Enzimas

Bq. Marcell Gatica Miranda, PhD.

[email protected]

1
Resultado de Aprendizaje:

R2. Explicar las características de las enzimas y los factores que afectan su regulación
en contexto biológico.

Recursos conceptuales involucrados:

• Propiedades de las enzimas.

• Cinética enzimática.
• Factores que regulan la velocidad enzimática.

2
 Contexto

Observa estas dos imágenes:

¿Qué son las enzimas?

¿Cuáles son las principales

funciones de las enzimas en el
cuerpo?

Mencione algunas enzimas

3
 Reacción Química
?
Reactivo A + Reactivo B P

Espontaneidad de
Termodinámica
la reacción. Cinética
ΔG (-)
(exergónica) Si Es posible realizar

?
Rápidas

Lentas

4
 Reacciones Químicas en el Organismo

Las reacciones químicas que ocurren en los organismos

vivos presentan energías de activación tan elevadas, que
las velocidades de reacción deberían ser muy lentas →
debería ser incompatibles con la vida.

¿Cómo podemos explicar este fenómeno?

ENZIMAS
5
ENZIMAS catalizadores biológicos

6
 Enzimas

¿Qué son las Enzimas?

• Las enzimas son catalizadores, es decir, moléculas que sin consumirse, aumentan
significativamente la velocidad de una reacción química →106-1014 veces.

• Las enzimas en su mayoría son proteínas que catalizan reacciones químicas en los seres
vivos.

• No hacen factibles las reacciones imposibles, sino que solamente aceleran las que
espontáneamente podrían producirse.

7
 Enzimas

¿Cuáles son las propiedades de las Enzimas?

• Son específicas: cada enzima cataliza un

solo tipo de reacción.

• Casi siempre actúa sobre un único sustrato.

• Hacen posible reacciones que en

condiciones fisiológicas no tendrían lugar
→ aceleran la velocidad de reacción.

• La reacciones sin catalizador requerirían

condiciones extremas de presión, T° o pH.

8
 Enzimas

• En una reacción catalizada por enzima (E), los reactivos se denomina

sustratos (S), es decir, la sustancia sobre la que actúa la enzima.

• El sustrato es modificado químicamente y se convierte en uno o más

productos (P).

• Como esta reacción es reversible se expresa de la siguiente manera:

El sustrato se une a una

región concreta del
enzima, llamada centro
activo o sitio activo.
9
 Propiedades Generales de las Enzimas:
NOMENCLATURA

• Las enzimas se clasifican y designan de acuerdo a la

naturaleza de las reacciones químicas que catalizan.

• Existen seis clases principales de reacciones que catalizan

las enzimas, así como subclases y sub-subclases dentro
de las clases.

10
 Clases de Enzimas

1. Oxidorreductasas: Reacciones de oxido-reducción.

2. Transferasas: Transferencia de grupos intactos de una molécula a otra.

3. Hidrolasas: Reacciones de hidrólisis.

(ruptura de enlaces con participación de agua).

4. Liasas: Adición de grupos a dobles enlaces,

o formación de = por eliminación de grupos.

5. Isomerasas: Transferencia intramolecular de un grupo.

(cis/trans, L/D, aldehído/cetona).

6. Ligasas: Unión de dos sustratos a expensas de la hidrólisis de ATP.

11
Enzimas

12
Clases de Enzimas

13
 Enzimas
NOMBRE RECOMENDADO, SISTEMÁTICO Y NÚMERO CLASIFICATORIO

Enzimas

Nombre
recomendado o Nombre sistemático Clasificatorio
trivial

Tripsina, peptidil-L-amino ácido

EC 3.4.17.1.
carboxipeptidasa hídrolasa

1°: Clase principal

Sustrato – Tipo de
Asignados por su 2°: Subclase
R(x)- terminación
descubridor 3°: Sub-subclase
asa
4°: Número serie de la E
14
 Enzimas

Enzimas

Simples o Zimógenos o
Isoenzimas
Complejas proenzimas

Diferente
Mecanismo de
proteína con
seguridad
igual función

¿Qué significa que una enzima sea simple o compleja?

