia de la práctica y cualquier investigación previa que se haya

7
 solicitado (escrita o no). Se practicará un examen corto al inicio o durante la práctica para asegurar que el alumno
conoce el tema a tratar. Queda a discreción del instructor permitir la participación de un alumno que evidentemente
no maneja el conocimiento previo requerido.

6. Utilizar su equipo de protección personal todo el tiempo que se encuentre dentro de las instalaciones del laboratorio.
Como equipo de protección personal se incluye: bata larga (siempre cerrada), de manga larga, sin bolsas en los
costados y deberá contar con su respectivo nombre y logo de la Universidad, anteojos de seguridad y zapatos
cerrados. El no cumplir con esta regla es causa justificada para retirar a un alumno del laboratorio del día,
perdiendo el derecho a presentar examen, cuaderno, práctica y reporte. De reincidir, el alumno incluso puede ser
retirado definitivamente de laboratorio.
7. No llevar consigo bolsas, mochilas ni artículos de uso personal (celulares, localizadores, joyas etc.). De descubrirse
que un alumno porta consigo una de estas pertenencias, ésta se confiscará y se devolverá al final de la práctica.
No utilice su teléfono móvil como calculadora; lleve la propia. El laboratorio no se hace responsable de guardar
ninguna pertenencia personal de los alumnos durante la práctica. Es responsabilidad del estudiante asegurar sus
pertenencias personales ANTES de llegar al laboratorio.

• Trabajo antes de llegar al laboratorio: El Pre-Lab

o Cuaderno de Laboratorio
El cuaderno de laboratorio está diseñado para cumplir como evidencia del trabajo que se ha realizado previo y
durante cada práctica de laboratorio. Lo más valioso de su cuaderno de laboratorio es el contenido. Aunque su
presentación es importante, no es lo principal en un cuaderno de laboratorio, por lo que el estudiante no debe temer a
hacer cualquier anotación dentro de su cuaderno en cualquier momento.
Cada estudiante debe poseer un cuaderno de laboratorio que cumpla con ciertas especificaciones establecidas. Si
alguna persona desea usar un cuaderno reciclado (previamente usado pero con espacio limpio suficiente para utilizarlo)
puede hacerlo siempre y cuando se identifique claramente, esté forrado con el color asignado a la sección y plástico.
No puede usarse el mismo cuaderno de laboratorio para dos cursos simultáneos en un mismo ciclo.
Un trabajo que no puede leerse simplemente no tiene validez alguna, por lo que se espera que el estudiante tenga
un cuaderno tan ordenado como sea posible, y sobre todo, legible. No se permitirá el uso de lápiz o de corrector en el
mismo.

El laboratorio es un lugar donde nunca debe llegarse a improvisar. Es necesario asegurar que el estudiante esté
familiarizado con el tema a tratarse en el laboratorio, así como con el procedimiento que se seguirá. Como ayuda al
estudiante, se ha diseñado un cuestionario que llamaremos Pre-lab. Responder el Pre-lab a conciencia tiene la ventaja
de ayudar a un mejor rendimiento para el examen corto que se realizará en cada práctica al inicio de la misma. Es
responsabilidad del estudiante el resolverlo a conciencia para asegurarse que se comprenderá el trabajo que se va a
realizar durante el laboratorio. Se incluye en el cuaderno, colocando pregunta y respuesta, así como las referencias
bibliográficas válidas consultadas al final.

El cuaderno de laboratorio deberá contener las siguientes secciones:

Sección Contenido Valor1

Fecha de realización Indicar claramente la fecha en que se llevará a cabo la práctica de --
laboratorio.
Encabezado Indicar claramente el número y título de la práctica que se --
llevará a cabo en el laboratorio.
Pre-laboratorio Deberá incluir las preguntas indicadas en la práctica 50%
correspondiente con su respectiva respuesta. Al final deberá
colocarse las referencias bibliográficas válidas consultadas (en
formato Vancouver)
Fichas de toxicidades Es necesario conocer e incluir la toxicidad del reactivo que se 20%
manejará. Es de vital importancia incluir los efectos de exposición,
forma de aplicar primeros auxilios y la forma adecuada de
desecho.

8
 Diagrama de flujo Enumerar los pasos a seguir durante todo el procedimiento de la 20%
práctica. Debe indicarse claramente cada paso, incluyendo los
aspectos preparativos involucrados. Debe presentarse en forma de
un diagrama de flujo para hacer más fácil el seguimiento del
procedimiento.
Tablas de resultados Se debe preparar por adelantado las tablas que se usarán para 10%
registrar los resultados de la práctica.
Observaciones Es necesario que después de anotar los resultados obtenidos en la --
práctica, se anote también cualquier observación que
posteriormente pueda explicar una alteración en los resultados. No
debe confiarse en la memoria ni debe recurrirse a papelitos sueltos
para anotar esta clase de información (Durante el laboratorio)
Nota total del cuaderno de laboratorio 100%
1
Valor: Algunos rubros no tienen valor asignado, ya que su presencia no agrega puntos de nota al
laboratorio. Sin embargo, su ausencia sí resta puntos de la nota del cuaderno

• Trabajo dentro del Laboratorio

Como se indicó anteriormente, se espera que el estudiante haga su mejor esfuerzo para aprovechar al máximo las
actividades que se proponen en el laboratorio. El trabajo que se realice durante del laboratorio deberá ser registrado
por cada estudiante a manera de poder comprobar qué se hizo, cómo se hizo y cuándo se hizo. Luego de comprender
lo solicitado como parte de la práctica el alumno deberá realizar a cabalidad dichas actividades.

o Examen Corto
Al inicio, durante o al final de cada laboratorio se realizará un examen corto que evidenciará el conocimiento con el
que se preparó el estudiante para la práctica. El alumno pierde el derecho a esta prueba si llega tarde o no se presenta
a las actividades programadas para el laboratorio

o Formato de resultados y anotaciones (en el cuaderno)

Este está diseñado para cumplir con evidencia del trabajo que se ha realizado durante cada práctica de laboratorio.
Lo más valioso es el contenido pues de ello dependerá la apropiada comprensión, análisis y discusión de los resultados,
que deberán ser plasmados en los reportes o actividades de entrega que se soliciten al final de cada práctica.
Un formato que no puede leerse simplemente no tiene validez alguna, por lo que se espera que el estudiante tenga
un cuaderno tan ordenado como sea posible, y sobre todo, legible. No se permitirá el uso de lápiz o de corrector en el
mismo.

• Trabajo posterior al laboratorio

La principal forma de evaluación del trabajo hecho durante el laboratorio, así como la comprensión obtenida después
de realizado el laboratorio, es la elaboración de documentos solicitados o un reporte del mismo. En estos se evidencia
el nivel de comprensión y la calidad del trabajo realizado por el estudiante. Si la evidencia solicitada consiste en un
reporte, este deberá cumplir con las siguientes condiciones:

o Reporte del Laboratorio

El reporte de laboratorio tiene doble función: permite al estudiante entrenarse en el arte de la escritura científica y
le brinda la oportunidad de demostrar qué tanto aprendió durante la realización de la práctica. Para presentar un buen
reporte de laboratorio, el estudiante debe esforzarse en varios aspectos. Primero, debe asegurarse que el contenido
del reporte sea acorde al tema que se trató en el laboratorio. Segundo, es necesario que muestre tanto una buena
redacción como una buena ortografía. Como futuros médicos, es importante que los estudiantes ejerciten su habilidad
de escribir bien, ya que forma parte de la buena formación de todo profesional.

9
 El reporte debe contener las siguientes secciones:

Sección Contenido Valor1

Carátula Debe llevar claramente toda la información de identificación del --
estudiante y de la práctica
Resumen o Sumario Como su nombre lo dice, debe resumir lo realizado durante la 10
práctica, incluyendo el o los principales resultados y conclusiones.
No debe cubrir más de 10 líneas de escritura.
Datos, Cálculos y Debe presentar de la manera más ordenada posible, los datos, 20
Resultados cálculos y resultados obtenidos en la práctica. De preferencia, debe
hacerse en tablas de fácil lectura, a manera que alguien que no
haya estado en el desarrollo de la práctica pueda entenderlo con
facilidad.
NO se aceptan datos, cálculos y resultados escritos a mano. De
presentarlos así, se calificará con un cero esta sección.
Discusión de resultados Es la sección en donde el estudiante puede poner en práctica el 30
aprendizaje que haya obtenido. Debe discutirse posibles fuentes de
error y posibles formas de mejorar la ejecución y el rendimiento de
la práctica. No se trata de culpar a nadie por los errores cometidos,
sino más bien buscar las soluciones para evitarlos en futuras
ocasiones.
Conclusiones Como regla, no se puede concluir teoría ni un asunto que no haya 20
sido incluido en la discusión. Es necesario haber discutido un punto
para poder concluir al respecto
Anexos Debe incluir cualquier dato, cálculo, tabla, gráfica, imagen o 10
información que apoye lo que discute. Deberá ser citado
apropiadamente en la discusión, de no ser así obtendrá 0 pts.
De no existir anexos pertinentes o solicitados, la nota se añadirá a
los puntos de la discusión de resultados.
Bibliografía Numeradas y escritas en formato VANCOUVER. 10
Nota total del reporte de laboratorio 100
1
Valor: Algunos rubros no tienen valor asignado, ya que su presencia no agrega puntos de nota al
laboratorio. Sin embargo, su ausencia sí resta puntos de la nota.

Formato para entregar el REPORTE DE LABORATORIO:

• Hojas tamaño carta.

• Fuente: Calibri 11.
• Interlineado sencillo (1.0)
• Título de las tablas “Entre comillas”.
• Fuente de los datos obtenidos, Calibri 8.
• Las conclusiones, se deben escribir con viñetas.
• Si incluye imágenes en la sección de ANEXOS debe colocar el número de la figura, nombre y fuente.

El reporte o documento solicitado como evidencia de la realización de las actividades de laboratorio debe ser
entregado al ingreso del siguiente período de laboratorio de realizada la práctica. No se recibirán reportes parcial o
totalmente escritos a MANO (salvo excepciones precisas indicadas por su instructor), ni en formato electrónico. Estos
deberán entregarse debidamente engrapados. Se entregará una hoja de control de entrega de reporte, donde se
anotará semanalmente la fecha en que se entregó el informe. No se recibirán documentos por otras vías, como
correo electrónico o mensajes personales, así como no se recibirán fuera del tiempo asignado.

Toda aquella persona que se haya ausentado por cualquier motivo de una práctica, NO TIENE DERECHO a
entregar un reporte, sin importar si la falta ha sido justificada o no. De ser justificada, la nota de dicho laboratorio se
eliminará, a manera de no ser tomada en cuenta en el cálculo de la nota final. Sin embargo, esto no quiere decir que

10
el estudiante se libere de la evaluación del tema de la práctica durante las pruebas finales del laboratorio del curso. ES
RESPONSABILIDAD DEL ALUMNO investigar el tema tratado durante la práctica que faltara, independientemente
si la falta ha sido justificada o no.

IMPORTANTE: NO se tolerará ningún tipo de copia en los reportes de laboratorio, entre grupos del mismo
laboratorio o entre grupos de otras secciones del curso. Cualquier indicio de plagio (reproducción no autorizada de una
publicación, palabra por palabra, incluyendo Internet) será castigado con una nota de cero en el reporte. Cualquier
indicio de copia (entrega de reportes idénticos por parte de dos o más alumnos o grupos) será evaluado como un cero
para todos aquellos estudiantes que tengan el reporte igual o con similitudes evidentes, sin importar quién lo generó
ni quién lo copió. Todo caso quedará documentado, y una reincidencia puede significar el retiro definitivo del o los
alumnos involucrados del laboratorio del curso.

