Trabajo Práctico N° 4: OBSERVACION
MICROSCOPICA DE MICROORGANISMOS
TÉCNICAS DE COLORACIÓN.
Cátedra de Microbiología Agrícola
Carrera Ingeniería Agronómica
UNSa- Sede Sur Metán
Dra. Eleonora Harries
JTP SEMIESCLUSIVA
2023
Trabajo Práctico N° 4: Microscopía y
coloraciones.
OBJETIVOS DEL PRACTICO
• Adquirir habilidad en la observación al microscopio de los
microorganismos.
• Observar la variedad de formas existentes entre los
microorganismos.
• Adquirir destreza para realizar los distintos tipos de coloraciones.
Porque usamos un microscopio en
Microbiología Agrícola?
Los microorganismos no son visibles al ojo humano
Tipos de Microscopios
✓ LUPA ESTEREOSCOPICA
✓ MICROSCOPIO
Aumento = objetivo x ocular
Resolución = aceite de
inmersión
Uso y mantenimiento
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TIPOS DE MICROSCOPIOS
Microscopio óptico Fondo oscuro
Microscopio electrónico Microscopio de fluorescencia
Microscopía de Microorganismos
• Montaje en estado fresco.
Bacterias Hongos
• Coloraciones
Bacterias Hongos
PREPARACION DE BACTERIAS PARA TINCION
PREPARACION Y FIJACION DEL
EXTENDIDO POR CALOR
COLORACION
OBSERVACION
MORFOLOGIA BACTERIANA
MACROSCOPICA MICROSCOPICA
(forma y caracteristicas de la colonia) (forma de las células bacterianas bajo microscopio)
COLORACIONES
Coloración simple Coloración diferencial Coloración especializada
MORFOLOGÍA DIFERENCIACION VISUALIZAR
DE BACTERIAS ESTRUCTURAS
COLORACION DE GRAM
Gram positivas Gram negativas
a) Realizar el frotis o extendido con
la muestra de interés.
FIJACION b) Fijar con calor.
c) Cubrir con Violeta de genciana o
cristal violeta, 1-2 minutos.
d) Lavar con agua.
e) Cubrir con Lugol (mordiente), 2
CRISTAL minutos.
VIOLETA f) Lavar con agua.
g) Decolorar con alcohol, 20
segundos.
LUGOL h) Lavar con agua.
i) Colocar Safranina o Fucsina, 30
segundos a 1 minuto.
j) Lavar con agua y dejar secar.
k) Observar al microscopio (100X)
DECOLORACION con una gota de aceite de
inmersión.
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SAFRANINA explicativos en
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COLORACION DE GRAM
Bacilos Gram positivos Bacilos Gram negativos
Cocos Gram positivos Cocos Gram negativos
COLORACIONES ESPECIALES
ENDOSPORAS FLAGELOS
CAPSULAS ACIDO ALCOHOL RESISTENTES
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OBSERVACIONES DE HONGOS
Penicillium sp. Rhizopus sp.
Fusarium sp. Aspergillus sp.
HONGOS UNICELULARES
Levadura Saccharomyces cerevisae bajo microscopio confocal con sonda fluorescente roja
que tiñe vacuolas (A2 y B2) y péptido antimicrobiano marcado con fluorescencia verde (A3
y B3). Nótese la colocalizacion del péptido en vacuolas (A4 y B4). A1: cepa silvestre y A2:
cepa mutante resistente al péptido.
PRACTICAMOS LO QUE SABEN??
Moodle: Micro*2017
GUÍA DE ESTUDIO
FOROS DE CONSULTA
GRACIAS
