FACULTAD DE INGENIERIA

Escuela Profesional de Ingeniería de

Industrias

Alimentarias

Licenciada con Resolución del Consejo Carrera Profesional de Ingeniería de Industrias

Directivo N° 002 -2018-SUNEDUCD Alimentarias
UNIVERSIDAD NACIONAL DE JAÉN

ESCUELA DE INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

ASIGNATURA:

MICROBIOLOGIA

DOCENTE:

MSc. Blga. Mblga. Deysy M. Vásquez Santiago

TAREA:

Práctica de laboratorio N°6

ESTUDIANTE:

Alcantara Lozano Christan Alejandro

Morales Huertas Azumy Araceli

Torres Dávila Isis Enit

De La Cruz Cruzado Yameli

Jaén-Perú, septiembre 2024.

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CURSO MICROBIOLOGIA

PRÁCTICA N° 06
IDENTIFICACION DE Staphylococcus aureus
MSc. Blga. Mblga. Deysy M. Vásquez Santiago

I. INTRODUCCION

Staphylococcus (del griego staphylo, "racimo de uvas" y kókkos, "gránula") es un género

de bacterias de la clase Bacilli. Comprende microorganismos que están presentes en la
mucosa y en la piel de los humanos y de otros mamíferos y aves. Las especies que se
asocian con más frecuencia a las enfermedades en humanos son Staphylococcus
aureus (el miembro más virulento y conocido del género), Staphylococcus epidermidis,
Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus capitis y Staphylococcus haemolyticus.
Los estafilococos crecen fácilmente en casi todos los medios bacteriológicos, en
cultivos es mejor en el medio sal manitol y agar sangre. Además, producen catalasa, lo
que la diferencia de los estreptococos.

El género Staphylococcus (del griego staphylo, "racimo de uvas", y kokkos, "gránulo")

es uno de los grupos bacterianos más relevantes en microbiología médica debido a su
presencia ubicua y su implicación en enfermedades humanas y animales. Estas
bacterias pertenecen a la clase Bacilli y son cocos Gram positivos de tamaño pequeño
(0.5-1 μm de diámetro), caracterizados por agruparse en forma de racimos irregulares.
Son microorganismos inmóviles, aerobios y anaerobios facultativos, que colonizan
principalmente la piel y las mucosas de los mamíferos y aves, actuando como
comensales o patógenos oportunistas según las circunstancias.

Dentro de este género, Staphylococcus aureus es el patógeno más virulento y

clínicamente significativo. Es responsable de una amplia gama de infecciones, que van
desde infecciones cutáneas leves hasta enfermedades potencialmente mortales como
bacteriemias, endocarditis y neumonías. Además, produce numerosas toxinas y
enzimas que contribuyen a su patogenicidad, como hemolisinas, leucocidinas,
enterotoxinas y coagulasa.

Por otro lado, especies como Staphylococcus epidermidis y Staphylococcus

saprophyticus son consideradas oportunistas. Aunque menos virulentas que S. aureus,
pueden causar infecciones en pacientes inmunocomprometidos o en presencia de
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dispositivos médicos, como catéteres o prótesis. Estas especies se distinguen de S.
aureus por no producir coagulasa ni fermentar manitol y por formar colonias de color
blanco en medios de cultivo.

Los Staphylococcus tienen la capacidad de crecer en una amplia variedad de medios

bacteriológicos, siendo el agar manitol salado y el agar sangre los más utilizados para
su aislamiento y diferenciación. En estos medios, S. aureus se distingue por su
capacidad para fermentar manitol y producir colonias de color amarillo dorado,
mientras que S. epidermidis y S. saprophyticus no fermentan manitol y producen
colonias blancas.

Desde un punto de vista bioquímico, los Staphylococcus son catalasa positivos, lo que
significa que poseen la capacidad de descomponer el peróxido de hidrógeno en agua
y oxígeno mediante la enzima catalasa. Esta característica los diferencia de otros cocos
Gram positivos como Streptococcus, que son catalasa negativos. Además, la
producción de coagulasa por parte de S. aureus es un marcador distintivo para su
identificación.