Las actividades que se entreguen deberán de ir debidamente identificadas de la siguiente manera:

UNIVERSIDAD MARIANO GÁLVEZ DE GUATEMALA

FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS Y DE LA SALUD
CARRERA DE MEDICINA
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA I, SECCIÓN ___

MESA DE LABORATORIO No. ___

NOMBRE DE ALUMNO CARNÉ NÚMERO DE PUESTO
NOMBRE DE ALUMNO CARNÉ NÚMERO DE PUESTO
NOMBRE DE ALUMNO CARNÉ NÚMERO DE PUESTO
NOMBRE DE ALUMNO CARNÉ NÚMERO DE PUESTO
NOMBRE DE ALUMNO CARNÉ NÚMERO DE PUESTO

PRÁCTICA No. ___

-TÍTULO DE LA PRÁCTICA-

… INFORMACIÓN DEL REPORTE…

11
Formato de ficha toxicológica a incluir

Nombre del reactivo:

Exposición Primeros auxilios

Piel

Ojos

Ingestión

Forma adecuada de descarte:

Referencias:

Evaluación de todo el trabajo del laboratorio

El trabajo de Laboratorio se evaluará de la siguiente manera:

Rubro por evaluar Puntaje

Pre-laboratorios / cuaderno 1 pt.
Exámenes cortos 4 pts.
Reportes de laboratorio 5 pts.
Hoja de trabajo 0.5 pt.
Caso clínico 0.5 pts.
Actividad 1 pt.
Examen parcial de Laboratorio 3 pts.
Examen final de Laboratorio 5 pts.
Nota Total de Laboratorio 20 pts.

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 Práctica No. 1
Manejo de Soluciones Fisiológicas

Introducción
Existe una gran variedad de formas de expresar la concentración de una solución. Sin embargo, las formas comunes
de hacerlo también cambian de una ciencia a otra. Es decir, las formas más comunes de indicar concentraciones no
son iguales en un laboratorio de análisis químico que en un laboratorio clínico. El médico debe estar preparado para
identificar estas diferencias en expresión para poder darle una correcta interpretación a cualquier medición que se le
presente, ya sea de un análisis químico (como un análisis de algún fármaco) o de un análisis clínico (de un paciente).

Objetivos
Que el estudiante
1. Se familiarice con la diversidad de formas de expresar la concentración de una solución.
2. Explique en forma clara el uso correcto de utensilios de medida necesarios en la preparación, aplicación
y/o administración de medicamentos.
3. Sea capaz de convertir unidades de peso, volumen, tiempo y concentración.
4. Prepare soluciones adecuadamente.

Alcance
Al finalizar la práctica se espera que el estudiante logre las siguientes competencias:
1. Explica el concepto de soluciones y su concentración.
2. Realiza los cálculos necesarios para preparar soluciones.
3. Maneja cristalería volumétrica adecuadamente.
4. Prepara una solución fisiológica adecuadamente.
5. Hace conversiones de unidades de peso, volumen, tiempo y concentración.
6. Argumenta la importancia del uso adecuado de cantidades y dosificación.

Antecedentes
Una solución puede definirse como una mezcla homogénea de una o más sustancias dispersadas dentro de un
medio disolvente. El componente de mayor proporción es quien actúa como solvente (también llamado disolvente),
mientras que los que se encuentren en menores proporciones (puede ser uno o más) son los llamados solutos. Las
propiedades de la solución no dependen tanto del tamaño de las moléculas sino de la cantidad de ellas presentes en
una cantidad específica de la solución.
En el ámbito clínico médico se hace uso de diferentes tipos de soluciones, cuyos usos son tan diversos como la
rehidratación o suplementación de componentes bioquímicos de los cuales el paciente presente una deficiencia. Algunas
soluciones son necesarias para la adecuada administración de medicamentos.

Pre-laboratorio
1. Investigue la composición de la solución de Hartman.
2. Haga un cuadro comparativo sobre los diferentes tipos de sueros de rehidratación oral. Incluya:
a. el nombre del tipo de suero,
b. su composición
c. los casos en los que puede ser utilizado.
3. Investigue las diferentes formas de dosificación de medicamentos en cuanto a volumen, especialmente para
niños, y su conversión a mililitros (onzas, cucharaditas, gotas, etc.)
4. ¿Qué es una solución fisiológica y que se refieren con eso?
5. Calcule la normalidad de una solución de 1L con 0.7 g de NaCl
6. En Guatemala se expresa la concentración de glucosa en sangre como mg/dL, mientras que en otros países es
milimoles/L. ¿Cuál es el valor normal de glucosa en sangre en milimoles/L?

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 PRÁCTICA DE LABORATORIO

Materiales

a. Reactivos
- Dextrosa (Glucosa), grado reactivo
- Agua destilada

b. Cristalería
- Probeta de 10mL y 50mL
- Beaker de 150 mL
- Varilla de vidrio
- Vidrio de reloj
- Balón aforado de 1L

c. Instrumentación
- Papel parafinado
- Espátula para pesar
- Pizeta con agua destilada
- Taza (dos tazas caseras por mesa, proporcionado por los estudiantes)
- Pacha de plástico con graduación (dos por mesa, proporcionado por los estudiantes)
- Cucharita de café de uso casero (dos por mesa, proporcionado por los estudiantes)
- Cuchara sopera de uso casero (dos por mesa, proporcionado por los estudiantes)
- Cuchara medidora para dosificación pediátrica (una por mesa, proporcionado por los estudiantes)
Procedimiento

I. Preparación de soluciones: Dextrosa al 5%

- Calcule el peso de dextrosa que usará para preparar 50 mL de una solución de dextrosa al 5%.
- Prepare su vidrio de reloj, tárelo (¿qué significa tarar?) y obtenga la cantidad calculada de dextrosa.
- Disuélvala en el beaker de 100 mL, asegurándose de no sobrepasar los 50 mL.
- Transfiera la solución resultante al balón aforado de 50 mL y afórelo (llenar con agua destilada hasta la marca
en el cuello del balón).
- Determine cuantas calorías contiene esta solución.

II. Preparación de SRO

- Se seleccionará una taza de cada fila y se llenará el pichel o recipiente con 1L de agua del chorro.
- Adicionar el sobre y mezclar con varilla de vidrio
- Transfiera la solución al balón aforado de 1L y determine si necesita más agua o tiene exceso.
- Realice el mismo procedimiento con la otra taza
- Anote sus observaciones

III. Comparación de utensilios caseros con no caseros

- Con agua destilada comparar los volúmenes de:
• 1 onza de la pacha de plástico y transfiérala a la probeta de 50mL, mida y reporte.
• 1 Cucharadita obtenida de la cucharita de uso casero y transfiérala a la probeta de 10 mL, mida y reporte.
• 1 Cucharada obtenida de la cuchara de uso casero y transfiérala a la probeta de 50 mL, mida y reporte.
• 1/2 Cucharadita obtenida de la cucharita de dosificación pediátrica y transfiérala a la probeta de 10 mL,
mida y reporte.
• 1 Cucharadita obtenida de la cucharita de dosificación pediátrica y transfiérala a la probeta de 10 mL, mida
y reporte.

14
Bibliografía de referencia
1. Burtis, C. A. y E. R. Ashwood. 2001. Fundamentals of Clinical Chemistry. 5ª. Edición. W. B. Saunders
Company. pág. 16-18
2. Kaplan, L. A. y A. J. Pesce, S. C. Kazmierczak. 2003 Clinical Chemistry. Theory, Analysis, Correlation. 4ª.
Edición. Mosby, Inc. pág. 34-36
3. Nordmann, J. 1986. Análisis Cualitativo y Química Inorgánica. México. Compañía Editorial Continental, S. A.
de C. V. pág. 33-44

15
 Practica No. 2
Uso del potenciómetro para medición del pH

Introducción
Las mediciones de pH en algunos fluidos corporales son de gran ayuda en el diagnóstico de enfermedades. En
algunos fluidos es normal y deseable poseer un pH ácido mientras que en otros, pH neutro o hasta básico. Un médico
debe comprender a cabalidad el significado del valor del pH no solamente como herramienta de diagnóstico, sino para
comprender el proceso metabólico que puede estar provocando la alteración de este valor, así como la forma correcta
de tratarlo y corregirlo. En esta práctica se pretende reforzar el concepto de pH y de mostrar al alumno la forma como
se determina el pH de una solución y las causas de su desviación, usando un ejemplo similar al utilizado en el control
del pH en sangre a través del proceso de respiración.

Objetivos
Que el estudiante
1. Explique el concepto de pH de una solución.
2. Se inicie en el manejo de soluciones buffer
3. Conozca la utilidad del pH como parámetro de análisis de varios fluidos corporales.
4. Determine el pH de una muestra desconocida.

Alcance
Al finalizar la práctica se espera que el estudiante logre las siguientes competencias:
1. Identifica qué son las soluciones buffer
2. Reconoce la utilidad del valor de pH como parámetro de análisis clínico de varios fluidos corporales.
3. Determina el pH de una muestra.
4. Conoce qué factores pueden afectar la medición apropiada del pH de una solución.

Antecedentes
Debido a que el agua es el medio de los sistemas biológicos, es indispensable considerar el rol de esta molécula en
disociación de iones de las moléculas biológicas. Aunque el agua es en esencia una molécula neutra, se ioniza en una
pequeña proporción. Esta disociación puede describirse con una ecuación de equilibrio simple:
H2O ↔ H+ + OH
Expresar la concentración de hidrógenos en una solución puede ser tediosa, ya que las concentraciones posibles
cubren un amplio rango. Una forma sencilla de hacerlo es expresando en forma de pH, el cual se define como sigue:
pH = -log[H+]
Los ácidos pueden definirse como donadores de protones, mientras que las bases pueden considerarse aceptores
de protones. En términos de pH, los ácidos poseen valores de pH por debajo de 7.0, mientras que las bases lo poseen
por encima del mismo valor. Los ácidos y bases fuertes se disocian por completo en medio acuoso, formando un grupo
de átomos con carga positiva (cationes) y otro con carga negativa (aniones); por el contrario, los ácidos y bases débiles
se ionizan levemente produciendo un equilibrio entre la especie molecular neutra y los iones producidos. Debe notarse
que, al estar en este equilibrio, el pH de la solución que contiene la especie no cambia, aunque se agreguen volúmenes
relativamente grandes de ácido o base. Este fenómeno se conoce como amortiguación y es de suma importancia en
los sistemas bioquímicos del cuerpo humano. En la mayoría de estudios bioquímicos, es importante realizar los
experimentos que requieren el consumo de iones H+ u OH- en una solución de un agente amortiguador que posee un
pH de equilibrio (también conocido como pK) muy cercano al pH óptimo para el experimento.
Un ejemplo: amortiguación en la sangre

El valor del pH en la sangre se mantiene dentro de un rango muy limitado alrededor de 7.4. Aún cambios
relativamente pequeños desde este valor pueden causar graves consecuencias metabólicas. Por lo tanto, el organismo
recurre a amortiguación para mantener la homeostasis. Aunque la sangre contiene muchos tipos de cationes (Na+, K+,
Ca2+ y Mg2+) y aniones (Cl-, PO43- y SO42-) que pueden actuar en la amortiguación, los principales amortiguadores de
la sangre son la hemoglobina en los eritrocitos y el ion bicarbonato en el plasma. En el caso de la hemoglobina, la
amortiguación se logra por la ionización de los anillos imidazol de las histidinas dentro de la proteína.

16
 La formación del ion bicarbonato a partir de CO2 y H2O permite la transferencia del CO2 relativamente insoluble de
los tejidos a los pulmones, donde se expulsa. La principal fuente de CO2 en los tejidos es la oxidación de los compuestos
de carbono ingeridos. La relación entre el ácido carbónico y el ion bicarbonato formado se muestra en las siguientes
ecuaciones.
CO2 + H2O ↔ H2CO3 ↔ H2CO3 ↔ H+ + HCO3-

Estas reacciones ocurren principalmente dentro de los eritrocitos, ya que casi todo el CO2 que deja los tejidos por
medio del endotelio capilar es atrapado por estas células. La primera reacción está catalizada por la enzima anhidrasa
carbónica. La ionización del ácido carbónico luego ocurre de forma espontánea, produciendo el ion bicarbonato más
un ión hidrógeno.

Potenciometría
Se conoce como potenciometría a la medición de una diferencia de potencial eléctrico entre dos electrodos. Estas
mediciones se hacen a través de un electrodo, el cual forma parte de un aparato mayor llamado potenciómetro.
Existen varias clases de electrodos, según el parámetro que desea medirse. Usando un potenciómetro puede medirse,
por ejemplo, la concentración de iones, tales como calcio, sodio, potasio e hidrógeno. En el caso de las mediciones de
pH, el electrodo que se utiliza es especial, ya que detecta únicamente concentración de iones hidrógeno (H+).
Los electrodos sensibles a concentraciones de iones hidrógeno están fabricados de un tipo especial de vidrio, con
un grosor generalmente de 10 a 100 µm. La sensibilidad de este vidrio varía con la temperatura, por lo cual es
importante realizar las mediciones de pH a una temperatura constante. Usualmente, el vidrio se fabrica en forma de
bulbo para medir pH en soluciones y en forma plana para medir pH en superficies. El caso especial de realizar
mediciones de pH en sangre requiere electrodos especiales conocidos como electrodos de capilar.