15
Propiedades Generales de las Enzimas
→ Formada sólo por aminoácidos

(No proteica)
(Unión covalente)

Apoenzima: parte proteíca no activa de una enzima

Holoenzima: Apoenzima+ Cofactor 16
 Propiedades Generales de las Enzimas
Es importante señalar que las enzimas tienen grupos prostéticos. Y se deben
diferenciar de cofactores y coenzimas. El grupo prostético siempre permance unido a
la enzima (enlace covalente) en cambio cofactores y coenzimas solamente acompañan
a la enzima cuando cataliza la reacción.

❑ Un cofactor es un
componente no proteico,
termoestable y de baja
masa molecular necesario
para la acción de una
enzima. No esta unido
covalentemente.

❑ Entre los cofactores se

encuentran los iones
metálicos (Fe+2, Cu+2, K+,
Mn+2, Mg+2, entre otros).
Unión
❑ Si el cofactor es una Covalente
molécula orgánica, se le
Grupo prostético
denomina COENZIMA. “Hemo” 17
 Coenzimas
Características generales de las coenzimas:

• Son moléculas orgánicas NO proteicas que participan en la reacción enzimática y son

transformados durante ella (co-sustratos).
• Reconstituyen su estado original mediante una reacción secundaria (se reciclan en una
reacción adicional).
• Son indispensables para que ocurra la reacción enzimática.
• Actúan como transportadores transitorios de grupos químicos específicos.
• Se unen por fuerzas débiles a las enzimas y se pueden separar de estas por diálisis.

18
 Coenzimas
Principales coenzimas formadas a partir de vitaminas:

▪ La base de muchas * Vitaminas hidrosolubles

coenzimas, son las
vitaminas
ingeridas en la (PPT)
dieta.

▪ Si nos falta en la
dieta alguna (PLP)
vitamina,
podemos afectar
la homeostasis del
organismo. El
correcto
funcionamiento
de las enzimas,
implica un
individuo sano. 19
 Coenzimas
Principales coenzimas formadas a partir de vitaminas:

* Vitaminas liposolubles → No son base de coenzimas:

20
 Mecanismo de Acción de las Coenzimas
Sustrato Producto
Enzima 1

Coenzima No Coenzima
Modificada Modificada

Producto Sustrato
Enzima 2

1. La coenzima se une a un enzima.

2. La enzima capta su sustrato específico.
3. La enzima ataca a dicho sustrato, arrancándole algunos de sus átomos y generando un producto.
4. La enzima cede a la coenzima dichos átomos provenientes del sustrato.
5. La coenzima acepta dichos átomos y se desprende de la enzima.
6. La coenzima transporta dichos átomos y acaba cediéndolos a otra enzima. De esta manera la
21
coenzima se recicla.
22
 ¿ Cómo funcionan las enzimas ?
• En condiciones fisiológicas las reacciones
sin catalizar tienden a ser lentas (estabilidad
de biomoléculas).

• Muchas reacciones bioquímicas suponen

situaciones poco probables.

• Una enzima soluciona estos problemas

proporcionando un ambiente
tridimensional favorable a la reacción (sitio
activo).
Las reacciones catalizadas por las enzimas
son reacciones que ocurrirían de todas
• Las enzimas pueden acelerar las reacciones maneras espontáneamente pero a
en que participan por factores que van de velocidades muy lentas; las enzimas no son
106 a 1014 veces. moléculas mágicas - las reacciones que
catalizan deben ser químicamente posibles

23
 Enzimas

• Aceleran la velocidad de reacción química

Algunos incrementos de velocidad

producidos por las enzimas

24
 Enzimas
Especificidad:
Las reacciones enzimáticas son altamente específicas

Enzima
Sustrato Producto ΔG (-)

De grupo (= grupo
• Aceleran la velocidad de reacción química químico de molec.)
• No cambian su composición en la reacción Clase
Absoluta
(= enlace qco)
• Especificidad de sustrato (sustrato)

Especificidad
de sustrato

25
 Enzimas
Modelos de reacción química
En una reacción química se rompen enlaces de las moléculas de reactivos y se forman
nuevos enlaces, dando lugar a los productos.

B
B
A
A

• Teoría de las colisiones

• Teoría del estado de transición 26
 Enzimas: Teoría de las colisiones
o La teoría de colisiones fue enunciada por Lewis en 1918.
o Según esta teoría para que las moléculas de dos reactivos reaccionen se debe producir
un choque entre ellas.

