UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

LABORATORIO DE ANALISIS INSTRUMENTAL I

Integrantes: Semestre: 5to Semestre

 Camba Fuentes Julio Ariel Grupo: G1A
 Lozano García Milena Valentina
 Luna Zuñiga Emely Maily Profesor: Dra. Zoraida Burbano.
 Zambrano Suarez Kallil Alid
GRUPO DE PRÁCTICA: 4

Práctica N°7 Control de calidad (QC) de la curva de calibrado

OBJETIVOS DE LA PRACTICA
 Aplicar el control de calidad QC en la elaboración de la curva de calibración como herramienta para la posterior
Validación de métodos de ensayo

MARCO TEORICO

El análisis químico instrumental es una herramienta fundamental en el laboratorio para la identificación y

cuantificación de compuestos químicos. Para garantizar la confiabilidad de los resultados obtenidos, es necesario
evaluar los parámetros de calidad del método analítico empleado. A continuación, se desarrollan los conceptos clave
de estos parámetros y su relevancia en el contexto del control de calidad y validación de métodos.

1. Precisión

La precisión es una medida de la reproducibilidad de los resultados obtenidos al repetir un análisis bajo las mismas
condiciones. Se expresa generalmente como la desviación estándar (SD) o el coeficiente de variación (CV), y se evalúa
a través de diferentes niveles:

 Precisión intradía: Reproducibilidad dentro de un mismo día de trabajo.

 Precisión interdía: Reproducibilidad entre diferentes días.
 Precisión interlaboratorio: Consistencia entre distintos laboratorios que emplean el mismo método.

Además, la precisión se clasifica en dos categorías principales:

 Repetibilidad: Representa la precisión de un análisis en el que la única fuente de variación es el análisis de

muestras repetidas, ya sea debido al instrumental o al método empleado.
 Reproducibilidad: Evalúa la precisión obtenida al comparar resultados provenientes de diferentes muestras,
análisis o métodos.

Rango : Se define como la diferencia entre el valor más alto y el más bajo dentro de un conjunto de datos utilizados en
una clase.

Desviación Estándar: Mide cuánto se desvía, en promedio, cada dato respecto al promedio general de un grupo.

En cuanto a exactitud y precisión, estas son características independientes. Por ejemplo, un método puede ser poco
preciso si sus mediciones son muy variables entre sí, pero su promedio se aproxima al valor real. A la inversa, un
método puede ser preciso si produce resultados muy similares entre ellos, aunque todos estén alejados del valor
verdadero. Aunque es común que una buena exactitud también implique una buena precisión, esto no siempre ocurre
de manera recíproca.

La precisión se ve afectada principalmente por errores aleatorios, los cuales provocan variaciones alrededor del valor
central.

Errores Aleatorios Errores Sistematicos

Ruido químico: Se origina por diversas variables que Errores instrumentales: Estos ocurren debido a
influyen en la química del sistema, como cambios en la problemas en los circuitos eléctricos, fugas en sistemas
temperatura o presión, fluctuaciones de humedad, de vacío, efectos de la temperatura en los detectores o
vibraciones y variaciones en la intensidad de la luz. errores en la calibración de medidores, pesas y equipos
volumétricos. Se corrigen mediante calibraciones
regulares de los instrumentos.
Ruido instrumental: Está relacionado con los cuatro Errores personales: Surgen por factores humanos, como
componentes principales de un instrumento: el la percepción del color en el punto final de una
generador, el detector, el procesador y el sistema de valoración, la comparación de intensidades entre dos
lectura. haces de luz, o dificultades visuales como el daltonismo.

Errores del método: Se deben al comportamiento no

ideal de reactivos y reacciones, lo que incluye reacciones
lentas o incompletas, pérdidas por volatilidad o
absorción del analito, entre otros. Para minimizar estos
errores, se realiza la validación del método.

2. Exactitud

La exactitud describe qué tan cerca está un resultado medido del valor verdadero o aceptado. Se puede evaluar
mediante:

 Materiales de referencia certificados (CRM): Contienen cantidades conocidas del analito.

 Pruebas de recuperación: Evaluación de la capacidad del método para recuperar el analito a partir de una matriz
compleja.

El parámetro de calidad para medir la exactitud es el error sistemático.

