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RESUMEN LABORATORIO TOXICOLOGÍA I
Determinación de alcohol etílico. Muestras: Sangre (preferiblemente), orina y tejidos.
1) ESPECTROFOTOCOLORIMETRÍA: Método de Microdifusión de CONWAY: proc. sencillo, certero y
rápido que req. un mín. de habilidad y aparatos. Para mx sin alcohol etílico. Uso: diagnóstico diferencial.
TÉCNICA:
1) Colocar 2 mL de la sol, de K2Cr2O7 (agente absorbente) en el centro de la unidad Conway.
2) Colocar 1 mL de sol, saturada de K2CO3 (agente liberador)en el compartimento exterior.
3) En el mismo, agregar 0,8 mL de sangre u orina. 0,4 mL de tej. homogeneizado equiv. a 0,8 g de tej.
4) Tapar la unidad, remover con un mov. rotatorio: t de difusión para sangre y orina 3 horas a T ambiente.
Para tejidos: 4 h a 37º o una noche a T ambiente. La aparición verde-azul indica presencia de etanol.
PARA LA DETERMINACIÓN CUANTITATIVA SE PROSIGUE ASÍ:
5) Con una pipeta capilar transferir el contenido del compartimiento central a un cilindro graduado de 10
mL. Enjuagar bien dicho compartimento y agregar los lavados al cilindro.
6) Enrasar hasta 10 mL con agua destilada.
7) Preparar un blanco de reactivos con 2 mL de sol de dicromato diluida con agua destilada hasta 10 mL.
8) Leer densidades ópticas en un espectrofotocolorímetro (450 nm) con agua destilada como referencia.
9) Preparar patrones adicionando cantidades conocidas de alcohol etílico a la sangre y repetir proc.
NOTA: La recuperación de alcohol adicionado a las muestras biológicas es de 96 a 101%. El rango de
concentración que se puede determinar en muestras de 0,8 de sangre u orina es de 0 hasta 300 mg %
3C2H5OH + 2K2Cr2O7 + 8H2SO4 → 2Cr2(SO4)3 + 3CH3COOH + 2K2SO4 + 11H2O
En la rx anterior, el K2Cr2O7 (color rojo anaranjado) cuando reacciona con etanol en presencia de H2SO4
produce ácido acético junto con sulfato de cromo (verde). La rx es un ej de una RQ redox: el dicromato se
reduce a sulfato de cromo (III) y el alcohol se oxida a ácido acético.
2) TITRIMETRÍA: MÉTODO DE KOZELKA-HINE: método titrimétrico de det. de etanol en una mx bio.
Presenta la ventaja de excluir los OH ingeridos por otras sust., lo que genera un resultado confiable del alcohol
etílico ingerido por sust. alcohólicas. Recomendado para det. alcohol cuando el # de mx que debe dosificarse en
un día no es muy numeroso; y en mx de orina que cont. div. cuerpos reductores (acetona, formaldehído, etc.)
FUNDAMENTO: Extracción del alcohol por arrastre con el vapor de agua, la reducción del dicromato ácido
por el alcohol y posterior titulación del exceso de dicromato no reducido por yodometría.
TÉCNICA:
1) Calentar hasta ebullición el balón generador de vapor y beacker en donde se colocarán los tubos A y B.
2) Colocar en el tubo A 5 ml de tungstato de sodio al 10% y 5 ml de H2SO4 1 N (para precipitar las prot.)
3) Colocar en el tubo B: 10 mL de solución saturada de NaOH y 10 mL de sol, sat. de cloruro mercurioso,
se forma un precipitado de óxido amarillo de mercurio.
4) Agregar en el tubo A: 1 o 2 mL de sangre u orina exactamente.
5) Introducir el extremo libre del refrigerante, en el Erlenmeyer colector con unos mL de agua destilada.
6) Conectar todos los instrumentos del aparato de destilación.
NOTA: Durante toda la operación los tubos A y B deben mantenerse en un baño de agua hirviente.
7) Continuar el proceso de destilación hasta recoger de 25 a 30 mL de destilado.
8) Retirar la fiola y lave bien el refrigerante con agua destilada.
9) Agregar desde una bureta 10 mL de sol. de dicromato 0,1 N y 5 ml de ácido sulfúrico concentrado
procurando que corra por las paredes (para evitar la mezcla).
10) Cerrar inmediat. la fiola, agite para mezclar el contenido y llévelo a baño de María hirviente por 20 min
11) Enfriar la fiola y diluya con la cantidad necesaria de agua para que la concentración final del ácido
sulfúrico sea equivalente o inferior al 10%.
12) Añadir alrededor de 0,2 g de KI p/a
13) Titular el yodo lib. con sol. de tiosulfuro de sodio 0,1 N en presencia de una gota de sol. indicadora de
almidón agg cuando el color propio del anión peryoduro esté próximo a desaparecer, continúe la
titulación, cuidadosamente hasta aparición de un color verde azulado del ión crónico.
