UNIVERSIDAD UTE

FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y AGRONOMÍA

CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA

BIOLOGÍA CELULAR

INFORME DE LABORATORIO

CÉLULAS PROCARIOTAS

INTEGRANTES:

 Yuliana Pérez

 Danna Leiva

 Carla Robalino

DOCENTE:

Miryan Rivera
 Introducción

Las bacterias, organismos unicelulares pertenecientes al dominio Bacteria, son

ejemplos representativos de células procariotas, caracterizadas por la ausencia de núcleo

definido y organelos membranosos. Estas células tienen una estructura sencilla pero

esencialmente funcional, destacándose la pared celular, cuya composición determina

propiedades morfológicas y de resistencia que son fundamentales para su clasificación y

estudio (Madigan et al., 2018).

La tinción de Gram, desarrollada por Hans Christian Gram en 1884, es una técnica

diferencial ampliamente utilizada en microbiología para clasificar bacterias en Gram

positivas y Gram negativas. Esta diferenciación depende de la capacidad de las bacterias

para retener el colorante violeta cristal durante el proceso de decoloración con alcohol, lo

que está directamente relacionado con la estructura y espesor de su pared celular. Las

bacterias Gram positivas poseen una capa gruesa de peptidoglicano, lo que permite

retener el colorante inicial, adoptando un color violeta-azul; por el contrario, las bacterias

Gram negativas tienen una capa más delgada de peptidoglicano y una membrana externa

que no retiene el colorante, permitiendo la adquisición de un tono rojo o rosa al final del

proceso (Tortora, Funke & Case, 2020).

Además de la tinción de Gram, la tinción simple es otro método útil para observar

la morfología bacteriana. A diferencia de las técnicas diferenciales, la tinción simple

utiliza un solo colorante que permite visualizar la forma y agrupación de las bacterias

(Willey, Sherwood & Woolverton, 2017). Ambas técnicas son fundamentales en el campo

de la microbiología, ya que permiten la identificación preliminar de microorganismos y

son la base para estudios más avanzados en diagnóstico clínico, control de calidad y

biotecnología.
 La presente práctica tiene como objetivo aplicar las técnicas de tinción de Gram

y tinción simple en muestras bacterianas para observar su morfología microscópica y

diferenciar entre bacterias Gram positivas y Gram negativas. Estos procedimientos no

solo facilitan la identificación de microorganismos, sino que también permiten relacionar

los resultados con la estructura de la pared celular bacteriana, proporcionando una

comprensión más profunda de las características que definen a las células procariotas.

Objetivo General

1. Realizar la tinción de Gram y la tinción simple en muestras

bacterianas para diferenciar entre bacterias Gram positivas y Gram negativas, y

observar su morfología microscópica.

Objetivos Específicos

1. Preparar adecuadamente las muestras bacterianas en portaobjetos

para su posterior tinción.

2. Realizar el procedimiento de tinción de Gram y tinción simple

siguiendo las técnicas apropiadas.

3. Observar las muestras teñidas bajo el microscopio con diferentes

aumentos para identificar la morfología bacteriana y diferenciar entre Gram

positivas y Gram negativas.

4. Interpretar los resultados obtenidos y relacionarlos con la

estructura de la pared celular bacteriana.

Materiales y Métodos
 1. Materiales

1.1. Reactivos:

 Cristal Violeta.

 Lugol (solución yodada).

 Alcohol-Cetona.

 Safranina.

 Azul de Metileno.

 Metanol.

1.2. Equipos:

 Microscopio óptico con lentes de 4X, 10X, 40X y 100X (con aceite

de inmersión).

 Mechero o fuente de calor.

 Portaobjetos.

 Asa de inoculación o mondadientes.

2. Métodos

2.1. Se colocó una gota de muestra en este caso se utilizó la saliva lo

cual se colocó en el centro de un portaobjetos.

2.2. Luego de tomar una muestra bacteriana con un cotonete se realizó

un frotis en el portaobjetos.

