Introducción

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INTRODUCCIÓN A LA BIOLOGÍA
La Biología es la ciencia de la vida. La vida es el conjunto de características comunes entre los diversos organismos que los
diferencia de los objetos inanimados. La biología es reduccionista.
La célula es el ente más pequeño y más simple que posee la cualidad de la vida. Por ello, esas “características comunes” que
diferencian a lo vivo de lo muerto son a su vez características propias de una célula.
Propiedades básicas de los seres vivos
Vida: Es la propiedad básica de las células. Las células son las menores
Propiedades básicas de las células unidades que poseen vida.
Vida y muerte Muerte: Es considerada una propiedad básica puesto que sólo un ser vivo
Complejidad y organización puede sufrir el destino de la muerte.
Programa genético y los medios p/ usarlo Complejidad y Organización Precisa:
Reproducción
Los niveles de organización biológica, en orden ascendente:
Obtención y utilización de energía
Átomos, que se unen para conformar moléculas pequeñas, que se disponen
Reacciones químicas
dentro de polímeros gigantes, que se arreglan para formar complejos
Actividades mecánicas
macromoleculares, que se disponen dentro de organelos subcelulares, que
Reacción a estímulos
habitan el interior de las células, que son la unidad funcional y estructural
Autorregulación
de los tejidos, varios tejidos diferentes juntos conforman un órgano, varios
Evolución
órganos se relacionan en aparatos y sistemas, que conforman al individuo.
Es necesario saber que:
*Diferentes patrones en la organización de las células originan las diferencias macroscópicas entre individuos
*El tamaño de los órganos depende en mayor instancia del número de células que componen dicho órgano más que
el tamaño de las células.
*Al microscopio electrónico, cada tipo celular posee organelas de forma y localización particulares en individuos de
diferentes especies; es decir, tienen una apariencia constante.
*Cada tipo de organelo muestra una composición constante de macromoléculas ordenadas en un patrón predecible
Programa Genético y los medios para usarlo: Los genes funcionan como (1)almacenes de información, (2)planos para
construcción de estructuras celulares, (3)programa para duplicarse y (4)contienen instrucciones para llevar a cabo funciones
celulares. Los cambios en la información genética (mutaciones) generan variaciones entre individuos de una especie, lo que
es la base de la evolución.
Las células constan de los medios para utilizar su información genética, por lo que se consideran seres vivos. Los virus poseen
material genético, pero son incapaces de expresar por sí mismos la información contenida en ese material. Por ende, los virus
se consideran abióticos.
Reproducción: Las células se reproducen por división. Una célula madre da origen a dos células hijas. Para ello, el material
genético debe duplicarse antes; así, las células hijas son idénticas entre sí y a la célula madre. En la mayoría de los casos, las
dos células hijas tienen el mismo volumen; excepto en la división del oocito, donde una de las células hijas retiene casi todo
el citoplasma.
Obtención y utilización de energía: Todos los procesos biológicos requieren el consumo de energía. Toda la energía necesaria
para la vida proviene de la radiación electromagnética del sol, que es captada por pigmentos en las membranas de las células
fotosintéticas. La fotosíntesis es el proceso que convierte la energía luminosa en energía química, que se almacena en forma
de sacarosa y almidón (carbohidratos ricos en energía). La energía llega a los animales empacada en forma de glucosa. La
glucosa, dentro de las células, se desensabla y su contenido energético se puede almacenar en forma de energía disponible y
rápida (ATP).
El recambio es la actividad de degradar y construir macromoléculas y organelas. Requiere gran cantidad de energía y
mantiene la integridad de la célula ante los fenómenos de desgaste, permite responder a condiciones cambiantes.
Reacciones Químicas: Las células llevan a cabo diversas reacciones químicas, todas ayudadas por enzimas. La suma de
reacciones químicas de una célula lleva por nombre Metabolismo.
Anabolismo + Catabolismo → Metabolismo
Síntesis Degradación
Movimientos y Actividades Motoras: Una célula puede moverse a sí misma (desplazamiento celular). Dentro de la misma
célula también se llevan a cabo actividades motoras, como el desplazamiento de partículas, transporte de materiales,
dependientes en su mayoría de la participación de las proteínas motoras.
Reacción a Estímulos: Los unicelulares reaccionan a estímulos de una manera más obvia. Las células en los organismos
multicelulares no son tan obvias. La mayor parte de ellas posee “receptores” para recibir estímulos que inciten a la célula a
generar una respuesta.
Autorregulación: Como las células son complejas y ordenadas, necesitan de energía y de una regulación constante. Los
mecanismos de regulación se hacen evidentes cuando la célula se daña.
Los fenómenos encargados de regular el equilibrio interno se agrupan bajo el nombre de homeostasis.
Evolución: Diversos tipos de tipos y especies celulares descienden de una única célula ancestral de hace más de 3mil millones
de años.
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Unidades de Medida en Biología Celular y Molecular
Longitud Peso
-3
mm=10 m
-6
µm=10 m Dalton: 1 doceava parte (1/12) de la masa de un átomo de
-9 -10 -1
nm=10 m Å=10 m ó 10 nm carbono 12; la masa de 1 átomo de hidrógeno
pm=10-12m
El μm se utiliza para medición de células y organelas. El nm para medición de macromoléculas y el A para medición de átomos y moléculas pequeñas.

Historia
Siglo XVI: Aparece el primer microscopio compuesto.
Robert Hooke (1665): Descubrió las células en un corcho. Realmente observó paredes celulares de tejido vegetal muerto.
Leeuwenhoek (1674): Observó células libres en agua. Fue el primero en describir diferentes formas de bacterias.
Schleiden (1838): Concluyó que las plantas estaban formadas por células, y que el embrión de planta proviene de una célula.
Schwann (1839): Concluyó que células de plantas y de animales son estructuras similares
Virchow (1855): Dijo que las células se originan de células preexistentes.
De los postulados de Schwann y Virchow, se desprende la teoría celular, que tiene tres postulados:
Todos los organismos están compuestos por una o más células (S)
La célula es la unidad estructural de la vida (S)
Las células sólo pueden originarse de una célula preexistente (V)
Cronología de la aparición de las primeras células. Algunos Datos:
Tiempo en el que vivió la célula ancestral común → 3mil millones de años
La vida procariota existe desde hace → 2700 millones de años
Los organismos eucariotas más simples existen desde hace → 1600 millones de años
Los animales complejos aparecieron repentinamente hace → 600 millones de años

Dominios y Reinos. Clasificación de los Seres Vivos.

Célula Dominio Reino Características
Bacteria (Eubacteria) Bacteria Unicelulares
Procariotas
Archaea (Arqueobacteria) Arquea Unicelulares
Protista ↑ unicelulares, ↓ multicelulares
Fungi ↓ unicelulares, ↑ multicelulares
Eucariotas Eukarya
Vegetal Multicelulares
Animal Multicelulares

La célula como la unidad básica de la vida.

Existen dos clases de células de morfología diferente. Las procariotas y las eucariotas. Ambas poseen un lenguaje genético
idéntico, vías metabólicas comunes y propiedades estructurales afines.

Célula Procariota (1 a 5 µm)

Son células sin núcleo; conocidas también como bacterias, poseen variadas formas, entre las que se encuentran los cocos
(esferoidales), los bacilos (alargadas), los vibriones (forma de coma), los espirilos (en forma de espiral corta) y las
espiroquetas (espirales largas).

Características estructurales de la célula procariota.

Membrana Plasmática:
**De composición y estructura similar a la de la célula eucariota.
**Alberga a las enzimas respiratorias en una estructura
denominada mesosoma. En bacterias fotosintéticas, la membrana
también alberga a las enzimas encargadas de ese proceso.
Pared Celular:
**Rígida, abiótica. Sirve de protección.
**Sus componentes son muy diferentes a los componentes de las
paredes celulares eucarióticas.
**Componentes:
Peptidoglicano: Siempre presente en la pared.
Membrana Externa: Similar a la membrana plasmática
(también llamada interna). Formada por lípidos,
proteínas y polisacáridos. No siempre está presente. La
membrana externa posee una proteína canal, la porina.
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Nucleoide:
**Región del protoplasma bacteriano donde se sitúa el cromosoma. Al MET, es una zona electrolúcida (clara).
**No se encuentra rodeado por membranas.
**El cromosoma bacteriano es circular, desnudo y único.
**El cromosoma está asociado a la membrana celular (probablemente esto se relacione con los procesos de división celular).
**El ADN bacteriano tiene de 600mil a 8millones de pares de bases, que codifican entre 500 y varias miles de proteínas.

El ADN es la molécula de almacenamiento genético, un tipo de ácido nucleico. La presentación al microscopio del ADN en
una estructura visible y compacta es lo que recibe el nombre de cromosoma.

Plásmido:
**Pequeña molécula circular de DNA de cadena doble, que se separa del cromosoma bacteriano principal.
**Es un vector de clonación, se replica independientemente al DNA bacteriano y puede conferir a la bacteria la resistencia a
antibióticos.
Ribosomas:
**Coeficiente de sedimentación de 70s. 50s para la sub unidad mayor y 30s para la sub unidad menor.
**Son más pequeños que ribosomas eucarióticos e incluyen un menos número de componentes.
Citoesqueleto procariótico:
Filamentos primitivos. Mucho más simple estructural y funcionalmente que el citoesqueleto eucariótico.
Flagelo:
**Para el desplazamiento bacteriano.
**Compuesto por un cuerpo basal, un gancho y un filamento delgado de flagelina (una proteína).
**El flagelo utiliza energía desde una bomba de protones para GIRAR y producir desplazamiento celular.
**Las bacterias pueden tener varios flagelos.

Algunas características funcionales de la célula procariota.

División:
Sin compactación de cromosomas y sin formación de huso mitótico.
DNA se duplica y las copias se separan por el desarrollo de una membrana entre ellas.
Intercambio Genético:
Son seres asexuales pero logran un intercambio genético gracias a un proceso llamado conjugación. Consiste en que una
estructura de la célula donadora, denominada Pili F, se extiende desde ésta hacia una célula receptora. A través de este
puente, las células logran intercambiar información génica. Casi nunca se transfiere un cromosoma completo.
También logran cierto intercambio genético con el ambiente, pues captan e incorporan DNA ajeno desde ahí (con más
frecuencia que eucariotas).
Biopelículas:
Se considera a los procariotas como organismos solitarios, pero se los encuentra también en complejas comunidades
multiespecíficas denominadas biopelículas. Las diferentes células de una biopelícula realizan distintas actividades
especializadas.
“Los procariotas son organismos complejos y muy evolucionados metabólicamente. Muchos son capaces de sobrevivir en condiciones
extremadamente adversas, cosa que no ocurre con frecuencia con los eucariotas. Muchas de las moléculas indispensables para la actividad
normal de muchas especies eucariotas son sintetizadas por bacterias.”

Tipos de Procariotas: Ejemplos

Bacteria Micoplasmas
(Eubacterias) Cianobacterias
Procariotas

Ejemplos
Extremófilas:
*Metanógenos
Archaea *Halófilos
(Arqueobacterias) *Acidófilos
*Termófilos

Bacteria / Eubacteria
Incluye a las células vivas más pequeñas (micoplasmas) y a los procariotas más complejos (cianobacterias).
Micoplasmas: 0.2 µm. Sin pared celular. Poseen apenas 500 genes. Son los procariotas más pequeños, el tipo celular
conocido más pequeño. Del tamaño de algunos virus grandes.
Cianobacterias: Son los procariotas más complejos. Poseen membranas intracelulares con enzimas fotosintéticas. Muchas de
ellas fijan nitrógeno (convierten N2 en NH3). Las especies fotosintéticas y fijadoras de nitrógeno pueden vivir con solo los
recursos esenciales: luz, nitrógeno, dióxido de carbono y agua. Son las primeras en colonizar luego de erupciones volcánicas.
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Célula Eucariota (10 a 30 µm)
En su interior son mucho más complejas (estructural y funcionalmente) que procariotas

