Cambios en el manual de instrucciones

Errores de copia
Las instrucciones de las funciones celulares están escritas en la secuencia de nucleótidos del
ADN. Estas instrucciones se transcriben en secuencias de ARN mensajero que sirven luego
de molde para la síntesis de proteínas en los ribosomas. Las proteínas, a su vez, realizan
múltiples funciones en las diferentes partes de la célula y también fuera de ella, como es el
caso de las proteínas de la matriz extracelular o de proteínas de comunicación como muchas
hormonas (recordemos la insulina).
El ADN, además, es duplicado para ser pasado a sucesivas generaciones de células cada vez
que estas se dividen, las cuales, asimismo, pasan de generación en generación en una
especie cada vez que los organismos se reproducen.
Pero toda vez que el ADN se duplica pueden suceder errores (los mecanismos de replicación
no son perfectos). Y estos errores serán perpetuados luego en cada división celular. Estos
cambios en la secuencia del ADN, que pueden tener consecuencias importantes en el
funcionamiento de las células o de diferentes partes del organismo o no tenerlas, se llaman
mutaciones.
Para poder realizar las actividades propuestas deben leer la viñeta fenomenal “Fibrosis
quística: la enfermedad y sus mutaciones”.

Actividad 1. Problemas con una proteína

La mayor parte de las mutaciones conducen a la pérdida de la función de una proteína. Esto
puede suceder por dos razones fundamentales. Una, que la célula produzca una proteína
defectuosa que no cumple con la función que debería. Y otra, que directamente no produzca
la proteína en cuestión. En el primer caso, a veces se detecta un poco de función residual; en
el segundo, la función es nula. La fibrosis quística es una enfermedad que se debe a la
ausencia de una proteína o su falla.

1. Una de las características de la fibrosis quística es que las personas que la padecen
tienden a desarrollar neumonías complicadas y otras infecciones de las vías respiratorias.
Expliquen cómo la ausencia o el mal funcionamiento de la proteína específica conduce a
este síntoma.

2. ¿Qué relación existe entre las infecciones del tracto respiratorio y los problemas digestivos
en los pacientes con fibrosis quística?

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3. Los anticuerpos son herramientas que permiten la detección de proteínas específicas en
células y tejidos. Muchas versiones comerciales producen una coloración o fluorescencia,
es decir, la emisión de luz de colores particulares. Las figuras abajo muestran células
normales del tracto respiratorio (de pacientes sanos) y de personas con la mutación más
frecuente de fibrosis quística (la cual se denomina “F508del”). De acuerdo con estos
resultados, ¿dirían que esta mutación produce una proteína defectuosa o no produce
proteína? ¿En qué se basan para llegar a su conclusión?

Células de epitelio nasal de un paciente

sano (izquierda) y uno con la mutación
F508del (derecha). Las manchas rojas
cerca del extremo de las células
corresponden a la proteína CFTR
(tomado de Hyde, S. C., Southern, K. W.,
Gileadi, U., Fitzjohn, E. M., Mofford, K. A.,
Waddell, B. E., Gooi, H. C., Goddard, C. A.,
Hannavy, K., Smyth, S. E., Egan, J. J.,
Sorgi, F. L., Huang, L., Cuthbert, A. W.,
Evans, M. J., Colledge, W. H., Higgins, C.
F., Webb, A. K., y Gill, D. R. (2000).
Repeat administration of
DNA/liposomes to the nasal epithelium
of patients with cystic fibrosis. Gene
therapy, 7(13), 1156-1165.
https://doi.org/10.1038/sj.gt.3301212).

Comparación de células bronquiales de

un paciente sano (arriba) con uno con
la mutación F508del de fibrosis quística
(abajo). El color verde es producido por
un anticuerpo que detecta la proteína
CFTR. El color rojo en el paciente sano
corresponde a la tubulina dentro de las
cilias (tomado de Kreda, S. M., Mall, M.,
Mengos, A., Rochelle, L., Yankaskas, J.,
Riordan, J. R., y Boucher, R. C. (2005).
Characterization of wild-type and
deltaF508 cystic fibrosis
transmembrane regulator in human
respiratory epithelia. Molecular biology
of the cell, 16(5), 2154-2167.
https://doi.org/10.1091/mbc.e04-11-1010).

2
 Actividad 2. Fibrosis quística: distintos tipos de errores
La maquinaria celular que copia el ADN no es perfecta y produce errores, aunque con una
frecuencia bajísima. Pero no todos los errores son iguales, ni tienen el mismo impacto en las
proteínas ni ocurren con la misma frecuencia.
Las tres formas básicas de cambio son la inserción de una base extra, la eliminación de una
base (se la llama “deleción”) y el cambio de una base por otra (se la denomina “sustitución”).
Además, hay mutaciones que comprometen segmentos enteros de ADN y no solamente
bases puntuales: puede haber grandes inserciones o deleciones y también inversiones de un
segmento o duplicaciones.