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TÓXICOS GASEOSOS: MONÓXIDO DE CARBONO (DETERMINACIÓN EN SANGRE): El CO se
puede determinar en sangre a través de algunas RQ de identificación y métodos de microdifusión.
MUESTRA. OBSERVACIONES PREVIAS.
a) La determinación de CO debe practicarse rápidamente, porque en caso que no haya ocurrido la muerte
se elimina fácilmente después de 24 horas.
b) En caso de que la muestra de sangre sea venenosa, se debe emplear como anticoagulante el Citrato de
Na o K (50 mg/10 mL) ya que el oxalato de Potasio, transf. el CO en CO2 después de algún tiempo.
c) La muestra de sangre también puede ser obt. por punción dactilar y no es necesario usar anticoagulante.
Fundamento: el tinte rojo grosella de la carboxihem es + resist. a div. reactivos químicos que el de la oxihem.
1. Ensayo de Haldane: Diluya la sangre problema con agua destilada y comparela con una dilución
idéntica de sangre normal (1 gota de sangre en 10-15 mL de agua). La Carboxihem presentará un tono
rosado, la sangre normal aparecerá amarillenta.
2. Diluya una porción de la sangre normal con 4 veces su volumen de agua destilada. Agregar 3 veces el
volumen original de ácido tánico al 1%, recientemente preparado, agitar bien y dejar en reposo. La
Carboxihem forma un ppdo. de color rojo, mientras que la sangre normal aunque roja al principio, se
vuelve parda después de1 o 2 horas y gris después de 24 a 48 horas.
3. Prepare una dilución de sangre sospechosa y otra semejante de sangre normal 5%. Trate con 0.04 de
ácido pirotanico (mezcla de ácido tánico y ácido pirogalico a partes iguales)
La carboxihemoglobina de un ppdo. de un color carmínado. La sangre normal produce un ppdo. gris oscuro.
DETERMINACIÓN POR MICRODIFUSIÓN ESPECTROFOTOCOLORIMETRÍA: Método de
Feldstein y Klendsho
Fundamento: Se basa en la redux por el CO del ion Pd a Pd metálico el cual aparece como una película negra
plateada sobre la superf. del [Link] de la unidad de Conway. Ventaja: prop. evidencia presuntiva de la
ausencia de CO al no observarse sobre la superf. de la sol. de cloruro de Pd la película negra plateada caract.
PROCEDIMIENTO: Se le dará instrucciones
1. Sol. de Cloruro de Pd: disolver 0,22 g de PdCl2 en 250 mL de HClO calentar si es necesario para
efectuar la solución.
2. Compart. central: Coloque 2 mL de sol. de cloruro de Pd (ag. absorbente)
3. Compart. medio: Coloque 1 mL de ác. sulfúrico al 10% (ag. liberante)+1 mL de sangre (evit. mezcla).
4. Tape la celda y rotar suavemente para mezclar el contenido del compartimiento medio.
5. Tiempo de difusión: 1 hora a temperatura ambiente. La aparición de una película plateada de Pd
metálico permite presumir la presencia de CO.
6. (Para la det. cuantit. prosiga de la siguiente manera): con la ayuda de una pipeta capilar, transfiera a un
tubo de centrífuga, la sol. PdCl2 que no ha reaccionado con el CO.
7. Centrifugue para eliminar cualquier partícula de Pd.
8. Transfiera 0,1 mL de la sol. sobrenadante a un balón de 10 mL.
9. En otro balón volumétrico, coloque 0,1 mL de sol. de PdCl2 original.
10. Añada a cada balón 1 mL de sol. de goma ghatti y 1 ml de sol, de yoduro de potasio al 15%, luego
diluya con agua destilada hasta 10 mL mezcle bien.
11. Lea las densidades ópticas de la muestra y del control, ajustando el cero con agua destilada.
TITRIMETRÍA
Método de Ryan, Nolan and Conway.
PdCl2 + CO + H2O → ´Pd + CO2 + 2HCl
Es una titulación en una cápsula de porcelana donde se agrega la sangre que contiene el monóxido de carbono
más cloruro de paladio que forma ácido clorhídrico y es titulado con un álcali (base (KOH) a pH 4-4,5) en
presencia de azul de bromofenol, dando como resultado un color azul intenso.
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Desventaja: El error producido por el factor personal en las operaciones de titulación.
Detección de medicamentos: las personas no necesitan tener síntomas de envenenamiento o abuso de
fármacos. Éstas, tienen que dar su aprobación para someterse a pruebas de detección de sustancias, excepto en
ciertas circunstancias (accidentes). No determinan con qué frecuencia se usan y sólo pueden detectar algunas.