Características estructurales de la célula eucariota

Membrana Plasmática:
**Es el límite de una célula, una estructura formada por lípidos con glucoproteínas inmersas.
** Es similar a la membrana bacteriana.
Pared Celular:
**Presente en vegetales y en células de hongos.
**En vegetales se compone de celulosa y en hongos, de quitina.
Núcleo:
**Estructura que diferencia a las eucariotas de las procariotas.
**Constituye un sitio de depósito del ADN rodeado por membrana, esta cobertura se denomina “envoltura nuclear”.
**Dentro del núcleo se encuentra el nucléolo, una región densa donde se ensamblan las subunidades ribosómicas, no está
cubierto por membrana.
**El cromosoma eucariótico es lineal, asociado a histonas (formando la cromatina) y múltiple (hay más de un tipo).
Organelos membranosos:
**Cada uno con una función especializada.
**Retículo endoplasmático, aparato de Golgi, mitocondria, cloroplastos (en vegetales), peroxisomas, Eedosomas, lisosomas.
**En eucariotas., el trasporte intracitoplasmático de sustancias se da mediante la formación de vesículas.
En procariotas, el proceso es menos importante y se da por difusión simple.
**Son organelas propias de los vegetales el cloroplasto y la vacuola.
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Ribosomas:
**Coeficiente de sedimentación de 80s. 60s para la sub unidad mayor y 40s para la sub unidad menor.
Citoesqueleto:
**Más perfeccionado que el procariótico. Compuesto por microtúbulos, microfilamentos y filamentos intermedios.
Flagelos y cilios:
**Para la locomoción celular y para otras actividades como el barrido de sustancias sobre una superficie ciliada.
**Compuestos por un complejo armazón proteico de microtúbulos y membrana plasmática circundante.
**Los flagelos eucarióticos son más complejos que los procarióticos.
**Los flagelos eucariontes son muy similares en diferentes especies.
Algunas características funcionales de la célula eucariota.
Mitosis:
Es el proceso de división celular más común. Es característica la condensación de los cromosomas previamente duplicados y
la formación de un huso mitótico.
Intercambio genético:
Los eucariotas consiguen una recombinación genética gracias a la meiosis, característica de seres de reproducción sexual.
Mediante la meiosis, se forman los gametos (con un juego menos de cromosomas que la célula madre). Los gametos
femenino y masculino participan en la fecundación para fusionarse y restablecer el número normal de cromosomas,
formando un nuevo individuo.
Diferenciación (en multicelulares):
Proceso por el cual las células no especializadas se vuelven más complejas y especializadas en estructura y función. Es la
formación de células especializadas. Un ser humano adulto posee alrededor de 250 tipos distintos de células diferenciadas.
La ruta de diferenciación seguida por cada célula embrionaria depende de las señales que la célula recibe del ambiente
circundante. Las señales, a su vez, dependen de la posición que ocupa la célula dentro del embrión.
Como resultado de la diferenciación distintos tipos celulares adquieren una apariencia característica y contienen materiales
únicos. El número, apariencia y localización de diferentes organelos puede correlacionarse con la actividad de cada tipo
celular.
Otros datos:
Los protistas son los eucariotas más complejos. Las levaduras los más simples.
En un organismo multicelular, los diferentes tipos celulares se obtienen mediante la diferenciación.
El ser humano posee alrededor de 250 tipos distintos de células diferenciadas
El número, apariencia y localización de los diferentes organelos puede correlacionarse con la actividad celular.
¡COMPARACIÓN PROCARIOTAS – EUCARIOTAS!
Característica Procariotas Eucariotas
Bicapa de lípidos con glucoproteínas Bicapa de lípidos con glucoproteínas
Membrana plasmática
inmersas. inmersas.
Función de protección
Función de protección
Pared celular Compuesta por: membrana externa + red
En vegetales: compuesta de celulosa
de peptidoglicano
Nucleoide no rodeado por membrana Núcleo rodeado por envoltura nuclear
Contiene el cromosoma: Contiene el cromosoma:
Región nuclear Circular - Desnudo Lineal - Asociado a histonas
(no forma cromatina) - Único (forma cromatina) - Múltiple
No se observa nucléolo Puede observarse nucléolo/s
Código genético Idéntico Idéntico
Similar en ambos: Ribosoma completo 70S Similar en ambos: Ribosoma completo 80S
Ribosomas Subunidad mayor 50S Subunidad mayor 60S
Subunidad menor 30S Subunidad menor 40S
Información genética Menos que eucariotas Más que procariotas
Similares en ambas.
Similares en ambas.
Fosforilación oxidativa en membrana
Vías metabólicas Fosforilación oxidativa en mitocondrias.
plasmática.
Fotosíntesis en cloroplastos.
Fotosíntesis en membrana plasmática.
Membranas citoplásmicas No (excepto cianobacteria) ¡Sí!
Citoesqueleto Presente. Rudimentario. Presente. Muy evolucionado ;)
Flagelos Compuestos por proteína flagelina Compuestos por microtúbulos + membrana
Por división simple/bipartición Por mitosis + citocinesis
División celular Sin condensación de cromatina Con condensación de la cromatina
Sin huso mitótico Con huso mitótico
Mediante conjugación y captación de ADN a
Intercambio genético partir del medio
Mediante meiosis
Formación de biopelículas ¡Sí! ¡No!
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Tamaño de las células y sus componentes
Las moléculas biológicas grandes (macromoléculas) y complejos
macromoleculares se miden en angstroms o nanómetros. Las células y sus
organelas se cuantifican en micrómetros. Ejemplos:
Núcleo: 5 a 10μm Ø
Mitocondria: 2 μm de largo
Célula procariota: 1 a 5 μm de largo
Célula eucariota: 10 a 30 μm Ø
Las células son muy pequeñas porque:
(1) Porque la mayoría de las eucariotas posee un solo núcleo, con dos copias
para la mayoría de los genes. Un número mayor de núcleos implicaría mayor
volumen celular.
(2) Porque es importante el valor de la relación superficie/volumen para el
intercambio de sustancias con el medio circundante. Al aumentar el volumen,
el valor de la relación disminuye, hay menos superficie por unidades de
volumen.
(3) Porque el tiempo para la difusión es proporcional al cuadrado de la
distancia que recorre una sustancia. (O2 usa 100 ms para recorrer 1μm). Largas
distancias son inoperantes metabólicamente hablando (para recorrer 1mm,
una molécula necesita 100x106 ms).

Agregados Macromoleculares no bióticos: Virus y Viroides

Virus
Son agentes patógenos más pequeños y más simples que una bacteria. NO son organismos vivos, son “parásitos obligados”.
Se presentan en una amplia variedad de formas, tamaños y estructuras; aun así comparten características comunes, como la
estructura, que en todos es ordenada, definida; y también su complejidad poco acentuada con relación a las células.
Provocan enfermedades humanas como SIDA, polio, influenza, exantemas, sarampión y cáncer.
Fuera de la célula, cuando son sólo un agregado macromolecular carente de función, se los conoce como VIRIONES.
Los virus se componen de una cubierta proteica y material genético.

Poliédrica
Ej: Adenovirus
(Icosaedro)

Cápside
Helicoidal Ej: VMT
(Proteína)

Mixta Ej: Bacteriófago

Ej: Adenovirus,
ADN
Composición de los Bacteriófago
Virus Material genético
(ADN o ARN)
ARN Ej: VIH, VMT

Presente
Ej: VIH
(Gemación)
Envoltura
(Bicapa lipídica)
Ausente Ej: Adenovirus,
(Lisis) Bacteriófago

Las proteínas:
*Forman una cubierta con subunidades repetidas (pocos genes
virales se encargan de codificarlas) denominada cápside. Esas
subunidades se arreglan en motivos helicoidales o poliédricos.
Con cápside helicoidal: VMT.
Con cápside poliédrica: Adenovirus, Bacteriófago T, VIH
Los ácidos nucleicos:
*Puede ser ARN o ADN. Contiene la información genética viral.
Algunos virus tienen 3 o 4 genes. Otros tienen varios cientos.
Con ADN: Adenovirus, bacteriófago T.
Con ARN: VMT, VIH.
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Los lípidos:
*Están presentes en muchos virus de animales (Ej, VIH). La célula huésped perdió parte de su membrana al dejar escapar al
virus, que ahora posee un recubrimiento lipídico.

Infección Viral
Según sea el virus específico, el huésped puede ser una planta, un animal o una bacteria. Algunos virus tienen un amplio
espectro de huéspedes (Ej, rabia); la mayoría tiene un espectro reducido (Ej, influenza).
Cada virus posee en su superficie una proteína capaz de unirse a un componente definido de la célula huésped. Ej: VIH se une
+
por medio de su proteína gp120 a la proteína de membrana CD4 de los linfocitos T CD4 . Interacciones semejantes a la del
ejemplo determinan la especificidad del virus.
2 tipos básicos de infección viral:
Infección Lítica: Secuestro de síntesis celular. Elaboración de viriones y LISIS de la célula para liberar una nueva progenie viral.
Formación de Provirus: El DNA viral se integra al material genético de la célula huésped. No causa muerte celular (a
eucariotas). El DNA integrado se denomina PROVIRUS.
Efectos del provirus: Lisis celular y liberación de viriones en bacterias.
Liberación de viriones por gemación en animales (VIH)
Algunas células se vuelven cancerosas.
Algunos datos sobre los virus
Retrovirus: Virus cuyo material genético consiste en RNA (Karp); emplean una DNA polimerasa llamada transcriptasa inversa
para traducir el genoma del virus de RNA a DNA intermediario. Son capaces de formar provirus.
Virus que transforman células de mamíferos a células cancerosas:
Virus tumorales de DNA Virus tumorales de RNA (Retrovirus)
Poliomavirus, Virus de los simios 40 (SV40), Adenovirus, Virus
Estructura semejante al VIH.
similares al del herpes.
Pueden transformar a las células porque portan genes cuyos productos interfieren con las actividades normales que regulan
el crecimiento celular. En la mayoría de los casos, estos virus incrementan en gran medida el riesgo de una persona para
desarrollar cáncer en vez de ser el único factor causante de la enfermedad.
Otros virus vinculados con cánceres humanos: Virus del papiloma humano (HPV), Virus de la hepatitis B, Virus de Epstein-Barr
(linfoma de Burkitt), un tipo de Virus del herpes (HHV-8) relacionado con sarcoma de Kaposi.

Viroides
*Partículas infecciosas que consisten en ARN circular *240 a 600 nucleótidos de longitud
*Presentan una décima parte del tamaño de los virus más pequeños. *No presentan cubierta proteica.
*Atacan a vegetales. (Enfermedad de la Papa; Cadang Cadang). *No codifican proteína alguna.
*Usa proteínas del huésped (ARN polimerasa II), interfiriendo en la expresión génica normal.

Priones
Agentes infecciosos relacionados con ciertas enfermedades neurodegenerativas de mamíferos (Enfermedad de Creutzfeldt-
Jakob, Encefalitis espongiforme bovina [vacas locas], Kuru) compuesto solo de proteínas.
c
En la superficie de las células nerviosas se halla una proteína PrP (proteína prion celular, que es normal). Una variante con
plegado diferente llamada PrPSc (proteína prion Scrapie, que es la partícula infecciosa) se halla en cerebros humanos con
enfermedad de Creutzfeldt-Jacob, donde se acumula y forma agregados que destruyen a las neuronas.
Ambas variantes pueden alojar secuencias de aminoácidos idénticas, solo varía el plegamiento.
Proteína Prion Celular (PrPC) Proteína Prion Scrapie (PrPSc)
Molécula monomérica, soluble en soluciones salinas Forman moléculas fibrilares insolubles interaccionando e/ sí
Digerible por enzimas Resistentes a digestión enzimática
Casi por completo hélices α Cerca de 45% tiene hojas β
La molécula PrPSc puede actuar como molde para que la PrPc se pliegue anormalmente.

CONCEPTOS PARA RECORDAR

VIRUS: Partícula infecciosa más simple que una bacteria, patógeno que requiere de la maquinaria celular para su
replicación. Son parásitos obligados.
VIRION: Partícula viral. Consiste en material genético de ADN o ARN rodeado por una cápside y en algunos casos por una
envuelta lipídica.
PROVIRUS: Es el ADN proveniente del virus intercalado en el ADN nuclear de la célula.
RETROVIRUS: Virus cuyo material genético consiste en RNA (Karp); emplean una DNA polimerasa llamada transcriptasa
inversa para traducir el genoma del virus de RNA a DNA intermediario. Son capaces de formar provirus
VIROIDE: Partícula infecciosa que consiste en ARN circular sin cubierta proteica.
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BASES QUÍMICAS DE LA VIDA

La vida está estructurada con los mismos elementos químicos que se pueden encontrar en la materia inerte. Existen
componentes inorgánicos propiamente dichos, como lo son los metales (en su forma basal o ionizada) y agua, y también
moléculas orgánicas, estructuradas generalmente con átomos de carbono y complementada con hidrógeno, oxígeno y
nitrógeno (CHON), además de otros elementos como fósforo y azufre.
¡CONSIDERACIONES GENERALES!
Conceptos sobre enlaces químicos:
Dentro de las células los átomos, iones y moléculas interaccionan entre sí mediante enlaces covalentes y no covalentes.
Un enlace es covalente cuando los átomos comparten electrones. Los enlaces covalentes son uniones fuertes entre los
átomos que conforman las moléculas.
Las interacciones entre moléculas (o entre distintas partes de una macromolécula) están reguladas por interacciones más
débiles: los enlaces no covalentes. Se clasifican en:
Interacciones iónicas Puentes de hidrógeno
Interacciones de van der Walls Interacciones hidrófobas
Conceptos sobre polaridad de las moléculas:
Las moléculas polares son aquellas que tienen una distribución asimétrica de la carga eléctrica (dipolos). Contienen uno ó
más átomos electronegativos (O, N, S) e interaccionan bien con moléculas de agua (hidrófilas).
Las moléculas apolares son aquellas sin átomos electronegativos centrales, formadas solo por carbono e hidrógeno. Se
caracterizan por no interaccionar con moléculas de agua (hidrófobas).

Componentes Inorgánicos
Agua
 La mayor parte de la masa de los organismos (excepto en  Es el “solvente universal”. Disuelve más solutos que
dientes, huesos y semillas). cualquier otro solvente.
 Su abundancia es inversamente proporcional a la edad.  Determina estructuras de moléculas biológicas. (Las
 Molécula asimétrica de enlaces polarizados. Es un dipolo. proteínas, por ejemplo, adquieren diferentes formas y
Debido a esto interacciona con grupos químicos cargados configuraciones debido a su exposición al agua).
(solvatación).  Líquido matriz donde “se construye la estructura insoluble
 Forma puentes de hidrógeno con moléculas de agua de la célula”. (Las membranas celulares, por ejemplo, son
(máximo con 4) y con otro tipo de moléculas (como insolubles en agua y se organizan en la estructura típica de
aminoácidos y azúcares). bicapa para minimizar la interacción con el agua).
 El calor que el agua absorbe se destina a la separación de  Protege a las células de cambios bruscos de temperatura y
los puentes antes que a subir la temperatura: Elevado de la radiación, etc.
coeficiente calórico.
Iones
Na+ Intra Extra Función
+ Regulación de volumen celular.
K K+ Na+ / Cl-
Cl- Equilibrio hidroelectrolítico.
Mg2+ Mg2+ Cofactor. Interviene en hidrólisis de ATP.
2+
PO43- Ca Ca2+ Importante regulador.
PO43- HCO3- Buffers
-
HCO3 La tabla muestra la concentración predominante, los diferentes iones existen en ambos compartimentos

Minerales No Ionizados
Hierro (en hemoglobina, ferritina, citocromos). Co, Cu, I, Mn, Mb, Ni, Se, Zn (Oligoelementos).

