Fluitest GOT AST

ASPARTATE AMINOTRANSFERASE

Información:
MDH
oxaloacetato+NADH+H+ L-malato + NAD+
Catálogo No. Contenido
1176 R1 8x 15 ml R2 1x 25 ml NADH se oxida a NAD +. La tasa se determina fotométricamente, la disminución de
NADH es directamente proporcional a la tasa de formación de oxaloacetato y por
1177 R1 4x 50 ml R2 4x 10 ml
lo tanto la actividad de AST.
1178 R1 4x 100 ml R2 2x 40 ml
H7001 Hit I (ILab*) R1 6x 47 ml R2 6x 11 ml Concentración de reactivos:
R1:
H7003 Hit 917 (AU*) R1 6x 60 ml R2 6x 14 ml
Tris buffer pH 7.8 100 mmol/l
AU7003 AU R1 6x 60 ml R2 6x 14 ml L-Aspartato 200 mmol/l
1101 P-5-P R0 6x 3 ml LDH 800 U/l
MDH 600 U/l
( * ) El kit contiene código de barras unicamente para el sistema Hitachi. R2:
NADH2 0.18 mmol/l
Información del sistema: 2-Oxoglutarato 12 mmol/l
Sin anctivación con fosfato de piridoxal:
Hitachi 911: ACN Preparación y estabilidad:
111 Fluitest GOT AST sin activación con piridoxal fosfato
Hitachi 917: ACN 457, ACN 111 (STAT) Componentes del kit sin abrir: Hasta la fecha de expiración de +2°C a +8°C.
Con activación con fosfato de piridoxal Inicio de suero:
Hitachi 911: ACN Mezclar 5 volúmenes de R1 con 1 volumen de R2.
143 Esta solución es estable hasta 10 días at +2°C to +8°C or
Hitachi 917: ACN 143 Hasta 1 día at +20°C to +25°C.
Revisar: Para la medición con fosfato de piridoxal en los analizadores Hitachi Inicio de sustrato
911/912 se requieren etiquetas especiales. Estas etiquetas están disponibles bajo R1:Listo para usar.
petición. Para la aplicación en el Hitachi 912, utilice un sistema abierto o póngase R2:Listo para usar.
en contacto con el servicio de atención al cliente de Analyticon. Estabilidad en uso: R1 28 días
R2 90 días
Fluitest GOT AST con activación con piridoxal fosfato
Uso previsto: Componentes del kit sin abrir: hasta la fecha de expiración de +2°C a +8°C
Prueba in vitro para la determinación cuantitativa de aspartato amino-transferasa
(AST) en suero y plasma humanos, con o sin activación con fosfato de piridoxal. Inicio de sustrato:
R1: Mezclar bien 100 partes de R1 y 1 parte de
Resumen: solución P-5-P(por ejemplo,10 ml R1+100µl P-5-P).
La aspartato aminotransferasa (glutamato-oxaloacetato-transaminasa) pertenece a R2: Listo para su uso.
las transaminasas, que catalizan la interconversión de aminoácidos y -cetoácidos Estabilidad en uso solución de trabajo P-5-P
por transferencia de grupos amino. La aspartato aminotransferasa se encuentra activada:
comúnmente en el tejido humano. Aunque se encuentra que el músculo cardíaco
R1 6 días
tiene la mayor actividad de la enzima, también se ha observado una actividad R2 90 días
significativa en el cerebro, el hígado, la mucosa gástrica, el tejido adiposo, el
músculo esquelético y los riñones. La AST está presente tanto en el citoplasma Muestra:
como en las mitocondrias de las células. En los casos que involucran una lesión Recolectar suero en tubos estándar.
tisular leve, la forma predominante de AST es la del citoplasma, con una cantidad Plasma con Heparina o EDTA.
menor que proviene de la mitocondria. El daño tisular severo hace que se libere Estabilidad: 24 horas de +20°C a +25°C
más enzima mitocondrial. Los niveles elevados de transaminasas pueden indicar 7 días de +2°C a +8°C
un infarto de miocardio, enfermedad hepática, distrofia muscular y daño a los Separar suero/plasma del cóagulo/células dentro de 8 horas a tempratura ambiente
órganos. En 1955, Karmen et al describieron la primera determinación cinética de la o 48 horas de +2°C a +8°C.