Productos
A2 + B2 → 2 AB
Complejo
activado
B AB
A +
B Eficaz
A
Reactivos A B AB
B A B
A B
B A
B

A No Eficaz
A
A A
Choque A
A - No alcanzó E suficiente (E.
Activación).
- No tenía la orientación
adecuada. 27
 Enzimas: Teoría del complejo activado
• Fue enunciada por H. Eyring en 1935.
• La reacción transcurre a través de un intermedio, complejo activado, formado por
moléculas que han chocado y en el que algunos enlaces se han relajado y se han empezado
a formar otros.
• En este estado la energía del complejo es elevada, por lo que es inestable, y rápidamente se
descompone formando los productos de reacción.
Estado de
transición

La energía inicial que hay que

suministrar a los reactantes para
que la reacción transcurra se llama
ΔH<0 energía de activación (Ea).
→ Barrera energética

La velocidad de reacción va a depender de la energía de activación que requieran los

28
reactivos para llegar al estado de transición.
 ¿ Cómo una enzima acelera la
velocidad de una reacción?
Reduce de la energía de activación

A. La disminución de la energía de activación disminuye el impedimento de todas

las reacciones químicas.

B. La enzima disminuye la energía de activación, debido a:

1) Disminución de la entropía al acercar dos moléculas en solución.
2) Retiro de las aguas de solvatación.
3) Distorsiones y cambios en los sustratos.
4) Cambios conformacionales en la enzima para interactuar con el sustrato y
que se lleve a cabo la reacción.

29
 ¿ Cómo una enzima acelera la
velocidad de una reacción?
REACCIÓN SIN ENZIMA REACCIÓN CON ENZIMA

Energía de activación de la reacción catalizada es menor que la energía de activación de

la reacción sin catalizar. 30
 ¿ De qué depende la energía de activación?

❖ Depende de la suma de :

❖ Energía traslacional de las moléculas

Colisión
❖ Energía rotacional → Orientación adecuada

❖ Energía vibracional → ruptura de enlaces Reordenamiento

❖ Energía electrónica → transferencia de electrones

Si la energía es suficiente, se vence la repulsión y las moléculas se aproximan lo

suficiente para que se produzca una reordenación de sus enlaces.
31
 Enzimas
Etapas de una reacción catalizada Enzimáticamente
El estado de transición es inestable

1. E reconoce a S. Comienza la
formación de ES.
2. Complejo ES formado.
3. Transformación del complejo ES
a un complejo intermedio EI.
4. Comienza la formación del
complejo EP.
5. Empieza la disociación de EP.
6. Disociación Total de P y
liberación de E.

S +E ES ES EI EP EP E +P
32
 Enzimas

Las enzimas cumplen su papel

catalítico gracias a:
• Fijación estereoquímicamente
complementaria del sustrato.
• Transformación catalítica del
mismo.

En ambas funciones participan:

• Cadenas laterales de los aminoácidos.
• Grupos o moléculas no proteicas: Centro Activo en la enzima tiene
❖ Grupos prostéticos que ser capaz de:
❖ Cofactores
❖ Iones metálicos Fijar específicamente al substrato
Transformarlo catalíticamente.

33
Enzimas
Sitio Activo

34
 Enzimas
Sitio Activo

• Región catalítica especializada:

Hendidura 3D superficial (unión S)
Volumen reducido

• Microentorno único:
Agua excluida (salvo reactiva)
pK especiales

• Multiplicidad de enlaces débiles:

Energía de unión alta
kd baja
Especificidad:
• Especificidad = Complementariedad:
• Absoluta.
Forma 3D complementaria E-S
• Relativa.
Enlace direccionales
Llave cerradura o Ajuste inducido
35
 Enzimas

La unión del sustrato es muy específica

• Complementariedad geométrica
• Complementariedad de cargas, uniones iónicas
• Modelos:
Llave – cerradura.
Encaje inducido
Estado de transición

36
 Especificidad enzimática

• Modelo llave-
cerradura :
estructura del
sustrato y la del
centro activo son
complementarias.
• Este modelo es
válido en muchos
casos, pero no es
siempre correcto.