La importancia médica de los Staphylococcus radica no solo en su capacidad para

causar infecciones sino también en su resistencia antimicrobiana. En particular, S.
aureus resistente a la meticilina (MRSA, por sus siglas en inglés) representa un desafío
significativo en salud pública debido a su resistencia a múltiples antibióticos.

Por lo tanto, el estudio e identificación precisa de Staphylococcus spp. es crucial en

microbiología clínica, ya que permite implementar tratamientos adecuados y diseñar
estrategias efectivas de control y prevención. Este documento se centra en la
identificación de Staphylococcus aureus mediante pruebas bioquímicas, como la
catalasa y la coagulasa, y el uso de medios de cultivo específicos. A través de estas
técnicas, es posible diferenciar esta especie patógena de otras menos virulentas dentro
del mismo género, contribuyendo así al diagnóstico y manejo adecuado de las
infecciones estafilocócicas.
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II. OBJETIVOS
• Identificación de las especies que comprende el género Staphylococcus sp.
utilizando los medios adecuados.
• Identificación del género Staphylococcus sp con el uso de pruebas bioquímicas,
prueba de la coagulasa y prueba de catalasa.

III. FUNDAMENTO TEORICO

Los Staphylococcus sp son cocos Gram positivos de 0.5-1 μm de diámetro, inmóviles,

aerobios y anaerobios facultativos, caracterizados en que se agrupan de forma
irregular en racimos (Fig. 1), producen catalasa y coagulasa (Fig.2), lo que los diferencia
de los Streptococcus sp. Son bacterias poco exigentes. Se encuentran presentes en la
mucosa y en la piel de los humanos, crecen fácilmente en casi todos los medios
bacteriológicos, y descomponen los azúcares por fermentación, pero su crecimiento es
mejor en agar manitol salado y agar sangre (Fig. 3). Tiene importancia médica
principalmente el S. aureus, y en humanos además de éste, et S. saprophyticcus y el S.
epidermidis.
La catalasa es una enzima que descompone el peróxido de hidrógeno (H202) en
oxígeno y agua.
H202 + Catalasa H2O + O2 (burbujas de gas)

De esta manera las bacterias se protegen del efecto tóxico del H2O2, que es un producto
final del metabolismo aerobio de los azúcares.
Los Staphylococcus son productores de catalasa por lo tanto son catalasa (+).
Staphylococcus aureus posee dos tipos de coagulasa:

a. Una endocoagulasa o coagulasa ligada o "clumping factor" que está unida a la

pared celular. Esta actúa directamente sobre el fibrinógeno provocando la
formación de coágulos o grumos cuando se mezcla una suspensión bacteriana con
plasma (test en placa o lámina).
b. Una exocoagulasa o coagulasa libre que actúa mediante la activación de un
factor (CRF), formándose un complejo coagulasa-CRF, el cual reacciona con el
fibrinógeno produciéndose un coágulo de fibrina (test en tubo).

Se pueden distinguir las siguientes especies:

1. S. aureus: Estafilococo patógeno. Es el agente causal de la mayoría de las

infecciones; se caracteriza por producir coagulasa o fermentar el manitol, elaborar
diversas toxinas, en especial la toxina a, y sintetizar en su mayoría un pigmento
amarillo dorado, no difusible, que colorea a las colonias.
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2. S. epidermidis y S. saprophyticcus: Estafilococos oportunistas. Son gérmenes

comensales de la piel o libres en el medio ambiente, que en ocasiones pueden
intervenir en procesos patógenos. Se caracterizan por no producir coagulasa ni
toxina a, no fermentan el manitol y elaboran en su mayoría un pigmento blanco
aporcelanado.