actividad de AST en suero. La Federación Internacional de Química Clínica (IFCC) Centrifugar muestras que contengan precipitado antes de realizar el ensayo.
recomendó en 1977 y 1980 procedimientos estandarizados para la determinación Notas:
de la AST, incluida la optimización de las concentraciones del sustrato, el empleo Para uso diagnóstico in vitro.
de los tampones TRIS *, la preincubación del tampón y el suero combinados para Precaución! R1 contiene componentes peligrosos.
permitir que se produzcan reacciones secundarias con NADH, inicio del sustrato, y La hoja de datos de seguridad del material contiene información
activación opcional del fosfato de piridoxal. En 2002, la IFCC confirmó su adicional relacionada con la seguridad. Está disponible para descargar
recomendación y la extendió a 37 ° C. Este método se deriva del método de desde nuestra página [Link] Ejercite las
referencia de la IFCC. * TRIS = Tris (hidroximetil) -aminometano precauciones normales requeridas para el manejo de todos los reactivos
de laboratorio.
Principio de la prueba: Procedimiento de la prueba:
Fluitest GOT AST sin activación con piridoxal fosfato Materiales proporcionados
Prueba UV de acuerdo al método estandarizado: • Soluciones de trabajo descritas arriba
 Muestra y adición de R1 (buffer) Materiales adicionales requeridos
 Adición de R2 e inicio de la reacción: • Calibradores y controles descritos abajo
• 0.9% NaCl
2-oxoglutarato + L-aspartato AST L- glutamato + oxaloacetato
AST es la enzima que cataliza esta reacción de equilibrio. El incremento
oxaloacetato es medido en una reacción indicadora subsecuente que es catalizada
por la malato deshidrogenasa.
MDH
oxalacetato + NADH + H+
L-malato + NAD+
En la segunda reacción, NADH se oxida a NAD. La tasa de disminución en NADH
(medida fotométricamente) es directamente proporcional a la tasa de formación Proceso manual de inicio de suero:
de oxalacetato, y por lo tanto la actividad AST.
Longitud de onda: Hg 334 nm, Hg 340 nm o Hg 365 nm
Fluitest GOT AST con activación con piridoxal fosfato Temperatura: +25 / + 30 / +37°C
Prueba UV de acuerdo al método estandarizado: Cubeta: 1 cm
 Muestra y adición de R1 (buffer/pyridoxal phosphate) Ajuste de cero: contra
 Adición de R2 e inicio de la reacción: aire
L-aspartato+ Complejo enzima-fosfato Oxaloacetato+Complejo Solución de trabajo 1000 µl
de piridoxal fosfato piridoxamina-enzima Suero/Plasma 100 µl
-cetoglutarato+Complejo L-glutamato +Complejo
enzima-fosfato de piridoxamina Mezclar, incubar por 1 min a temperatura de ensayo e inicie el cronómetro
enzima-fosfato de piridoxal
simultáneamente. Leer después de exactamente 1, 2 y 3 minutos.
El piridoxal fosfato es una coenzima que transfiere un grupo amino de un Cálculos:
aminoácido (aspartato) a otro aminoácido (glutamato), a través del correspondiente Hg 365 nm 3235 x A/min
-cetoácido. La adición de fosfato de piridoxal a la mezcla de reacción asegura una Hg 340 nm 1746 x A/min
actividad catalítica máxima, mientras que la adición de --cetoglutarato hace que el Hg 334 nm 1780 x A/min
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Am Mühlenberg 10, 35104 Lichtenfels / Germany
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fosfato de piridoxal se relibere, y por lo tanto reactiva la reacción de la

transaminasa. El aumento de oxaloacetato se determina en una reacción
indicadora catalizada por la malato deshidrogenasa.