3. Sensibilidad

La sensibilidad es la capacidad del método para diferenciar pequeñas variaciones en la concentración del analito.
Matemáticamente, está relacionada con la pendiente de la curva de calibración. Una alta sensibilidad es esencial para
detectar cambios sutiles en niveles bajos de concentración.

4. Selectividad

La selectividad es la capacidad del método para identificar y cuantificar el analito en presencia de interferentes. Este
parámetro es especialmente relevante cuando se analizan muestras complejas, como matrices biológicas o
ambientales. Métodos como la cromatografía y la espectrometría de masas ofrecen alta selectividad debido a su
capacidad de separar y caracterizar compuestos específicos.

5. Límite de detección (LOD) y límite de cuantificación (LOQ)

 LOD: Es la concentración mínima del analito que puede ser detectada pero no cuantificada con precisión. Se
define generalmente como la señal que excede tres veces el ruido de fondo.
 LOQ: Es la concentración mínima del analito que puede ser cuantificada con precisión y exactitud aceptables, y
suele ser diez veces el ruido de fondo.
6. Intervalo de concentración (Rango dinámico)

El rango de concentraciones en el que el método mantiene una relación lineal entre la señal medida y la concentración
del analito se conoce como intervalo de concentración. Este rango incluye el límite inferior y superior del método, y
asegura que los resultados sean confiables dentro de estos valores.

7. Robustez

La robustez evalúa la capacidad del método para resistir pequeños cambios en las condiciones experimentales, como:

 Temperatura.
 pH de la solución.
 Composición del solvente.

Un método robusto garantiza resultados consistentes incluso bajo condiciones levemente alteradas.

8. Linealidad

La linealidad se refiere a la capacidad del método para producir resultados directamente proporcionales a la
concentración del analito dentro de un rango especificado. La evaluación de la linealidad generalmente se realiza
mediante regresión lineal y se expresa como el coeficiente de correlación (R²).

Importancia de la validación de métodos analíticos

La evaluación de estos parámetros es parte integral de la validación de un método analítico, un proceso que asegura
que el método es adecuado para su propósito. Normativas internacionales como la ICH Q2(R1) y las guías de la FDA
establecen los requisitos para la validación, incluyendo:

 Requisitos específicos para cada parámetro.

 Diseño experimental adecuado.
 Documentación rigurosa de los resultados.

¿Qué es un estandar de control (QC, Quality Control) ?

Es una solución de concentración conocida, independiente de los estándares usados para construir la curva de
calibración, que se utiliza para verificar la exactitud y precisión del método analítico.

Características clave del estándar de control:

1. Independencia: Se prepara por separado, a partir de una fuente o lote diferente al utilizado para la
construcción de la curva de calibración, lo cual reduce sesgos y asegura una validación independiente.
2. Concentración conocida: Se selecciona una concentración dentro del rango de la curva de calibración para
validar que el método mide de forma correcta en ese intervalo.
3. Uso rutinario: Se mide periódicamente junto con las muestras analíticas para garantizar que la curva de
calibración sigue siendo válida durante el análisis.
Importancia del estándar de control en la curva de calibración:

 Verificación de la linealidad: Permite confirmar que la relación entre la concentración y la absorbancia sigue
siendo lineal.
 Control de la precisión y exactitud: Asegura que el método produce resultados cercanos al valor real y con
mínima variabilidad.
 Identificación de problemas: Si los valores del estándar de control se desvían significativamente de lo
esperado, puede indicar errores en el proceso, problemas con el instrumento o degradación de las soluciones
estándar.
 Cumplimiento de calidad: Es un requisito fundamental en laboratorios acreditados para demostrar la fiabilidad
de los resultados.

Ejemplo práctico:

Si la curva de calibración cubre un rango de 10 a 50 µg/ml, se puede preparar un estándar de control de 25 µg/ml (un
punto intermedio) para verificar que las mediciones en esa concentración sean correctas y dentro de los límites
aceptables de recuperación (por ejemplo, entre el 80 % y 120 %).

¿Qué es el porcentaje de recuperación en un control de calidad de curva de calibración ?

El porcentaje de recuperación en el control de calidad de una curva de calibración es una medida que indica qué tan
eficiente y precisa es la técnica analítica para cuantificar un analito en comparación con la cantidad real o teórica
presente en la muestra.