2.3. Para fijar la muestra colocada en el portaobjetos se la coloco a la

llama del mechero por unos pocos segundos realizando 3 pasadas.

2.4. Luego se coloca la primera tinción de las 5 tinciones que se tenía,

se empezó con el cristal de Violeta el cual se colocó en el centro del portaobjetos

donde se encontraba la muestra, en un cronómetro se colocó 1 minuto lo cual nos

indicaba el tiempo que debía estar el cristal de Violeta en el portaobjetos, luego

 con el agua destilada se procedió a realizar el enjuague de la placa para poder

colocar el siguiente reactivo.

2.5. Para el siguiente reactivo se realizó el mismo procedimiento pero

en este caso se utilizó Lugol esperamos por 1 minuto y se enjuago con agua

destilada.

2.6. Se coloca el siguiente reactivo qué en ese caso fue Alcohol-Cetona

durante 10 segundos y se enjuago con el agua destilada.

2.7. Para el siguiente reactivo se colocó Safranina durante un minuto lo

cual dará un indicativo de que hay presencia de bacterias Gram negativas.

Resultados

Se observó una muestra de saliva siguiendo un procedimiento detallado.

Inicialmente, se realizó el sellado de la muestra en la placa portaobjetos. Posteriormente,

se aplicaron los reactivos necesarios para llevar a cabo la tinción. Una vez seca la muestra,

se observó un cambio en su apariencia, presentando tonalidades blancas a simple vista.

Al examinarla bajo el microscopio, se identificaron estructuras bacterianas que se

visualizaron como puntos morados, lo cual corresponde a bacterias Gram positivas. Los

resultados obtenidos se muestran en las siguientes imágenes:

1.

2.
3.

4.
 5.

6.

Discusión

1. Observación de Bacterias en una Muestra

El primer paso del procedimiento consistió en sellar la muestra de saliva en un

portaobjetos. Este paso resulta fundamental, ya que permite evitar la contaminación

externa y mantener las condiciones originales de la muestra, asegurando resultados más

precisos.

2. Aplicación de Reactivos y Análisis Macroscópico

Posteriormente, se aplicaron los reactivos necesarios para la tinción, con el

objetivo de resaltar características específicas de las bacterias, como su estructura y

coloración. La tinción de Gram, utilizada en este procedimiento, permite diferenciar entre

bacterias Gram positivas y Gram negativas según la naturaleza de su pared celular,

específicamente la cantidad de peptidoglicano presente.

3. Observación Microscópica

Al examinar la muestra bajo el microscopio, se identificaron puntos de color

morado, lo cual indica que ciertas bacterias presentes en la muestra retuvieron el colorante

cristal violeta durante la tinción. Este resultado es característico de bacterias Gram

positivas, que poseen una pared celular gruesa compuesta principalmente por

peptidoglicano, lo que les confiere la capacidad de retener el colorante primario y resistir

la decoloración con alcohol.

Conclusiones

1. Se pudo observar con claridad las bacterias presentes en la muestra

de saliva tras aplicar las técnicas de tinción.

2. Durante la tinción de Gram, las bacterias adquirieron un color

morado, lo cual facilitó su identificación bajo el microscopio.

3. La práctica permitió desarrollar habilidades en la aplicación de

reactivos y el uso adecuado del microscopio.

 4. Se comprobó la importancia de trabajar con cuidado y mantener la

limpieza para obtener resultados confiables.

5. La experiencia ayudó a entender cómo los procedimientos de

tinción permiten observar microorganismos invisibles a simple vista.

Referencias

 Madigan, M. T., Bender, K. S., Buckley, D. H., Sattley, W. M., &

Stahl, D. A. (2018). Brock. Biología de los microorganismos (14. ª ed.). Pearson

Educación.

 Tortora, G. J., Funke, B. R., & Case, C. L. (2020). Microbiología:

Una introducción (13. ª ed.). Pearson.

 Willey, J. M., Sherwood, L. M., & Woolverton, C. J. (2017).

Prescott, Harley y Klein. Microbiología (10. ª ed.). McGraw-Hill Education.