Pre-laboratorio
1. ¿Cuál es el pH normal en una muestra de orina? ¿De una muestra de sangre?
2. ¿De qué depende el valor del pH de una solución?
3. ¿Cómo ayuda la anhidrasa carbónica a mantener constante el pH de la sangre?
4. Investigue cuál es la importancia del control de pH tanto en orina como en sangre.

PRÁCTICA DE LABORATORIO

Materiales
a. Reactivos
- Solución buffer de fosfatos (fosfato ácido de potasio, fosfato di ácido de potasio)
- Solución de NaOH al 0.25%
- Agua destilada
b. Cristalería
- Beackers de 50 o 100 mL
c. Instrumentación
- Potenciómetro
- Pajilla plástica (brindada por el estudiante)
- Agitador magnético
- Estufa/agitador

Procedimiento

I. Medición de pH.
- En un beacker de 50 mL tome alrededor de 30 mL de agua destilada.
- Mida el pH según la explicación del instructor.
- Repita con una solución de NaOH 0.25% y una solución de fosfatos.

17
II. Efecto del CO2 en el pH
- Tome el beacker con agua destilada y vuélvale a medir el pH.
- Tendiendo el electrodo dentro de la solución y con agitación, sople hacia la solución usando una pajilla durante
alrededor de diez segundos, observando los cambios en pH. Si su potenciómetro no tiene lectura continua,
tome una lectura inicial antes de soplar, y una final después de haber soplado los diez segundos.
- Anote sus resultados.
- Repita con la solución de NaOH 0.25% y la solución buffer de fosfatos.

Observaciones importantes
En su informe, explique a qué se deben las diferencias y similitudes de efectos del CO2 en cada resultado. ¿Cuáles
de las soluciones son capaces de amortiguar el CO2 expelido en el soplo?

Anexo
1. Investigue cuál es la importancia del control de pH tanto en orina como en sangre.

Bibliografía de referencia
1. Burtis, C. A. y E. R. Ashwood. 2001. Fundamentals of Clinical Chemistry. 5ª. Edición. W. B. Saunders
Company. pág. 108-110
2. Kaplan, L. A. y A. J. Pesce, S. C. Kazmierczak. 2003 Clinical Chemistry. Theory, Analysis, Correlation. 4ª.
Edición. Mosby, Inc. pág. 110-112
3. King, M. W. 2004 “Ionic Equilibria Review” THE Medical Biochemistry Page. Indiana University School of
Medicine. Last Modified October 27, 2004.

18
 Practica No. 3
Relación entre estructura y función en una proteína

Introducción
La relación entre la estructura de una proteína y la función que ejerce es directa. Cualquier alteración que una
proteína tenga en su estructura se traduce en una alteración en su función. Algunas alteraciones son bastante
evidentes, y otras más sutiles, pero siempre se da. En la presente práctica se pretende ilustrar el efecto de la pérdida
de estructura (mediante desnaturalización) en la actividad de dos enzimas bien conocidas.

Objetivos
Que el estudiante:
1. Conozca la relación directa que existe entre la estructura y función de una proteína.
2. Observe el cambio en la actividad funcional de una proteína al perder su estructura nativa, al exponerse a
condiciones desnaturalizantes.

Alcance
Al finalizar la práctica se espera que el estudiante logre las siguientes competencias:
1. Conoce la relación directa entre estructura y función de una proteína.
2. Explica el cambio de función de una proteína al modificarla por medios de desnaturalización.
3. Conoce la acción de la catalasa y la amilasa.
4. Explica la importancia de la acción de la catalasa como mecanismo biológico de defensa, y de la amilasa para la
alimentación humana.
5. Conozca la acción de dos enzimas comunes: la catalasa y la amilasa.

Antecedentes
Las proteínas son moléculas altamente complejas y difíciles de visualizar incluso en sus versiones más simples. Se
ha utilizado esquemas que resalten ciertas características para poder comprender mejor la función de cada proteína.
Una de las funciones más importantes de las proteínas en el organismo es el de catalizar reacciones que mantienen el
delicado equilibrio de la vida. Como es el caso de todas las proteínas, un cambio en su estructura a cualquier nivel
puede significar una alteración significativa en la función que lleva a cabo dentro del organismo. En el caso específico
de las enzimas, un cambio en cualquier nivel de la estructura significa la incapacidad de catalizar una reacción, haciendo
que la misma no se lleve a cabo a la velocidad requerida.
Las enzimas son polímeros biológicos que catalizan múltiples procesos, haciendo posible la vida que conocemos.
Tienen una importante participación en la salud y la enfermedad, ya que determinan la velocidad a la que se lleva a
cabo las reacciones en el organismo y, por ende, los procesos fisiológicos.

Pre-laboratorio
1. Investigue la forma cómo actúa la catalasa y la amilasa en el organismo. Explique detalladamente las
reacciones que catalizan y su importancia para nosotros.
2. Indique claramente en qué tejidos humanos se encuentran y qué función cumplen dentro del tejido
mencionado.
3. ¿Qué medios físicos pueden alterar la función y la estructura de una proteína?

19
 PRÁCTICA DE LABORATORIO

Materiales

a. Reactivos
- HCl grado reactivo
- Solución de NaOH 40%
- Solución saturada de sal de mesa
- Solución de Almidón al 0.5%
- Solución de Lugol
- Peróxido de hidrógeno, 10 volúmenes
- Trozos de hígado
NOTA: por grupo total de estudiantes (toda la sección) deben entregar 4 onzas de hígado de
res UN DÍA ANTES DE LA PRÁCTICA. Acordar hora y lugar de entrega con catedrática.

b. Cristalería
- Pipetas pasteur
- Beakers de 250 mL
- Tubos de ensayo

c. Instrumentación
- Gradilla para tubos de ensayo
- Estufa
- Baño de María con gradilla y a 37 °C

Procedimiento

I. Función de la catalasa
- Numere en su gradilla tubos de ensayo de 1 a 8, y coloque en ellos las siguientes muestras:

Tubo de Muestra
Ensayo
1 Agua destilada
2 Trozo de hígado fresco
3 Trozo de hígado congelado
4 Trozo de hígado congelado y descongelado
5 Trozo de hígado fresco con 20 gotas de agua y calentado en Baño María (5
min)
6 Trozo de hígado fresco con 20 gotas de HCl
7 Trozo de hígado fresco con 20 gotas de NaOH al 40%
8 Trozo de hígado fresco con 20 gotas de NaCl saturada

- Agregue a cada tubo alrededor de un mililitro de peróxido de hidrógeno (o agua oxigenada). Asegúrese de
agregar el peróxido tubo por tubo, observando uno a uno el resultado. Importante: Si lo agrega a todos a la
vez, no podrá observar todos los resultados.

II. Función de la amilasa

- Numere en su gradilla tubos de ensayo de 1 a 7, y coloque en ellos las siguientes muestras (Consejo: piense
en un limón al momento de obtener su muestra):

20
 Tubo de Muestra
Ensayo
1 Agua destilada
2 Muestra de saliva
3 Muestra de saliva calentada en Baño María durante cinco minutos
4 Muestra de saliva con 20 gotas de HCl
5 Muestra de saliva con 20 gotas de NaOH al 40%
6 Muestra de saliva con 20 gotas de NaCl saturada
7 Agua destilada con 20 gotas de NaOH al 40%

- Agregue a cada tubo alrededor de un mililitro de solución de almidón al 0.5% e incube durante cinco minutos
a 37°C.
- Agregue una gota de Lugol a cada tubo.

Observaciones importantes
Explique en su reporte los resultados que observó, incluyendo el significado de las pruebas cualitativas del agua
oxigenada y del Lugol.

Anexo
1. Explique la función que tiene en nuestro organismo la catalasa y la amilasa.
2. Explique detalladamente las reacciones que catalizan y su importancia para nosotros

Bibliografía de referencia

1. McKee, T., McKee, J. R. 2003. Bioquímica. La Base Molecular de la Vida. 3ª Edición, traducida de la 3ª
Edición en inglés.
2. Murray, R., Mayes, P., Granner, D., Rodwell, V. 2001. Bioquímica de Harper. 15ª Edición en español,
traducida de la 25ª Edición en inglés

21
 Practica No. 4
Métodos de identificación de monosacáridos y almidón

Introducción
Los monosacáridos son la fuente de energía más importante e inmediata del ser humano, por lo que son uno de los
componentes más comunes dentro de los componentes de la dieta usual. Algunos se encuentran como tales, en su
forma libre, mientras que otros se encuentran formando disacáridos y hasta polisacáridos. Uno de los polisacáridos
más útiles para la nutrición humana es el almidón, ya que está formado enteramente por unidades de glucosa y es
posible digerirlo enteramente, a diferencia de la celulosa. El almidón, además de ser un alimento, también es utilizado
dentro de algunos procedimientos químicos como indicador de titulación gracias a su interacción con el yodo molecular.
En esta práctica se presenta al alumno los principales métodos de identificación de monosacáridos y del almidón para
determinar su presencia en varios alimentos.

Objetivos
Que el estudiante:
1. Diferencie experimentalmente entre algunos monosacáridos y el almidón.
2. Pueda identificar la presencia de algunos monosacáridos y almidón en artículos caseros.

Alcance
Al finalizar la práctica se espera que el estudiante logre las siguientes competencias:
1. Conoce la diferencia entre métodos cualitativos y cuantitativos
2. Interpreta resultados de pruebas cualitativas.
3. Realiza e interpreta satisfactoriamente pruebas específicas de identificación de monosacáridos y almidón.
4. Diferencia entre azúcares reductores y no reductores
5. Conoce la diferencia entre monosacáridos, disacáridos y polisacáridos.

Antecedentes

Los carbohidratos, que son las biomoléculas más abundantes de la naturaleza, se definen como polihidroxialdeídos
(aldosas) o polihidroxiacetonas (cetosas). Los carbohidratos más simples son unidades conocidas como
monosacáridos, tales como la glucosa o la fructosa. La unión de dos monosacáridos unidos por enlaces glucosídicos
forma un disacárido, como la sacarosa y lactosa. Cuando se unen más de dos monosacáridos en cadena por medio
de los mismos enlaces glucosídicos, se forma un polisacárido, tal como el almidón, el glucógeno y la celulosa.

Los carbohidratos son la fuente principal de energía para el organismo, contribuyendo con 50 a 60% del total de
calorías usadas por el mismo. Los carbohidratos complejos son una mejor fuente de energía que los azúcares simples
refinados. En el adulto sano, los carbohidratos se almacenan como glucógeno, principalmente en músculo y en el
hígado. Además de ello, se ha descubierto que los carbohidratos intervienen en procesos celulares importantes, tales
como la unión entre células, la transducción de señales y la endocitosis. Los carbohidratos también se encuentran
como partes integrales de otras biomoléculas, como glucoproteínas y glucolípidos. Algunos monosacáridos se
encuentran formando parte de las moléculas informativas principales, el ADN y el ARN.

Los carbohidratos que reducen los reactivos de Fehling o de Benedict y el reactivo de Tollens se conocen como
azúcares reductores. Todos los monosacáridos y la mayoría de disacáridos son azúcares reductores, con la
importante excepción de la sacarosa (azúcar de mesa) y la threalosa que no son reductores.

22
 Figura No. 1 Prueba de Benedict

Figura No. 2 Reacción de Molish

Pre-laboratorio
1. Diferencie entre azúcar reductor y azúcar no reductor.
2. Indique la base bioquímica de las pruebas de Benedict para monosacáridos y de Lugol para almidón.
3. Indique las bases bioquímicas para la prueba de Molish
4. Describa como vería una prueba positiva para carbohidratos si usara la prueba de Molish, Benedict y Lugol

PRÁCTICA DE LABORATORIO

Materiales

a. Reactivos
- Solución de glucosa (dextrosa) al 5%
- Solución de fructosa al 5%
- Solución de sacarosa al 5%
- Solución de almidón al 5%
- Alfa naftol al 5% en etanol
- Ácido sulfúrico concentrado

b. Cristalería
- Pipetas Pasteur
- Erlenmeyers de 250 mL
- 15 tubos de ensayo

c. Instrumentación
- Gradilla para tubos de ensayo
- Estufa

23
 Procedimiento

I. Preparación de tubos de ensayo

- En una gradilla coloque 15 tubos de ensayo y numérelos claramente como sigue, y coloque unas veinte gotas
de las siguientes soluciones en ellos.