1. Las sustituciones son cambios en el ADN en los cuales una base nitrogenada es
reemplazada por otra; generalmente, una A por una G (o viceversa) o una C por una T (o el
cambio inverso). Estas mutaciones pueden tener efectos grandes en una proteína o
efectos suaves o nulos. Abajo encontrarán un fragmento de la secuencia del ARN
mensajero de la proteína CFTR. Y, a continuación, encontrarán el mismo fragmento, pero
con la secuencia de dos mutaciones que provocan fibrosis quística: la G551D (afecta al 5 %
de los pacientes) y la R553X (que afecta a un 1 % de los pacientes). Lean la infografía de la
Fundación de Fibrosis Quística y resuelvan los siguientes acertijos.

Fragmento de ARN mensajero de tipo salvaje (“normal”):

GAAGGUGGAAUCACACUGAGUGGAGGUCAACGAGCAAGAAUUUCUUUAGCAAG

Fragmento de ARN de la mutación G551D:

GAAGGUGGAAUCACACUGAGUGGAGAUCAACGAGCAAGAAUUUCUUUAGCAAG

Fragmento de ARN de la mutación R553X:

GAAGGUGGAAUCACACUGAGUGGAGGUCAAUGAGCAAGAAUUUCUUUAGCAAG

a) Comparen las tres secuencias y marquen con color las mutaciones.

b) Usando el código genético (pueden encontrarlo en internet), hallen la secuencia de

aminoácidos de cada uno de los tres ARN mensajeros: el de tipo salvaje (normal) y los
dos mutantes.

c) ¿Cuál es la diferencia fundamental entre las mutaciones G551D y R553X?

d) Una de estas mutaciones provoca la ausencia total de la proteína, mientras que la

otra genera una proteína presente pero no funcional. ¿Cuál es cuál?

e) ¿Cuál de estas dos mutaciones tiene más chances de provocar un fenotipo más
extremo, es decir, síntomas más graves en los pacientes?

3
2. Las deleciones pueden ser tan grandes como segmentos enteros de un cromosoma (en
ese caso pueden llevar a remover varios genes completos) o tan pequeñas como la
eliminación de uno solo o unos pocos nucleótidos. Aun así, sus efectos pueden ser muy
profundos. Las secuencias más abajo corresponden a un segmento específico del ARN
mensajero del gen CFTR; la primera es la secuencia normal y las otras dos son mutantes.

Fragmento de ARN mensajero de tipo salvaje (“normal”):

AAA GAA AAU AUC AUC UUU GGU GUU UCC UAU GAU GAA UAU AGA UAC AGA AGG

Fragmento de ARN con la mutación 1:

AAA GAA AAU AUC AUC GGU GUU UCC UAU GAU GAA UAU AGA UAC AGA AGG

Fragmento de ARN con la mutación 2:

AAA GAA AAU AUC AUC UUG GUG UUU CCU AUG AUG AAU AUA GAU ACA GAA GG

a) Comparen las secuencias mutantes con la de tipo salvaje y encuentren las

mutaciones. ¿Qué tienen en común estas mutaciones? ¿En qué difieren?

b) Usando el código genético, escriban las secuencias de aminoácidos codificadas por

estos fragmentos de ARN.

c) ¿Qué efecto tiene la mutación 1 en la secuencia de aminoácidos? ¿Y la mutación 2?

3. Basándose en las respuestas a la pregunta anterior, ¿por qué creen que una deleción de
un solo nucleótido puede ser más devastadora que una deleción de tres nucleótidos?
¿Cómo esperarían que fueran los efectos de eliminar dos pares de bases de una
secuencia? ¿Y los de eliminar cuatro, cinco o seis pares de bases?

4. La mutación F508del es la más frecuente en pacientes con fibrosis quística (60 % de los
casos, aproximadamente). Si bien la secuencia permite la síntesis de una proteína
completa, los pacientes con esta mutación carecen de proteína CFTR en sus membranas.
Lean la viñeta con atención y expliquen a qué se debe este fenotipo.

5. Muchos cambios en las secuencias de genes tienen efectos leves o nulos. A veces se habla
de “mutaciones silenciosas”. Casi todas las mutaciones del gen CFTR que no tienen
síntomas (o tienen síntomas extremadamente leves) son sustituciones de un nucleótido
por otro y nunca o casi nunca deleciones o inserciones. ¿Por qué les parece que esto es
así?

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6. ¿Por qué la droga ivacaftor es efectiva en pacientes con la mutación G551D y en pacientes
con F508del?

7. La droga ataluren podría ser útil para tratar a pacientes con la mutación R553X, pero no a
aquellos que tengan el defecto genético G551D. ¿Por qué?

