3er exámen Inmuno Lab
Reacciones de aglutinación
Aglutinación: Reacción inmunológica en donde se combinan antígenos particulados con
sus anticuerpos específicos. Es semicuantitativa.
Es fácil, y es altamente sensible, es de 1 microgramo en comparación a las de
precipitación como la inmunoelectroforesis, la difusión radial de Mancini y la doble difusión
de Ouchterlony.
La aglutinación no permite la cuantificación exacta de anticuerpos, solo los resultados se
expresan en función de la dilución mayor del suero que aun permite la observación de un
aglutinado (Título del suero).
Aglutinación
Pasiva o indirecta
Activa o directa
Los antígenos que participan Los antígenos se acoplan en
en la reacción son forma artificial a partículas que
componentes naturales de la solo funcionan como soportes.
particular (Bacterias, Usando como soporte eritrocitos
levaduras, eritrocitos, o partículas de poliestireno
linfocitos, etc) (Látex).
En ambos se puede efectuar en placa o en tubo, de forma cualitativa y semicuantitativa
(título del suero).
Los eritrocitos en una prueba de aglutinación pueden ser lisados por acción del
complemento sérico y para evitar esto, el suero debe estar incubado a 56°C x 30 minutos.
Aglutinación bacteriana. Entre los antígenos localizados en la superficie celular de estos
como su capsula, pared o flagelos y la población heterogénea de anticuerpos específicos
presentes el huésped que estaba en contacto con el microorganismo en cuestión.
Este puede ser de forma artificial como la vacunación o la inmunización o natural como
con infecciones clínicas.
Aplicaciones:
Identificación y clasificación de microorganismos aislados de fuentes como exudados,
heridas, sangre, alimentos, aguas negras, etc.
Diagnósticos de cuadros infecciosos mediante hallazgo de anticuerpos en suero.
En esta práctica titulamos antisueros obtenidos en conejo contra los antígenos H y O de
Salmonella choleraesuis por aglutinación en tubo y determinar la presencia en suero de
anticuerpos específicos contra el agente causal de diferentes procesos infecciosos por
medio de placas (reacciones febriles).
Para la titulación de anti-antígenos H y O
Todos los tubos de ambos anti antígenos 0.25 ml de TBS q es la solución reguladora.
Después 0.25 ml del anti antígeno correspondiente y se diluye hasta el tubo 9, después se
le agrega el antígeno correspondiente 0.25 ml a todos, todos se llevan a baño maría 37°C
x 3 horas y luego a refrigeración. Buscas el título del suero.
Para reacciones febriles.
En placas se pone primero el suero problema en todos los pocillos para después colocar 1
gota de cada antígeno, se compara con un suero positivo y uno negativo.
Aglutinación pasiva.
Los eritrocitos se usan como soporte para antígenos. Se utilizan frescos (de una semana
a un mes) o también pueden conservarse en solución de Alsever o momificados con
formaldehido o glutaraldehído o indefinidamente en congelación o liofilizados.
A los eritrocitos frescos se les acoplan moléculas pequeñas, en este caso se utilizan
métodos químicos para establecer enlaces covalentes que unan tales moléculas con los
grupos químicos de la membrana del eritrocito. Nosotros logramos unir los enlaces
químicos por medio de tratamiento previo del eritrocito con ácido tánico.
Eritrocito sensibilizado: Eritrocito recubierto artificialmente con un antígeno.
El propósito de la aglutinación pasiva es convertir una precipitación a una aglutinación y
hacerla más sensible. Se pueden obtener títulos de 1:100000 a 1:1000000.
Se realiza aglutinación en tubo (semicuantitativa) y en placa (cualitativa) usando
eritrocitos y partículas de látex como soporte. También se hará reacción por inhibición de
hapteno como un método del uso clínico.
Titulación de un suero por aglutinación pasiva
Primero se sensibilizaron eritrocitos del grupo 0, usando cloruro de cromo y usando acido
tánico, esto lo hicieron los profes.
Para la titulación a los 10 tubos se les agrego 0.2 ml de TBS-G, y al primero 0.2 ml de
suero anti- antígeno y se hicieron diluciones hasta el tubo 10, y a todos los tubos 0.2 ml
de eritrocitos sensibilizados, se hace un 11 y 12 para los testigos. Se llevan a baño maria
y Buscamos máxima dilución.
Inhibición de la hemaglutinación por hapteno.
Los antígenos o haptenos en solución pueden inhibir la reacción de hemaglutinación
pasiva, ya que si se combinan con su anticuerpo bloquean los sitios activos
correspondientes. Gracias a esto se pueden titular los antígenos o haptenos o demostrar
su especificidad de los anticuerpos en presencia de antígenos o haptenos químicamente
relacionados.
DIAGNOSTICO PRECOZ DE EMBARAZO.
La gonadotropina coriónica humana GCH, es una hormona que aparece en el suero y en
la orina de mujeres embarazadas o en procesos neoplásicos (cáncer en hombres). Se
incuba orina con un anticuerpo anti-GCH y después se agregan partículas de látex o
eritrocitos momificados recubiertos con GCH. La sensibilidad es de 10 días después del
día del retraso menstrual, hasta 109 días después de la última regla. GCH muy alto es
sugerente de un proceso neoplásico.
Método cualitativo
A un tubo problema se agrega 0.25 ml de suero anti-GCH, y aun tubo testigo se le agrega
0.25 de solución control, suelen tenerla los kit. A los dos se les agrega 0.25 ml de orina y
a los dos una gota de eritrocitos sensibilizados. Se debe observa un anillo o botón al
fondo, la aglutinación es negativa a embarazo. Y la inhibición de la aglutinación es
positiva a embarazo.
Método cuantitativo
A todos los 8 solución salina, luego se le agrega la orina 0.25 ml al primer tubo y se diluye
hasta el 8, agregar una gota de suero anti GCH, y a todos una gota de ertitrocitos
sensibilizados con GCH, incubar 2 horas. L a dilución final o el titulo es entre la que inhibe
completamente y la que forma alglutinacion.
U.I de GCH/24hr= volumen de orina 24 hr x reciproca de dilución final x sensibilidad del
reactivo.
Aglutinación pasiva con partículas de latex.
El latex es una suspensión coloidal de partículas esféricas de poliestireno de 0.8 a 1.1
micrometros de diámetro, esta cargada negativamente. Adsober particularmente
proteínas. Estas partículas se utilizan como soporte de antigenos en pruenas de
aglutinación pasiva.
FACTOR REUMATOIDE.
En el suero de personas con artritis reumatoide, fiebre reumática y en general y en
general de procesos inflamatorios anticuerpos dirigidos contra las propias
inmunoglobulinas, principalmente IgG, A estos anticuerpos se les conoce como facto
reumatoide, los más abundantes libres en el suero pertenecen a clase IgM.
La determinación se lleva a cabo con partículas de látex recubiertas con IgG.
En placa 1 gota de suero diluido y 1 gota de reactiva de látex-gamma globulina. Luego los
control positivo o control negativo, el testigo negativo (uniforme), testigo positivo (grumos).
PCR PROTEINA C REACTIVA
La proteína C reactiva aparece en el plasma a consecuencia de infamaciones o necrosis,
durante la fase aguda de las infecciones. Se puede determinar a las 18-24 hrs después
del inicio de la enfermedad.
Se puede determinar con partículas de látex recubiertas con anti-PCR.
En un pocillo poner una gota del suero y una del reactivo del latex-anti-PCR.
Preparar el testigo negativo (uniforme) y el testigo positivo (grumos).