Tubo Solución Tubo Solución

1 Agua destilada 9 Sacarosa
2 Glucosa 10 Almidón
3 Fructosa 11 Agua destilada
4 Sacarosa 12 Glucosa
5 Almidón 13 Fructosa
6 Agua destilada 14 Sacarosa
7 Glucosa 15 Almidón
8 Fructosa

II. Prueba de Molish para carbohidratos

- Al siguiente grupo de tubos (6-10) agregue 5 gotas de alfa naftol.
- Cuidadosamente, añada ácido sulfúrico concentrado deslizándolo por las paredes y sin agitar. Observe
cuidadosamente la interfase, buscando un anillo rojo o violeta.

TUBO MUESTRA RESULTADO (+/-)

1 AGUA
2 GLUCOSA
3 FRUCTOSA
4 SACAROSA
5 ALMIDON

III. Prueba de Benedict para azucares reductores

- Agregue a los primeros cinco tubos (1-5) de dos a cuatro gotas de reactivo de Benedict y caliente en baño
María durante cinco minutos.
- Anote cualquier cambio de color.

TUBO MUESTRA RESULTADO (+/-)

6 AGUA
7 GLUCOSA
8 FRUCTOSA
9 SACAROSA
10 ALMIDON

IV. Prueba de Lugol para almidón (amilosa)

- Al último grupo de tubos (11-15) agregue dos a cuatro gotas de Lugol.
- Anote cambios de color.

TUBO MUESTRA RESULTADO (+/-)

11 AGUA
12 GLUCOSA
13 FRUCTOSA
14 SACAROSA
15 ALMIDON

24
Observaciones importantes
En discusión, debe explicar claramente la base de cada prueba y aclarar o justificar cualquier análisis que no hay
concordado con sus expectativas de resultados.

Anexo
1. Investigue cómo se identifican los monosacáridos puros usando polarimetría.

Bibliografía de referencia
1. Kaplan, L. A. y A. J. Pesce, S. C. Kazmierczak. 2003 Clinical Chemistry. Theory, Analysis, Correlation. 4ª.
Edición. Mosby, Inc. pág. 583, 697
2. Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K., Walter, P. 2002. Molecular Biology of the Cell. 4ª.
Edición. Garland Science.
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/bv.fcgi?call=bv.View..ShowTOC&rid=mboc4.TOC&depth=10
3. Murray, R., Mayes, P., Granner, D., Rodwell, V. 2001. Bioquímica de Harper. 15ª Edición en español,
traducida de la 25ª Edición en inglés.

25
 Practica No. 5
Propiedades físicas y químicas del almidón

Introducción
El almidón es uno de los compuestos más importantes para el ser humano, ya que es la principal forma de
almacenamiento de energía en el reino vegetal, y por ende, la principal fuente de carbohidratos en nuestra dieta. Es
especialmente abundante en papas, el maíz, en las semillas y en todos sus derivados (harinas, especialmente). Además,
es muy fácil de digerir y de aprovecharse.

Objetivos
Que el estudiante:
1. Conozca las propiedades estructurales del almidón.
2. Visualice la degradación del almidón por calor, dando como resultado glucosa libre.
3. Relacione la degradación del almidón con la nutrición humana.

Alcance
Al finalizar la práctica se espera que el estudiante logre las siguientes competencias:
1. Identifica las estructuras del almidón.
2. Describe la reacción y productos de la degradación de almidón, produciendo como resultado glucosa libre
identificable experimentalmente.
3. Reconoce el valor nutricional del almidón

Antecedentes

La digestión del almidón ocurre debido a enzimas de hidrólisis especiales en un proceso complejo. El almidón es
un material semi-cristalino que se fabrica en varias partes de una planta. Industrialmente, la fuente más importante
del almidón comercial es el maíz, aunque también puede obtenerse de otras fuentes importantes, tales como trigo,
arroz, papa, entre otros.

Aunque el almidón está enteramente formado por unidades de glucosa, posee dos estructuras principales: amilosa
y amilopectina. La amilosa es un compuesto lineal compuesto por unidades de α-glucosa. Estas subunidades de
glucosa están unidas por un enlace conocido como enlace glucosídico α(1→4), indicando que la unión se da entre
el carbono 1 de una α-glucosa y el carbono 4 de la siguiente. La amilopectina, en cambio, está formada además de los
enlaces α-(1→4) de la amilosa, por enlaces α(1→6), formando ramificaciones.

La amilosa es hidrolizada mediante la acción de una enzima específica, conocida como amilasa, presente en la
saliva (conocida como ptialina). Esta enzima se especializa en romper los enlaces α-(1→4) característicos de la amilosa
y también los enlaces glucosídicos alfa-1,4 de la amilopectina y da como productos diversos carbohidratos de diferentes
tamaños, debido a que la alfa-amilasa producida en las glándulas salivales así como la alfa-amilasa producida en el
páncreas es una endoamilasa, eso quiere decir que rompe el almidón en su interior y sus productos pueden ser: glucosa,
maltosa, maltotriosa, isomaltosa y dextrinas. La alfa-amilasa salival dispone de muy poco tiempo para romper el almidón
y por eso su acción es muy corta en cambio la alfa-amilasa pancreática dispone de más tiempo para actuar sobre el
almidón y sus productos pueden ser moléculas más pequeñas como glucosa, maltosa e isomaltosa.

26
 Sin embargo, cuando el almidón se hidroliza por acción de ácidos, se rompe en una serie de compuestos intermedios.
Almidón → Amilodextrina → Eritrodextrina → Acrodextrina → Maltosa → Glucosa
Estos compuestos se caracterizan por dar un color diferente cada uno a las reacciones de identificación de
carbohidratos.

Pre-laboratorio
1. ¿Cuál es la importancia principal del almidón para el ser humano?
2. ¿Qué fuentes de almidón conoce usted y utiliza a diario?
3. ¿Por qué los seres humanos no guardamos almidón como reserva de energía?
4. Dibuje la estructura de la glucosa y de la maltosa
5. Investigue los compuestos intermediarios que se forman en la degradación del almidón.

PRÁCTICA DE LABORATORIO

Materiales
a. Reactivos
- Solución de almidón al 0.5%
- Ácido clorhídrico concentrado
- Solución de NaOH 0.1 M
- Solución de Lugol
- Solución de Benedict

b. Cristalería
- Varillas de vidrio
- Beakers de 500 mL
- 20 tubos de ensayo

c. Instrumentación
- Gradilla para tubos de ensayo
- Estufa

d. Otros
- Pipetas Pasteur plásticas
- Hielo

27
 Procedimiento

I. Estructura helicoidal del almidón

- En un tubo de ensayo coloque 5 mL de almidón y 8 gotas de solución de Lugol. Observe el cambio de color.
- Caliente el tubo en baño María durante cuatro minutos. Observe el color.
- Enfríe el tubo sumergiéndolo en agua fría. Observe y anote

II. Hidrólisis del almidón

- Coloque 100 mL de almidón en un beaker de 500 mL, añada 6 mL de HCl concentrado y póngalo a calentar en
la estufa.
- Tome dos tubos e identifíquelos como “Almidón sin hidrolizar”.
- Observe en el momento en que el almidón empiece a hervir (Cuidado de no quemarse)
- Cada cinco minutos después que empiece a hervir, tome dos muestras de un mililitro cada una, identifíquelas
y déjelas enfriando. Debe tomar muestras para 5, 10,15, 20, 25, 30, 35 y 40 minutos después de que empieza
a hervir. IMPORTANTE: Cuide de no dejarlo secar.
- Al tener todos sus tubos fríos, a uno de cada pareja agregue solución de Lugol y anote el resultado. Al otro,
neutralícelo y agregue 6 gotas de reactivo de Benedict y caliente en baño María por cinco minutos.
- Anote todos los cambios de color.

Observaciones importantes
En discusión, debe explicar claramente la base de cada prueba y aclarar o justificar cualquier análisis que no hay
concordado con sus expectativas de resultados.

Anexo
1. Investigue los compuestos intermediarios que se forman en la degradación del almidón.

Bibliografía de referencia
1. Kaplan, L. A. y A. J. Pesce, S. C. Kazmierczak. 2003 Clinical Chemistry. Theory, Analysis, Correlation. 4ª.
Edición. Mosby, Inc. pág. 583, 697
2. Murray, R., Mayes, P., Granner, D., Rodwell, V. 2001. Bioquímica de Harper. 15ª Edición en español,
traducida de la 25ª Edición en inglés.
3. Tester, R.F. y J. Karkalas, X. Qi. 2004 Starch structure and digestibility Enzyme-Substrate relationship.
World’s Poultry Science Journal. Vol. 60.

28
 Practica No. 6
Identificación de Pentosas y Cetosas

Introducción

Los monosacáridos son la fuente de energía más importante e inmediata del ser humano, por lo que son uno de los
componentes más comunes dentro de los componentes de la dieta usual. Algunos se encuentran como tales, en su
forma libre, mientras que otros se encuentran unidos formando disacáridos y hasta polisacáridos. En esta práctica se
presenta al alumno los principales métodos de identificación de pentosas y cetosas para determinar su presencia en
varios alimentos y soluciones conocidas.

Objetivos
Que el estudiante:
1. Conozca las propiedades químicas y la estructura de las pentosas y cetosas.
2. Conozca las diferentes formas de monosacáridos que se encuentra en las fuentes alimenticias.
3. Utilice diferentes pruebas para caracterizar las pentosas y cetosas.

Alcance
Al finalizar la práctica se espera que el estudiante logre las siguientes competencias:
1. Realiza satisfactoriamente los ensayos cualitativos de identificación de pentosas y cetosas.
2. Describe la importancia de la presencia de pentosas y cetosas en la dieta.
3. Identifica la presencia de pentosas y cetosas en alimentos comunes de la dieta.

Antecedentes

Las pentosas son monosacáridos (glúcidos simples) formados por una cadena de cinco átomos de carbono. Como
en los demás monosacáridos aparecen en su estructura grupos hidroxilo (OH). Además, también pueden llevar grupos
cetónicos o aldehídicos. La fórmula general de las pentosas es C5H1005. A continuación se citan algunas pentosas:

Aldopentosas: Como su nombre lo indica contienen la función aldehído. Una de las más importantes es la ribosa, la
cual hace parte de los nucleótidos que forman el ARN. A partir de la ribosa se puede obtener la desoxirribosa la cual
forma parte del ADN.

Cetopentosas: Contienen la función cetona.

29
Cetosas:
La D-fructosa, originalmente llamada levulosa, suele conocerse como el azúcar de la fruta por su contenido elevada
en ésta. Se encuentra también en algunos vegetales y en la miel. Esta molécula es importante como miembro del
grupo de la familia de las cetosas. Por gramo, la fructosa es doblemente dulce que la sacarosa, por lo que puede
usarse en cantidades menores. Por esa razón, la fructosa se usa como edulcorante en muchos alimentos procesados.
Por otro lado, la fructosa se usa en cantidades importantes en el sistema reproductor masculino, ya que los
espermatozoides la usan como fuente principal de energía.
La lactosa, o el azúcar de la leche, es un disacárido formado por una molécula de galactosa unida a una glucosa
por medio de un enlace ß(1→4). La incapacidad de hidrolizar este enlace (deficiencia de lactasa) es común entre los
animales.
La sacarosa, o azúcar común de mesa (de caña o de remolacha), se produce en hojas y raíces de las plantas. Es
una fuente de energía que se transporta a través de toda la planta. La sacarosa contiene un residuo α-glucosa y uno
ß-fructosa unidos a través de sus carbonos anoméricos.

Pre-laboratorio
1. Investigue el uso y fundamento de las reacciones de Bial y Seliwanoff
2. ¿Qué tipo de alimentos cree usted que daría positivo para la prueba de pentosas?
3. Escriba la reacción de hidrólisis de la lactosa. ¿Qué enzima la cataliza?
4. ¿Qué tipo de alimentos cree usted que daría positivo para la prueba de cetosas?
5. Investigue sobre la intolerancia a la lactosa, o deficiencia de lactasa.