Fig. 2. Prueba de
Coagulasa
(+): Positivo
(-): Negativo

Fig. 2. Prueba de Catalasa

(+): Positivo
Fig. 1. Coloración (-): Negativo
Gram Cocos Gram
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B C

Fig. 3. Medio de cultivo Manitol Salado: A) Control, B) Fermentación del manitol, C) Manitol n
egativo

A B

Fig. 3. Medio Agar Sangre: A) Control, B) Colonias de Staphylococcus

IV. MATERIALES Y METODOS

• Muestra: Cultivo Bacteriano Staphylococcus aureus

• Medio de Cultivo: Agar Sangre
• Plasma humano
• Asa bacteriológica o mondadientes

PRUEBA DE LA CATALASA:
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• En una lámina portaobjetos colocar una gota de peróxido de hidrógeno (agua
oxigenada)
• Con un aplicador de madera o asa de siembra coger una porción del centro de
la colonia sospechosa y realizar una emulsión
• Observar la presencia o no de burbujas (Fig. 2).
INTERPREATACIÓN:
La rápida aparición y producción sostenida de burbujas de gas o efervescencia indica
una reacción positiva.

• CATALASA (+): Presencia de burbujas

• CATALASA (-): No burbujas

PRUEBA DE LA COAGULASA EN TUBO:

• En un tubo colocar 05 ml de caldo nutritivo estéril + 0.5 de plasma, colocar una

porción de la colonia sospechosa (catalasa positiva) y realizar una emulsión o
suspensión.
• Incubar a 37ºC por 2 a 4 hrs.
• Realizar la observación: formación de coágulo.

COAGULASA POSITIVO: Formación de coágulo

COAGULASA NEGATIVO: No formación de coágulo

PRUEBA DE LA COAGULASA EN PLACA O LAMINA:

• En un lamina colocar 01 o 02 gotas de plasma humano
• Colocar una porción de la colonia sospechosa (catalasa positiva) con un
aplicador de madera y realizar una emulsión o suspensión, agitar unos 10
segundos.
• Realizar la observación: formación de grumos (Fig. 2)

COAGULASA POSITIVO: Formación de grumos

COAGULASA NEGATIVO: No formación de grumos INTERPRETACIÓN:
La reacción se considera positiva ante cualquier grado de coagulación visible dentro del
tubo. La reacción se observa mejor inclinando el tubo Fig. 2.
Si es positiva, el coagulo permanece en el fondo del tubo. Las bacterias fuertemente
coagulasa positivas pueden producir un coagulo en 1 a 4 horas; por lo tanto, se
recomienda observar el tubo a intervalos de 30 minutos durante las primeras 4 horas
de la prueba.
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Algunas cepas de S. aureus pueden formar fuertes fibrinolisinas que disuelven el
coagulo recién formado. Por consiguiente, pruebas positivas pueden pasar
inadvertidas si no se observa el tubo a intervalos frecuentes.
Otras cepas de S. aureus pueden producir sólo suficiente coagulasa como para dar una
reacción positiva tardía luego de 18 a 24 horas de incubación; por lo tanto, todas las
pruebas negativas a las 4 horas, deben observarse después de las 18 a 24 horas de
incubación.
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V. ESQUEMA DE TRABAJO
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VI. RESULTADOS Y DISCUSION

Resultados y Discusión (Ampliado)

La identificación de Staphylococcus aureus se basa en pruebas bioquímicas

específicas que confirman su capacidad para metabolizar ciertos compuestos y
producir enzimas características. A continuación, se detallan los resultados:

1. Prueba de la catalasa:

Método: Una muestra bacteriana sospechosa fue mezclada con peróxido de

hidrógeno (H₂O₂) en una lámina portaobjetos. Se observó una reacción inmediata con
formación de burbujas, lo que indica catalasa positiva.

Fundamento bioquímico:
La catalasa es una enzima producida por bacterias aerobias y anaerobias facultativas
como Staphylococcus spp., que descompone el H₂O₂ en agua (H₂O) y oxígeno (O₂).
Esta reacción protege a las bacterias del estrés oxidativo causado por el peróxido, un
subproducto del metabolismo aerobio:

2H_2O_2 \xrightarrow{\text{Catalasa}} 2H_2O + O_2

2. Prueba de la coagulasa:

Métodos:

Prueba en tubo: Se mezcló una suspensión bacteriana en un caldo nutritivo con

plasma humano y se incubó a 37°C. Se observó formación de coágulos en menos de 4
horas, lo que indica positividad.