• Modelo ajuste inducido: El centro activo adopta la

conformación idónea sólo en presencia del
sustrato.
• La unión del sustrato al centro activo del enzima
desencadena un cambio conformacional que da
lugar a la formación del producto. 37
 Especificidad enzimática
La unión del sustrato es muy específica

38
 Enzimas
Modelos de interacción Enzima-sustrato

39
 Enzimas
Estabilización del Estado de Transición

La teoría del Ajuste Inducido se amplía en la actualidad definiendo la acción

enzimática como:

Centro Activo enzimático es en realidad complementario no al substrato o al

producto, sino al estado de transición entre ambos

40
¿ Qué factores afectan la
actividad de una enzima?

– pH
– Temperatura

41
 Efecto del pH sobre la actividad enzimática
• Los enzimas poseen grupos químicos
ionizables (-COOH; -NH2; -SH; etc.) en las
cadenas laterales de sus aminoácidos.

• Según el pH del medio, estos grupos pueden

tener carga eléctrica positiva, negativa o
neutra.

• Como la conformación de las proteínas

depende, en parte, de sus cargas eléctricas,
habrá un pH en el cual la conformación será
la más adecuada para la actividad catalítica.
→ Este es el llamado pH óptimo.

• La mayoría de las enzimas son muy sensibles

a los cambios de pH.

• Desviaciones de pocas décimas por encima o

por debajo del pH óptimo pueden afectar
drásticamente su actividad.

42
 Efecto de la T° sobre la actividad enzimática

• En general, los aumentos de T° aceleran las

reacciones químicas: por cada 10°C de
incremento, la velocidad de reacción se
duplica.

• Las reacciones catalizadas por enzimas

siguen esta ley general. Sin embargo, al ser
proteínas, a partir de cierta T°, se empiezan
a desnaturalizar por el calor.

• La temperatura a la cual la actividad

catalítica es máxima se llama temperatura
óptima.

• Por encima de esta T° óptima, el aumento

de velocidad de la reacción debido a la
temperatura es contrarrestado por la
pérdida de actividad catalítica debida a la
desnaturalización térmica, y la actividad
enzimática decrece rápidamente hasta
anularse.
43
 Enzimas
Disminuyen la energia
de activación
La mayoría son
proteínas

Su deficiencia: Catalizadores Mecanismos de Rx:

Enzimopatías biológicos
Colisiones y estado
Diagnóstico Aceleran la de transición
Terapia velocidad de
reacción
Blanco terapéutico Enzimas

Aumentan la
velocidad de Rx, solo
Existen enzimas: de reacciones que son
Simples posibles.
Se clasifican en 6 No alteran el
Complejas
grupos equilibrio químico
Zimogenos
Isoenzimas
44
 CIERRE

1) Describa tres propiedades de las enzimas.

2) Mencione tres distintas clases de enzimas.
3) Defina sitio activo. Indique cómo las moléculas que se unen al sitio activo
para que ocurra la catálisis.
4) Indique similitudes y diferencias entre cofactor y coenzima.
5) Defina apoenzima, holoenzima y grupo prostético.
6) Explique cómo el pH puede afectar la unión de la enzima a su sustrato.
7) Explique cómo la temperatura puede afectar la unión de la enzima a su
sustrato.

45
 Enzimas

Bq. Marcell Gatica Miranda, PhD.

[email protected]

46
Resultado de Aprendizaje:

R2. Explicar las características de las enzimas y los factores que afectan su regulación
en contexto biológico.

Recursos conceptuales involucrados:

• Propiedades de las enzimas.

• Cinética enzimática.
• Factores que regulan la velocidad enzimática.

47
 Contexto

Observa estas dos imágenes:

¿Se puede aumentar o

disminuir la velocidad de
reacción de una enzima?

¿Qué provoca en el organismo

la actividad excesiva de una
enzima?

48
Cinética enzimática

49
 Cinética enzimática

o Corresponde al estudio de las velocidades de reacción y la forma en que cambia en

respuesta a cambios en los parámetros experimentales.

o La cinética enzimática es el análisis cuantitativo del efecto de cada uno de los factores
que intervienen en la actividad enzimática, que se evalúa a través de la velocidad de la
reacción catalizada.

o Las variables más importantes son:

o Concentración de enzima, sustratos y productos (incluyendo

inhibidores y/o activadores)
o pH
o Temperatura

50
 Cinética enzimática

Michaelis-Menten

Michaelis L and Menten M L 1913

Kinetik der Invertinwirkung; Biochem.
Z. 49 333–369

* Los primeros experimentos de cinética enzimática, realizados bajo condiciones

controladas de pH, lo realizaron Michaelis y Menten en 1913, (una vez que en 1909
Sorensen introdujera el concepto de pH).