PRÁCTICA DE LABORATORIO

Materiales

a. Reactivos
- Solución de glucosa (dextrosa) al 5%
- Solución de fructosa al 5%
- Solución de xilosa al 5%
- Solución de sacarosa al 5%
- Leche entera (proveído por el estudiante)
- Leche Delactomy (proveído por el estudiante)
- Miel (proveído por el estudiante)
- Reactivo de Bial
- Reactivo de Benedict
- α-naftol al 1%
- Ácido sulfúrico concentrado
- Reactivo de Seliwanoff

NOTA: el grupo completo de estudiantes (toda la sección) deberá traer los siguientes insumos un día
antes de la práctica y estregarlos a su catedrática en lugar y hora concordados previamente.
- leche entera (presentación tetrabrik de 250 ml)
- leche deslactosada (presentación tetrabrik de 250 ml)
- media taza (100-125 ml) del miel pura, en un recipiente perfectamente limpio, cerrado y desechable

b. Cristalería
- Tubos de ensayo
- Beakers de 250 mL

c. Instrumentación
- Pipetas Pasteur
- Gradilla para tubos de ensayo
- Estufa
- Pinza para tubos de ensayo

30
 Procedimiento

I. Prueba de Molish para carbohidratos

- Poner 20 gotas de cada una de las muestras en tubos de ensayo
- Agregue 5 gotas de alfa naftol.
- Cuidadosamente, añada ácido sulfúrico concentrado deslizándolo por las paredes y sin agitar. Observe
cuidadosamente la interfase, buscando un anillo rojo o violeta.

TUBO MUESTRA RESULTADO (+/-)

1 GLUCOSA
2 FRUCTOSA
3 XILOSA
4 SACAROSA
5 LECHE ENTERA
6 LECHE DELACTOMY
7 SOL. MIEL

II. Prueba de Benedict para azucares reductores

- Poner 20 gotas de cada una de las muestras en tubos de ensayo
- Agregue de dos a cuatro gotas de reactivo de Benedict y caliente en baño María durante cinco minutos.
- Anote cualquier cambio de color.

TUBO MUESTRA RESULTADO (+/-)

1 GLUCOSA
2 FRUCTOSA
3 XILOSA
4 SACAROSA
5 LECHE ENTERA
6 LECHE DELACTOMY
7 SOL. MIEL

III. Prueba de pentosas

- Poner 20 gotas de cada una de las muestras en tubos de ensayo
- Agregue 1.5 mL de reactivo de Bial y agite
- Colocar en agua hirviendo durante 3 minutos, si al cabo de ese tiempo se torna azul-verdoso indica una prueba
positiva.

TUBO MUESTRA RESULTADO (+/-)

1 GLUCOSA
2 FRUCTOSA
3 XILOSA
4 SACAROSA
5 LECHE ENTERA
6 LECHE DELACTOMY
7 SOL. MIEL

IV. Prueba de cetosas

- Poner 20 gotas de cada una de las muestras en tubos de ensayo
- Agregue 20 gotas de reactivo de Seliwanoff (CUIDADO: es fuertemente ácido) y poner en baño María durante
quince minutos. Anote los colores obtenidos.

31
 TUBO MUESTRA RESULTADO (+/-)
1 GLUCOSA
2 FRUCTOSA
3 XILOSA
4 SACAROSA
5 LECHE ENTERA
6 LECHE DELACTOMY
7 SOL. MIEL

Anexos
1. Explique en su reporte si logró la hidrólisis de su muestra de leche y de sacarosa o no. Indique las posibles
razones de porqué sí o no lo logró.
2. Investigue sobre la intolerancia a la lactosa, o deficiencia de lactasa.

Bibliografía de referencia
1. McKee, T., McKee, J. R. 2003. Bioquímica. La Base Molecular de la Vida. 3ª Edición, traducida de la 3ª
Edición en inglés.
2. Murray, R., Mayes, P., Granner, D., Rodwell, V. 2001. Bioquímica de Harper. 15ª Edición en español,
traducida de la 25ª Edición en inglés
3. Villanueva de Bocaletti, Odette. Manual de Laboratorio Bioquímica 1 2005. Universidad del Valle de
Guatemala.

32
 Practica No. 7
Introducción a la Espectrofotometría y Curvas de calibración

Introducción
Hacer un análisis cuantitativo implica la necesidad de asegurar la calidad de los resultados obtenidos, aplicando
el uso fundamental de una curva de calibración. En esta práctica, los estudiantes prepararán una curva de
calibración, para leerla luego en el espectrofotómetro, y finalmente poder determinar cuál es la concentración de
una solución desconocida.

Objetivos
Que el estudiante
1. Pueda realizar una curva de calibración
2. Pueda calcular una concentración desconocida a partir de una curva de calibración

Alcance
Al finalizar la práctica se espera que el estudiante logre las siguientes competencias:
1. Describe la utilidad de una solución patrón para preparar una curva de calibración.
2. Explica la importancia de la curva de calibración en todo proceso de cuantificación espectrofotométrica
3. Realiza curvas de calibración en Excel.
4. Es capaz de calcular la concentración de un analito mediante el uso de la ecuación de la curva de calibración.

Antecedentes

La espectrofotometría es uno de los métodos de análisis más usados, y se basa en la relación que existe entre
la absorción de luz por parte de un compuesto y su concentración. Cuando se hace incidir luz monocromática (de una
sola longitud de onda) sobre un medio homogéneo, una parte de la luz incidente es absorbida por el medio y otra
transmitida; como consecuencia, la intensidad del rayo de luz será atenuada desde Po a P, siendo Po la intensidad de
la luz incidente y P la intensidad del rayo de luz transmitido. Dependiendo del compuesto y el tipo de absorción a
medir, la muestra puede estar en fase líquida, sólida o gaseosa. En las regiones visibles y ultravioleta del espectro
electromagnético, la muestra es generalmente disuelta para formar una solución.

Cada sustancia tiene su propio espectro de absorción, el cual es una curva que muestra la cantidad de energía
radiante absorbida, Absorbancia, por la sustancia en cada longitud de onda del espectro electromagnético, es decir, a
una determinada longitud de onda de la energía radiante, cada sustancia absorbe una cantidad de radiación que es
distinta a la que absorbe otro compuesto (Fig. 1)

Absorbancia
(A)

Longitud de onda (nm)

Fig.1 Espectro de absorción de dos compuestos diferentes.

33
Ley de Lambert
Esta ley establece que cuando pasa luz monocromática por un medio homogéneo, la disminución de la intensidad del
haz de luz incidente es proporcional al espesor del medio, lo que equivale a decir que la intensidad de la luz transmitida
disminuye exponencialmente al aumentar aritméticamente el espesor del medio absorbente (Fig. 2):

P0

B
Fig. 2. Ley de Lambert

Ley de Beer
La intensidad de un haz de luz monocromática disminuye exponencialmente al aumentar aritméticamente la
concentración de la sustancia absorbente, cuando este haz pasa a través de un medio homogéneo (Fig. 3).

P0

Fig. 3. Ley de Beer

Mediciones de transmitancia y absorbancia.

Las mediciones de absorbancia o transmitancia se hacen por comparación entre la muestra problema y un estándar
arbitrario o referencia. Como la referencia debe poseer un porcentaje de transmitancia de 100%, esta es llamada
referencia de 100%., o una absorbancia de cero.

Selección de longitud de onda de trabajo.

La longitud de onda de trabajo corresponde, generalmente, a la longitud de onda en la cual la absorbancia del analito
(sustancia a analizar) es máxima, y recibe la denominación de Lambda máximo (lmax). Para seleccionar el lmax., se
hace un espectro de absorción o curva espectral, y que consiste en una gráfica de la absorbancia de una solución de
la sustancia absorbente de concentración adecuada, medida a distintas longitudes de onda y en ella se determina el
lmax. (Fig.4).

En este caso
lmax = l 1

34
Las mediciones de absorbancia se hacen en la zona de longitudes de onda donde se espera que absorba la sustancia
problema. Si se trata de sustancias coloreadas, las mediciones se realizan en la zona visible del espectro
electromagnético (380 a 800nm). En el caso de sustancias no coloreadas, las mediciones se realizan en la región
ultravioleta del espectro electromagnético (200 a 380nm).

Curva de Calibración.
Uno de los métodos más utilizados para determinar la concentración de una muestra problema, es el método de la
curva de calibración. Esta curva de calibración es una gráfica que relaciona la concentración de al menos cinco
soluciones de estándar de concentraciones conocidas, con la absorbancia de cada uno de ellos a la longitud de onda
máxima (lmax) (Fig. 5).

Una vez obtenida la gráfica se determina la función matemática que presenta dicha recta a través del tratamiento
estadístico de regresión de los mínimos cuadrados, la cual relaciona la absorbancia y la concentración de un analito.
La siguiente ecuación matemática corresponde a dicha función:

A=mc+n (Ecuación 1)

A : Absorbancia. n : Intercepto de la recta

m : Pendiente de la recta y que corresponde al producto entre absortividad a de la muestra y el espesor b de la
cubeta.

Luego se mide la absorbancia de la solución problema y se interpola su valor en la gráfica o se reemplaza en

la ecuación (1), para obtener el valor de concentración del analito. La concentración de la solución problema debe
estar comprendida en el rango de concentración que comprende la curva de calibración. Si la concentración de la
solución problema es menor que la concentración del estándar más diluido debe usarse el método de adición estándar,
que consiste en adicionar un volumen determinado de un estándar concentrado a la solución problema, antes de
realizar la lectura y que permite que esta lectura este dentro de las obtenidas para la curva de calibración. En el caso
contrario, si la concentración del analito es mayor que la concentración del estándar más concentrado la solución
problema deberá ser diluida.

35
Al hacer la curva de calibración, se debe emplear la longitud de onda de máxima absorbancia (lmax.), para obtener una
recta con la máxima pendiente y así tener mayor sensibilidad y precisión al hacer las mediciones. La medición de la
absorbancia de la solución problema debe hacerse a la misma longitud de onda que fue hecha la curva de calibración.

Bibliografía
1. Skoog, D.A., West, D.M., Holler, F.J., Crouch, S.R. 2001 Química Analítica. 7ª. Edición. McGraw Hill. pág.
166

ANEXO 1
EL ESPECTROFOTÓMETRO

Los principales componentes de un

espectrofotómetro de un haz se muestran en la figura.
En él puede identificarse los siete componentes
básicos: 1) una fuente de energía radiante estable, 2)
una rendija de entrada (omitida en este dibujo), 3) un
selector de longitud de onda, 4) una rendija de salida
para enfocar la luz, 5) un dispositivo para sostener la
celda de la muestra (sample cuvette), 6) un detector
de energía radiante, y 7) un dispositivo de lectura en
la que pueda obtenerse el valor de la medición que se
realiza (omitida en este dibujo). Algunos instrumentos
utilizan filtros como selectores de longitud de onda,
haciendo que solamente pase luz de una sola longitud de onda (o monocromática). Estos instrumentos se conocen
como fotómetros. Por el contrario, los espectrofotómetros utilizan un sistema de monocromador en prismas o en
rejillas, haciendo que pueda brindarse una luz monocromada en un rango de longitudes de onda.

36
 El recipiente en el que se coloca la muestra a ser medida en un espectrofotómetro
se conoce como celda (en inglés, cuvette o cell). Este recipiente es normalmente de
vidrio cuando se usa en un rango de 320 a 950 nm, ya que este material es totalmente
transparente a esas longitudes de onda. Sin embargo, para longitudes por debajo de
los 320 nm, es indispensable utilizar celdas de cuarzo (o sílice), ya que el vidrio absorbe
luz de estas longitudes de onda. Las celdas pueden ser de forma cilíndrica o cuadrada,
aunque se prefieren las últimas, mostradas en la siguiente figura. Independientemente
de ello, las celdas deben cuidarse extremadamente para evitar suciedad y rayones que
puedan alterar los resultados.

ANEXO 2
CÁLCULO DE REGRESIÓN LINEAL

Muchos métodos analíticos se basan en una curva de calibración en la que una cantidad medida y se relaciona
en proporción directa con la concentración conocida x de una serie de patrones (o soluciones de concentración
conocida). La ordenada (la variable dependiente, graficada en el eje y) representa la característica medida (en este
caso, absorbancia), mientras que la abscisa (la variable independiente, graficada en el eje x) representa la
concentración (en nuestro caso, partes por millón). Como es común (y deseable), la gráfica tiende a una línea recta,
aunque debe observarse que no todos los datos caen sobre la línea recta, debido a errores aleatorios de la medición.

Para lograr obtener la recta que mejor se ajusta al grupo de datos que se ha obtenido, es necesario avocarse a la
técnica estadística conocida como análisis de regresión, el cual proporciona medios para la elaboración objetiva de
una ecuación para esta recta, a través del uso del método de los mínimos cuadrados.
Al emplear este método para generar una curva de calibración, se debe partir de dos suposiciones: primero, que
existe una relación lineal entre la variable medida (y) y la concentración del compuesto que se busca (x), y segundo,
que cualquier desviación de los puntos individuales respecto a la recta obtenida se debe a errores aleatorios de la
medición. La ecuación que se obtiene es, entonces, en el formato:
y = mx + b

donde b es la intersección en y (el valor de y cuando x es cero) y m es la pendiente.