Componentes Orgánicos
C, H, O y N son los elementos mayoritarios que construyen las moléculas orgánicas. P y S también están presentes. Estos
átomos se organizan en grupos funcionales (agrupaciones de átomos que se conforman casi siempre y confieren a las
moléculas orgánicas sus propiedades). Los grupos funcionales son comunes son:
Metilo Hidroxilo Sulfhidrilo Carbonilo Carboxilo Fosfato Amino

Biologicamente, los más importantes de los grupos funcionales son: éster (ácido + alcohol) y amidas (ácido + amina).
 Bases químicas de la vida
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Clasificando a las moléculas biológicas, tenemos:

2. Elementos unitarios para construir macromoléculas:

1. Macromoléculas o biopolímeros:
 Casi todas las células poseen un pool de monómeros para
 Forman la estructura de la célula y ejecutan sus
el recambio de macromoléculas.
actividades.
 Azúcares (monosacáridos), precursores de polisacáridos.
 Son muy grandes y organizadas, contienen desde docenas
 Aminoácidos, precursores de las proteínas.
hasta millones de átomos de carbono.
 Nucleótidos, precursores de los ácidos nucleicos.
 Debido a su complejidad estructural es que pueden
 Ácidos grasos, que se incorporan a algunos lípidos.
realizar tareas complejas.
 Confieren a los organismos las propiedades de la vida 3. Metabolitos o intermediarios metabólicos:
 Se clasifican en: Proteínas, Carbohidratos, Lípidos y Ácidos  Se forman en los diferentes pasos de las vías metabólicas.
Nucleicos  En el esquema a “A → B → C”, B sería un metabolito.
 Proteínas, Carbohidratos, AN y algunos lípidos son  No tienen una función por sí mismos.
polímeros.
4. Moléculas de función diversa
 Los polímeros se constuyen con gran cantidad de
 Vitaminas, hormonas esteroides, aminoácidos, ATP, AMPc
monómeros mediante un proceso de polimerización
y productos de desecho (urea)

Monómero: Subunidad que, uniéndose a otras iguales

o semejantes, conforma una molécula más grande o
polímero.
Polímero: Macromolécula formada por la unión
repetida de subunidades o monómeros.
Polimerización: Los monómeros libres no
interaccionan solos el uno con el otro para conformar
un polímero, cada uno debe activarse antes por la
unión con una molécula acarreadora. La molécula
acarreadora transfiere al monómero al extremo de
una macromol´ecula en crecimiento.
Hidrólisis: Es la división de los enlaces por efecto del
agua. Los polímeros se desarman por hidrólisis de los
enlaces que unen a los monómeros.
Las reacciones de polimerización e hidrólisis están
catalizadas por enzimas.

Macromoléculas
Macromolécula Subunidades Enlace de unión Funciones Ejemplos
Reservas de energía R. de energía: glucógeno,
Polisacáridos Monosacáridos Enlace glicosídico Materiales de construcción almidón
biológicos duraderos Estructurales: celulosa, quitina
Realizan todas las actividades Hemoglobina, miosina, actina,
Proteínas Aminoácidos Enlace peptídico
celulares ATPasa, catalasa
Almacenamiento y transmisión
Ácidos Enlace
Nucleótidos de información genética ADN y ARN
nucleicos fosfodiéster
Función estructural y catalítica
Reservas de energía
Ácidos grasos, Triglicéridos, fosfolípidos,
Lípidos Enlaces éster Función estructural,
glicerol, etc. glucolípidos, esteroides
señalización celular

Carbohidratos
 Azúcares simples (monosacáridos) y sus derivados, y todas moléculas construidas con unidades de azúcar.
 Funciones principales: almacenar energía química; materiales de construcción durables.
 Fórmula general: (CH2O)n. Los importantes para el metabolismo poseen entre 3 y 7 carbonos.
 3C: triosas (gliceraldehído y dihidroxiacetona). 4C: tetrosas (treosa y eritrosa). 5C: pentosas
(ribosa). 6C: hexosas (glucosa, fructosa). 7C: heptosas
Estructura de los azúcares:
 Pueden ser: polihidroxialdehídos (aldosas) o polihidroxicetonas (cetosas).
 A partir de 5 carbonos en la cadena sufren una autorreacción de ciclización.
 Presentan estereoisomería “D” o “L” en estado lineal, al ciclarse, se agregan las formas “α” o “β”.
 Ejemplos importantes son D-glucosa y L-fucosa.
 Las estructuras cíclicas de 5 lados se conocen como furanosas (ej, fructosa), las de 6 lados, como
piranosas (ej, glucosa).
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Unión de azúcares entre sí: Enlaces glicosídicos.  Disacáridos sirven como almacén de energía.
 Enlaces covalentes, unen monosacáridos para formar  Unión de “unos pocos” azúcares (3 – 10): Oligosacáridos.
grandes moléculas.  Los oligosacáridos, asociados a lípidos o proteínas,
 Se forman por reacción entre: C1 de un azúcar + forman glucolípidos y glucoproteínas.
Hidroxilo de otro azúcar: –C–O–C –  Son importantes porque:
 Existen enlaces glicosídicos α y β. a) sirven para distinguir un tipo de célula de otro
 Unión de 2 azúcares: Disacáridos. Ej: Sacarosa (Glu + Fru) b) ayudan a mediar interacciones específicas
(α1→2) y Lactosa* (Glu + Gal) (β1→4). entre célula y su ambiente.

Polisacáridos
Molécula Monómero Función y almacenamiento
Reserva animal de glucosa.
Glucógeno Glucosa
De Se almacena en el citosol de las células.
almacenamiento Reserva vegetal de glucosa.
Almidón Glucosa
Se almacena en los plástidos de las células.
Celulosa Glucosa Principal componente de las paredes celulares vegetales.
Quitina N-acetil glucosamina Cubierta externa de insectos, arácnidos y crustáceos.
Estructurales
Forman parte de la matriz extracelular del cuerpo
Glicosaminoglicanos Disacárido
humano.

Polisacáridos: Pueden agruparse en nutricionales y estructurales de acuerdo a su función en el organismo. Los nutricionales
son digeribles con facilidad por animales y comprenden el glucógeno y el almidón. Los estructurales forman estructuras
resistentes y durables; son la celulosa, la quitina y los glicosaminoglicanos.
Glucógeno:
 Polímero ramificado de glucosa de los animales.
 Glucosas unidas por enlaces glicosídicos α (1→4), excepto en los
puntos de ramificación donde el enlace es α (1→6).
 Se almacena en el músculo y en el hígado.
 El músculo posee glucógeno para mantener actividad moderada
durante 30 min.
 PM 1 – 4 millones de dáltones.
Almidón:
 Polímero ramificado de glucosa de las plantas.
 Se subclasifica en amilosa y amilopectina.
 Amilosa: helicoidal no ramificada. Enlaces glicosídicos α (1→4).
 Amilopectina: polímero ramificado. Menos ramificaciones que el
glucógeno.
 Se almacena como granos de almidón en las membranas que
rodean a los plástidos.
 Degradado por la amilasa en el tracto digestivo.
Celulosa:
 Polímero lineal de glucosa. Principal componente de la pared
celular de células vegetales.
 Glucosas unidas por enlaces glicosídicos β (1→4).
 Es el material orgánico más abundante en la Tierra y el más
rico en energía.
 Degradada por la celulasa.
 Ningún animal puede digerir celulosa. Los herbívoros y
termitas contienen microorganismos que la digieren.
Quitina:
 Polímero lineal de N-acetilglucosamina.
 Presente en exoesqueleto de insextos, arañas y crustáceos.
 Dura, resistente pero flexible. Muy adaptable.
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Glicosaminoglicanos (GAG):
 Polisacáridos complejos.
 Formados por la repetición periódica de dos azúcares.
 Estructura –A–B–A–B–A–
 Por su carga negativa tienden a atraer agua y forman una gelatina.
 Ejemplos: Queratán Sulfato, Condroitín Sulfato, Dermatán Sulfato, Heparina, Ácido Hialurónico.
 Unidos a proteínas forman proteoglicanos.
 La mayor parte de los GAG se encuentran en los espacios que rodean a las células. La heparina es una excepción.
 Heparina: glicosaminoglicano con función de anticoagulante. Actúa activando a la antitrombina. (La antitrombina inhibe
a la trombina, responsable de la coagulación de la sangre)

Polipéptidos y proteínas
 Polímeros lineales de aminoácidos.
 Llevan a cabo virtualmente todas las actividades de la célula: son herramientas moleculares.
 Una célula de mamífero tiene en gral. 10mil proteínas con diferentes funciones.
 Funcionan como enzimas, cables estructurales, moléculas de señalización, receptores de membrana, anticuerpos,
transportadores, maquinaria de contracción, hemostasia, etc.
 Muchas funciones porque, como grupo, las proteínas pueden adquirir estructuras moleculares ilimitadas.
 La estructura única y muy definida de cada proteína le permite llevar a cabo una función particular.
Poseen gran especificidad.
Denominamos polipéptido a una cadena lineal de aminoácidos
Denominamos proteína a (1) un polipéptido que por sí mismo desempeña una función o (2) polipéptidos que se unen para
ejecutar una función

Ejemplos de aminoácidos Ejemplo de polipéptido: Dos polipéptidos unidos

Aminoácidos unidos por enlaces peptídicos. Separados no poseen ninguna función, deben
Si puede realizar una función se denomina proteína. reunirse para conformar una proteína

Aminoácidos:
Son las unidades monoméricas de proteínas; cada uno está formado por tres grupos funcionales unidos a un carbono α
central: un grupo amino, una cadena lateral definitoria y un grupo carboxilo.
Son 20 los codificados en el código genético. Puede haber más de 20 en las proteínas. Los aminoácidos extra se forman por
modificaciones postraduccionales (después de sintetizada la proteína).
Características comunes de los aminoácidos:
 Son α-L-aminoácidos (excepto algunas bacterias que usan  La unión de unos pocos aminoácidos es un oligopéptido y
α-D-aminoácidos en sus paredes celulares y algunos de muchos aminoácidos es un polipéptido.
antibióticos).  Dentro de una cadena peptídica, los aminoácidos son
 Se unen entre sí por un enlace peptídico, que es un enlace reconocidos como residuos.
covalente del tipo amida.  El residuo con un amino libre es el N-terminal y el que
 La unión de dos aminoácidos se denomina dipéptido, la de posee el carboxilo libre es el C-terminal.
tres, tripéptido, y así sucesivamente.
Características diferenciales de los aminoácidos: Las cadenas laterales (R).
 La variabilidad de las R confiere a las proteínas su  Son importantes en relaciones intramoleculares
estructura diversa y actividades. (estructura y actividad de la molécula) e intermoleculares
 En “sitios activos” de proteínas, por ejemplo, sirven como (relación del polipéptido con otra molécula)
catalizadores. También dan especificidad a la proteína.  Se organizan en 4 grupos
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Aminoácidos codificados en el código genético
Ácidos Básicos
Ác. aspártico (Asp / D) Ác. Glutámico (Glu / E) Lisina (Lys / K) Arginina (Arg / R) Histidina (Hys / H)

Polares cargados

Serina (Ser / S) Treonina (Thr / T) Glutamina (Gln / Q) Asparagina (Asn / N) Tirosina (Tyr / Y)

Polares sin carga

Alanina (Ala / A) Valina (Val / V) Leucina (Leu / L) Isoleucina (Ile / I)

No polares Metionina (Met / M) Fenilalanina (Phe / F) Triptófano (Trp /W) Aminoácidos con R de propiedades únicas:
Glicina: Puede adaptarse a ambientes
hidrófilos o hidrófobos. Reside donde dos
polipéptidos entran en contacto estrecho.
Es más flexible que los demás aminoácidos.
Cisteína: R polar sin carga. Puede crear un
enlace covalente con otra cisteína cuando
Glicina (Gly / G) Cisteína (Cys / C) Prolina (Pro / P) se oxidan (puente disulfuro)
Prolina: R hidrófoba. Se considera un
iminoácido (¡solo para rendir biología!).
Con R únicas Crea dobleces en las cadenas polipeptídicas.
Altera estructuras secundarias ordenadas.

No todos los aminoácidos de la tabla se hallan en todas las proteínas, tampoco están distribuidos de forma equivalente.
Existen otros aminoácidos en los péptidos pero se forman postraduccionalmente. De estas modificaciones postraduccionales
(PTM), la fosforilación es la más común (los aminoácidos fosforilables son los que poseen un –OH).
Las PTM pueden generar notables cambios en las propiedades de las proteínas (un error en la PTM puede determinar graves
cambios en la célula). Debido a PTM, un péptido puede existir como varias moléculas biológicas distintas.
Disposición de Aminoácidos en:
Proteína Hidrosoluble (Hidrofílica) Proteína Liposoluble (Hidrofóbica)
 Aminoácidos Polares: En la superficie de la molécula.  Aminoácidos Polares: En el núcleo de la molécula.
Ayudan a solubilizar la proteína en el agua.
 Aminoácidos Apolares: En el núcleo de la molécula.  Aminoácidos Apolares: En la superficie de la molécula.
Bien empaquetados, excluyen al agua.
Las interacciones hidrófobas entre residuos apolares son una fuerza motriz durante el plegamiento de las proteínas.
Muchas veces en proteínas hidrosolubles, algunos residuos polares
pueden ir en el interior hidrófobo (Ej: enzimas)
Existen aminoácidos que no pueden ser sintetizados por nuestro
organismo, son los aminoácidos esenciales: Phe, Ile, Leu, Lys, Met, Trp,
Thr, Val (FILMTV). Se agregan Hys y Arg en embarazadas y niños en
crecimiento.