Realizaron sus estudios utilizando el concepto de velocidades iniciales de

reacción y diferentes concentraciones de sustrato.

51
 Cinética enzimática

[ ]
• Al seguir la velocidad de aparición de
P producto (o de desaparición del
sustrato) en función del tiempo se
obtiene la llamada curva de avance de
la reacción, curva de progreso, o
simplemente, la cinética de la reacción.

ES S • A medida que la reacción transcurre, la

velocidad de acumulación del producto
E va disminuyendo porque se va
consumiendo el sustrato de la
tiempo reacción. 52
 Cinética enzimática
La velocidad de la reacción podemos medirla mediante el incremento de producto en
función del tiempo:

La [P] aumenta en función del tiempo hasta

alcanzar el equilibrio de la reacción.
V0
Equilibrio
[P]
La velocidad inicial → Igual a la pendiente de la
curva de avance a tiempo cero.
Se define como n° de moles de productos
formados por segundo cuando la reacción acaba
de empezar.
Δ𝑃
V0 = t≈0
Δ𝑇
Tiempo
- La medida de V0 se realiza antes de que se consuma el 10% del total del sustrato, de forma
que pueda considerarse la [S] como esencialmente constante a lo largo del experimento.
- En estas condiciones no es necesario considerar la reacción inversa, ya que la cantidad de
producto formada es tan pequeña que la reacción inversa apenas ocurre. 53
 Cinética enzimática
Para estudiar la cinética enzimática se mide el efecto de la concentración inicial de sustrato
sobre la velocidad inicial de la reacción, manteniendo la cantidad de enzima constante:

Equilibrio, pto final

Saturación

Curva de progreso Curva de saturación

Curva de saturación: Se mide el efecto de la concentración de sustrato sobre la velocidad
inicial de una reacción catalizada por una enzima (manteniendo constante la [E]). 54
 Cinética enzimática
Modelo cinético de Michaellis-Menten, Briggs- Haldane

o Relaciona la velocidad inicial con la concentración de sustrato.

o Parte del supuesto del estado estacionario del complejo ES.

Hipótesis del estado estacionario:

como la concentración de enzima es muy pequeña y la concentración de sustrato
muy grande en el primer momento se llega a una concentración de complejo
enzima - sustrato que es constante para toda la reacción.

o velocidad de formación de ES = velocidad de descomposición de ES

55
 Cinética enzimática

▪ Michaelis y Menten (1913) y Briggs- Haldane, propusieron un modelo simple que da

cuenta de la mayoría de los rasgos de las reacciones catalizadas por enzimas.
▪ En este modelo, la enzima (E) se combina reversiblemente con su sustrato (S) para
formar un complejo ES que posteriormente genera el producto, recuperándose la E
libre.
▪ El modelo, involucrando una molécula de S, es representado por:
k1 k2
E+S ES E+P
k-1

▪ La ecuación de Michaelis-Menten, describe como la velocidad de reacción varía con la

concentración de sustrato:

56
Cinética enzimática

57
 Cinética enzimática
Significado de los parámetros cinéticos

1. Significancia de la km:

o Km : concentración de sustrato necesaria

para alcanzar la mitad de la velocidad
máxima (Vmáx).

o La Km es característica de cada enzima y su

sustrato particular.

o La Km no depende de la concentración de la
enzima.

o El valor de Km da idea de la afinidad de la

enzima por el sustrato (sólo si K2 es muy
pequeño): A menor Km, mayor afinidad del
enzima por el sustrato, y a mayor Km, menor
afinidad.
58
 Cinética enzimática
¿Cuál es la importancia fisiológica
de la Km?