Utilice los resultados del grupo, colocando en una tabla las concentraciones de estándar, de 0 a 10 mg/mL (sin tomar
en cuenta el estándar 0.5mg/mL) y a la par de cada concentración, el valor de absorbancia obtenido.

37
Procedimiento

I. Gráfica de Datos

a. En una hoja de Excel nueva, copie su tabla de resultados de la forma siguiente (IMPORTANTE: Utilice sus
propios resultados, no los mostrados aquí)

Promedio Sección A
Muestra Absorbancia
0 0.000
8 0.176
12 0.273
16 0.374
20 0.481
32 0.702
40 0.891
48 1.107

Seleccione tanto las concentraciones como las absorbancias (puede incluir los títulos si desea) y accione el
botón, correspondiente al Asistente de Gráficas.

b. Seleccione el tipo de gráfico adecuado, el de dispersión XY

38
 c. Decida si quiere leyendas o no

d. Guarde en una hoja separada, poniéndole nombre

e. Modifique las propiedades de la Serie 1 para que solamente le aparezcan marcadores y no la línea (que es
la forma normal como se presenta en una serie nueva).

II. Gráfica de Recta de Regresión

a. Para graficar la recta de regresión, coloque el puntero sobre la gráfica, en cualquiera de los puntos de la
regresión. Haga click con el botón derecho del mouse y aparecerá la opción Agregar línea de tendencia.
Acepte.
b. Aparece un menú para especificar el tipo de regresión. Seleccione lineal. Vaya a la pestaña que indica
opciones y seleccione los cuadros de Presentar ecuación en el gráfico y Presentar el valor R cuadrado en el
gráfico. Acepte presionando enter.
c. Aparecerá en su gráfica la línea de regresión para los datos experimentales y la ecuación, en la forma
d. y = 0.0466 x + 0.0558
e. r2= 0.9998
f. Calcule el coeficiente de correlación r: r es la raíz cuadrada del valor presentado como r2 . Este valor le
indica que tanto se acercan los datos experimentales a la recta de regresión. En este caso le permite a
usted evaluar que tan bien realizó sus diluciones, si hay algún punto que tenga diferencia con el
comportamiento general de los demás.. Mientras más cercano a 1.000, mejor fue el ajuste de los datos.
Para una curva de calibración es espectrofotometría se aceptan curvas de calibración con coeficiente de
correlación por encima de 0.98 Algunos métodos son más estrictos.

III. Cálculos
a. Suponga que una muestra del paciente 1, de concentración de proteína desconocida, le dio una lectura de
absorbancia de 0.100, y la muestra del paciente 2 tiene una absorbancia de 0.200. Calcule las
concentraciones en las dos muestras, despejando de la ecuación de regresión de la gráfica que obtuvo en
el laboratorio.

Si
Y = mX + b,

m y b son los valores que usted obtuvo en la gráfica de regresión de Excel

39
 En nuestro caso, Y es absorbancia y X es concentración
Absorbancia = m x (Concentración) + b

La concentración de una muestra desconocida se calcula simplemente como

Concentración= (Absorbancia - b) / m

ANEXO 3
CÁLCULO DE LA CONCENTRACIÓN DE COMPUESTOS

Cuando se desea determinar la concentración de un compuesto en una solución mediante el uso de un

espectrofotómetro, en casi todas las técnicas de laboratorio debe procederse a la preparación de tres tubos: un tubo
blanco, un tubo estándar y un tubo muestra.

Tubo “blanco”: contiene diluyente, estabilizadores químicos del pH, reactivos colorantes y todos los ingredientes que
sean necesarios para la realización de la Técnica, pero no debe contener la sustancia que se va a estudiar. El
“blanco” sirve para hacer la calibración del espectrofotómetro, desechando la absorbancia de todos los componentes
diferentes de la sustancia de estudio, lo cual se logra haciendo que en presencia de esta cubeta óptica en el
recipiente respectivo del fotómetro, ajustemos la absorbancia de la pantalla a “cero”. De tal forma que
estas mismas sustancias en los otros tubos ya no interfieran en las próximas lecturas de absorbancia.

Tubo “estándar”: contiene lo mismo que el blanco, y se le agrega la sustancia de estudio a una concentración
conocida. El objetivo que tiene la preparación de este tubo es que sirve para comparar su absorbancia, la cual será
en función de la concentración conocida, con la absorbancia de la “muestra”.

Tubo “muestra”: contiene lo mismo que el blanco, pero en este no conocemos la cantidad de la sustancia que
estamos estudiando. Este se prepara a partir de fluidos biológicos (sangre, líquido cefalorraquídeo, entre otros).

El haber puesto los componentes en los tres tubos nos permite tener un coeficiente de absorción molar uniforme.
En estas circunstancias y teniendo en cuenta que el espesor de la muestra absorbente habrá de ser siempre de 1 cm,
entonces nos queda que la absorbancia habrá de ser directamente proporcional a la concentración del compuesto
dado, según la siguiente formula.

CONCENTRACIÓN DE LA MUESTRA = CONCENTRACIÓN DEL ESTÁNDAR * ABSORBANCIA DE LA MUESTRA

ABSORBANCIA DEL ESTÁNDAR

PRÁCTICA DE LABORATORIO

Materiales

a. Reactivos
- Solución madre de azul de metileno, 80 ppm (mg/L)

b. Cristalería
- Balones aforados de 100 mL, 50 mL, 25 mL y 10 mL
- Pipetas volumétricas de 5 mL y 10 mL
- Tubos de ensayo
- Beaker 150 mL
- Pipetas Pasteur

40
 c. Instrumentación
- Gradilla
- Espectrofotómetro UV-VIS
- Celdas para lectura

Procedimiento
I. Preparación de Curva de Calibración
- Se preparará una curva de calibración por mesa de estudiantes. La curva de calibración es de siete puntos,
desde cero a cuarenta partes por millón de azul de metileno.
- Prepare en los balones aforados, las concentraciones según la tabla siguiente:

Concentración en curva, mL solución madre, 80 ppm

Volumen final
ppm azul de metileno azul de metileno
0 (blanco) 0 ---
8 5 mL 50 mL
12 15 mL 100 mL
16 5 mL 25 mL
20 25 mL 100 mL
32 10 mL 25 mL
40 25 mL 50 mL

- Transfiera alrededor de 5 mL de cada solución a tubos de ensayo. Asegúrese que los tubos de ensayo se
encuentren limpios, secos y claramente identificados.
- Incluya un tubo con la solución de concentración desconocida que se le entregará durante el laboratorio.

II. Lectura de Curva de calibración

- Al tener todos sus tubos listos, y llegar su turno, lea la absorbancia de cada una de las muestras a 665 nm.
No olvide leer también su muestra desconocida. Debe seguir todas las indicaciones de su instructor de
laboratorio.

Observaciones importantes
Anote en su formato de resultados la absorbancia de cada punto de su curva de calibración y de su muestra
desconocida. Reporte la ecuación de su curva, la correlación entre sus puntos y la concentración de su muestra
desconocida.

Anexo
1. Investigue por lo menos cinco exámenes de laboratorio clínico de rutina, que se realicen por medio de la
espectrofotometría, indicando sus valores normales y su uso.
2. ¿Cuál es la importancia de la espectrofotometría?

Bibliografía
1. Skoog, D.A., West, D.M., Holler, F.J., Crouch, S.R. 2001 Química Analítica. 7ª. Edición. McGraw Hill. pág.
166

41
 Practica No. 8
Determinación de glucosa en muestra sanguínea

Introducción
La glucosa es el azúcar principal de la sangre y una fuente muy importante de energía que las células de nuestro
organismo utilizan, por tal motivo esta ha sido objeto de muchos estudios y la literatura ofrece diversas técnicas de
análisis, las cuales varían de acuerdo con diferentes factores como la naturaleza de la muestra, los contenidos de
glucosa y la viabilidad experimental. Uno de los métodos utilizados a nivel clínico y de investigación es el enzimático
colorimétrico para la determinación de glucosa en suero o plasma. Debido a que en la sangre hay células como los
glóbulos blancos o glóbulos rojos que pueden seguir consumiendo azúcar después de extraer la sangre, el valor de
glucosa en sangre completa es un 15 % menor que el valor de glucosa en suero o plasma.

Objetivos
Que el estudiante:
1. Comprenda el principio bioquímico/enzimático de la determinación de la glucosa en muestras biológicas.
2. Determine espectrofotométricamente el contenido de la glucosa en suero sanguíneo humano.

Alcance
Al finalizar la práctica se espera que el estudiante logre las siguientes competencias:
1. Reconoce el uso de métodos espectrofotométricos en pruebas de laboratorio para la determinación de
analitos en muestras biológicas.
2. Describe las metodologías bioquímicas más utilizadas para la determinación de glucosa sanguínea.
3. Especifica las condiciones apropiadas en el paciente para la determinación de glucosa sanguínea.
4. Interpreta los resultados obtenidos de cuantificación de glucosa.
5. Correlaciona un valor de glucosa con la condición clínica de un paciente.

Antecedentes
La glucosa es la principal fuente de energía para el metabolismo celular. Se obtiene fundamentalmente a través de
la alimentación, y se almacena principalmente en el hígado en forma de glucógeno. En esta última forma mantiene la
concentración normal de glucosa en sangre. Para que esos niveles se mantengan y el almacenamiento en el hígado
sea adecuado, se precisa la ayuda de la insulina, una hormona sintetizada en las células beta del páncreas, la cual se
libera cuando los niveles de glucosa en sangre se elevan más de 70 mg/dL, la insulina recluta los transportadores de
glucosa en el músculo y tejido adiposo, llamados GLUT-4, lo que favorece el ingreso de glucosa a estas células.
Por tanto, la determinación de glucosa en sangre (glucemia) es útil para el diagnóstico de numerosas enfermedades
metabólicas, fundamentalmente de la diabetes mellitus. También es necesaria esta prueba, una vez diagnosticada la
diabetes, para controlar la dosis de insulina que se debe administrar para tratarla.
La diabetes mellitus es una enfermedad que incapacita al cuerpo para metabolizar o usar eficazmente los
carbohidratos, las proteínas y las grasas. Cuando comemos, diversos carbohidratos como los que comemos en cereales,
tortillas, pan, verduras o frutas, todos ellos se digieren en el intestino hasta convertirse en monosacáridos los cuales
por vía porta llegan al hígado y allí todos los monosacáridos absorbidos se convierten en GLUCOSA.

Fundamento del método

La glucosa oxidasa convierte la glucosa en peróxido de hidrógeno y ácido D-glucónico. La peroxidasa cataliza la
oxidación del peróxido de hidrógeno a 4-aminofenazona con la subsecuente unión con el p- hidroxibencensulfonato. El
producto final es un c hidroquinoleína el cual absorbe a 500 nm.
La intensidad del color es directamente proporcional a la concentración de la glucosa.

42
 GOD
Glucosa + O2 + H2O ------------------ > Acido glucónico + H2O2

POD
H2O2 + 4-aminofenazona + fenol ----------------- > quinoneimina + 4 H2O

Valores de referencia
Suero o plasma: 70 – 110 mg/dL

Pre-laboratorio
1. A que nos referimos cuando hablamos de:
- Hiperglicemia
- Hipoglicemia
- Diabetes mellitus

PRÁCTICA DE LABORATORIO

Materiales

a. Reactivos
- Reactivo de glucosa
- Muestras sanguíneas (Suero)
- Estándar de glucosa
- Alcohol al 70%
- Cloro al 5%

b. Cristalería
- Tubos de Ensayo

c. Instrumentación
- Gradilla para tubos de ensayo
- Micropipetas de 10-100µL, 100-1000µL
- Tips amarillos y azules
- Espectrofotómetro
- Celdas para espectrofotómetro
- Baño de María a 37 °C

Procedimiento

- Identificar los tubos de ensayo como Blanco, estándar y muestra.

