UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA
FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD
PROGRAMA DE BACTERIOLOGÍA
INMUNOLOGIA
ANA CRISTINA BRUNAL FABRA
KEILA BARRETO MARTINEZ
KEILIN POLO SILVA
SANDRA PATERNINA ESPITIA
HILDA ROSA ACEVEDO PAYARES
CINDY RODIÑO
UNIVERDIDAD DE CORDOBA
CIENCIAS DE LA SALUD
BACTERIOLOGIA
INMUNOLOGIA
VIERNES 7:00AM – 10:00AM
MONTERIA – CORDOBA.
2020
Comprometida con el desarrollo regional
Carrera 6ª. No. 76-103 Montería Córdoba NIT. 891080031-3
www.unicordoba.edu.co 1964-2013
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FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD
PROGRAMA DE BACTERIOLOGÍA
Practica N° 6
Floculación: VDRL /RPR
1. ¿Qué son Ac no treponémicos y treponémicos?
R// Las pruebas no treponémicas son aquellas que no determinan anticuerpos
específicos contra T. pallidum, en su lugar detectan anticuerpos contra antígenos
generados comúnmente por los tejidos dañados por este microorganismo.
Presentan un bajo costo, son fáciles de efectuar y son utilizadas para la detección
de una infección reciente, o para evaluar la respuesta a un tratamiento, sin
embargo, su desventaja es la alta inespecificidad que presentan. Las principales
pruebas de este grupo son VDRL (Venereal Research Disease Laboratory), RPR
(Rapid Plasma Reagin), TRUST (Toluidina Red Unheated Serum Test), USR
(Unheated Serum Reagin).
Las pruebas treponémicas, son las que detectan anticuerpos IgG e IgM
específicos contra T. pallidum, gracias a que utilizan antígenos de la membrana
externa del protozoo y antígenos recombinantes. Presentan una alta especificidad
y sensibilidad, por lo cual son utilizadas para confirmar los resultados obtenidos
con las pruebas no treponémicas. Su desventaja es que no pueden distinguir entre
una infección reciente y activa vs una infección anterior ya tratada y no contagiosa,
debido a que el anticuerpo treponémico permanece reactivo de por vida en el
donador. Las pruebas más conocidas de este grupo son FTA-ABS (Inmuno-
fluorescencia indirecta con absorción del suero), TPHA (Micro-hemaglutinación),
ELISA (ensayo de inmuno-adsorción ligado a enzimas) y Western Blot.
2. ¿Qué es floculación? Descríbala.
La floculación es la aglomeración de partículas desestabilizadas en
microflóculos y después en los flóculos más grandes que pueden ser depositados
llamados flóculo. La adición de otro reactivo llamado floculante o una ayuda del
floculante pueden promover la formación del floculo. La floculación tiene lugar de
manera natural durante la formación de los copos de nieve o los sedimentos
marinos, pero también se aplica deliberadamente en las industrias de la
biotecnología, la minería, el petróleo y el papel y la pulpa.
3. ¿Por qué se dice que la prueba de VDRL y RPR son pruebas
presuntivas?
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R// Se dice que las pruebas VDRL y RPR son pruebas presuntivas porque son
pruebas de manera rápida, económica, pero estandarizadas, pueden inferir la
presencia o ausencia de determinados microorganismos. Como sucede con todas
las técnicas analíticas, unas buenas técnicas de ensayo presuntivo elevan al
máximo la probabilidad de obtener un resultado “verdadero” y reducen al mínimo
la probabilidad de obtener un falso positivo. Los análisis presuntivos solo deben
practicarse, sí y sólo sí, llevan aparejadas la práctica de pruebas confirmatorias,
por el carácter de irrefutabilidad, Ninguna prueba por sí sola es suficiente para
establecer el diagnóstico.
4. ¿A qué se debe el fenómeno de prozona y postzona?
R// Efecto Prozona se da en la zona donde existe exceso de Ac frente al Ag,
donde no se produce precipitación, originando falsos (-) por altas concentraciones
de Ac. Esta dificultad se elimina con diluciones seriadas estándar del suero.
Es cuando debido al exceso de Ac no se forma la red que permite la aglutinación.
Puede también deberse a la presencia de Ac “no aglutinantes”
Efecto Postzona se da en la zona de exceso de Ag, donde tampoco se da la
precipitación, dando falsos (-). Es la ausencia de reacción inmune cuando hay
altas concentraciones de antígeno.