Viñeta fenomenal

Fibrosis quística (I): Una enfermedad genética

La fibrosis quística es una enfermedad hereditaria que afecta fundamentalmente a
personas de origen europeo y se da en uno de cada 3000 nacimientos. La fibrosis
quística se debe a mutaciones en un gen llamado CFTR por sus siglas en inglés, que
significan “regulador transmembrana de la conductancia de fibrosis quística”.

El gen CFTR contiene la información para producir

una proteína de membrana que regula el pasaje
de iones de cloro de un lado al otro de las células. Y
esto, a su vez, controla la cantidad de agua, pues
las moléculas de agua “siguen al cloruro”: donde
hay más cloruro hay, también, más agua. Cuando
la proteína CFTR es normal, el balance de agua y
cloruro es normal. Cuando la proteína está ausente
o no funciona, se produce un desbalance en la
cantidad de agua dentro y fuera de la célula. Esto
produce la acumulación de un mucus espeso en
ciertos tejidos clave como los del pulmón, el
páncreas y otras partes del sistema digestivo.

Todas las personas tenemos dos copias del gen

CFTR. Para padecer la enfermedad, las dos copias
deben ser defectuosas, es decir, deben haber
La proteína CFTR atraviesa la membrana
heredado alelos mutantes tanto de su padre como y bombea iones cloruro cambiando de
de su madre. Las personas con una copia funcional conformación. Adaptado de Cant, Pollock
y Ford (2014). The International Journal of
y una no funcional no padecen síntomas, pero son Biochemistry & Cell Biology (52).
portadoras que pueden tener hijos con la
enfermedad, es decir que se trata de una
condición recesiva.
Todas las personas tenemos dos copias del gen CFTR. Para padecer la enfermedad,
las dos copias deben ser defectuosas, es decir, deben haber heredado alelos
mutantes tanto de su padre como de su madre. Las personas con una copia funcional
y una no funcional no padecen síntomas, pero son portadoras que pueden tener hijos
con la enfermedad, es decir que se trata de una condición recesiva.

Existen numerosas mutaciones descritas que afectan al gen CFTR.

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 Viñeta fenomenal

Fibrosis quística: una falla, muchas consecuencias

El problema con la fibrosis quística
es muy puntual: se trata de una
proteína de membrana que regula la
localización de iones y agua dentro y
fuera de la célula. Pero el impacto de
esta alteración es múltiple.

En los pulmones, la acumulación de mucus espeso bloquea las vías respiratorias,

produce grandes cantidades de flema que atrapa bacterias y causa frecuentes
infecciones e inflamaciones. En el páncreas, el mucus resulta en el taponamiento de
los conductos que vierten enzimas digestivas en el tubo digestivo y esto, a su vez, es
causa de una disminución en la captación de nutrientes y, por lo tanto, un
crecimiento empobrecido. En el hígado, el mucus puede bloquear los conductos
biliares, lo que resulta en enfermedades hepáticas.

El cambio de un solo aminoácido puede desembocar en una multitud de síntomas.

Viñeta fenomenal

Fibrosis quística (III): F508del, la mutación más común

Esta mutación afecta aproximadamente a dos tercios de los pacientes con fibrosis
quística. Se trata de una deleción de tres nucleótidos, es decir que faltan tres
nucleótidos en el ADN. También se la conoce como ΔF508 (que se lee “delta efe 508”;
la letra griega delta aquí significa “deleción”). Esta mutación resulta en una proteína a
la que le falta el aminoácido número 518 (que es una “fenilalanina”, de ahí la letra “F”
del nombre de la mutación). Sin este aminoácido, la proteína se pliega en una
conformación rara, muy diferente de la normal, y la célula la reconoce como
“defectuosa” y la destruye. De este modo, las células de las personas portadoras de
dos copias de esta mutación no tienen en sus membranas la proteína CFTR y
desarrollan los síntomas descritos más arriba.

Existen miles de otras mutaciones en el gen CFTR, con efectos que van de los nulos o
difícilmente detectables a toda una gama de diferentes problemas con las proteínas
producidas (¡o no producidas!). Las fundaciones dedicadas a esta enfermedad
destacan la importancia de que cada paciente conozca el tipo de mutación que
causa su enfermedad, pues, dependiendo del tipo de daño molecular, ciertas terapias
pueden funcionar, no funcionar o hacerlo mejor o peor.

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 Viñeta fenomenal

Fibrosis quística (IV): Diferentes terapias para diferentes daños

moleculares
La fibrosis quística no tiene cura hasta el momento. No es posible aún reparar un
daño genético. Sin embargo, la vida de los pacientes con esta enfermedad es mucho
más larga y con mayor calidad que la que tenían a mediados del siglo XX. La forma
principal de tratamiento ha sido tradicionalmente la administración de antibióticos
de diferentes tipos y formulaciones, siempre para tratar o prevenir las infecciones que
se producen en el tracto respiratorio.