Prueba en placa: Se agregó una muestra bacteriana a gotas de plasma en una lámina
portaobjetos. La formación de grumos confirmó la positividad.
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Fundamento bioquímico:
La coagulasa es una proteína que interactúa con el fibrinógeno en el plasma,
convirtiéndolo en fibrina insoluble. Esta reacción facilita la formación de coágulos
visibles.

Endocoagulasa (factor de aglutinación): Actúa directamente sobre el fibrinógeno y se

detecta en pruebas en placa.

Exocoagulasa (coagulasa libre): Requiere un factor reactivo del plasma (CRF) y es

detectada en la prueba en tubo.
Estas enzimas son exclusivas de S. aureus, diferenciándolo de otros estafilococos que
carecen de actividad coagulasa.

VII. CONCLUSIONES

1. La prueba de catalasa es indispensable para diferenciar Staphylococcus de géneros

como Streptococcus, ya que todas las especies de Staphylococcus son catalasa
positivas.

2. La coagulasa es un marcador bioquímico clave para la identificación de S. aureus,

permitiendo su distinción de otras especies del género.

3. El agar manitol salado y el agar sangre son herramientas fundamentales en el

aislamiento y caracterización de S. aureus, ya que permiten identificar sus
propiedades de fermentación y hemólisis.

3. Es crucial monitorear regularmente las reacciones bioquímicas para evitar

falsos negativos, especialmente en pruebas de coagulasa, donde algunas cepas
pueden producir fibrinolisinas o reacciones tardías.

VIII. CUESTIONARIO
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1. Fundamento de la coagulasa
La coagulasa es una enzima producida exclusivamente por S. aureus. Su función es
convertir el fibrinógeno del plasma en fibrina insoluble, permitiendo la formación de
coágulos. Esto puede ser una estrategia de virulencia, ya que los coágulos protegen a
la bacteria de las defensas del huésped.

Existen dos tipos principales:

Coagulasa ligada (factor de aglutinación): Directamente convierte fibrinógeno en

fibrina.

Coagulasa libre: Actúa a través de un factor reactivo (CRF), formando un complejo

que cataliza la conversión del fibrinógeno.

La positividad en esta prueba distingue a S. aureus de especies no patógenas como S.

epidermidis y S. saprophyticus.

2. Fundamento de la catalasa
atalasa descompone el peróxido de hidrógeno (H₂O₂) en agua y oxígeno. Esta reacción
es esencial para proteger a las bacterias aerobias y anaerobias facultativas de los
efectos tóxicos del H₂O₂ generado durante la respiración celular.

La prueba se realiza colocando H₂O₂ en contacto con la bacteria. Si se producen

burbujas, se confirma la presencia de catalasa (reacción positiva).

Este fundamento es clave para diferenciar Staphylococcus (catalasa positivo) de

Streptococcus (catalasa negativo), que carece de esta enzima.

1. ¿Cuál es la importancia médica de Staphylococcus aureus?

Relevancia en infecciones:
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S. aureus es un patógeno oportunista que causa infecciones en la piel (forúnculos,

celulitis), infecciones invasivas (bacteriemia, endocarditis, osteomielitis) y
enfermedades asociadas a dispositivos médicos.

Producción de toxinas:
Produce toxinas como enterotoxinas (intoxicación alimentaria), toxina exfoliativa
(síndrome de piel escaldada) y toxina TSST-1 (síndrome de choque tóxico).

Resistencia antimicrobiana:
La aparición de cepas resistentes como MRSA (meticilina-resistente) y VRSA
(vancomicina-resistente) complica el tratamiento y representa un desafío para la
salud pública.

3. ¿Qué diferencias existen entre Staphylococcus aureus, Staphylococcus

epidermidis y Staphylococcus saprophyticus?
Catalasa: Todas las especies son catalasa positivas.

Coagulasa: S. aureus es coagulasa positiva, mientras que S. epidermidis y S.

saprophyticus son coagulasa negativas.

Fermentación del manitol: S. aureus fermenta el manitol, cambiando el color del

medio a amarillo; S. epidermidis no lo fermenta y S. saprophyticus puede fermentar
manitol de manera variable.