- Seguir el siguiente esquema de pipeteo

Blanco Estándar Muestra 1 Muestra 2

Estándar -- 10 µL -- --
Muestra de Suero -- -- 10 µL --
Muestra Orina -- -- -- 10 µL
Reactivo Glucosa 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL
Mezcle e incube por 5 min en baño a 37°C
Luego de la incubación leer el estándar y las muestras en el espectrofotómetro a una
longitud de onda de 490 nm. Llevando el equipo a cero con el Blanco

43
Cálculo de resultados

• Glucosa en suero (mg/dL)= Absorbancia de muestra x F

F = Concentración de estándar
Abs. Estándar

Valores de referencia
Suero o plasma: 70 – 110 mg/dL

Observaciones importantes
En discusión, debe explicar claramente la base de cada prueba y aclarar o justificar cualquier análisis que no
hay concordado con sus expectativas de resultados.

Bibliografía de referencia
1. Kaplan, L. A. y A. J. Pesce, S. C. Kazmierczak. 2003 Clinical Chemistry. Theory, Analysis, Correlation. 4ª.
Edición. Mosby, Inc. pág. 583, 697
2. Ficha técnica de Glucosa AA. Wiener Lab. Rosario - Argentina.

44
 Práctica No. 9
Curva de tolerancia a La glucosa

Introducción

La prueba de tolerancia a la glucosa se utiliza para determinar el nivel de respuesta de un organismo ante una
carga fuerte de glucosa. Generalmente se usa en el diagnóstico de intolerancia a la glucosa en personas que se
sospeche diabetes mellitus (para estos casos se acostumbra hacer una curva de tolerancia de 3 horas), también puede
utilizarse esta prueba para investigar diversas causas de hipoglicemia (en este caso se acostumbra hacer una curva de
tolerancia de 5 horas).

Objetivos
Que el estudiante:
1. Interprete una prueba de tolerancia a la glucosa en un paciente.
2. Conozca los diferentes posibles patrones a obtener en una prueba de tolerancia a la glucosa.

Alcance
Al finalizar la práctica se espera que el estudiante logre las siguientes competencias:
1. Interpreta adecuadamente los valores reportados en una curva de tolerancia a la glucosa
2. Correlaciona satisfactoriamente los valores obtenidos en una curva de tolerancia a la glucosa con la condición
particular de un paciente.
3. Aprenderá a utilizar un glucómetro simple
4. Identifica la diferencia en exactitud entre métodos de determinación de la concentración de glucosa
sanguínea.

Antecedentes

En ayunas la liberación de glucosa hepática está muy aumentada, lo cual determina el diagnóstico, hiperglicemia
en ayunas o diabetes. En la diabetes mellitus, las personas no pueden metabolizar correctamente la glucosa, sobretodo
en el músculo esquelético y en el tejido adiposo debido a la falta de insulina (diabetes mellitus tipos 1), o debido a una
insulina que no se une correctamente a su receptor en la célula blanco (diabetes mellitus tipo 2). Por lo anterior la
glucosa no se utiliza como combustible en el músculo esquelético y tejido adiposo, los niveles de glucosa sanguínea
aumentan arriba de los valores normales causando hiperglicemia.

La prueba de tolerancia a la glucosa no es más que varias medidas del nivel de azúcar en la sangre antes y después
de la administración de una carga definida de glucosa. El principal propósito de la curva de tolerancia a la glucosa es
diferenciar entre pacientes con tolerancia normal a la glucosa, intolerantes a la glucosa y diabéticos. En un paciente
normal, la máxima elevación de glucosa sanguínea se observa después de 30 minutos de ingerida la dosis de prueba
y regresa a valores normales después de 3 horas. En diabéticos, los niveles de glucosa sanguínea alcanzados son más
altos y la vuelta a valores basales es más tardada.

Es necesario cumplir con varios requisitos para realizar la prueba:

• Descontinuar, de ser posible, medicamentos que afecten la tolerancia a la glucosa
• Realizar en la mañana, posterior a tres días de dieta libre (con por lo menos 150 g de carbohidratos por día) y con
actividad normal
• Realizar la prueba luego de un ayuno de 10 a 16 horas solamente en pacientes ambulatorios
• El paciente debe permanecer sentado y no debe comer ni fumar durante la prueba
• La prueba no debe realizarse en personas muy enfermas u hospitalizadas
• Debe realizarse entre 7 y 9 de la mañana
• Se recomienda una carga de 75g de glucosa para pacientes no embarazadas, la cual debe beberse en menos de
cinco minutos

45
 La curva de tolerancia a la glucosa puede requerirse para diagnosticar un paciente con diabetes mellitus tipo 2,
siempre y cuando una medición de glucosa en ayunas haya dado un valor sérico menor de 129 mg/dl. Sin embargo,
la prueba es muy útil para el diagnóstico de diabetes mellitus gestacional, de intolerancia a la glucosa y para estudios
epidemiológicos. Una variante de esta prueba, llevada a cabo en 5 horas, también puede servir para el diagnóstico de
varios tipos de hipoglucemia, siempre y cuando se acompañe de una curva de insulina que se hace con las mismas
muestras séricas que con la que se determina la glucosa. La curva de tolerancia a la glucosa y la curva de insulina
también se indican en cualquier persona que se investiga por “síndrome metabólico”.

PRÁCTICA DE LABORATORIO

Materiales

a. Reactivos
- Solución para curva de tolerancia a la glucosa, 75 g en 200 mL
- Etanol al 70%, para desinfección
- Tiras reactivas para medición de glucosa en sangre
- Un paciente (un estudiante voluntario de la mesa)

b. Cristalería
- No se utilizará cristalería en esta práctica

c. Instrumentación
- Algodón
- Pinchador
- Lancetas para el pinchador
- Glucómetro

Procedimiento

Este procedimiento se hará con la participación de toda la clase.

- Coloque a su paciente en una posición cómoda, preferiblemente sentado. Pregunte cuál y cuándo fue su
última comida.
- Prepare el glucómetro e inserte la tira que usará.
- Cargue una lanceta en el pinchador. Asegúrese que la lanceta sea nueva. Con un trozo de algodón húmedo
con alcohol, limpie el área donde va a realizar el pinchazo. Recuerde hacerlo en círculos del centro hacia
fuera. Pinche.
- Coloque una gota de sangre en el área indicada para hacerlo en la tira reactiva de glucosa y espere el
resultado. Este será su valor inicial o preprandial.
- Corrobore que el valor de glucosa obtenido sea menor a 110 mg/dl, de lo contrario no puede llevarse a
cabo el procedimiento
- Indique al paciente que ingiera la solución para curva de tolerancia a la glucosa. Es importante que el
paciente se mantenga sentado, ya que es posible que sufra de náusea o mareos.
- Repita la operación a los 30, 60, 120 y 180 minutos.
- Coloque los resultados en una tabla similar a la siguiente y grafíquelos.

Minutos 0 30 60 120 180

Glucosa
(mg/dL)

- Indique cuál sería su diagnóstico preliminar (recuerde, es solamente una aproximación, no un diagnóstico
real).

46
 IMPORTANTE: Debido a que se manejarán fluidos corporales, específicamente sangre, es necesario que todo el
material que entre en contacto con el fluido se deseche adecuadamente en los botes rojos. Las lancetas deben
cubrirse antes de ser desechadas.

Observaciones importantes
Tome en cuenta que existen muchos factores que pueden afectar la prueba de tolerancia a la glucosa. Investigue
cuáles son e indique la influencia que cada uno tiene.

Bibliografía de referencia
1. Idema, Lars. Hypoglycemia Homepage Holland Glucose Tolerance Test Actualizado al 28 de abril, 1998.
Consultado el 2 de noviembre, 2005.
http://hypoglykemie.nl/gtt.htm
2. Tschritter, Otto, et al. Assessing the Shape of the Glucosa Curve During an Oral Glucosa Tolerante Test.
Diabetes Care 26:1026–1033, 2003.
http://care.diabetesjournals.org/cgi/reprint/26/4/1026
3. Burtis, C. A. y E. R. Ashwood. 2001. Fundamentals of Clinical Chemistry. 5ª. Edición. W. B. Saunders
Company. pág. 16-18
4. Kaplan, L. A. y A. J. Pesce, S. C. Kazmierczak. 2003 Clinical Chemistry. Theory, Analysis, Correlation. 4ª.
Edición. Mosby, Inc. pág. 34-36

47
 Práctica No. 10
Prueba de la Hemoglobina Glucosilada (HbA1) como control del nivel de glucosa
en sangre

Introducción

Uno de los parámetros más utilizados por los médicos para controlar el progreso y el manejo de la diabetes en sus
pacientes es la determinación de glucosa en sangre. Sin embargo, el parámetro de glucosa en sangre refleja los
niveles del momento en que se toma la muestra. En cambio, la hemoglobina glucosilada se forma progresiva e
irreversiblemente en los eritrocitos durante el período normal de vida de éstos, de ciento veinte días. Debido a que la
cantidad de hemoglobina glucosilada presente en sangre refleja el nivel de glucosa en sangre manejado durante las 6
a 8 semanas previas al día en que se hace el examen de laboratorio, el valor que este tiene es mucho mayor que la
determinación de glucosa en ayunas, el paciente no puede engañar al médico, aunque se ponga a dieta de
carbohidratos un par de días antes del examen.
El valor normal de la hemoglobina glucosilada es hasta 6 % en el adulto y 4 % en el niño. Por cada 1 % que
aumenta la hemoglobina glucosilada (Hb A 1c), aumenta en 30 a 35 mg % la concentración de glucosa sanguínea. Así
como la glucosa se une a la GLOBINA de la hemoglobina, también puede unirse a otras proteínas plasmáticas y
proteínas de membrana, por eso la hiperglicemia causa muchos daños secundarios a nivel celular. La unión de la
proteína (globina u otra proteína) a la glucosa se produce sin acción enzimática, a esto se le conoce con el nombre de
GLUCACIÓN, en cambio cuando interviene una enzima que cataliza la unión de la glucosa a la proteína como ocurre
en la síntesis de las glucoproteínas se conoce con el nombre de GLUCOSILACIÓN.

Objetivos
Que el estudiante:
1. Analice el valor obtenido de una prueba de hemoglobina glucosilada, HbA1, en una muestra de sangre.
2. Correlacione el valor de hemoglobina glucosilada con el estado general del paciente.

Alcance
Al finalizar la práctica se espera que el estudiante logre las siguientes competencias:
1. Explica la relación existente entre la hemoglobina glucosilada y los niveles de glucosa en sangre durante la
vida media del eritrocito.
2. Interpreta la relación existente entre los valores de hemoglobina glucosilada y el valor de glucosa sérico.
3. Aprecia el valor diagnóstico y de control del parámetro de hemoglobina glucosilada en un paciente,
especialmente si es diabético

Antecedentes

Diabetes mellitus
Varias investigaciones han demostrado que la diabetes mellitus no es una enfermedad única, sino un conjunto de
enfermedades que manifiestan un síntoma en común: la inhabilidad del paciente de regular su nivel de glucosa en
sangre (es decir, intolerancia a la glucosa). Los principales síntomas de la diabetes mellitus son niveles de glucosa
anormalmente altos tanto en sangre como en orina (hiperglucemia y glucosuria, respectivamente), poliuria, polidipsia
(sed excesiva), hambre constante (polifagia), pérdida de peso repentina y, durante los episodios agudos de la diabetes
mellitus, exceso de cuerpos cetónicos en sangre y en orina (cetonemia y cetonuria, respectivamente). Todos estos
síntomas son el resultado final de la falta de capacidad de metabolizar la glucosa y de mantener altos niveles de glucosa
en sangre.

Uso de proteínas glucosiladas como parámetros de control

La medición de proteínas glucosiladas, especialmente la hemoglobina, se usa ampliamente para el monitoreo
rutinario del estado glucémico a largo plazo de un paciente con diabetes mellitus. La hemoglobina glucosilada se usa
tanto como índice de glucemia promedio, así como índice de riesgo para el desarrollo de complicaciones diabéticas.

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Más recientemente, esta prueba se usa en programas de control de calidad para la evaluación del tratamiento del
paciente diabético. Es posible usar otras proteínas sanguíneas glucosiladas como indicador de glucemia promedio,
pero en períodos más cortos que la hemoglobina glucosilada. Sin embargo, su utilidad clínica no está tan bien
establecida como en el caso de la hemoglobina, y no hay evidencia convincente que relacione su concentración con
las complicaciones crónicas de la diabetes.
Debido a que la vida media de un eritrocito es de 120 días, el valor de la hemoglobina glucosilada refleja la
concentración promedio de glucosa durante entre 6 a 8 semanas precedentes al muestreo.
En detalle, el grupo hidroxilo de la glucosa se une a los grupos amino libres de la hemoglobina. Esta hemoglobina
glucosilada, denominada HbA1c puede separarse de la hemoglobina no glucosilada por medio de cromatografía de
intercambio iónico o electroforesis. La fracción de la hemoglobina glucosilada se encuentra normalmente alrededor
del 4 al 6 % de la hemoglobina total, cuando la concentración de glucosa sanguínea se mantiene dentro de los
parámetros normales. El aumento en los valores de hemoglobina glucosilada es indicativo de un mal control de los
niveles de glucosa en sangre, guiando al médico en la selección del tratamiento adecuado (dieta más rigurosa,
medicamento, mayor dosis de insulina, etc.) para su paciente.