Grupos prostéticos
Porción de la proteína que no está compuesta por aminoácidos.
Se agrega a la cadena peptídica después de la síntesis en el ribosoma.
Los grupos prostéticos pueden o no estar presentes. Ej: carbohidratos
(glicoproteínas), metales (metaloproteínas) y grupos orgánicos
(flavoproteínas, hemoproteínas).
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Una proteína que posee grupo prostético se denomina proteína conjugada.

Estructura de las proteínas

La mejor forma de observar la relación estructura/función es en las proteínas. Sus estructuras en cualquier ambiente son
definidas y predecibles a pesar de lo enormes y complejas que pueden ser.
Las proteínas se organizan en 4 niveles de organización.
La estructura primaria se refiere a la secuencia de aminoácidos, las demás, se refieren a la organización de la molécula en el
espacio.

Estructura Primaria: Secuencia lineal de aminoácidos que constituyen la cadena.

Estabilizada por enlaces covalentes.
La información viene del genoma. Es la de mayor importancia: contiene información para los demás niveles de organización.
Errores en la E1° se ven en la Anemia Drepanocítica (Se cambia un Glu por una Val).
INSULINA, la primera secuenciada: con dos cadenas, una de 21 y otra de 30 aminoácidos.
Las secuencias de aminoácidos pueden obtenerse a partir de la secuencia de nucleótidos del gen que codifica una proteína.
Estructura Secundaria: Conformación (Estructura 3D) de partes de la cadena.
Estabilizada por puentes de hidrógeno.
Son conformaciones predefinidas que proveen el número máx de puentes de H entre aminoácidos vecinos.
La estructura secundaria se relaciona solo con la cadena principal del péptido (..-N-C-C-N-C-C-..), no con las R.
Hélice alfa:
1. Cadena principal hacia adentro, R proyectadas hacia afuera.
2. Puentes de hidrógeno entre átomos de un péptido enlazado y los que están justo abajo y arriba en la espiral
(paralelos al eje de la estructura).
3. (C=O) de un enlace peptídico se acerca al (N-H) de otro y se forma el puente de Hidrógeno.
4. La hélice gira una vuelta cada 4 (3,6) aminoácidos.
5. Distancia entre residuos: 1,5 A.
6. Presente en queratinas, mioglobina y hemoglobina.
Hoja plegada beta:
1. Varios segmentos de un polipéptido que permanecen lado con lado.
2. R proyectados arriba y debajo de la estructura.
3. Puentes de hidrógeno entre (C=O) y (N-H); perpendiculares al eje de la cadena de polipéptidos.
4. Los segmentos próximos del esqueleto polipeptídico pueden ser paralelos o antiparalelos.
5. Distancia entre residuos: 3,5 A.
6. Presente en seda (resiste fuerzas de tensión). También en porinas.
Otras disposiciones: Asas, giros y bisagras. Con frecuencia son las porciones más sensibles de un polipéptido y las de mayor
actividad biológica. (Ej, en anticuerpos). Son segmentos “desordenados”.
Estructura Terciaria: Conformación (Estructura 3D) de la proteína en su totalidad.
Estabilizada por uniones no covalentes entre las R.
Las cisteínas que se aproximan mucho pueden formar enlaces covalentes conocidos como puentes disulfuro.
El número de conformaciones de la estructura terciaria es prácticamente ilimitado.
Se estudia por cristalografía de rayos X.
Las porciones no organizadas en hélices ni láminas (desordenadas) no pueden determinarse por cristalografía de rayos X y
tienen funciones decisivas en procesos vitales (unión a DNA, etc).
De acuerdo a la estructura terciaria, las proteínas se clasifican en:
Fibrosas: De estructura muy alargada (aquí entran las proteínas estructurales extracelulares). Colágeno, elastina, queratina.
Globulares: De forma compacta (aquí entran las que ejercen las funciones celulares, en su mayoría son intracelulares).
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Estructura Cuaternaria: El grado estructural que alcanzan las proteínas compuestas por subunidades.
Estabilizada por interacciones no covalentes, interacciones iónicas entre dos o más polipéptidos.
La mayoría de las proteínas están formadas por más de una cadena peptídica o subunidad. Las subunidades pueden
vincularse por puentes disulfuro, interacciones no covalentes. Las subunidades pueden ser iguales o diferentes. (Ej: proteína
de dos subunidades puede ser un homodímero o un heterodímero)

Mioglobina:
 Proteína transportadora de oxígeno en músculo.  Hemo está insertado en el núcleo hidrófobo de la proteína: esto
 Es una hemoproteína de 153 aminoácidos. promueve la unión del O2 sin que se oxide el Hierro.
 Primera proteína cuya estructura terciaria se determinó.  La estructura terciaria se mantiene casi exclusivamente por interacciones
 Proteína globular con 8 hélices alfa de 24 aminoácidos de longitud c/u. no covalentes.
 75% de los aminoácidos tienen una conformación en hélice (% muy alto).  Mioglobina no posee enlaces de disulfuro.

Hemoglobina:  Mioglobina y hemoglobina evolucionaron desde un polipéptido ancestral.

 Proteína transportadora de oxígeno en la sangre.  El oxígeno al unirse al Fe provoca cambios en la conformación de la Hb.
 Tetrámero proteico. Hemoproteína.  Las funciones de las proteínas pueden estudiarse por los cambios en su
 Dos cadenas alfa y dos cadenas beta. conformación.
 Los monómeros son similares a la mioglobina.

Dominios de proteínas
Un dominio o módulo proteico es una región de una proteína que se pliega y funciona en forma casi independiente.
Se piensa que los dominios surgieron por la fusión de genes, cada dominio representa lo que alguna vez fue una molécula
separada. Las proteínas de mamífero tienden a ser más complejas (más dominios) que las de organismos inferiores.
Plegamiento común es lo que comparten dominios que poseen un esqueleto peptídico que se pliega en una configuración
regularmente similar, los dominios pueden agruparse en familias que tienen, en general, una estructura similar.

Cambios dinámicos dentro de las proteínas

Las proteínas no son estáticas ni rígidas, son capaces de tener considerables movimientos en sus estructuras internas.
Los cambios conformacionales se estudian con: espectroscopía y RMN, que vigilan los movimientos proteicos y revelan
cambios en puentes de hidrógeno, movimientos ondulatorios de cadenas laterales, rotaciones de anillos aromáticos de Y y F.
Debido al tamaño pequeñito de las proteínas, ellas pueden verse influidas por cambios en la energía del ambiente: “las
fluctuaciones aleatorias de pequeña escala de los ordenamientos de los enlaces dentro de una proteína crean un incesante
movimiento térmico dentro de la molécula”.
El papel de los movimientos dentro de las funciones de una proteína se ve en muchas enzimas: Ej. Acetilcolinesterasa
(degrada acetilcolina en uniones neuromusculares). En ella, las cadenas laterales deben apartarse de un lugar, dejando al
descubierto el sitio catalítico de la enzima.
Cambios conformacionales: son los movimientos no aleatorios y predecibles dentro de una proteína, que se activan por la
unión de una molécula específica. Virtualmente, cada actividad proteica se acompaña de cambios conformacionales. Ej. de
proteína con notables cambios conformacionales: GroEL al entrar en contacto con GroES, Miosina.

Interacciones Proteína-Proteína
Diferentes proteínas, c/u con una función específica, se reúnen para formar un complejo multiproteico (Ej. Piruvato
deshidrogenasa, con 60 polipéptidos que corresponden a 3 enzimas). Gracias a las enzimas vinculadas, el producto de una
enzima puede conducirse directamente a la próxima enzima de la secuencia sin diluirse en el medio acuoso de la célula.
Los CMP no están siempre ensamblados de manera estable como la Piruvato deshidrogenasa; es regla general que las
proteínas interactúen unas con otras de manera muy dinámica. Las proteínas que interactúan tienden a mostrar superficies
complementarias que estabilizan su interacción con enlaces no covalentes.
Procesos tan diversos como la síntesis de DNA, la formación de ATP y el procesamiento de RNA se llevan a cabo mediante
“máquinas moleculares” con gran número de proteínas, algunas de las cuales establecen interrelaciones estables y, otras,
uniones transitorias.

Desnaturalización
Es la pérdida del plegamiento o desorganización de una proteína a partir de su estado
nativo. Ella puede volver a su estado nativo, luego de desnaturalizarse, por un proceso
llamado renaturalización.
La desnaturalización se logra mediante agentes que interfieren con las interacciones que
estabilizan la estructura terciaria.
La desnaturalización puede lograrse con: calor, detergentes, solventes orgánicos,
radiación, calor, urea, cloruro de guanidinio. Los puentes de disulfuro se rompen con
mercaptoetanol.
La proteína puede renaturalizarse porque la secuencia de aminoácidos contiene toda la
información necesaria para el plegamiento tridimensional.

Lípidos
Grupo heterogéneo de moléculas biológicas insolubles en agua y solubles en solventes apolares (orgánicos). Son solubles en
cloroformo, benceno. Debemos estudiar a los ácidos grasos, las grasas, los fosfolípidos, los glicolípidos y los esteroides.
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Ácidos grasos
Un ácido graso es una cadena larga de hidrocarburo no ramificada con un solo ácido carboxílico en un extremo. La cadena de
hidrocarburo es hidrófoba; el grupo carboxilo es hidrofílico. Por tanto, los ácidos grasos son moléculas anfipáticas.
Los ácidos grasos son utilizados para fabricar jabón.
Los ácidos grasos de las células cumplen con las siguientes características:
(1) Número par de átomos de carbono
(2) Longitud de 14 a 20 (16 a 22) átomos de carbono
(3) Pueden ser saturados (sin dobles enlaces) o insaturados (con uno o varios dobles enlaces)
(4) Los dobles enlaces tienen configuración cis, no trans.
Los ácidos grasos se diferencian por la longitud de la cadena de hidrocarburo y por la presencia o ausencia de dobles enlaces.

Grasas (Triglicéridos)
Consisten en una molécula de glicerol unidas con enlaces éster a tres ácidos
grasos. Son moléculas apolares.
**Son sólidas a temperatura ambiente si los ácidos grasos presentes son
saturados (sin dobles enlaces).
**Son líquidas a temperatura ambiente si los ácidos grasos presentes son
insaturados (con dobles enlaces). Las grasas líquidas a temperatura ambiente
son los aceites.
Una molécula de grasa puede tener tres ácidos grasos idénticos, o puede
contener más de una especie de ácido graso (grasa mixta).
La mayoría de las grasas naturales son una mezcla de moléculas con distintas
especies de ácidos grasos.
Las grasas se almacenan en adipocitos.

Fosfolípidos
Pueden tener como esqueleto una molécula de glicerol (fosfoglicéridos) o una molécula
de esfingosina (esfingomielina).
Son moléculas anfipáticas que forman la bicapa de lípidos de la membrana plasmática.
También funcionan como precursores de segundos mensajeros.
Fosfoglicéridos
Fosfolípidos compuestos por glicerol unido a dos ácidos grasos y a un fosfato, el fosfato
también se une con un pequeño alcohol.
El alcohol incorporado al fosfoglicérido puede ser: colina, inositol, etanolamina o serina.
La estructura del fosfolípido cuenta con: una cabeza polar (alcohol y fosfato) y dos colas
hidrófobas (los ácidos grasos).
Los fosfolípidos formados se denominan: fosfatidil colina (PC), fosfatidil inositol (PI),
fosfatidil etanolamina (PE) y fosfatidil serina (PS).
Fosfatidil colina también se denomina lecitina; fosfatidil etanolamina también se denomina cefalina. Ambos son fosfolípidos
de carga neutra. Fosfatidil serina y fosfatidil inositol son fosfolípidos de carga negativa (fosfolípidos ácidos).
¡OJO! Existe un fosfoglicérido doble llamado difosfatidil glicerol o cardiolipina.
Esfingomielina
Fosfolípido compuesto por esfingosina unida a un ácido graso por
su grupo amino y a una fosfocolina.
La esfingosina es un aminoalcohol de cadena larga. La cadena de
hidrocarburo de la esfingosina equivale a una cola hidrofóbica, el
ácido graso unido equivale a otra.
La esfingomielina es el único fosfolípido de membrana que no está
formado sobre una base de glicerol.

Glicolípidos
Lípidos de membrana formados por esfingosina unida a un ácido graso y a grupos de azúcar. Son anfipáticos.
Si el carbohidrato es un azúcar simple: cerebrósido.
Si el carbohidrato es un oligosacárido: gangliósido.

Esteroides
Lípidos construidos alrededor de un esqueleto de hidrocarburo de cuatro anillos. Ejemplos:
colesterol, hormonas sexuales (testosterona, estrógeno), hormonas de la corteza suprarrenal.
El colesterol es un lípido anfipático. Debemos saber que:
*Es un componente de las membranas animales, casi ausente en vegetales y bacterias.
*Su papel en la membrana es:
Aumentar la durabilidad y rigidez de la bicapa Reducir la permeabilidad de la bicapa
Mantener un estado de fluidez intermedia Borrar temperaturas de transición precisas
*Es precursor de la síntesis de hormonas esteroideas en el REL.
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¡Estructura de los lípidos!

Triglicéridos Glicerol + 3 ácidos grasos
Diacilglicerol

Fosfoglicéridos (son fosfolípidos) Glicerol + 2 ácidos grasos + fosfato + alcohol

Ácido fosfatídico

Esfingosina + ácido graso + fosfocolina

Esfingomielina (es un fosfolípido)
Ceramida

Esfingosina + ácido graso + monosacárido

Esfingolípidos Cerebrósidos
Ceramida
Glucolípidos
Esfingosina + ácido graso + oligosacárido
Gangliósidos
Ceramida

¡Funciones de los lípidos!