Desde 2012, sin embargo, existe una droga que, por primera vez, ataca la causa de la
fibrosis quística y no solo sus síntomas. Se trata del ivacaftor, desarrollado por la
empresa Vertex Pharmaceuticals en colaboración con la Cystic Fibrosis Foundation
de los Estados Unidos. Esta sustancia se une a los canales de cloruro defectuosos y los
modifica de tal manera que puedan permitir el pasaje de los iones a través de la
membrana. El ivacaftor es especialmente efectivo en pacientes con la mutación
G551D, pero también funciona para otros defectos genéticos. La droga no elimina los
síntomas, sino que los morigera, y no es efectiva para todos los tipos de mutaciones.

A partir de 2015, la misma compañía presentó otra droga, el lumacaftor, que ayuda a
las proteínas en general a plegarse correctamente. Tomada en conjunto con ivacaftor,
mejora la situación de quienes portan la mutación más común, F508del (aunque es
posible que no funcione para otras mutaciones).

La empresa PTC Therapeutics está desarrollando en Europa una sustancia de

molécula pequeña que ayuda a los ribosomas a “saltarse” los codones STOP
prematuros y lograr así la síntesis de proteínas cuando existen mutaciones de
terminación de secuencia. La droga, llamada ataluren, está pensada para tratar otra
enfermedad producida por este tipo de mutaciones (distrofia de Duchenne), pero
quizá pronto pueda ser usada para otras afecciones producidas por este tipo de
mutaciones, incluida la fibrosis quística.

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 Actividad 3. Exceso de actividad
Para resolver esta actividad consulten la viñeta fenomenal titulada “Mutaciones y la
formación del hueso”.

1. ¿Qué similitudes y qué diferencias encuentran entre las mutaciones discutidas para la
fibrosis quística y la mutación que produce la fibrodisplasia osificante progresiva?

2. ¿Qué tipo de mutación les parece que serán más común, en general, en las poblaciones
de seres vivos, una de pérdida de función o una de ganancia de función?

Actividad 4. Síntesis: orden en el mundo de las mutaciones

Construyan un mapa de ideas que sintetice lo aprendido hasta ahora sobre mutaciones y
que incluya los siguientes términos.
Mutación puntual
Substitución
Deleción
Inserción
F508del
Mutación de cambio de marco de lectura
Mutación de terminación prematura (“sin sentido”)
Plegado de proteína
Proteína no funcional
Mutación de pérdida de función
Mutación de ganancia de función

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 Viñeta fenomenal

Mutaciones y la formación del hueso

Cuando somos un embrión en formación, nuestras células reciben distintas señales
que les dicen cómo multiplicarse, ordenarse y volverse diferentes de tal forma que se
alcance la formación de un ser humano completo con una gran cantidad de tipos
celulares diferentes. Las células que se formarán como esqueleto tienen en su
superficie un receptor específico (llamado “receptor de activina A de tipo I”) y, cuando
es activado por una señal específica, las células se diferencian en células óseas. La
unión entre el receptor y la proteína es específica, tanto que si el receptor no existiera
en la célula o si este no pudiera unirse a la proteína sería imposible que se generara el
tejido óseo. Este sistema de comunicación no solo se encarga de regular la formación
ósea del embrión, sino que, luego del nacimiento, hace posible la reparación de
huesos y tejidos.

La fibrodisplasia ossificans progresiva es una

enfermedad rarísima en la cual este receptor se
encuentra anormalmente activado, aun en ausencia de
señal. Esta afección se debe a una mutación en la
posición 206 de la proteína que cambia una arginina por
una histidina. En las personas que padecen esta
condición, los tejidos conectivos y cartílagos se van
transformando en huesos de modo progresivo; esto
parece estar asociado a un proceso defectuoso de
reparación de cartílagos en respuesta a los pequeños
daños que son normales en todo tejido. Luego de unos
años, esta excesiva formación de hueso hace que las
articulaciones se “traben” por completo y que el
movimiento sea imposible. Además, estas personas
tienen el riesgo de que, ante alguna agresión que
necesite reparación de tejidos (como un simple golpe, la
La imagen muestra el
aplicación de vacunas o una inyección de anestesia esqueleto de Harry Eastlack.
odontológica), este receptor “hiperactivado” pueda Esta viñeta fue desarrollada por
Emilia Clément y Gabriel Gellon
convertir estas lesiones en tejido osificado. Harry para la secuencia fenomenauta
Eastlack, en Estados Unidos, fue uno de los primeros “Comunicación celular: la
biología de la diabetes”.
pacientes en ser descritos en detalle; su esqueleto, que
parece una armadura casi completa, está conservado en
un museo del Colegio de Médicos de Filadelfia.