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Imprecisión:
Proceso manual
La reproducibilidad para inicio
se determinó de sustrato:
en Hitachi 911 usando controles en un protocolo interno entre el día (n = 20). Los siguientes resultados fueron obtenidos:
Longitud de onda: Hg 334 nm, 340 nm o Hg 365 nm
Temperatura: +25 / +30 / +37°C Entre día
Cubeta: 1 cm Muestra Media SD CV
Ajuste de cero: contra aire U/l U/l %
R1 1000 µl Muestra 1 43.5 2.05 4.71
Suero/Plasma 100 µl
Muestra 2 83.4 1.95 2.34
Mezclar, incubar por 1 min a temperatura de ensayo, luego agregar:
Muestra 3 127 2.92 2.30
R2 200 µl
La reproducibilidad se determinó mediante controles dentro del protocolo entre el día (n = 20). Los siguientes resultados fueron obtenidos:
Mezclar, lea la absorbancia inicial y arranque el cronómetro simultáneamente.
Repita la lectura después de exactamente 1, 2 y 3 minutos.
En la corrida
Cálculos: Muestra Media SD CV
Hg 365 nm 3823 x A/min U/l U/l %
Hg 340 nm 2063 x A/min
2103 x A/min Muestra 1 39.8 1.13 2.83
Hg 334 nm
Limitaciones - interferencia:
Muestra 2 86.0 1.04 1.21
Criterio: Recuperación dentro de +/- 10% del valor inicial. La hemólisis interfiere
debido a la actividad AST de los eritrocitos. Muestra 3 135 1.51 1.12
Ictericia: No hay interferencia significativa hasta un índice I de 20 (bilirrubina
conjugada y no conjugada aproximada: 20 mg / dl) Comparación del método:
Hemólisis: sin interferencia significativa hasta un índice H de 1100 (concentración Una comparación entre Analyticon Fluitest AST (y) y un ensayo comercial (x)
aproximada de hemoglobina: 1100 mg / dl). brindó los siguiente sresultados con 58 muestras:
Lipemia (Intralípidos): No hay interferencia significativa hasta un índice L de 325 y = 0.946 x + 1.385; r= 0.998
(concentración aproximada de triglicéridos: 650 mg / dl). Existe una correlación
pobre entre la turbidez y la concentración de triglicéridos. Control de calidad:
La lipemia puede causar una señalización de la absorción como resultado de un Suero humano control
aumento de la absorción.
Contronorm Plus 5 x 5 ml #1205
Las muestras de sangre solo se deben extraer antes de la administración de
20 x 5 ml #1220
sulfasalazina y sulfapiridina. Concentraciones fisiológicas en plasma de 
Contropath Plus 5 x 5 ml #1305
sulfasalazina o sulfapiridina.
20 x 5 ml #1320
Se puede llevar a resultados incorrectos.
El efecto de los fármacos y sus productos metabólicos en la prueba no se conoce Los intervalos y límites de control deben adaptarse a los requisitos específicos del
en todos los casos. En caso de duda, se recomienda repetir la prueba después de laboratorio y del país. Los valores obtenidos deben estar dentro de los límites
que se haya suspendido el medicamento. Sin embargo, el medicamento solo puede establecidos. Cada laboratorio debe establecer las medidas correctivas que deben
ser suspendido de acuerdo con las instrucciones del médico que lo atiende. tomarse si los valores se encuentran fuera de los límites.