Almacén muy concentrado de energía; se guardan en los adipocitos.
Triglicéridos
1 gramo de grasa contiene dos veces más energía que 1 gramo de azúcar.
Componentes fundamentales de la bicapa lipídica en las membranas celulares.
Fosfolípidos
Precursores de segundos mensajeros celulares.
Glicolípidos Abundantes en la vaina de mielina, importantes en el sistema nervioso.
Componente de la membrana de células animales.
Aumenta la durabilidad y rigidez de la membrana.
Reduce la permeabilidad de la membrana.
Colesterol Mantiene un estado de fluidez intermedia.
Borra temperaturas de transición precisas.
Precursor de las hormonas esteroideas.
Precursor de sales biliares.

Ácidos Nucleicos
 Polímeros lineales de nucleótidos.  Existen dos clases: DNA (ácido desoxirribonucleico) y RNA
 Función primaria: almacenar y transmitir información (ácido ribonucleico).
genética.  El DNA es material genético en todas las células. Algunos
 Otras funciones: estructurales y catalíticas. virus usan RNA.

Nucleótidos
Nucleósido

Azúcar + Base Nitrogenada + Fosfato = Nucleótido

Pentosa Purina Pirimidina

Ribosa (RNA) Adenina Citosina

Desoxirribosa (DNA) Guanina Timina (DNA)
(RNA)
Uracilo (RNA)

DNA RNA
Molécula Bicatenaria Molécula Monocatenaria
Pentosa: Desoxirribosa Pentosa: Ribosa
Pirimidinas: Citosina y Timina Pirimidinas: Citosina y Uracilo
Purinas: Adenina y Guanina Purinas: Adenina y Guanina
Ubicación: My. Núcleo / Mn. Citoplasma (mitocondrias) Ubicación: My. Citoplasma / Mn. Núcleo
Forma doble cadena con sus dos hebras Puede formar doble cadena con una sola hebra
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Cosas en común de los ácidos nucleicos:

El esqueleto está formado por azúcares y fosfato. Los nucleótidos se encuentran unidos por uniones fosfodiéster. La pentosa
tiene grupos característicos en cada carbono:
 C1: Unión a la base nitrogenada (al N1 de las pirimirinas o al N9 de las purinas).
 C2: Tiene un OH si es ribosa y un H si es desoxirribosa
 C3: OH si representa el extremo 3’.
Se esterifica con fosfato del nucleótido subyacente formando parte de la unión fosfodiéster.
 C4: 
 C5: Unión al fosfato. Es el fosfato libre si el nucleótido está en el 5’.
Forma parte de la unión fosfodiéster.

ARN: Ácido ribonucleico

Es monocatenario, pero puede plegarse para formar dobles hélices (estructura 2ria) y estructuras 3D
complejas (estructura 3ria). Pueden tener actividad catalítica, en ese caso se denominan ribozimas (ej,
la ribozima cabeza de martillo)
Existen RNA de tres tipos principales (hay otros menos abundantes):
mRNA: Lleva el mensaje del DNA hasta el citoplasma. Es el que sirve de molde para la síntesis proteica.
tRNA: Es el traductor o adaptador durante la síntesis proteica. Se une a mRNA por un lado y a un
aminoácido por otro.
rRNA: Cumple funciones estructurales y de ribozima. Forma parte del ribosoma, un complejo
ribonucleoproteico.

ADN: Ácido desoxirribonucleico

La molécula consta de dos cadenas antiparalelas y complementarias.
1. La molécula es bicatenaria.
2. Las cadenas se enrollan una sobre otra en un par de hélices
derechas. Esta estructura quedó clara en la difraxn de rayos X.
3. Las hélices son antiparalelas.
4. El esqueleto de azúcar fosfato se ubica hacia afuera de la
molécula, los fosfatos dan la característica ácida (carga
negativa) a la molécula.
5. Las bases se orientan hacia el centro de la molécula en un
plano más o menos perpendicular al eje de ella. Las bases
confieren estabilidad a la molécula gracias a fuerzas de van der
Walls entre las “pilas de platos”.
6. Las bases de las dos cadenas se unen por puentes de
hidrógeno. La fuerza de los puentes de hidrógeno es aditiva.
7. El ancho de la doble hélice es de 2 nm (20 A)
8. Pu siempre se aparea con Pi.
9. Los únicos pares posibles en la doble hélice de ADN son AT y
CG. AT unidos por pdH y CG unidos por 3.
10. Los espacios entre los giros crean un surco mayor y un surco
menor que sirven para interacciones con proteínas de unión a
DNA (Ej, TBP se adosa al surco menor, algunos factores de
transcripción se unen al surco mayor)
11. La doble hélice da una vuelta completa cada 10 residuos o
3,4 nm (34 A).
12. Las cadenas son complementarias.

La síntesis de DNA a partir de DNA se denomina replicación.

La síntesis de RNA a partir de DNA se denomina transcripción.
La síntesis de proteínas a partir de mRNA se denomina traducción o traslación.
 Enzimas
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ENZIMAS
Las enzimas son catalizadores biológicos, mediadores del metabolismo encargados de todas las reacciones que ocurren en la
célula. Son las encargadas de dirigir el tránsito metabólico de la célula.
La primera enzima cristalizada y secuenciada fue la ureasa vegetal. Las enzimas son proteínas. Existen catalizadores
biológicos que no son proteínas, son ARN y reciben el nombre de ribozimas.
Las enzimas, como son proteínas, pueden presentarse como enzimas conjugadas. En ese caso los grupos prostéticos suelen
ser inorgánicos (metales, formando metaloenzimas) u orgánicos (coenzimas). Los cofactores son importantes para la catálisis
y realizan actividades para las que los aminoácidos no son adecuados (Ej, reacciones redox).

Propiedades de las enzimas

1. Se necesitan en pequeñas cantidades.
2. Sufren cambios reversibles durante las reacciones.
3. Cada molécula puede participar repetidamente en
reacciones individuales.
4. Son muy específicas, esto es esencial para mantener la vida.
5. Los reactivos que se unen a la enzima se denominan
sustratos.
6. No afectan la termodinámica de la reacción. Solo afectan el
aspecto cinético.
7. Muy eficientes, ↑ velocidad de la reacción en un factor de
108 - 1013. Pueden hacer en un segundo lo que tardaría
300mil años sin enzimas.
8. Realizan sus actividades en intervalos pequeños de
temperatura y pH (pequeñas variaciones de estos
parámetros las afectan gravemente).
9. Actúan como directoras de “tránsito metabólico”. Los
productos que se forman solo son los necesarios.
10. La actividad enzimática es regulable.
Las enzimas disminuyen la energía de activación
La energía de activación es la energía que deben alcanzar los reactivos para llegar a un estado activado en el que puedan
ocurrir los reajustes atómicos necesarios para que ocurra la reacción (es la energía para formar el complejo activado o el
estado de transición).
Las enzimas catalizan las reacciones mediante la reducción de la magnitud de de la energía de activación. Logran eso
uniéndose con más firmeza al estado de transición que a los reactantes mismos, lo que estabiliza el complejo activado y
disminuye su energía.
La actividad enzimática sigue la secuencia: [S] + [E] → [ES] → [P] + [E]
Sitio Activo
1. Es el sitio donde el sustrato se une a la enzima.
2. Gralmente se encuentra sepultado en lo profundo de la proteína, lo que contribuye a:
 Aumentar la reactividad de los residuos del sitio activo.
 Desolvación del sustrato (el agua apantalla cargas).
3. Queda conformado por aminoácidos que se reúnen en el plegamiento.
4. Es responsable de la actividad catalítica y de la especificidad de la enzima.

Cinética enzimática
La cinética estudia la velocidad con que una enzima cataliza una reacción
bajo ciertas condiciones experimentales.
Los conceptos básicos por saber son los siguientes:
La velocidad de reacción inicial depende de la concentración de sustrato.
En presencia de concentraciones altas de sustrato, las enzimas individuales
trabajan a su máxima capacidad, o sea que la velocidad en estas
condiciones depende de la cantidad de moléculas de enzimas.
A mayor concentración de sustrato, la enzima se aproxima al estado de
saturación. La velocidad en el punto de saturación se denomina velocidad
máxima (Vmax).
¿Qué es la Constante de Michaelis?
Km = [S] donde ( V = Vmax/2 )

La constante de Michaelis es la concentración de sustrato a la cual la velocidad de la reacción es equivalente a la mitad de la

velocidad máxima alcanzable en un sistema enzimático.
 Enzimas
EMP
Inhibidores enzimáticos
Compuestos que se unen a la enzima y disminuyen su actividad. La célula depende de inhibidores para regular la actividad de
muchas de sus enzimas; se los puede usar también como fármacos y pesticidas.
Los inhibidores enzimáticos se clasifican en reversibles s irreversibles.
Inhibidores irreversibles: Se unen con fuerza a la enzima (enlace covalente). Ejemplos: Organofosforados (pesticidas) y
diisopropilfosfofluoridato (gases nerviosos) son inhibidores de la enzima acetilcolinesterasa. Penicilina es un inhibidor
irreversible de una enzima para la formación de la pared celular bacteriana.
Inhibidores reversibles: Se pueden clasificar en competitivos y no competitivos. Se unen de manera débil a la enzima.
Los inhibidores competitivos compiten con el sustrato por el acceso al sitio activo, se parecen al sustrato pero no se
transforman a producto. El nivel de inhibición depende de la relación sustrato/inhibidor. Ejemplos: teprótido y
captoprilo son inhibidores competitivos de la enzima convertidora de angiotensina (IECAs) usados en el tratamiento de
la hipertensión.
Los inhibidores no competitivos no compiten con el sustrato por el sitio de unión; actúan en un sitio distinto al sitio
activo de la enzima. El nivel de inhibición depende de la concentración del inhibidor. En presencia de un inhibidor no
competitivo nunca se puede alcanzar la Vmax.
Unión de gran firmeza a la
enzima
Irreversible
Enlace covalente IE

Unión al sitio
Inhibición activo
Enzimática
No se transforma
Competitiva
en producto

Depende de [S]
Reversible
Unión en sitio
diferente al sitio
No activo
competitiva
No depende de [S],
sí de [I]
 Estructura y función de las membranas
EMP

ESTRUCTURA Y FUNCIÓN DE LA MEMBRANA PLASMÁTICA

La MP es una estructura delgada y frágil de aprox. 5 a 10 nm de espesor. No se encuentra ningún indicio de ella al MO, puede
analizarse al ME. Todas las membranas de la célula muestran como ultraestructura, en micrografías electrónicas, 3 capas: dos
oscuras y externas, una media y clara. Las membranas celulares consisten en una bicapa de lípidos, donde las cabezas polares
son las que se tiñen de oscuro.
Funciones de la membrana
1. División en compartimentos:
**Las membranas son hojas continuas 5. Respuesta a señales externas:
**Es inevitable que cierren compartimentos. **Transducción de señales mediante receptores que se unen a
**Compartimentalización con membranas permite: ligandos específicos.
- Actividades especializadas sin interferencia externa. **La transducción de la señal puede hacer que la membrana
- Regulación de actividades de forma independiente. genere una señal que estimula o inhibe actividades internas de la
2. Sitios para actividades bioquímicas: célula.
**Las membranas son un compartimento distinto por sí mismas. 6. Interacción celular:
**Proporcionan un andamiaje donde pueden ordenarse **Permite que las células se reconozcan y envíen señales entre sí.
componentes para que la interacción entre reactivos sea efectiva. **Permite que las células se adhieran o que intercambien
3. Provisión de una barrera con permeabilidad selectiva: materiales e información.
**Las membranas evitan el intercambio irrestricto de moléculas 7. Transducción de energía:
entre compartimentos. **La más importante ocurre en la fotosíntesis
**Las membranas suministran medios de comunicación entre **También en la transferencia de energía desde grasas y
compartimentos que separan. carbohidratos hasta el ATP.
4. Transporte de solutos: **Estas maquinarias están en cloroplastos y mitocondrias.
**Transporte físico de sustancias de un lado a otro, a menudo en
contra de gradiente.
**Permite acumular sustancias necesarias para impulsar el
metabolismo (azúcares, aminoácidos).

Historia
Overton: Concluyó que el poder de disolución de la capa limitante externa de la célula concordaba con la de un aceite graso.
Gorter y Grendell: Propusieron que la membrana estaba compuesta por una bicapa de lípidos y que los grupos polares
estaban hacia la periferia (expuestos al agua) y las cadenas grasoacilo hidrófobas quedaban protegidas del
ambiente acuoso.
Fisiólogos celulares: Dedujeron la presencia de proteínas en la membrana. La tensión superficial de las membranas eran
menores a las estructuras lipídicas puras.
Davson y Danielli: Sugirieron que la bicapa de lípidos estaba cubierta, en ambas superficies, por proteínas globulares;
postularon también la presencia de poros recubiertos de proteína para la entrada de solutos polares.
Singer y Nicolson: Establecieron el modelo de mosaico fluido.
Modelo del Mosaico Fluido: “dogma central” de la biología de la membrana. De acuerdo a este modelo, la bicapa de lípidos
es el centro de la membrana y se enfoca la atención a su estado físico: los lípidos se encuentran en estado líquido y las
moléculas individuales pueden moverse lateralmente en la membrana. Las proteínas ocurren como un mosaico de partículas
discontinuas que penetran la bicapa. Presenta a las membranas como estructuras dinámicas, sus componentes son móviles y
capaces de unirse para mantener interacciones transitorias o semipermanentes.
 Estructura y función de las membranas
EMP
Composición química de las membranas
Los componentes de las membranas son: Lípidos, Proteínas y Carbohidratos.
Las membranas son ensambles de lípidos y proteínas donde los componentes se mantienen unidos mediante enlaces no
covalentes. La bicapa de lípidos sirve como soporte estructural; las proteínas son las que llevan a cabo la mayoría de las
funciones. Cada tipo celular diferenciado contiene un complemento único de proteínas de membrana que contribuye a las
actividades especializadas de ese tipo celular.
La relación lípido/proteína es muy variable. Depende del tipo de membrana y del tipo de célula.