Hexoquinasa

Enzima km
Hexoquinasa I 0,1 mM
Hexoquinasa IV 5 mM
(Glucoquinasa)

Normoglicemia ~ 5 mM
59
 Cinética enzimática
Significado de los otros parámetros
cinéticos
o Vmax: velocidad máxima teórica: velocidad
cuando todos los centros activos están
ocupados por sustrato.

o Kcat: número de recambio: número de

moléculas de sustrato convertidas en
producto por molécula de enzima y unidad de
tiempo, en condiciones de saturación de
sustrato.

o Actividad específica: unidades por mg de

proteína total en la preparación enzimática.

o Constante de especificidad: kcat/Km. Es una

medida de eficiencia catalítica de una enzima.
Evalúa la velocidad en que una enzima se
encuentra con un sustrato en solución.
60
 Cinética enzimática
Gráfico de Lineweaver-Burke:

61
 Cinética enzimática
Se necesita caracterizar cinéticamente en el laboratorio de bioquímica a una enzima X.
Para ello se realiza un experimento en condiciones de velocidad inicial, aumentando las
concentraciones de sustrato y midiendo las velocidades. Los datos obtenidos son los
siguientes:
Sustrato mM Velocidad
(mmol L-1 min-1 )
1,5 1,5
2,5 2,3
5 3,5
7,5 4,8
10 5,9
15 7,1
20 7,2

Realice el gráfico de Michaelis-Menten

Realice el gráfico de Lineweaver-Burke (doble recíproco)
Calcule la Km de la enzima por ambos métodos….
62
 Cinética enzimática
Inhibición Enzimática:

Inhibidores
¿Qué es un inhibidor enzimático?

o Efector que hace disminuir la

actividad enzimática, a través de Isostéricos Alostéricos
interacciones con el centro
activo (isostéricos) u otros
centros específicos (alostéricos).
Inhibidores

Irreversibles Reversiblesible

Competitivo No competitivo Acompetitivo

63
 Cinética enzimática
Inhibición Enzimática:

Los inhibidores pueden ser de dos tipos:

1. Inhibidor irreversible: modifica químicamente a la enzima.

Ej. Penicilina → Se une covalentemente a la
transpeptidasa e inhibe síntesis de pared bacteriana.
E+I E’ Ej. Aspirina → Se une irreversiblemente a la
ciclooxigenasa e inhibe síntesis de moléculas
inflamatorias relacionadas con el dolor

2. Inhibidor reversible: establece un equilibrio con la enzima libre, con el complejo

enzima-substrato o con ambos:

E+I EI

ES + I ESI
64
 Cinética enzimática
Inhibición Reversible:

o Inhibición Competitiva: El inhibidor se fija

al centro activo de la enzima libre,
impidiendo la fijación del substrato.

Inhibición reversible
Competitiva
o Inhibición No Competitiva: El inhibidor se
fija a la enzima independientemente de
No competitiva
que lo haga o no el substrato; el inhibidor,
por tanto, no impide la fijación del
substrato a la enzima, pero sí impide la Acompetitiva
acción catalítica. → disminuye la cantidad
de enzima funcional.

o Inhibición Acompetitiva: El inhibidor se

fija únicamente al complejo enzima-
substrato una vez formado, impidiendo la
acción catalítica.
65
 Cinética enzimática
Inhibición Competitiva Reversible:
Unión del inhibidor al centro activo de la enzima.

 Compiten con el S por el sitio activo de la E

 Se une solo a la E libre.
 V máx no se altera y Km cambia (aumenta).66
 Cinética enzimática
Inhibición Competitiva Reversible:
Un inhibidor competitivo produce cambios en la Km, sin afectar la Vmáx

Características:
o Las fijaciones de
sustrato e inhibidor son
mutuamente
exclusivas.
o A muy altas [S]
desaparece la
inhibición.
o Por lo general, el
inhibidor competitivo
es un análogo químico
del sustrato.
o El inhibidor es tan
específico como el
sustrato.

67
 Cinética enzimática
Inhibición No Competitiva Reversible:
Unión del inhibidor a un sitio distinto del centro activo, no compite con el sustrato.

 Se une a un lugar diferente del sitio

activo la enzima.
 Se une a la E libre y también al
complejo ES.
 Por acción del inhibidor disminuye la
Vmax pero el valor de Km no se altera.
68
 Cinética enzimática
Inhibición No Competitiva Reversible:

Ki[ESI]

69
 Cinética enzimática
Inhibición Acompetitiva (incompetitivo):
El inhibidor se une sólo al complejo enzima sustrato.

 Se une sólo al complejo ES.