Se calcula al analizar una muestra con una concentración conocida del analito (generalmente añadida como estándar)
y comparando el resultado obtenido con el valor esperado o teórico. El propósito es evaluar si el método de medición
funciona correctamente en condiciones controladas.

Fórmula:

����� ���������
� ��� = % �� ����������ó�
����� ����

 Recuperación del 100 %: Indica una medición exacta, ya que la concentración obtenida coincide con la teórica.
 Recuperación menor al 100 %: Puede deberse a pérdidas durante el análisis o a interferencias en el método.
 Recuperación mayor al 100 %: Suele reflejar sobreestimaciones, contaminación, o efectos del método que incrementan
artificialmente la cantidad medida.

Rango típico de recuperación aceptable:

 80 % a 120 % para la mayoría de los métodos analíticos en química analítica.

 70 % a 130 % en métodos menos estrictos o cuando se analizan concentraciones muy bajas.

Matrices complejas (como sangre, alimentos o suelos) suelen introducir interferencias, lo que puede justificar
márgenes de recuperación más amplios.

 90 % a 110 % en métodos altamente precisos, como los requeridos en farmacéutica o bioquímica clínica.

¿Por qué se añade ácido sulfúrico en la preparación de estandares de dicromato de potasio ?

 Estabilidad química del ion cromo (VI): El ion cromo (VI) es más estable en medio ácido. En soluciones neutras o
básicas, puede sufrir reacciones de hidrólisis, generando especies menos estables. La adición de ácido sulfúrico
evita estas transformaciones y mantiene la concentración real del analito.
 Condiciones óptimas para la reacción: En el análisis espectrofotométrico del cromo, el medio ácido asegura que
 las especies de cromo presenten un comportamiento constante en términos de absorción de luz. Esto es crucial
para que los estándares sean representativos y la curva de calibración sea precisa.
 Mejora en la sensibilidad del análisis: En espectrofotometría, las especies de cromo (VI) absorben mejor la luz en
determinadas longitudes de onda cuando se encuentran en un medio ácido. Por ello, el ácido sulfúrico ayuda a
obtener mediciones más sensibles y reproducibles.

REACTIVOS DE LABORATORIO
 Dicromato de potasio
 Ácido sulfúrico concentrado
 Agua destilada
MATERIALES
 Matraces volumétricos
 Pipetas volumétricas
 Vasos de precipitación
 Picetas
 Guantes (indispensable)
EQUIPOS DE LABORATORIO
 Espectrofotómetro GENESYS 10
 Balanza analítica

PROCEDIMIENTO
 Preparar una solución estándar de Dicromato de potasio que contenga 500 µg ION Cromo/ml
 De esta solución prepare 5 estándares de trabajo en matraces volumétricos de 25 ml, enrase con agua destilada.
 CONCENTRACION
ALICUOTA VOL. DILUCION µg Ion Cromo/ml
0,5 ml 25ml 10
1 ml 25ml 20
1,5 ml 25ml 30
2 ml 25ml 40
2,5 ml 25ml 50

NOTA: Antes de enrasar, adicione a cada una de las diluciones, aproximadamente 0,4 ml de Ácido Sulfúrico concentrado y
diluya a la marca con agua destilada.
 Prepare un estándar de trabajo (QC) adicional, que tenga una concentración según el nivel de la curva de calibrado que
indique el profesor Subgrupo 4 (2 ml).
PARTE INSTRUMENTAL:
 Encienda el instrumento 15 minutos antes de ser utilizado.
 Longitud de onda: 430 nm,
 Lea las absorbancias de los estándares de la curva de calibrado y del QC preparado.

CONCENTRACION ABSORBANCIA
Est #
µg Ion Cromo/ml
0 0 0
1 10 0.058
2 20 0.095
3 30 0.127
4 40 0.165
5 50 0.193

NOTA: No incluir en la curva el valor de absorbancia del QC

RESULTADOS OBTENIDOS

1. Con los datos obtenidos, grafique la curva de calibrado utilizando EXCEL. Registre la ecuación y el valor de R².
2. Calcular el peso en gramos de Cr2O7K2 EN 500 ml
Datos:
�� ��2�7�2 = 294.185�/���
�� ��− = 51.99�/���
1. 500 µg ION Cromo/ml -- --------1 ml solución estándar
X----------------- 500 ml solución estándar
X= 250.000 µg ION Cromo/ml
X= 0,25 g ION Cromo/ml