Relación Proteína/Lípido:
Membrana Mitocondrial Interna
> Eritrocito > Vaina de Mielina

Cadena Transportadora de Electrones Aislamiento eléctrico. Esfingomielina.

Lípidos de la membrana
La membrana posee gran diversidad de lípidos. Todos son anfipáticos. Hay 3 tipos principales: fosfolíglicéridos, esfingolípidos
y colesterol. la mayoría de los lípidos de membrana son fosfolípidos.

Fosfoglicéridos
Son la mayoría de los fosfolípidos de membrana, construidos sobre una estructura de glicerol.
Diacilglicerol

Glicerol + 2 ácidos grasos + fosfato + alcohol

Ácido fosfatídico
El ácido fosfatídico no existe en la mayoría de las membranas.
Cosas para recordar:
El alcohol que se une al ácido fosfatídico puede ser colina (forma
PC: Lecitina
PE: Cefalina
fosfatidilcolina o lecitina); etanolamina (forma fosfatidiletanolamina o
PS cefalina); serina (forma fosfatidilserina) o inositol (forma fosfatidilinositol).
Ácidos Los alcoholes junto con el fosfato forman la cabeza polar del fosfolípido.
PI
Las cadenas grasoacilo son hidrocarburos no ramificados, de cadena par, de 16 a 20 carbonos de
longitud. Los fosfoglicéridos contienen a menudo un ácido graso saturado y otro saturado. Ácidos grasos poliinsaturados
omega 3 son EPA y DHA (5 y 6 insaturaciones, respectivamente) que se integran a PE y PC de encéfalo y retina.
Un fosfolípido particular, abundante en la membrana mitocondrial interna, es la cardiolipina, o difosfatidilglicerol. Es un
fosfolípido doble.

Esfingolípidos
Derivados de la esfingosina, un aminoalcohol que tiene una larga cadena de hidrocarburo. NO tienen glicerol. Existe un
fosfolípido (la esfingomielina) y glicolípidos.
Esfingosina + Ácido Graso = Ceramida
Ceramida + Fosfocolina = Esfingomielina
Fosfolípido
Ceramida + Monosacárido = Cerebrósido
Glicolípido
Ceramida + Oligosacárido = Gangliósido
Los esfingolípidos son abundantes en la vaina de mielina del sistema nervioso.
Los glicolípidos tienen funciones cruciales en la fisiología celular; su ausencia se asocia a enfermedades neurológicas.
También participan en enfermedades infecciosas: las toxinas del cólera y del botulismo y el virus de la influenza se unen a
gangliósidos de la superficie celular para entrar a la célula blanco.

Colesterol
Esteroide, molécula de lípido que no contiene ácidos grasos. Puede constituir hasta 50% de los lípidos de la membrana. No
existe en membranas plasmáticas de plantas ni en las células bacterianas.
El colesterol posee: **un grupo hidroxilo en el C3 polar que se orienta hacia la superficie de la membrana
** los anillos del colesterol permanece incrustado en la bicapa.
Los anillos hidrocarbonados son planos y rígidos, intervienen con los movimientos de las colas de los ácidos grasos.
La colocación de las moléculas de colesterol interfiere con el empaquetado ajustado de los fosfolípidos, lo que tiende a
aumentar la fluidez de la bicapa. El colesterol se distribuye simétricamente en ambas monocapas; es el elemento menos
asimétrico de la membrana.

Naturaleza e importancia de la bicapa lipídica

Cada tipo de membrana celular tiene su propia composición lipídica que difiere de
las demás por los tipos de lípidos, la naturaleza de los grupos cabeza y las especies
particulares de cadenas acilo grasas → algunas membranas contienen cientos de
especies químicamente distintas de fosfolípidos.
 Estructura y función de las membranas
EMP
Los lípidos de membrana son más que simples elementos estructurales:
**tienen efectos importantes en las propiedades biológicas de las membranas (estado físico de la membrana,
influyen en actividades de proteínas particulares de la membrana)
**proporcionan segundos mensajeros
Recordar que:
- La bicapa lipídica completa mide 6nm de espesor:
Cadenas de ácidos grasos de ambas hojas de la bicapa tienen una anchura de 30A
Hileras de grupos cabeza tienen una anchura de 15A cada una
-Las cadenas de ácidos grasos nunca se exponen al agua circundante, y como resultado:
Las membranas nunca tienen un borde libre
Las membranas son siempre estructuras continuas, sin interrupciones
Las membranas forman extensas redes interconectadas dentro de la célula
-Las membranas son deformables debido a su flexibilidad, lo que facilita cambios de forma como ocurre en:
División celular y locomoción
-La bicapa lipídica facilita la fusión y gemación de membranas, por ejemplo en secreción y fertilización
-La bicapa lipídica es capaz de autoensamblarse, es decir, los fosfolípidos disueltos en agua asumen espontáneamente la
conformación de una bicapa.
Liposomas: bicapa lipídica artificial que se ensambla por si sola en una vesícula esférica al
dispersar fosfatidil colina en un medio acuoso.
Liposoma furtivo (sigiloso): liposoma con una cubierta externa de polímero sintético
(polietilenglicol) que lo protege de la destrucción inmunitaria.
En los liposomas es posible insertar proteínas y estudiar sus funciones. También es posible
transportar fármacos o ADN dentro del cuerpo (en la pared del liposoma o en la luz).
El liposoma adquiere selectividad por una célula blanco si se colocan anticuerpos u
hormonas en su pared; lo que les permite unirse selectivamente con células blanco.
Se aumenta la resistencia de un liposoma al recubrirlo con un polímero sintético.

Carbohidratos de la membrana
Se encuentran unidos covalentemente a lípidos y proteínas de la membrana.
La composición de carbohidratos varía según la especie y el tipo de célula de 2 al 10% del peso de la membrana.
+ del 90% de carbohidratos → en glicoproteínas ¡El componente de azúcar NUNCA mira
El resto de los carbohidratos → en glicolípidos hacia el citosol!
Glicoproteínas:
1.La glicosilación es la PTM más compleja de las proteínas.
2.Poseen oligosacáridos de aprox. 15 azúcares por cadena.
3.Los oligosacáridos son muy variables.
4.Los oligosacáridos se encuentran unidos a la proteína por
medio de dos tipos de uniones: Uniones N y Uniones O.
5.Los oligosacáridos son importantes para destinar proteínas
a un compartimento o para interacciones de la célula con
su ambiente.
Glicolípidos:
1.Los carbohidratos de los glicolípidos determinan grupos
sanguíneos del sistema ABO.
2.El sistema ABO depende de la expresión de ciertas
glicosiltransferasas.
3.Los glicolípidos del sistema ABO son gangliósidos.

Proteínas de membrana
De acuerdo al tipo de célula y al organelo, cada membrana puede contener cientos de proteínas diferentes.

Proteínas de membrana

Poseen una orientación definida en la membrana

Proteínas integrales Proteínas Periféricas Proteínas fijadas a lípidos

*Transmembranosas, mono o multipaso Fuera de la bicapa de lípidos. Pueden ser EC o IC.

*Poseen dominios que sobresalen a ambos lados de
la membrana (IC y EC)
Add a la bicapa por enlaces no covalentes Add a la bicapa por enlaces covalentes
*20 a 30% de las proteínas del genoma
con moléculas de lípidos
*Add a la bicapa por fuerzas de van der Walls
 Estructura y función de las membranas
EMP
Lateralidad de la membrana: Es la orientación definida de cada proteína de la membrana en relación con el citoplasma, por
lo que las propiedades de una y otra superficies membranosas difieren mucho. Por ejemplo:
Se orientan hacia afuera, hacia el espacio extracelular: Las partes de las proteínas que interactúan con otras células
o con sustancias extracelulares.
Se orientan hacia adentro, hacia el citosol: las partes de las proteínas de membrana que interactúan con moléculas
citoplásmicas.

Proteínas Integrales
Son ejemplos de proteínas integrales los receptores, canales y transportadores; los transportadores de electrones de
bacterias, mitocondrias y cloroplastos. Las proteínas integrales son anfipáticas.
Dos porciones Transmembranosa Hidrofóbica Héliceα (↑↑↑) Unipaso
Láminaβ (  ) Multipaso
Superficie Externa
Interna Hidrofílicas [tienden a parecerse a
proteínas globulares]
*La proteína está en contacto directo con las cadenas grasoacilo de la bicapa.
*No es necesario que la proteína esté fija a la bicapa, ella puede difundir lateralmente.
*Los residuos transmembranosos tienden a ser hidrófobos, los del dominio IC tienden a
tener carga (+), los del dominio EC tienden a tener carga (-) y se asocian a CH.
*El dominio transmembrana casi siempre consiste en una cadena de 20 aminoácidos
hidrófobos en héliceα; hay proteínas transmembranosas con láminaβ en membrana
externa de bacterias, mitocondrias y cloroplastos [porinas y complejos TOM].
*La distribución de las proteínas integrales se estudia por congelamiento y fractura, que
explora la heterogeneidad microscópica de la membrana.
Para el estudio de la estructura y propiedades de las proteínas integrales de membrana, es
necesario aislarlas. Esto se realiza con detergentes:
SDS (Dodecil sulfato de sodio) → Detergente iónico → Desnaturaliza a la proteína
Tritón X-100 → Detergente ni iónico → No altera la estructura terciaria de la proteína.

Proteínas periféricas
(1) Unidas a la membrana por uniones electrostáticas débiles.
(2) Se extraen de la membrana mediante soluciones salinas en [↑].
(3) Las mejores estudiadas son las del esqueleto de membrana (en la superficie citosólica forman una red fibrilar).
(4) Otras proteínas de la superficie citosólica pueden ser: enzimas, cubiertas especializadas o factores que transmiten señales
transmembranosas.
(5) Las proteínas periféricas tienen una relación dinámica con la membrana. SON PROTEÍNAS PERIFÉRICAS:
Proteínas del esqueleto de membrana
Proteínas fijadas a lípidos Proteínas de cubierta vesicular
Se puede distinguir varios tipos.
Proteínas fijadas a GPI → Unidas a un oligosacárido unido a una molécula de PI en la hoja externa de la bicapa.
→ Pueden separarse mediante una fosfolipasa que separa lípidos que contienen inositol.
c
→ PrP , receptores, enzimas, proteínas de add celular.
→ Hemoglobinuria paroxística nocturna por deficiencia de síntesis de GPI.
Proteínas fijadas a AG → En el lado citoplásmico de la membrana.
→ Src, Ras, Proteínas G heterotriméricas.
 Estructura y función de las membranas
EMP
Lípidos de membrana y Fluidez de la membrana
Temperatura de transición: Temperatura a la cual los lípidos de la membrana pasan de una fase cristalina líquida a un gel
cristalino congelado en el que se limita en gran parte el movimiento de las cadenas de ácidos grasos de los fosfolípidos.
Por encima de la temperatura de transición: las moléculas de lípido y sus colas hidrófobas son libres de moverse en
ciertas direcciones, aunque conservando un orden considerable.
Por debajo de la temperatura de transición: el movimiento de las moléculas se limita mucho y la bicapa puede
describirse como un gel cristalino.
La temperatura de transición depende de la capacidad de los lípidos para agruparse [depende de los lípidos con los que está
formada].
Factores que influyen en la fluidez:
(1) Insaturación de ácidos grasos (especialmente en cis) [↑ insaturaciones, ↑fluidez, ↓ viscosidad, ↓temperatura de fusión]
(2) Longitud de las cadenas de ácidos grasos [↓ longitud, ↑fluidez, ↓ viscosidad, ↓temperatura de fusión]
(3) Colesterol: interrumpe el empaque ajustado de las cadenas grasoacilo e interfiere con su movilidad. Suprime las
temperaturas de transición precisas y crea una condición de fluidez intermedia. Tiende a aumentar la durabilidad y atenuar la
permeabilidad de una membrana.
Importancia de la fluidez:
(1) La fluidez establece un “compromiso” entre sólido/líquido.
(2) Permite interacciones dentro de la membrana. Las moléculas que interactúan en un proceso pueden reunirse, llevar a
cabo la reacción necesaria y separarse de nuevo.
(3) Es clave en la formación de la membrana.
(4) Participa en procesos celulares elementales: división celular, movimiento, crecimiento, formación de uniones entre
células, secreción y endocitosis.
Mantenimiento de la fluidez:
Es un tipo de homeostasis a nivel celular. Se lleva a cabo por:
(1) Desaturasas: Desaturan de enlaces simples en las cadenas de AG para formar enlaces dobles.
(2) Fosfolipasas y aciltransferasas: Recambio de las cadenas entre diferentes moléculas de fosfolípidos para producir otra
que contenga dos AG insaturados [reduce en gran medida la temperatura de fusión de la bicapa].
(3) La célula cambia los tipos de lípidos que se sintetizan en favor de aquellos que contengan más ácidos grasos
insaturados.
Como resultado de la acción de estas enzimas, las membranas de una célula se adaptan a las condiciones ambientales
prevalecientes. Estos mecanismos ocurren en mamíferos en hibernación, peces de estanques, plantas resistentes al frío y
bacterias que viven en agua caliente.