 Por acción del inhibidor
disminuye la Km y la Vmax.

70
 Cinética enzimática
Inhibición Acompetitiva (incompetitivo):

 Se une solo al complejo enzima-

sustrato.
 Por acción del inhibidor
disminuye la Km y la Vmax.

71
72
Regulación de Rutas Metabólicas

73
 Enzimas
Regulación de las rutas metabólicas:
o Las velocidades de las vías metabólicas se deben adaptar a las necesidades de las células.

Niveles de
regulación

Regulación Regulación Regulación

Enzimática Hormonal Genética

Regulación de Regulación por Modificaciones

Regulación
actividad cambios en la covalentes
Alostérica
enzimática [E] reversibles

74
 Enzimas
Regulación de las rutas metabólicas:
o Las reacciones enzimáticas están organizadas en rutas bioquímicas o metabólicas.

o En cada ruta el producto de una reacción es el sustrato de la siguiente.

o Las rutas deben estar reguladas para:

• Conservar la energía.
• Mantener un estado ordenado.
• Responder a variaciones ambientales.

o Las enzimas reguladoras catalizan las reacciones más lentas y fijan la velocidad de la ruta.
75
 Enzimas

Regulación de Actividad Enzimática:

1. A nivel de Sustrato

76
 Enzimas
Regulación de Actividad Enzimática:
2. Retroinhibición o inhibición negativa “feed-back”

o Inhibición de la ruta por el producto final.

o Se impide:
• Utilización innecesaria del primer sustrato.
• Acumulación del producto final.
• Acumulación de intermediarios.

3. Regulación cruzada

o Un producto de una vía activa o inhibe una enzima de los primeros pasos de otra ruta
77
 Enzimas
Regulación de Actividad Enzimática:

Regulación por cambios en la cantidad de la enzima

o Síntesis.
o Degradación.

Regulación de la eficiencia catalítica

No covalentes Enzimas Alostéricas

o Unión de ligando Fosforilación
Covalentes ADP-ribosilación
Metilación y Acetilación

o Rupturas proteolíticas Zimógenos

o Múltiples formas de la enzima Isoenzimas, complejos multienzimáticos

78
 Enzimas
Regulación Alostérica de la Función Enzimática:
Funcionan a través de la unión reversible, no covalente, de un metabolito regulador
denominado modulador.

La mayoría de las enzimas alostéricas

están formadas por más de una cadena
polipeptídica.

Proteína Alostérica: la unión de un

modulador al sitio alostérico afecta las
propiedades catalíticas del sitio activo.
Este fenómeno ocurre por cambios
conformacionales de la enzima inducidos
por la unión del modulador. 79
 Enzimas

¿Cómo es la cinética de una Enzima Alostérica?

o La unión del sustrato es

cooperativa
o la curva de velocidad
presenta una forma
sigmoidal

✓ Enzimas homotrópicos el sitio modulador y Cinética de Tipo

el sitio activo son el mismo. sigmoidea
✓ Regulación homotrópica (+) ó (-)

✓ Enzimas heterotrópicos el sitio modulador y

el sitio activo distintos.
✓ Regulación Heterotropica (+) ó (-)

80
 Enzimas

Control Alostérico : Enzima Alostérica

o Enzimas Homotrópicos
Ej. Un pequeño incremento de la [S] provoca un gran aumento de V0

La unión del primer S

genera un cambio
conformacional que
facilita la unión de la
segunda molécula de
sustrato.