Interpretación clínica. En la siguiente tabla se muestran los valores útiles para la interpretación clínica de un
paciente. Tome la decisión sobre su paciente en base a los resultados obtenidos.

Pacientes %HbA1
Pacientes normales o pacientes diabéticos controlados o con metabolismo estabilizado 4.5 – 7.0
Pacientes diabéticos no controlados o con desbalances metabólicos 8.5

Pre-laboratorio
1. ¿Qué factores se toman en cuenta para el diagnóstico de Diabetes Mellitus, tanto tipo I como tipo II en un
paciente?
2. ¿Cuál es la incidencia de diabetes en Guatemala?
3. ¿Cuál es la importancia de realizar la prueba de hemoglobina glucosilada en los pacientes que ya están
diagnosticados como diabéticos?
4. Investigue qué factores pueden alterar los resultados de la prueba (Hemoglobina glucosilada, HbA1)
5. Existen varios tipos de hemoglobina glucosilada, por lo que debe tenerse especial cuidado al ordenar las pruebas
de hemoglobina glucosilada. Investigue la diferencia entre hemoglobina glucosilada total, GHb y la hemoglobina
HbA1c. Indique los valores normales para cada una de ellas y las diferencias en su interpretación clínica.

Bibliografía de referencia
1. Human Besellscharft für Biochemica und Diagnostica mbH. 2005. Glycohemoglobin HbA1-Test. Fast Ion-
Exchange Resin Separation Method. Inserto.
2. Kaplan, L. A. y A. J. Pesce, S. C. Kazmierczak. 2003 Clinical Chemistry. Theory, Analysis, Correlation. 4ª.
Edición. Mosby, Inc. pág. 580-600
3. Murray, R., Mayes, P., Granner, D., Rodwell, V. 2001. Bioquímica de Harper. 15ª Edición en español,
traducida de la 25ª Edición en inglés. Págs. 83-84
4. Sacks, David B. et al. 2002. Guidelines and Recommendations For Laboratory Analysis in the Diagnosis and
Management of Diabetes Mellitus. The National Academy of Clinical Biochemistry. Págs 27-33 (Disponible en
http://www.aacc.org/NR/rdonlyres/1B0F23CE-7458-442E-BDA4-3096BD6E4C41/0/1_diabetes_overview.pdf ).

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ANEXOS

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ANEXO 1.

REGLAMENTO PARA USO DE LOS LABORATORIOS DEL I2QB3 VERSIÓN PARA ESTUDIANTES
Primer semestre 2024

Las actividades que se realizan en los laboratorios de Química y Ciencias Biológicas del Instituto de
Investigaciones Químicas, Biológicas, Biomédicas y Biofísicas (I2QB3), conllevan riesgos inherentes a la
naturaleza de los mismos; por lo tanto, se requiere que quienes se dispongan a trabajar en ellos se encuentren
debidamente capacitados y sean autorizados para mantener un comportamiento responsable acorde al
presente reglamento. El estudiante debe conocer y aplicar las normas y procedimientos que garanticen su
seguridad personal y la de sus compañeros, así como un aprovechamiento óptimo de las instalaciones
disponibles para su aprendizaje practico.
Los procedimientos administrativos, docentes y estudiantiles debidamente normados están contenidos en
este reglamento.

A. LINEAMIENTOS DE INGRESO A LAS ÁREAS

1. Para poder ingresar a las áreas de trabajo del laboratorio, el Estudiante debe: a. Estar inscrito en el curso
correspondiente.
b. Firmar de conocimiento y aceptación el Contrato de Aceptación del Reglamento para Estudiantes del Uso de
Laboratorios del I2QB3, el cual será distribuido por su docente de laboratorio a través de un Google Form. Este
contrato debe firmarse una vez al semestre.
2. Para poder asistir a laboratorios el estudiante debe:
a. Regirse por el presente Reglamento.
b. Presentarse puntual a la entrada del laboratorio.
c. Es obligatorio el uso de los siguientes accesorios:

● Bata blanca según las siguientes especificaciones: que cubra hasta la altura de la rodilla, con mangas largas,
confeccionada en tela de algodón o gabardina (que tenga mayor porcentaje de fibra natural); el cierre
preferiblemente a base de botones; puede tener solamente una bolsa frente al corazón y no debe tener cinturón
colgante ni aberturas a los lados para meter las manos; debe incluir el logo de la UMG sobre la única bolsa.
● Zapatos bajos completamente cerrados, que cubran todo el pie y con suela antideslizante. No se aceptan
zapatillas ni zapatos de tacón.
● Lentes de protección.
● Pantalón largo, sin agujeros.
3. Dentro de los laboratorios está prohibido:
a. Presentarse en pantalones cortos o faldas.
b. Ingresar maletines, mochilas, paquetes, loncheras y carteras.
c. Usar artículos personales, tales como computadoras, reproductores de música y video, etc.
d. Utilizar teléfonos celulares o cámaras. Únicamente se podrá hacer uso de estos dispositivos con
justificación del catedrático.
e. Ingresar alimentos y bebidas.
f. Presentarse bajo influencia de drogas (alcohol, estupefacientes o psicotrópicos).
4. Es responsabilidad del estudiante dejar sus pertenencias en un lugar seguro ANTES de ingresar al laboratorio.
El I2QB3 cuenta con casilleros designados para colocar objetos personales, pero NO SE HACE RESPONSABLE
por pérdida o robo de los mismos dentro de sus instalaciones.

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B. LINEAMIENTOS DE TRABAJO

1. Los estudiantes deben dirigirse al área del laboratorio que les corresponde de acuerdo a su curso y cuando
el Catedrático o Auxiliar de laboratorio lo indique. No está permitido que el estudiante circule por otras áreas
ni ingrese a otras áreas dentro del Instituto sin supervisión.
2. No está permitido recibir visitas durante el tiempo que dure la práctica de laboratorio.
3. Dentro del laboratorio es obligatorio usar el cabello recogido, uniforme (cuando aplique), bata cerrada y
equipo de protección personal.
4. No está permitido el uso de maquillaje excesivo, rímel, pestañas y uñas postizas o con esmalte y accesorios
personales que puedan ocasionar accidentes, tales como gorras, anillos, aretes grandes, pulseras, collares
largos o bufandas.
5. No se recomienda el uso de lentes de contacto durante las prácticas que involucren el manejo de
solventes volátiles o de ácidos concentrados.
6. En los laboratorios y pasillos del Instituto está terminantemente prohibido fumar, comer, beber y masticar
chicle.
7. Es responsabilidad del estudiante adquirir previamente los conocimientos pertinentes acerca de los riesgos
que la práctica conlleva, las precauciones a tomar y las medidas de contingencia aplicables.
8. Los estudiantes sólo pueden trabajar en el laboratorio y hacer uso del equipo si está presente el Auxiliar o
el Catedrático. El trabajo de los alumnos con investigación de tesis debe estar autorizado por el Director
Científico del instituto y ser supervisado por un profesional designado para hacerlo.
9. Por mínimo que sea, todo incidente ocurrido en el laboratorio (derrames, roturas, incendios, mal
funcionamiento o daño de equipo, etc.) o durante actividades relacionadas, debe ser inmediatamente reportado
al catedrático o instructor de laboratorio, quien debe tomar las medidas del caso. Los estudiantes están
obligados a seguir las indicaciones de su Auxiliar o Catedrático para resolver los problemas surgidos por el
incidente.
10. El estudiante que provoque rupturas o daño de materiales, debe llenar la “Boleta de Reposición de
Materiales” y entregarla al técnico especializado o al coordinador de área. El estudiante es responsable de la
compra y reposición del material dañado, para lo cual debe presentar la factura correspondiente al coordinador
docente del área.
11. Está terminantemente prohibido jugar con pisetas, llaves de gas, fuentes de agua y cualquier otro
material, insumo o equipo de laboratorio.
12. El estudiante debe entregar al Catedrático o al Auxiliar su cuaderno, informe o cualquier otro trabajo que
requiera, ya que el Instituto no se hace responsable de la recepción o almacenamiento de estos documentos.
13. Al utilizar los microscopios y estereoscopios, cada estudiante es responsable de lo siguiente: limpiar los
oculares y objetivos usando solamente papel limpia lentes, dejar el revólver en el objetivo de menor aumento,
bajar la platina y cubrir los equipos apropiadamente. Si no se siguen los cuidados indicados, el Estudiante
puede ser amonestado o multado, según aplique.

C. LINEAMIENTOS DE SEGURIDAD

1. El Estudiante debe usar lentes de seguridad en todo momento. Únicamente las prácticas que se limiten al
empleo de microscopios, estereoscopios,
instrumentación para fisiología humana o computadoras pueden realizarse sin los lentes de protección.
2. Durante el manejo del microscopio, cada estudiante deberá retirarse los guantes para evitar la
contaminación del mismo.
3. Al efectuar operaciones que generen gases, vapores inflamables o tóxicos, es imperativo trabajar en la
campana de extracción o con el sistema de extracción de todo el laboratorio.
4. En caso de actividades que involucren materiales calientes, corrosivos, altamente volátiles, finamente
pulverizados u otros que requieran cuidado especial, se deben emplear los equipos protectores, tales como
guantes, planchas aislantes, mascarillas, etc.
5. Está prohibido dejar funcionando sistemas de extracción, reacción u otros en ausencia de la persona
responsable de atenderlos. Si es el caso, se debe establecer turnos entre los responsables del proceso a manera
que los equipos permanezcan bajo supervisión en todo momento.

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6. Antes de descartar cualquier sustancia, el estudiante debe consultar al Catedrático o al Auxiliar y seguir sus
indicaciones. Los desechos de laboratorio deben descartarse únicamente en los recipientes destinados para el
efecto y ¡NUNCA UTILIZAR EL SISTEMA DE DRENAJES!
7. En el caso de trabajar con materiales bio-infecciosos, es obligatorio trabajar con guantes, mascarilla y
frente al mechero.
8. Al concluir cualquier actividad, los estudiantes deben dejar su área, material y equipo de trabajo limpio y
ordenado. Si la actividad involucra materiales bio-infecciosos, deben limpiar el lugar de trabajo con cloro al 0.5
% y etanol al 70 % y lavarse las manos antes de abandonar el laboratorio.
9. Si el Estudiante presenta alguna de las siguientes condiciones de salud DEBE notificar al catedrático:
cualquier enfermedad crónica (hipertensión o hipotensión arterial, alergias a cualquier sustancia, diabetes,
hipoglucemia, epilepsia, cáncer, leucemia, etc.) o situación fisiológica de importancia (embarazo, estar en
periodo de lactancia, tomar medicamentos con efectos secundarios graves o que afecten su desempeño en el
laboratorio, etc.).
10. Si el estudiante presenta síntomas gripales, como tos, secreción nasal, fiebre o congestión, deberá informar
a su Catedrático y Auxiliar y podrá ingresar al laboratorio únicamente utilizando mascarilla.
11. En caso de emplear cilindros con gases comprimidos, éstos deben ser transportados únicamente por medio
de una carretilla apropiada y estar sujetados a la pared o a la carretilla (NUNCA deben ser rodados o
arrastrados).
12. Se aceptarán órganos o especímenes de disección para su resguardo únicamente durante el día en que se
realizará la práctica. Para esto se deben seguir los lineamientos e indicaciones proporcionados por el personal
del I2QB3.
13. El estudiante debe respetar las señales de emergencia y nunca bloquear las rutas de evacuación ni el
acceso a dispositivos de seguridad con objetos personales u otros que puedan incrementar el riesgo de
accidente. En caso de una emergencia, todos los estudiantes deberán seguir las indicaciones del personal del
I2QB3 y del catedrático de laboratorio.
14. Cualquier estudiante que no cumpla con este reglamento puede ser objeto de expulsión temporal o
definitiva por parte de los docentes, Técnico Especializado, el Coordinador de Área o el director Científico.

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