Asimetría de los lípidos

La bicapa consiste en dos hojas distintas que tienen una composición lipídica muy diferente; las monocapas son
independientes, más o menos estables con propiedades químicas y físicas diferentes.
*Los glicolípidos se ubican solo en la hoja externa [pueden servir como receptores]
*El colesterol no contribuye a la asimetría, es el menos asimétrico.
En la cara interna: Add a residuos (+)
*Los fosfolípidos Cara Externa Cara Interna
En cara externa de linfocitos viejos: destrucción.
Esfingomielina Fosfatidiletanolamina En cara externa de plaquetas: coagulación.
Fosfatifilcolina Fosfatidilserina
En cara interna: Importante para transducción de
Fosfatidilinositol señales

Balsas lipídicas
Son parches de colesterol y esfingolípidos. Consisten en colesterol y fosfolípidos en microdominios que están más gelificados
y altamente ordenados. Flotan en el ambiente fluido de la membrana.
Determinadas proteínas tienden a concentrarse en las balsas, otras tienden a permanecer fuera de sus fronteras. Proteínas
ancladas a GPI son afines a las balsas.
Se postula que, si existieran in vivo, son demasiado pequeñas para ser estudiadas y que sirven como plataformas flotantes
que concentran proteínas específicas: organizan la membrana en compartimentos funcionales.
 Estructura y función de las membranas
EMP

La naturaleza dinámica de la membrana plasmática

Movimientos de los fosfolípidos:
-6
[1] Cambio lateral (10 s).
-9
[2] Flexión de colas hidrofóbicas (10 s).
5
[3] Flipflop (10 s). Para que el flipflop ocurra existen las flipasas que participan en el establecimiento
de la asimetría lipídica.
Los lípidos que carecen de grupos polares, como el colesterol, pueden moverse rápidamente a
través de la bicapa.
El estado físico de los lípidos es un factor importante para la movilidad de las proteínas integrales.

Difusión de proteínas de membrana luego de la fusión celular

En la fusión celular, dos tipos diferentes de células o células de especies distintas producen
una célula con un citoplasma común y una sola membrana plasmática.
(1) Fusión de célula humana + célula de ratón.
(2) Localización de proteínas de la membrana por medio de anticuerpos marcados
fluorescencia. Ac fluorescentes verdes para proteínas de rata y Ac fluorescentes rojos para
proteínas humanas.
(3) Al principio, la membrana de la célula fusionada se veía mitad humana (roja) y mitad “de
ratón” (verde).
(4) 40 minutos después, las proteínas de cada especie se habían distribuido uniformemente
en toda la membrana del heterocarion.
Si se realizaba el mismo experimento a bajas temperaturas, la viscosidad de la bicapa
aumentaba y la movilidad de las proteínas disminuía.
CUIDADO: Las proteínas no se mueven irrestrictamente.

Restricciones en la movilidad de proteínas y lípidos

Los científicos utilizan técnicas que permiten seguir el movimiento de las moléculas de
proteínas con el MO: El FRAP y el SPT.
Recuperación de la fluorescencia luego del fotoblanqueo (FRAP)
(1) Los componentes integrales de la membrana de células cultivadas se marcan con un tinte
fluorescente.
(2) Las células se colocan al microscopio y se irradian con un haz láser que blanquea
moléculas fluorescentes; queda una mancha circular de aprox 1μm de diámetro sin
fluorescencia.
(3) Si las proteínas son móviles, ocurrirá aparición gradual de la fluorescencia en el círculo
radiado.
La velocidad de recuperación de la fluorescencia mide el índice de difusión de las moléculas
móviles.
La extensión de la recuperación de la fluorescencia (%) proporciona una medida del
porcentaje de las moléculas marcadas que tienen la libertad de difundir.
Conclusiones iniciales del FRAP: (a) Las proteínas se mueven mucho más lento en una
membrana plasmática que en una bicapa lipídica pura. (b) una fracción de 30 al 70% de las
proteínas de membrana NO ES LIBRE DE DIFUNDIRSE de regreso al círculo radiado.
 Estructura y función de las membranas
EMP
Rastreo de partículas individuales (SPT)
(1) Se marca a proteínas individuales de membrana con partículas de oro recubiertas de
anticuerpo.
(2) Se sigue los movimientos de proteínas por medio de microscopía de video asistida por
computadora.
Conclusiones del SPT:
**Algunas proteínas se mueven aleatoriamente por toda la membrana, pero con un menor
coeficiente de difusión de lo que se mide en una bicapa artificial.
**Algunas proteínas no se mueven, se consideran inmovilizadas.
**Proteínas particulares se mueven de forma muy dirigida [no al azar].
**La mayor fracción de proteínas tienen movimientos aleatorios [brownianos] dentro de la
membrana con velocidades correspondientes a la difusión libre, pero migran solo por unas décimas
de micras.

Control de la movilidad de las proteínas de membrana

Las proteínas no son totalmente libres de moverse al azar entre los lípidos. Los movimientos pueden hallarse limitados por:
A) Relacionamiento con proteínas vecinas.
B) Relacionamiento con el esqueleto de membrana (la influencia más importante) Las barreras de
membrana se
Proteínas restringidas por el esqueleto de membrana estudian con pinzas
Proteínas fijadas al EM ópticas
C) Relacionamiento con materiales extracelulares.
El esqueleto de membrana forma una red de “cercas” alrededor de porciones de membrana, lo que crea compartimentos
que limitan la distancia que puede viajar una proteína integral. Las cercas poseen hendiduras que aparecen y desaparecen
mediante el ensamble/desensamble de la red.
Experimentos:
Caso 1: Si eliminamos mediante ingeniería genética el dominio citoplásmico de una proteína integral
La proteína se desplaza a una distancia mucho mayor que una proteína original
(El dominio citoplásmico de la proteína ya no se ve limitado en su viaje por el esqueleto de membrana)
Caso 2: Si eliminamos mediante ingeniería genética el dominio extracelular de una proteína integral
La proteína se desplaza a una velocidad mucho mayor que una proteína original
(El dominio extracelular de la proteína ya no se ve limitado en su viaje por materiales extracelulares)

Movilidad de los lípidos de la membrana

También restringida. Los fosfolípidos difunden en un área restringida, saltan la cerca para difundir de nueva cuenta en otra
área de membrana hasta volver a saltar la cerca. Las callas que restringen el movimiento de los lípidos estarían representadas
por hileras de proteínas integrales de membrana cuyos dominios citoplásmicos están unidos al esqueleto de membrana.

Dominios de membrana y polaridad celular

La mayor parte de las membranas posee
diversas variaciones en composición y Los espermatozoides son las
movilidad proteicas, sobre todo en las células de mamífero con
células cuyas diversas superficies tienen estructura más diferenciada.
distintas funciones. Los dominios de El espermatozoide maduro
membrana son porciones de una misma está cubierto por una
membrana continua pero que realizan membrana plasmática
funciones diferentes (poseen diferente continua que consiste en un
composición proteica). mosaico de diversos
En general, podemos asumir que los dominios localizados.
dominios de membrana son mantenidos
por zonas de oclusión.

Estudio de los Eritrocitos

Su membrana es la más estudiada porque: (1) son fáciles de conseguir,
(2) son células individuales no unidas a otras y (3) no poseen membranas
internas.
Para obtener un fantasma de membrana del eritrocito, se lo somete a
un medio hipotónico [hemólisis]: la célula se hincha y pierde su
contenido por fugas en la membrana.
Una vez aislado el fantasma, las proteínas se fraccionan por SDS PAGE
que las separa en casi 12 bandas conspicuas. Entre las proteínas
eritrocitarias existen enzimas (G3PDH), proteínas de transporte (para
iones y glucosa) y proteínas del esqueleto celular (espectrina).
 Estructura y función de las membranas
EMP
Proteínas integrales de la membrana eritrocitaria
La glucoforina fue la primera proteína TM
Banda 3 Glucoforina A secuenciada. De la secuencia de aminoácidos
2 pasos TM. 1 paso TM. de la glucoforina dependen los grupos
Homodímero Homodímero sanguíneos MM, MN o NN. Si una persona no
↓Carbohidrato: 6 a 8% del PM. ↑Carbohidrato: 60% del PM. expresa glucoforina A, la Banda 3 se glicosila
Intercambiador de aniones 16 cadenas de oligosacárido con más para compensar esa falta y además existe
- -
(HCO3 / Cl ) mucho NANA (repulsión) una inmunidad al paludismo

Proteínas periféricas de la membrana eritrocitaria: el esqueleto de membrana

Esqueleto fibrilar en la superficie interna de la membrana plasmática. Tiene un papel crucial para (1) mantener la forma
bicóncava del eritrocito y (2) limitar el movimiento de las proteínas integrales de membrana.
Espectrina: principal componente del esqueleto. Proteína fibrosa y alargada de 100nm de largo.
Heterodímero de subunidades α y β. Dos dímeros se unen por sus cabezas y forman un filamento
Anemias
hemolíticas tetramérico de 200nm flexible y elástico. Se add a la membrana por medio de anquirina. Las espectrinas se
arreglan en conjuntos hexa o pentagonales que forman las vallas intracelulares para difusión de proteínas.
Anquirina: Add a espectrina a la membrana. Se une no covalentemente al dominio citoplásmico de Banda 3.
La red de espectrina se construye mediante la unión de ambos extremos de cada filamento de espectrina para formar un
cúmulo de proteínas que incluye un filamentito de actina/tropomiosina que intervienen en la contracción.
Para recordar:
(1) Si a un fantasma se le extraen las proteínas periféricas, la membrana se fragmenta en vesículas [papel de la red proteica
en la integridad de la membrana].
(2) Los eritrocitos son deformables, durables y resisten fuerzas en cizalla que tienden a romperlos [la red proteica confiere
fuerza, elasticidad y flexibilidad a la célula].
El esqueleto de membrana no es exclusivo del eritrocito. Existe en otras células con miembros de la familia de la espectrina y
la anquirina. Por ejemplo, la distrofina es un miembro de la familia de la espectrina que se halla en esqueleto de membrana
de miocitos. Mutaciones en la distrofina ocasionan distrofia muscular (mata a niños). La fodrina es la isoforma de la
espectrina que se halla en la mayoría de las células del cuerpo.

Movimiento de sustancias a través de las membranas celulares

**La MP (1) retiene materiales disueltos en la célula y (2) permite el intercambio de materiales entre el medio IC y EC.
**Los lípidos son ideales para prevenir pérdida de solutos cargados y polares de la célula.
**Flujo neto indica que el movimiento de una sustancia hacia el interior y exterior de la célula no está en equilibrio y que
existe mayor ganancia que pérdida (o mayor pérdida que ganancia) de determinada sustancia.
**Hay dos formas básicas de movimiento de sustancias:
1. Pasivo: es el movimiento de sustancias a favor de un gradiente. Es espontáneo y libera energía.
2. Activo: es el movimiento de sustancias en contra de un gradiente. No es espontáneo y gasta energía.
Clasifi
Tipo Ocurre a través de Ejemplos Sustancia transportada
cación
MOVIMIENTO DE SUSTANCIAS A TRAVÉS DE LAS

Moléculas pequeñas, no
Difusión pasiva

A través de la bicapa Difusión entre los lípidos

Difusión cargadas y apolares
simple Canales iónicos Iones
A través de canales proteicos
Aquaporinas Agua
Difusión Transportadores GLUT Glucosa
A través de transportadores
MEMBRANAS

facilitada Transportadores de aminoácidos Aminoácidos

+ +
Bomba de sodio-potasio 3Na - 2K
+ +
Bomba de potasio-protón H -K
Bombas P ++
A través de Bomba de calcio Ca
Transporte activo

Primario +
bombas Bomba de protones vegetal H
+
Bombas V Bomba de protones vacuolar H
Bombas ABC CFTR, MDR Iones, tóxicos, fármacos
A través de cotransportadores +
Secundario Cotransportador de sodio-glucosa 2Na - 1Glc
(Simporte)
(Cotrans + +
porte) A través de intercambiadores Intercambiador sodio-protón Na - H
+ ++
(Antiporte) Intercambiador sodio-calcio 3Na - 1Ca
Conceptos importantes:
Difusión: Desplazamiento de sustancia de una zona de alta concentración a otra de baja concentración; la difusión termina
cuando se elimina la diferencia de concentraciones. Es un proceso espontáneo (no requiere energía).
Gradiente: Diferencia entre dos compartimentos, separados por una membrana, en cuanto a determinadas magnitudes. El
gradiente puede ser:
 Estructura y función de las membranas
EMP
Gradiente químico: por diferencia de concentraciones de una sustancia entre dos compartimentos.
Gradiente eléctrico: por diferencia de carga eléctrica entre dos compartimentos.
Gradiente electroquímico: por diferencia de concentraciones y de carga eléctrica entre dos compartimentos.
Gradiente de pH: por diferencia de acidez entre dos compartimentos.
Una sustancia puede generar más de un tipo de gradiente (por ejemplo, químico y eléctrico). Ambos factores determinan la
tendencia de una sustancia a difundir o no.
Para generar un gradiente a través de una membrana se requiere el uso de
energía. El fenómeno opuesto a la generación de un gradiente es la difusión.
Una sustancia que atraviesa la membrana puede hacerlo:
A favor de gradiente: cuando difunde, es decir, cuando pasa de la región de mayor
concentración a la región de menor concentración.
Es el movimiento pasivo de sustancias a través de la membrana.
En contra de gradiente: cuando pasa de la región de menor concentración a la
región de mayor concentración.
Es el movimiento activo de sustancias a través de la membrana.