Rango de medición Calibración:

Si el cambio de absorbancia por minuto es mayor que E / min 0.160 a 340 nm o S1: 0.9% NaCl
E / min 0.080 a 365 nm la muestra debe diluirse. En instrumentos sin función de S2: Bio Cal® E 10 x 3 ml #1430
repetición, diluya las muestras manualmente con NaCl al 0.9% o agua destilada /
desionizada (por ejemplo, 1 + 3). Multiplique el resultado por el factor de dilución Frecuencia de calibración:
apropiado (por ejemplo, factor 4). Se recomienda la calibración en dos casos:
Límite de dilución Hitachi: 800 U / lo 13,34 µkat / l • Después de un cambio de lote
• Cuando sea requerido en el proceso de control de calidad.
Valores de referencia Desechos:
Cada laboratorio debe investigar la transferibilidad de los valores esperados a su Por favor, revisar las regulaciones legales.
propia población de pacientes y, si es necesario, determinar su propio rango de
referencia. Para fines de diagnóstico, los resultados de la AST siempre deben Literatura:
evaluarse junto con la historia clínica del paciente, el examen clínico y otros 1. Bergmeyer HU, Herder M, Rej R. Approved recommendation (1985) on IFCC
hallazgos. methods for the measurement of catalytic concentration of enzymes. Part 2.
Fluitest GOT AST sin activación con piridoxal fosfato IFCC Method for aspartate aminotransferase. J Clin Chem Clin Biochem
De acuerdo al método IFCC 1986;24:49.
2. Glick MR, Ryder KW, Jackson SA. Graphical Comparisons of Interferences in
U/I µkat/I
Clinical Chemistry Instrumentation. Clin Chem 1 986;32:470-474.
Hombres <50 < 0.85 3. Greiling H, Gressner AM (Hrsg.). Lehrbuch der Klinischen Chemie und
Mujeres < 35 < 0.60 Pathobiochemie,3. Auflage. Stuttgart/New York: Schattauer Verlag, 1995
4. Karmen A et al. J Clin Invest 1955;24:126.
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De acuerdo a DGKC: 6. Thefeld W et al. Dtsch med Wschr 1974;99:343.
+37°C U/L µkat/L 7. Tietz NW (Hrsg.). Clinical Guide to Laboratory Tests, 3. Auflage. Philadelphia,
GOT AST/P5P hombres 10 – 50 0,17 – 0,83 PA: WB Saunders, 1995:76-77.
8. Wallnöfer H, Schmidt E, Schmidt FW (Hrsg.). Synopsis der Leberkrankheiten.
GOT AST/P5P mujeres 10 – 35 0,17 – 0,58 Stuttgart: Georg Thieme Verlag, 1974.
De acuerdo con Tietz: 9. Thomas L, Klein G. Neue vorläufige Normalbereiche für neun Serumenzyme.
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+37°C U/L µkat/L 10. Schumann G et al. IFCC Primary Reference Procedures for the Measurement
GOT AST/P5P hombres 15 – 40 0,26 – 0,68 of Catalytic Activity Concentrations of Enzymes at 37°C – Part 5. Reference
Procedure for the Measurement of Catalytic Concentrations of Aspartate
GOT AST/P5P mujeres 13 – 35 0,22 – 0,60
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11. Thefeld W, Hoffmeister H, Busch, E-W, Koller PU, Vollmar J. Referenzwerte
Sensibilidad analítica (límite inferior de detección): für die Bestimmungen der Transaminasen GOT und GPT sowie der
Límite de detección: 4 U/l or 0.07 µkat/l alkalischen Phosphatase im Serum mit optimierten Standardmethoden. Dtsch
El límite inferior de detección representa la concentración de AST medible más baja Med Wschr 1974;99:343-351.
que puede distinguirse de cero. 12. Klein G, Lehmann P, Michel E, Regenauer H. Vergleich der IFCC-Methoden
für ALAT, ASAT und GGT bei 37°C mit den eingeführten Standardmethoden
bei 25°C und 37°C. Lab Med 1994;18:403-404.

Analyticon® Biotechnologies AG (PGOTAST_GB-D_21_001_11.02_2018-09-12) S3/4

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