5. ¿Qué afecciones (diferente de Sífilis) pueden provocar reactividad del
VDRL y RPR?
RPR y VDRL: se utilizan en el diagnóstico de las infecciones treponémicas, como
la sífilis y el Pian, la pinta, el bejel.
Pian: es una infección tropical de la piel, los huesos y las articulaciones, causada
por la espiroqueta Treponema pallidum pertenue. En el caso del diagnóstico de
laboratorio, las pruebas solo permiten detectar la presencia de una
treponematosis, sin distinguir cual, incluyendo la sífilis. Las pruebas no
treponémicas más habituales son el RPR y el VDRL.
La pinta: es una enfermedad tropical infecciosa que afecta la piel y es causada
por la bacteria Treponema carateum. La enfermedad es transmitida directamente
o por contacto no-sexual.
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El bejel o sífilis endémica es una enfermedad crónica de la piel y otros tejidos,
producida por la bacteria Treponema pallidum endemicus. Es una de las
treponematosis endémicas, junto con el Pian y la Pinta.
6. ¿En el caso de VDRL y RPR que títulos de Ac tienen significado
clínico?
VDRL y RPR: Tiene significado clínico un título mayor de 1/160.
POSTLABORATORIO
1. ¿Qué diferencia existe entre la reactividad del VDRL y RPR?
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R// Los resultados de VDRL en lámina son comunicados como no reactivos (no
hay floculación), débilmente reactivos ligera floculación y reactivos floculación
definitiva. Todos los sueros reactivos se diluyen seriadamente, a cada dilución se
le realiza la prueba de VDRL y se registra el título máximo obtenido. Se obtiene
falsos negativos en ciertas condiciones, tales como fenómenos de Prozona, bajo
título de anticuerpos, presencia de sustancia inhibidora en el suero del paciente,
VIH, la temperatura ambiental fuera de rango de 23- 29°c o error técnico. Los
falsos positivos pueden llegar a 10 a 30% y han sido reportados en casos de
síndrome de anticuerpos anti-fosfolípidos, lupus, eritematosos sistemático, fiebre
reumatoide, neumonía neumococica, mononucleosis infecciosa, hepatitis
infecciosa, lepra, malaria, muestra hemolisadas o contaminada.
El RPR es una prueba diseñada para detectar Reagina en el suero de manera
rápida no requiere inactivación por el calor, la muestra se mezcla con una
suspensión que posee cardiolipina, lectina y colesterol en partículas de carbón, si
la muestra es positiva se observan pequeños grumos negros( floculación ), el
resultado se reporta como reactivo o no reactivo, todos aquellos reactivos deben
ser diluidos seriadamente para realizar la titulación y se reporta la dilución más
alta que exhibe reacción. Los falsos negativos se pueden producir por errores
técnicos y los falsos positivos son los mismos para la prueba de VDRL.
2. ¿En qué casos un paciente con sífilis puede tener una prueba
serológica no reactiva?
R// El resultado no reactivo (negativo) tampoco descarta sífilis, porque durante
el período de incubación de la enfermedad y hasta 15 días después de la
aparición del chancro sifilítico, aun no se han producido anticuerpos.
Adicionalmente, en pacientes con títulos muy altos de anticuerpos
anticardiolipina (1 o 2 % de los pacientes con sífilis) se observa una reacción
prozónica que causa falsos negativos.
3. ¿En qué otras pruebas son utilizadas la técnica de floculación?
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TRUST: (Toluidine Red Unheated Serum Test). Es una prueba desarrollada para
el despistaje de la sífilis, el principio es similar al del VDRL, pero no es necesario
inactivar el suero y el rojo de toluidina se encarga de dar color a la reacción. La
sensibilidad y especificidad son similares a la prueba de RPR. Puede realizarse
con suero o plasma. Es el mismo antígeno del VDRL con partículas coloreadas
con rojo de toluidina.
URS: (Unheated Serum Reagin). Tiene la ventaja que es poco costosa, tampoco
requiere de inactivación de suero por calor y, al igual que otras pruebas no
treponémicas, tiene buena sensibilidad y especificidad14-15. Puede emplearse
con suero. El antígeno no es particulado y la reacción es de floculación. Lectura
microscópica.
RST: Floculación microscópica
4. Consulte cual o cuales son las pruebas diagnósticas específicas para
Sífilis.
R// Pruebas serológicas
Para el diagnóstico serológico de la sífilis se utilizan tanto pruebas treponémicas
como no treponémicas. Estas pruebas se diferencian en los antígenos utilizados y
en el tipo de anticuerpo que se determina.
