“Año del Bicentenario, de la consolidación de nuestra independencia y de la
conmemoración de las heroicas batallas de Junín y Ayacucho”
FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES Y MATEMÁTICA
DEPARTAMENTO ACADÉMICO BIOLOGÍA
ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA
INFORME DE ANTIBIOGRAMA: RESISTENCIA EN GRAM NEGATIVOS Y
GRAM POSITIVOS
Estudiante: Dayanna verónica Ivonne Alva Lozano
Profesora: Maribel Denise Riveros Ramírez
Asignatura: Microbiología clínica
Año/Ciclo: 4to año / 8vo ciclo
2024-I
I. Introducción
El aislamiento e identificación de un agente infeccioso a partir de una muestra clínica
proveniente de un paciente, no es suficiente para impartir una terapia antiinfecciosa
adecuada. Actualmente, numerosos microorganismos han desarrollado múltiples
mecanismos que les permiten resistir a la acción de los más nuevos y potentes agentes
antimicrobianos.
Como no se puede predecir la susceptibilidad de las bacterias a los antimicrobianos, en
la actualidad se dispone de varios métodos para determinar el patrón de susceptibilidad
de una bacteria a los antibióticos. Entre los métodos más utilizados podemos mencionar:
1. Método de difusión del disco en agar (prueba de Kirby-Bauer). 2. Antibiograma ATB
Rapid (bioMérieux). 3. Método de dilución en caldo o en agar (Concentración
Inhibitoria Mínima [CIM]). 4. Método de la cinta o Epsilómetro EtestR (AB BIODISK).
Otro aspecto importante que se debe tener en cuenta en la realización de las pruebas de
susceptibilidad, es la elección correcta de los antibióticos a probar. A continuación, se
señalan algunos criterios que pueden ayudar a seleccionar adecuadamente dichos
agentes:
1. Microorganismo aislado2. Mecanismo de acción del antibiótico. 3. Espectro de
acción del antibiótico. 4. Biodisponibilidad del antibiótico en órganos y sistemas
(localización de la infección). 5. Origen o fuente de la infección (hospitalaria o
extrahospitalaria). 6. Estados fisiológicos del paciente (edad, embarazo, entre otros). 7.
Estados patológicos subyacentes (inmunosupresión, tratamiento previo con antibióticos,
insuficiencia renal o hepática, entre otros). La prescripción de algunos medicamentos
está sujeta en muchas ocasiones a factores o circunstancias inherentes al hospedero. Los
antibióticos no son la excepción. Es por ello, que el microbiólogo deberá conocer las
restricciones que tiene el uso clínico de algunos antibióticos, con el fin de elaborar
pruebas de susceptibilidad que proporcionen una valiosa información.
El reporte de los resultados de una prueba de susceptibilidad bien realizada, es un
instrumento que le permitirá al clínico elaborar un plan antibacteriano eficaz contra el
patógeno, seleccionando la droga menos tóxica para el paciente, y con las características
farmacocinéticas más apropiadas según la naturaleza y gravedad de la infección.
II. Objetivos
2.1. Objetivo general
Determinar la importancia clínica y microbiológica de las pruebas de susceptibilidad.
2.2. Objetivos específicos
- Elaborar correctamente un antibiograma de acuerdo al método de difusión del disco.
- Conocer los criterios que permiten la escogencia adecuada de los discos de
antibióticos a probar en un antibiograma.
- Interpretar y elaborar correctamente el reporte de un antibiograma.
III. Materiales
- Placas con agar Mueller Hinton
- Solución salina estéril.
- Patrón 0.5 del estándar de McFarland
- Medios de cultivo
- Pinzas
- Rotulador
- Discos de antibióticos
- Regla milimetrada
- Tablas de los criterios estandarizados del CLSI.
- Hisopos estériles.
IV. Método
4.1. Antibiograma por difusión
4.1.1. Método de disco-placa
Consiste en sembrar un placa con un inoculo de microorganismo puro y colocar sobre
ella discos impregnados con antibiótico. El antibiótico difunde sobre el agar
radialmente formando un gradiente de concentración, donde la máxima
concentración estará en las inmediaciones del disco y se encontrarán menores
concentraciones a medida que nos alejamos del mismo. De esta forma, si el
microorganismo es sensible a dicho antibiótico, no crecerá n las inmediaciones del
disco, generando el denominado halos de inhibición. El halo será medido con una
regla o pie de rey. La medida obtenida se interpretará según los criterios
establecidos por el comité pertinente.
El agar utilizado para realizar esta técnica depende del microorganismo a testar y el
método de incubación dependerá, a su vez, de si el microorganismo es aerobio o
anaerobio.
4.1.2. Método Epsilon-test o E-test
Sirve para determinar la CMI mediante difusión en placa. Para ello se utiliza una tira
impregnada de antibiótico en un rango de concentraciones establecido e indicado
con precisión en la tira. Las tiras se depositan en una placa inoculada con una
suspensión bacteriana 0,5 MacFarland, de modo similar al llevado a cabo para los
antibiogramas y se incuban a 37°C durante 18 horas.
La CMI corresponde al valor de punto de intersección del halo de inhibición de
crecimiento bacteriano con la tira. La colocación de la tira sobre el agar será boca
arriba, ya que si la colocamos del revés el gradiente de concentración no se formará
correctamente y se obtendrá un resultado erróneo.
4.2. Antibiograma por dilución
4.2.1. En medio sólido
Se preparan placas de agar con diferentes concentraciones de antibiótico. El proceso
de elaboración es más tedioso que en el caso del antibiograma disco-placa, ya que se
debe preparar cada placa individualmente con su concentración de antibiótico
correspondiente.