81
 Enzimas

Control Alostérico : Enzima Alostérica

82
 Enzimas

Control Alostérico : Enzima Alostérica

En una enzima alostérica la unión del sustrato es cooperativa: Modelos que
explican la cooperatividad

1. Simétrico concertado

2. Asimétrico o secuencial

83
 Proteína alostérica
Transporte de O2 por la hemoglobina:

84
 Proteína alostérica
Transporte de O2 por la hemoglobina:

85
 Proteína alostérica
Curva de saturación de O2

Forma sigmoidea: Cooperatividad positiva

N de Hill: Índice de cooperatividad
86
 Proteína alostérica

Modulador
positivo →
Aumenta
afinidad por
Modulador O2
negativo →
disminuye
afinidad por O2

2,3-DPG: 2,3 difosfoglicerato 87

 Enzimas

Regulación de la eficiencia catalítica

No covalentes Enzimas Alostéricas
Glucógeno fosforilasa
Fosforilación
Covalentes ADP-ribosilación
Metilación y Acetilación

+ glucagón Modificación covalente de la glucógeno

fosforilasa → degradación de glucógeno →
Cambio conformacional producido por la
fosforilación de un residuo de serina de cada
subunidad de la enzima, por acción de una
quinasa específica→ activa. La forma fosforilada
activa pierde actividad cuando una enzima
fosfatasa elimina los grupos fosfatos.
88
 Enzimas
Regulación de Actividad Enzimática:

Regulación por cambios en la cantidad de la enzima

o Síntesis.
o Degradación.

Regulación de la eficiencia catalítica

No covalentes Enzimas Alostéricas

o Unión de ligando Fosforilación
Covalentes ADP-ribosilación
Metilación y Acetilación

o Rupturas proteolíticas Zimógenos

o Múltiples formas de la enzima Isoenzimas, complejos multienzimáticos

89
 Enzimas
o Rupturas proteolíticas de zimógenos → Enzima activa

Un zimógeno o proenzima es un precursor enzimático inactivo.

90
 Enzimas
o Rupturas proteolíticas de zimógenos → Enzima activa

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 Enzimas
Regulación de Actividad Enzimática:

Regulación por cambios en la cantidad de la enzima

o Síntesis.
o Degradación.

Regulación de la eficiencia catalítica

No covalentes Enzimas Alostéricas

o Unión de ligando Fosforilación
Covalentes ADP-ribosilación
Metilación y Acetilación

o Rupturas proteolíticas Zimógenos

o Múltiples formas de la enzima Isoenzimas, complejos multienzimáticos

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 Enzimas
Regulación de la eficiencia catalítica

93
 Enzimas
Isoenzimas: ENZIMAS DE UTILIDAD CLÍNICA

1) Isoenzimas CK (Creatina Quinasa):

1) La CK puede presentarse en forma de 3 isoenzimas que se diferencian en su estructura:
a) CK-1 ó CK-BB, es la predominante en el tejido cerebral y en el pulmón.
b) CK-2 también llamada CK-MB es la de origen cardiaco.
c) CK-3 ó CK-MM que es la de origen muscular esquelético.
2) La aparición de CK elevada en el suero sugiere lesiones en el corazón, en el cerebro o en los músculos
esqueléticos.
3) Dependiendo del isoenzima de CPK elevado podemos diferenciar cuál es el tejido afectado.
2) Isoenzimas LDH (LDH)
1) El LDH es una enzima que se encuentra en muchos tejidos del cuerpo, pero es mayor su presencia en el
corazón, hígado, riñones, músculos, glóbulos rojos, en el cerebro y en los pulmones.
2) La LDH tiene un gran variedad de isoenzimas con leves diferencias en su estructura, que sugieren diferentes
orígenes por cada tejido:
a) LDH1 del corazón, músculos, y hematíes
b) LDH2 del sistema retículo endotelial y leucocitos
c) LDH3 de los pulmones
d) LDH4 de los riñones, placenta y páncreas.
e) LDH5 del hígado y musculo

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Vías metabólicas

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 CIERRE
Video para aprender a calcular parámetros cinéticos:
https://www.youtube.com/watch?v=sFwr4PxFmI0&ab_channel=Quimiayudas

1) ¿Cómo una enzima aumenta la velocidad de una reacción?

2) ¿Qué entiende por energía de activación?
3) ¿Qué es la Km de una enzima?
4) ¿Qué son los inhibidores? ¿Qué tipos de inhibidores existen? Describa cada
uno de ellos y mencione como cambian las propiedades cinéticas en presencia
de estos inhibidores.
5) Mencione y describa los distintos tipos de regulación de las vías metabólicas
que involucra a las enzimas.
6) ¿Qué son las enzimas alostéricas?
7) ¿Qué son las isoenzimas?

96
 Enzimas

Bq. Marcell Gatica Miranda, PhD.

[email protected]

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