Pruebas no treponémicas
Determinan anticuerpos reagínicos que se detectan con un antígeno: cardiolipina-
lecitina altamente purificado. A pesar de que las pruebas no treponémicas son
relativamente específicas, no son exclusivas para la sífilis y por tanto, pueden
producirse reacciones falsas positivas.
Las pruebas no treponémicas que se usan en la actualidad se dividen en 2 grupos,
según la forma en que se detecten los complejos antígenos-anticuerpos; así
tendremos pruebas no treponémicas de fijación del complemento (como la de
Kolmer) y pruebas no treponémicas de floculación.
Pruebas treponémicas
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En las pruebas treponémicas, el antígeno es el T. pallidum, su finalidad es la de
detectar anticuerpos antitreponémicos específicos que generalmente aparecen en
infecciones provocadas por treponemas como sífilis, frambesia, sífilis endémica y
pinta. Debido a su mayor especificidad, estas pruebas sólo se utilizan para
confirmar los datos obtenidos en las pruebas no treponémicas. Por desgracia, son
técnicamente complejas y costosas con relación a las no treponémicas.
5. Porque se debe diluir el LCR para realizar el VDRL
La VDRL en LCR es útil en el diagnóstico de sífilis en el sistema nervioso
central (SNC), un resultado positivo debe confirmarse con FTA-ABS. El
diagnóstico de sífilis en personas infectadas por HIV puede ser dificultosa por la
falta de respuesta serológica. VDRL en líquido cefalorraquídeo (LCR) tiene utilidad
clínica el diagnóstico de neurosífilis dado que es muy específico, pero un
resultado negativo no la descarta (sensibilidad es de 30-70%).,
La sífilis del SNC puede ser asintomática, la neurosífilis incluye sífilis meningeal, la
cual se encuentra años luego de la infección. El criterio para neurosífilis es LCR
con proteínas mayores de 40 ng/dl y más de 5 células mononucleares /mm3. Para
los sujetos con HIV se sugiere terapia para sífilis porque pueden desarrollar
neurosífilis, se debe realizar la determinación serial de VDRL en LCR.
6. CASO CLÍNICO:
Mujer de 24 años de edad, acude al servicio de urgencias del Hospital por fiebre,
nódulos linfáticos inflamados y manchas irregulares en la piel, más visibles en la
palma de las manos y en la planta de los pies. Refiere una lesión de pequeño
tamaño, translucida de color pardo-grisáceo en la parte interna de su labio inferior.
El médico reconoce el rash cutáneo de las palmas y de las plantas y la lesión en el
labio y le pregunta a la paciente acerca de sus hábitos sexuales y manifiesto que
su última relación sexual, fue un contacto ocasional, sin protección, hace 10
meses en una fiesta. Debido a lo anterior el médico ordenó practicarle en el
laboratorio una prueba serológica para sífilis la cual fue reportada como Reactiva
1/32.
Teniendo en cuenta estos antecedentes, Conteste:
A. ¿Qué Prueba le fue realizada a la paciente?
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Prueba serológica para sífilis
B. ¿Con base a este resultado se podría dar un diagnóstico definitivo de
sífilis? Sustente su respuesta.
No es confirmatoria, puede ser reactiva con 1/32 pero al ser una prueba no
treponémica deben confirmarse con pruebas treponémicas como el TPHA y FTA-
Abs para la confirmación de resultados.
C. ¿Qué pruebas haría usted para confirmar este resultado y por qué?
Se recomienda el ensayo de todas las muestras Reactivas con métodos
treponémicos tales como el TPHA y FTA-Abs para la confirmación de resultados,
además de que un resultado negativo no excluye el diagnóstico de la sífilis y
pueden aparecer falsos resultado positivo en otras enfermedades tales como
embarazo y enfermedades autoinmunes.
D. ¿Cuál o cuáles cree usted que fueron las causas para que la paciente no
acudiera al médico en la fase temprana de la Sífilis?
Por falta de conocimiento de esta enfermedad y sus síntomas o signos, también
porque esta tiene una fase latente.
E. ¿En caso que esta joven este embarazada, ¿qué probabilidad existe que
su hijo padezca Sífilis y cuál sería el procedimiento a realizar en este caso?
Tiene una alta probabilidad de padecer sífilis en el embarazo dado el tiempo y el
avance de enfermedad. Se determina ELISA IgM y repetir RPR a 1, 3, 6 y 12
meses tras la finalización del tratamiento
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