Infecciones:

S. aureus causa infecciones graves como bacteriemia, neumonía, abscesos y síndrome

de choque tóxico.
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S. epidermidis es un patógeno oportunista relacionado con infecciones en dispositivos
médicos, como catéteres y prótesis.

S. saprophyticus es una causa común de infecciones urinarias, especialmente en

mujeres jóvenes sexualmente activas.

Hemólisis en agar sangre: S. aureus suele producir β-hemólisis, S. epidermidis no

causa hemólisis (γ hemólisis) y S. saprophyticus generalmente tampoco muestra
hemólisis.

3. ¿Cuál es el fundamento de la prueba de catalasa y por qué es importante en

microbiología?

Reacción química:

La catalasa descompone el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno, generando

burbujas visibles.

Importancia:
Se utiliza para diferenciar Staphylococcus spp. (catalasa positiva) de cocos Gram
positivos catalasa negativa como Streptococcus spp. y Enterococcus spp.

4. ¿Qué tipos de coagulasa existen y cómo se detectan en laboratorio?

Coagulasa ligada: Forma parte de la pared celular y aglutina fibrinógeno en plasma.

Se detecta con la prueba en placa.
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Coagulasa libre: Es una enzima extracelular que convierte fibrinógeno en fibrina. Se
detecta con la prueba en tubo.

Pruebas:

Placa: Mezcla de colonias con plasma en un portaobjetos; aglutinación visible indica

positividad.

Tubo: Incubación de plasma con la muestra; formación de un coágulo indica

positividad.

5. ¿Explica la importancia del agar manitol salado en la identificación de

Staphylococcus aureus?

Contiene manitol, que S. aureus fermenta, produciendo ácido y cambiando el

indicador de pH (rojo fenol) a amarillo.

La alta concentración de sal (7.5%) inhibe bacterias no halotolerantes, seleccionando

Staphylococcus spp.

6. ¿Por qué se utiliza agar sangre en la identificación de S. aureus?

Hemólisis: S. aureus produce β-hemolisinas, causando una zona clara alrededor de las
colonias por lisis de eritrocitos.

Esto ayuda a diferenciarlo de otros estafilococos no hemolíticos.

7. ¿Cuál es la utilidad de la prueba de coagulasa en el diagnóstico clínico?

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Un resultado positivo confirma S. aureus, ya que este es el principal estafilococo

productor de coagulasa. Ayuda a diferenciarlo de otros Staphylococcus spp. coagulasa
negativos.

8. ¿Por qué se debe monitorear la prueba de coagulasa a intervalos regulares?

La fibrinolisina puede descomponer el coágulo después de tiempo prolongado,

causando falsos negativos. El monitoreo asegura resultados precisos.

9. ¿Qué diferencia existe entre bacterias catalasa positivas y catalasa negativas en

términos fisiológicos?

Catalasa positiva: Capaces de descomponer peróxido de hidrógeno, lo que las protege

contra estrés oxidativo (ej.: Staphylococcus, Bacillus).

Catalasa negativa: No poseen esta enzima, son más susceptibles al estrés oxidativo
(ej.: Streptococcus, Enterococcus).--

10. Describe el flujo de trabajo para el aislamiento e identificación de Staphylococcus

aureus.

1. Toma de muestra: Recolección de pus, sangre, u otro fluido corporal.

2. Cultivo primario: Siembra en agar manitol salado o agar sangre.

3. Observación de colonias: Hemólisis (agar sangre), fermentación del manitol

(amarillo).
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4. Prueba de catalasa: Diferenciación inicial de Staphylococcus spp.

5. Prueba de coagulasa: Confirmación de S. aureus.

11. ¿Cómo influye la resistencia a antibióticos de Staphylococcus aureus en la salud

pública?

Cepas como MRSA y VRSA dificultan el tratamiento, aumentando costos y mortalidad.

MRSA es común en hospitales y comunidades, representando un riesgo
epidemiológico.

12. ¿Cuáles son los mecanismos de patogenicidad más importantes de

Staphylococcus aureus?