Las comúnmente utilizadas para las pruebas son:
- Alcohol - Benzodiazepinas - Opiáceos naturales y
- Anfetaminas - Cocaína semisintéticos
- Barbitúricos - Marihuana - Fenciclidina
¿Por qué los disolventes orgánicos hay que evaporarlos a baño maría y no en un mechero? Porque la
mayoría son tóxicos e inflamables, por lo que debe usarse baño María y una campana de ventilación al trabajar
con ellos.
Factor de Retardo (Rf): En cromatografía, es como la relación entre la distancia recorrida por el centro de un
punto y la distancia recorrida por el frente del solvente.
Cromatografía de gases: técnica analítica que perm. separar, identificar y cuantificar los comp. Q de una
mezcla compleja según las dif. veloc. con las que se desplazan a través de una fase estacionaria cuando son
transp. por una fase móvil para la det. de agonistas. Se volatiliza la muestra y se inyecta en la cabeza de una
columna cromatografía, ahí se produce la sep. de los analitos, la fase móvil no interax con las moléculas del
analito solo lo transp. por la columna; dicha columna se encuentra dentro de un horno a T controlada constante o
gradual.
Proceso de Derivación: son RQ para transformar de los analitos en nuevas especies (compuestos derivados)
que sean compatibles con el sistema cromatógrafo: con la fase móvil, el sistema de inyección, la columna
cromatográfica y el detector continuo.
¿Por qué se mide el monóxido en sangre? Porque el CO es un gas con alta afinidad al grupo hem de los
hematíes y lo transforma de hemoglobina a carboxihemoglobina impidiendo la fijación del O2 y aumentando el
transporte de CO por todo el cuerpo produciendo una anoxia anóxica.
TOMA Y CONSERVACIÓN DE MUESTRAS:
Sangre: Para la toma de la mx se desinfecta la piel
con alcohol, excepto en el caso de determinación de
alcoholemia (se recurrirá a solución jabonosa u otro
antiséptico sin alcohol).pH=7,35-7,45. Este es un
consumo inmediato, hasta unas pocas h después de
haber consumido las drogas. Factores limitantes la
extracción de sangre debe ser en centro especializado,
y la prevalencia de las sustancias son muy cortas. Para
diag. intoxicaciones, se realizan 2 muestras, una con
sangre entera y otra con el solo suero, la cant.
recomendada son 5ml de cada muestra. La
conservación de las muestras se hará en heladera a
4°C hasta el momento del envío al laboratorio.
Orina: mx más abundante que la sangre, no invasiva,
fácil de recolectar y conservar. En algunos casos es necesario recolectar el vol. total emitido en las 24 h y en
otros es suficiente una única micción. Se conserva en heladera, a 4 ºC o en freezer. pH= 4,5 y 8 (ligeramente
ácido). Pruebas de drogas más usado pero no siempre son precisas, da resultados incompletos o falso negativo.
1. No fue diseñada o tiene una sensibilidad limitada para det. un fco o ingrediente del fármaco específico.
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2. La orina está muy diluida, por lo que la cant. de droga en la orina es < que la que puede det. la prueba.
3. La persona adultera la muestra o da la de alguien más. Por otro lado, la prueba a veces da un resultado
positivo (resultado falso positivo) cuando la persona no está usando la droga.
EL ETANOL Y SUS EFECTOS EN EL ORGANISMO: El alcohol, tiene un efecto inicial estimulante, pero
es un depresor del SNC. Se absorbe rápidamente en el intestino delgado y es metabolizado en el hígado. Su
consumo excesivo y prolongado puede causar enfermedades crónicas y graves daños en el cerebro, hígado, etc.
Puede crear dependencia.
Tratamientos para intoxicación alcohólica:
- Disulfiram: genera náuseas y enrojecimiento de la piel cada vez que el paciente ingiere alcohol, por lo
tanto, lo evitará.
- Naltrexona: Bloquea los receptores en el cerebro que hacen sentir placer al ingerir alcohol y ↓ ansias
por consumirlo.
- Acamprosato: Funciona en múltiples sistemas cerebrales para ↓ ansias, especialmente justo después de
haber dejado de consumir alcohol.
ESPECTROFOTOMETRÍA UV VISIBLE: proceso de absorción de radiación UV (con longitud de onda
entre 400 y 780 nm) que provoca el avance del electrón en un estado excitado.
Nota:
Las muestras ácidas se deben llevar a un pH ácido,
si es un ácido fuerte como el ácido sulfúrico se debe diluir, en cambio, si es un ácido débil como el ácido acético
no se diluye. Se extrae con éter dietilico.
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Para las neutras se lleva a pH neutro (7) con soluciones buffer de ácido fosfórico o amoniacal. Se extrae con
diclorometano.