El proceso consiste en preparar el medio de cultivo y dejarlo atemperar sin que
llegue a solidificar. Por otra parte, se separan diluciones seriadas del antibiótico de
interés. Se debe calcular la concentración final de los antibióticos en el volumen
total de agar de la placa. Posteriormente, para cada una de las concentraciones, se
añade en cada placa 2 ml de la dilución de antibiótico preparada y 18 ml de agar
atemperado, se homogeneiza correctamente y se deja solidificar. Es importante que
la temperatura del agar no sea excesivamente alto para que el antibiótico no pierda
su actividad. Tras sembrar las bacterias en las placas de concentraciones diferentes,
se dejan incubar entre 18 y 24 horas y se procede a su lectura.
4.2.2. En medio líquido
Para realizar la técnica se emplea una serie de tubos de ensayos (macrodilución) o
placas con caldo. Posteriormente las placas o tubos son inoculados con suspensiones
estandarizadas del microorganismo en ensayo. Luego de la incubación a 35°C durante
16 a 18 horas se observa el desarrollo bacteriano. La menor concentración de
antibiótico, donde no hay desarrollo visible corresponde a la concentración
inhibitoria mínima. Como fue explicado en los métodos por difusión, los resultados
de los métodos por dilución están influenciados por las condiciones del ensayo, por
lo cual el procedimiento está estandarizado y debe ser controlado de acuerdo con las
distintas normativas internacionales.
V. Resultados
A B C
Figura 1. Imagen A, con presencia de resistencia a antibióticos por una BLEE sin halo
de inhibición; en la imagen B, la CIM del antibiótico es 0.125 en la imagen C,
Klebsiella Pneomoneae (Kp) cepa 1706 es sensible a meropenem, mientras que
Klebsiella 1705 es resistente al mismo antibiótico. Fuente propia.
D E
Figura 2. En la imagen D, la CIM de la Cefotaxima es 16 𝜇𝑔 ∕ 𝑚𝑙, el control positivo
y negativo del ensayo validaron la prueba. En la imagen E se obtuvo una CMI >32
𝜇𝑔 ∕
𝑚𝑙, ya que la turbidez llegaba hasta la concentración llegaba hasta el pocillo con
concetración de 32 𝜇𝑔/𝑚𝑙 y no había más diluciones preparadas. Fuente propia.
F G
Figura 3. Se observa en la imagen F, se observa una Klebsiella pneumoniae
multirresistente; en la imagen G, por el método americano, se determinó que en la placa
de la izquierda hay presencia de B-lactamasas de espectro extendido, debido a que el
halo de inhibición del disco de cefatoxima + ácido clavulánico es > de 5 mm que el halo
del disco de cefotaxima sola. En cambio, en la imagen de la derecha la diferencia del
halo de inhibición no supera los 5 mm, por lo tanto es una bactera B-lactamasas.
VI. Conclusiones
- La bacteria Klebsiella pneumoniae (KPN) mostró patrones de resistencia a
varios antibióticos, lo que sugiere una posible resistencia multirresistente. Este
hallazgo es consistente con la creciente prevalencia de infecciones hospitalarias
causadas por cepas resistentes a antibióticos comunes.
- En el caso de Klebsiella pneumoniae, los resultados sugieren la posibilidad de
que la bacteria esté produciendo beta-lactamasas de espectro extendido (BLEE),
lo cual se confirma mediante la diferencia en los halos de inhibición al usar
combinaciones de cefalosporinas y ácido clavulánico. Las pruebas de sinergia
con ácido clavulánico deben realizarse para confirmar esta hipótesis y
proporcionar una mejor guía terapéutica.
- En cuanto a la técnica del método americano, se observó que la combinación de
cefalosporinas con inhibidores de beta-lactamasas mejora la capacidad de inhibir
el crecimiento bacteriano, lo que proporciona una herramienta útil para la
identificación de enzimas beta-lactamasas.
- Las bacterias gramnegativas, como Klebsiella pneumoniae, demostraron ser más
resistentes a los antibióticos tradicionales, lo que subraya la importancia de las
pruebas de sensibilidad en el manejo de infecciones graves. En bacterias
grampositivas, la sensibilidad a los antibióticos como la vancomicina y la
ampicilina sigue siendo relativamente alta, pero también es crucial monitorear la
aparición de cepas resistentes.
- Aunque los antibiogramas proporcionan una evaluación preliminar de la
susceptibilidad bacteriana, es fundamental realizar pruebas adicionales (como la
prueba de sinergia con ácido clavulánico para BLEE) y estudios moleculares
para una identificación más precisa de los mecanismos de resistencia. Este
seguimiento es esencial para guiar el tratamiento adecuado de infecciones
resistentes.
- Los resultados del antibiograma deben ser interpretados con cautela, ya que
pueden indicar la presencia de mecanismos de resistencia complejos, como la
producción de BLEE o carbapenemasas, lo que limita las opciones terapéuticas.
La identificación temprana de estas cepas resistentes permite a los médicos
ajustar las estrategias terapéuticas, evitando el uso de antibióticos ineficaces y
reduciendo la propagación de cepas resistentes en ambientes hospitalarios.
VII. Referencias
- Basualdo J., Coto C. & Torres R., (2006). Microbiología Biomédica:
Bacteriología-Micología-Virología-Parasitología-Inmunología. Atlante. Buenos
Aires.
- Velasco J., Araque M., Araujo E., Longa A., Nieves B., Ramírez A., Sánchez K.
& Velazco E., (2008). Manual Práctico de Bacteriología clínica. Venezolana
C.A. Printed, Venezuela.
- Porres N. & Ruiz E., (2018). Microbiología clínica. Paraninfo. Madrid, España.