Toxinas: Hemolisinas (destruyen eritrocitos), enterotoxinas (causan vómitos y

diarrea), toxina TSST-1 (choque tóxico).

Enzimas: Coagulasa (forma barreras de fibrina), hialuronidasa (disemina la infección).

13. ¿Por qué es necesario realizar pruebas confirmatorias adicionales después de

observar colonias sospechosas en un medio de cultivo?

Para evitar errores de identificación, ya que otras bacterias pueden presentar

características similares en medios selectivos.
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14. Explica el rol de Staphylococcus epidermidis y S. saprophyticus como patógenos
oportunistas.

S. epidermidis: Asociado a infecciones en catéteres, válvulas cardíacas y prótesis.

S. saprophyticus: Infecciones urinarias, especialmente en mujeres jóvenes

sexualmente activas.

15. ¿Qué factores pueden interferir en los resultados de las pruebas bioquímicas para
la identificación de Staphylococcus aureus?

Temperatura: Incubación inadecuada afecta el crecimiento.

Cantidad de muestra: Insuficiente material puede dar resultados falsos negativos.

Calidad del plasma: Plasma deteriorado altera la prueba de coagulasa.

IX. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

1. Leboffe, M. J., y B. E. Pierce. Microbiology Laboratory and application. 2a edition.
Morton Publishing co., USA. 2006.

X. ANEXO

El proceso para el aislamiento e identificación de Staphylococcus aureus consta de

una serie de pasos secuenciales que incluyen el cultivo inicial, pruebas bioquímicas y
análisis específicos en medios de cultivo. A continuación, se detalla un esquema
general del flujo de trabajo

1. Obtención de la muestra bacteriana

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Tomar una muestra de una superficie sospechosa o de una infección en estudio (piel,
mucosas, heridas).

Utilizar técnicas asépticas para garantizar la pureza y evitar contaminación.

2. Cultivo inicial

1. Medio de cultivo: Agar manitol salado (AMS):

Inocular la muestra en placas de AMS, que contiene cloruro de sodio al 7.5%,

inhibiendo el crecimiento de bacterias no halotolerantes.

S. aureus fermenta el manitol, generando un cambio de color en el indicador de pH

(fenol rojo) de rojo a amarillo.

2. Medio de cultivo: Agar sangre:

Inocular la muestra en agar sangre para evaluar la capacidad hemolítica.

Observar si las colonias producen hemólisis parcial (alfa-hemólisis) o completa (beta-

hemólisis).

3. Prueba de catalasa

Colocar una gota de peróxido de hidrógeno (H₂O₂) en una lámina portaobjetos.

Mezclar una porción de la colonia sospechosa con un aplicador de madera.

Observar la formación de burbujas.

Resultado positivo: Presencia de burbujas.

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Resultado negativo: Ausencia de burbujas.

Interpretación:

Un resultado catalasa positivo sugiere la presencia de Staphylococcus spp.

4. Prueba de la coagulasa

1. Prueba en tubo:

Preparar un tubo con 0.5 mL de plasma humano y caldo nutritivo estéril.

Añadir una muestra bacteriana y mezclar hasta obtener una suspensión uniforme.

Incubar a 37°C durante 2-4 horas.

Interpretación:

Positivo: Formación de un coágulo visible.

Negativo: Ausencia de coágulo.

2. Prueba en placa o lámina:

Colocar 1-2 gotas de plasma humano en una lámina portaobjetos.

Añadir una porción de la colonia sospechosa y mezclar con un aplicador de madera.

Observar la formación de grumos.

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Interpretación.

Positivo: Formación de grumos.

Negativo: Ausencia de grumos.

5. Interpretación final

Una bacteria que es catalasa positiva, coagulasa positiva, fermenta manitol, y

presenta colonias amarillas doradas con hemólisis parcial en agar sangre se identifica
como Staphylococcus aureus.

Las bacterias que son catalasa positiva pero coagulasa negativa y no fermentan
manitol se identifican como Staphylococcus epidermidis o Staphylococcus
saprophyticus.
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FLUXOGRAMA DE AISLAMIENTO DE Staphylococcus aureus