2. 294.185 g ��2�7�2---------- -- 103.98 g ION Cromo/ml

X - - - - - - - -- 0.25 g ION Cromo/ml

X= 0.70 g ��2�7�2

3. Calcular los Estándares de trabajo (5)

Datos:
V1=?
C1= 500 µg ION Cromo/ml
C2= 10-20-30-40-50 µg ION Cromo/ml
V2= 25 ml
V1 C1 = V2 C2
����
�� =
��
1) 10 µg ION Cromo/ml
(25 ��)(10 µgCr/ ml
�1 = = �, � ��
500 µgCr / ml
 2) 20 µg ION Cromo/ml
(25 ��)(20 µgCr/ ml
�1 = = � ��
500 µgCr / ml
3) 30 µg ION Cromo/ml
(25 ��)(30 µgCr/ ml
�1 = = �, � ��
500 µgCr / ml
4) 40 µg ION Cromo/ml
(25 ��)(40 µgCr/ ml
�1 = = � ��
500 µgCr / ml
5) 50 µg ION Cromo/ml
(25 ��)(50 µgCr/ ml
�1 = = �, � ��
500 µgCr / ml
4. Con ayuda de la ecuación, calcule la concentración real de su QC preparado y determine el porcentaje de
recuperación, el mismo que debe estar entre el 80 y 120%
Ecuación de la recta (y= m x + b)
y= 0,0038x + 0,0122
Coeficiente de correlación R2=
Longitud de onda = 430 nm
Subgrupo 4 = Concentración teórica del 4 nivel = 40 µg /ml
Despeje X de la ecuación de la recta
�±�
�=
�
0.165 − �, ����
�= = ��, ��
�, ����

����� ���������
� ��� = % �� ����������ó�
����� ����

40,21 µg/ml
%� = � ��� = ���. ��% �� ����������ó�
40 µg/ml
Explicación
Mediante la fórmula de porcentaje de recuperación podemos verificar el control de calidad (QC) para el ion cromo donde
nos dio positivo gracias a que el resultado se encuentra dentro del rango de 80 -120%.
CONCLUSIONES
 La validación del control de calidad (QC) para el ion cromo fue exitosa, logrando resultados consistentes tras la
lectura de cinco alícuotas y una alícuota de QC en el instrumento. Se realizó la curva de calibración a partir de los
datos obtenidos, determinando la ecuación de la recta y el coeficiente de correlación. Posteriormente, se despejó la
variable "x" de la ecuación, calculando la variable "y", que se utilizó en la fórmula de recuperación junto con la
concentración teórica. El cálculo resultante de 100.52% confirma la validez del método.
 El valor de R² obtenido fue de 0,9867, lo cual no cumple con lo esperado. Las posibles causas de esta desviación
pueden ser diversas y ocurrir en distintas etapas del procedimiento. Entre ellas se incluyen: errores en la medición
o pesado al preparar la solución madre o las diluciones, una toma incorrecta de las alícuotas al usar la
micropipeta, falta de homogeneización adecuada de las soluciones, contaminación de los estándares con
impurezas, formación de burbujas en la celda de medición o el uso de un medio ácido inadecuado que afecte la
estabilidad del analito.

Estos errores pueden surgir a lo largo de todo el procedimiento experimental, lo que resalta la importancia de
documentar cualquier incidencia durante el proceso. Esto permite identificar, analizar y corregir anomalías,
asegurando la fiabilidad y calidad de los resultados obtenidos.

RECOMENDACIONES
 Preparar los estandares con la mayor precisión ya que los errores finales en la curva de calibrado se deben en gran
parte a errores en la preparacion de las soluciones.
 Antes de realizar las mediciones, es fundamental asegurarse de que el espectrofotómetro esté calibrado y
funcionando correctamente. Esto incluye ajustar el cero con el blanco correspondiente (en este caso, agua destilada)
y comprobar que la lámpara esté en óptimas condiciones para obtener lecturas confiables.
 Colocar las cubetas correctamente para permitir la incidencia optima de luz.
 Leer el estandar (QC) en solitario y aplicar la formula de curva de calibrado de los estandares de trabajo para
evaluar si la concentración del analito si cumple con el parámetro de validez del método.
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