Difusión a través de las membranas

Para que un no electrolito pueda difundir a través de la membrana plasmática:
**Debe estar presente en mayor concentración en un lado de la membrana que en el otro
**La membrana debe ser permeable a esa sustancia
Para que la membrana sea permeable a una sustancia:
**El soluto debe poder pasar directamente a través de la bicapa de lípidos (Difusión simple a través de la bicapa)
**El soluto debe poder cruzar un poro acuoso a través de un canal proteico (Difusión simple a través de canales)

Difusión simple a través de la bicapa lipídica

Es la difusión en la que una sustancia se disuelve en la bicapa lipídica a su paso por la membrana.
Sirve para el movimiento de agua, gases, moléculas pequeñas sin
carga, moléculas apolares.
Para que una sustancia determinada pueda atravesar la bicapa lipídica
se debe considerar el coeficiente de partición y el tamaño de la
molécula.
Coeficiente de partición: es una medida de la polaridad de una
sustancia biológica. Se define como la proporción entre la
solubilidad de un soluto en aceite y la que tiene en agua.
Tamaño: las moléculas pequeñas no cargadas pueden
atravesar la bicapa.
A mayor coeficiente de partición y menor tamaño, mayor
velocidad de penetración en la bicapa
La bicapa lipídica es semipermeable: permeable al agua y a solutos pequeños pero impermeable a moléculas grandes y
cargadas.
Ósmosis: es el paso de agua a través de una membrana semipermeable, de una
región de menor concentración de soluto a una región de mayor concentración de
soluto.
**Si una célula tiene la misma concentración de solutos que el medio en el que se
encuentran, son isotónicos entre sí.
Cuando una célula se coloca en un medio isotónico, ella no gana ni pierde agua por
ósmosis.
**Si una célula tiene mayor concentración
de solutos que el medio en el que se
encuentran, el medio es hipotónico con
respecto a la célula.
Cuando la célula se coloca en un medio
hipotónico, ella gana agua por ósmosis y se
hincha.
**Si una célula tiene menor concentración
de solutos que el medio en el que se
encuentra, el medio es hipertónico con
respecto a la célula.
Cuando la célula se coloca en un medio
hipertónico, ella pierde agua por ósmosis y
se encoge.
 Estructura y función de las membranas
EMP
Funciones de la ósmosis:
1. En animales: las células del epitelio intestinal reabsorben líquidos desde la luz por medio de la ósmosis.
2. En plantas: las células son hipertónicas y generan una “presión de turgencia”, que es una presión interna que
empuja a la pared celular. La presión de turgencia da soporte a las plantas no leñosas y a las hojas. Si una célula
vegetal se coloca en un medio hipertónico, su volumen se reduce conforme la membrana plasmática se separa de la
pared celular que la rodea, proceso conocido como plasmólisis. La plasmólisis hace que las plantas pierdan su
soporte y se marchiten.

Difusión simple a través de canales proteicos

1. Difusión de iones a través de canales iónicos
La conductancia iónica a través de la membrana es el movimiento rápido a través de ella. La conductancia de un canal iónico
se estudia mediante pinza en parche o patch clamp.
La conductancia iónica tiene una función crucial en muchas actividades celulares, incluidas:
a) formación y propagación de un impulso nervioso
b) secreción de sustancias al espacio extracelular
c) contracción muscular
d) regulación del volumen celular
e) abertura de los estomas en las hojas de las plantas
La difusión de iones a través de la membrana se realiza por medio de canales iónicos, que son aberturas de la membrana
permeables a iones específicos. Están formados por proteínas integrales que rodean un poro acuoso central [por eso suelen
llamarse también canales acuosos]. Casi todos son muy selectivos y solo permiten el paso de un tipo particular de iones por
el poro.
La mayoría de los canales son Canales Controlados [con compuertas]
Abiertos por voltaje Abiertos por ligando Controlados mecánicamente
Dependen de la unión específica con un Dependen de fuerzas mecánicas
ligando [que casi nunca es el soluto que [tensión/estiramiento).
se transporta por el canal]. Se encuentran en el oído interno. Son
Dependen de la diferencia de carga
Ach es un ligando extracelular para canales catiónicos que se abren por el
iónica a los lados de la membrana.
entrada de cationes (Sodio?). movimiento de los estereocilios por
cAMP es un ligando intracelular para causa del sonido o de movimientos de
entrada de Calcio. la cabeza.

2. Aquaporinas o canales para agua

La gran permeabilidad de las membranas biológicas al agua se debe principalmente a las aquaporinas.
Sobre las aquaporinas se debe saber que:
(1) son proteínas integrales
(2) permiten el movimiento pasivo de H 2O
(3) las moléculas de agua pasan en una sola fila [aprox mil millones x segundo]
(4) el interior del canal es hidrófobo
Las aquaporinas son muy abundantes en túbulos renales y raíces de plantas. La hormona vasopresina (ADH) activa a la AQP2.
En la diabetes insípida nefrógena congénita los riñones no responden a vasopresina.

Difusión facilitada
Sirve para que azúcares y proteínas puedan atravesar la membrana.
Sobre la difusión facilitada hay que recordar que:
(1) Utiliza un transportador facilitador que promueve la difusión.
(2) El transportador sufre un cambio conformacional al transportar a la
molécula.
(3) El transporte se da en ambos sentidos con la misma facilidad.
(4) Mueven menos cantidad moléculas que los canales.
(5) Se parecen a las enzimas en que: a) son específicos, b) son saturables
(tienen una velocidad máxima) y c) su actividad puede regularse.
 Estructura y función de las membranas
EMP
Los transportadores sirven para aminoácidos, azúcares y solutos polares que no pueden entrar por difusión simple.
Difusión facilitada de glucosa: Se mantiene el gradiente favorable de la glucosa hacia el citosol por medio de la fosforilación
de la glucosa entrante (se disminuye la concentración de glucosa “pura” intracelular). Los transportadores de glucosa son
denominados GLUT y hay del 1 al 5.
GLUT4 es el transportador facilitador de glucosa que responde a insulina. Está presente en hepatocitos, miocitos y adipocitos.
Los GLUT4 están en vesículas del citoplasma y se muestran en la membrana de acuerdo a la concentración de insulina
plasmática.
Niveles ↑ de insulina → GLUT4 en la superficie celular.
Niveles ↓ de insulina → GLUT4 en membranas de vesículas citoplasmáticas.

Transporte Activo
(1) La vida no puede existir en equilibrio; los gradientes a través de la membrana
necesarios para impulsar los sistemas biológicos.
(2) Los gradientes a través de las membranas se generan mediante transporte activo.
(3) El transporte activo se da por medio de proteínas integrales que
a) Son selectivas
b) Sufren cambios de conformación que impulsan el movimiento del soluto a
través de la membrana.
(4) El transporte activo es un proceso acoplado a otro proceso exergónico, como:
a) La hidrólisis de ATP b) El flujo de una sustancia a favor de gradiente
c) El transporte de electrones d) La absorbancia de luz
(5) El transporte activo es unidireccional.

Transporte Activo Primario

Gasta ATP directamente para impulsar el transporte de solutos.
Existen diferentes tipos de bombas ATPasas: las de tipo P, las de tipo V y las de tipo ABC [ATP Binding Cassete].

Bombas P
La “P” se refiere a la fosforilación que sufre la proteína, lo que modifica su conformación y su afinidad por los solutos.
Bomba de Na+/K+
+ +
Expulsa tres Na e introduce dos K
(1) Presente solo en células animales, en células epiteliales se encuentra en la superficie basolateral.
+ +
(2) Es electrogénica: produce el exceso de Na en el compartimento EC y el exceso de K en el compartimento IC.
+ +
(3) Transporta 3 Na por cada 2 K (relación 3:2), con lo que contribuye a la separación de cargas a través de la MP.
(4) Consume 1/3 de la energía producida por la mayoría de las células y 2/3 de la energía de las células nerviosas.
(5) La digital inhibe a la bomba de sodio potasio, es utilizada para reforzar la contracción cardíaca.
(5) Funciones de la Na+/K+ ATPasa:
a) Mantener el volumen celular b) Generar grandes gradientes de Na+ y K+.
2+
Ca ATPasa
En REL, transporta calcio del citosol a la luz del ER.
Bomba de H+ vegetal
En la membrana plasmática, posee 3 funciones:
1) Transporte secundario de solutos
2) Control del pH del citosol
3) Control del crecimiento celular mediante acidificación
de la pared celular.
Bomba de K+/H+
(1) Se encuentra en células parietales gástricas, responsable de
secreción ácida del estómago. 2K+
(2) Secreta ácido concentrado 0,16N.
(3) En reposo: las bombas no son funcionales porque se hallan en
membranas de vesículas citoplásmicas.
(4) Histamina → Vesículas se fusionan con MP → Bombas
secretan ácido.
(5) El ácido gástrico se encarga de la digestión y produce pirosis.
(6) El omeprazol inhibe a la ATPasa (previene pirosis).

Bombas V
(1) No se fosforilan.
(2) Secretan H+ en vacuolas y organelas citoplásmicas (lisosomas y gránulos secretorios).
(3) Se ubican en la MP de varias células, p. ej. en los túbulos renales donde mantienen el equilibrio ácido base mediante
secreción de H+ a la orina.
 Estructura y función de las membranas
EMP
Bombas ABC
(1) Constituyen la mayor familia de transportadores de membrana.
(2) Se caracterizan por tener dominios de unión a ATP altamente conservados.
(3) Impulsa el transporte de iones, azúcares, aminoácidos al interior celular, o expulsan tóxicos desde el interior celular.

Transporte Activo Secundario o Cotransporte

Gasta ATP indirectamente. Aprovecha la energía potencial almacenada en el gradiente de una sustancia. Se clasifica en
simporte y antiporte.

Simporte
La molécula se transporta en contra de su gradiente en el mismo
sentido que el soluto que entra a favor de gradiente.
+
Simporte Na /Glucosa:
En el epitelio intestinal: la glucosa entra al enterocito por
cotransporte con sodio (2 de sodio por cada glucosa). El
+
cotransportador de Na /glucosa es capaz de transportar glucosa al
interior de la célula contra un gradiente de concentración 20mil
veces mayor. El cotransporte sirve para absorción de glucosa y
aminoácidos en intestino y túbulos renales.
Otros:
En plantas, existe cotransporte de sacarosa/H+, aminoácidos y
nitratos.

Antiporte
La molécula se transporta en contra de su gradiente en sentido
contrario al soluto que entra a favor de gradiente.
Las células a menudo mantienen el pH interno por medio de
intercambiadores Na+/H+. Las proteínas de contratransporte
suelen llamarse intercambiadores

Potenciales de membrana e impulsos nerviosos

Todos los organismos responden a la estimulación externa, es una propiedad llamada irritabilidad. La irritabilidad depende
de las propiedades básicas de las membranas, que van a conducir a la formación y propagación de un impulso nervioso.
Las neuronas son las células del sistema nervioso. Recolectan, conducen y transmiten información como impulsos nerviosos
que se mueven con rapidez.
La anatomía de las neuronas se resume en:
Cuerpo o soma: El centro metabólico.
Dendritas: Reciben la información entrante. Son múltiples.
Axón: Conduce el impulso saliente. Es único.
Botones terminales: Sitios especializados donde el impulso se transmite a la célula blanco.
Vaina de mielina: Cubierta lipídica aislante consistente en la membrana plasmática de células de la glía.
En el SNC está formada por oligodendrocitos. En el SNP está formada por células de Schwann.
Nodos de Ranvier: Espacio entre vainas de mielina contiguas. Posee canales de Sodio

Potencial de reposo
Diferencia de potencial: Es la diferencia de carga entre dos compartimentos separados por membrana, es decir, el voltaje a
través de la membrana que los separa.
Potencial de membrana: Es la diferencia de potencial eléctrico a través de la membrana.
Potencial de reposo: Es la diferencia de potencial medida en una célula excitable cuando no está sujeta a estimulación
externa.
Potencial de acción: Cambios colectivos en el potencial de membrana; empiezan con la despolarización hasta el umbral y
terminan con el regreso al potencial de reposo. Ocurre con la estimulación de una célula excitable y sirve como base para la
comunicación neuronal.
Potencial de membrana En células no excitables
Potencial de membrana
[-15 a -100 mV] Potencial de reposo En células excitables (Miocitos y neuronas)
+
Los potenciales de reposo son muy negativos gracias a que, en la neurona en reposo, existen canales de fuga para K
+
abiertos. El movimiento de iones K a través de la membrana es el factor más importante para calcular el potencial de
reposo.
Un estímulo nervioso causa la entrada de iones con carga positiva a la neurona: ocurre una despolarización (el potencial se
hace más positivo, más cercano a cero). Si el estímulo es fuerte como para despolarizar a la membrana más allá de un
potencial umbral (-50mV), ocurre un potencial de acción.
 Estructura y función de las membranas
EMP

Si se alcanza el umbral, ocurre la siguiente

secuencia:
(1) Aumenta la permeabilidad de la membrana
a Na+ mediante canales activados por voltaje
[el Na+ penetra a la célula]. El potencial de
membrana se hace positivo (+40mV).
(2) Los canales de Na+ se desactivan por un
péptido de desactivación; se abren canales de
K+ activados por voltaje [el K+ sale de la célula].
El potencial de membrana se vuelve muy
negativo (-80mV)
1 2 3 (3) El potencial negativo intenso cierra los
canales de K+; la membrana vuelve al estado
de reposo.
La secuencia anterior ocurre cada vez que se
genera un potencial de acción.

La Na+/K+ ATPasa devuelve los iones a sus compartimentos luego del potencial de acción. El potencial de acción sigue la ley
+ +
del “todo o nada”. El potencial de acción no cambia la concentración de Na ni K en los compartimentos (es insignificante).
El potencial de acción dura 5ms en axones de calamar gigante y menos de 1ms en una neurona mielinizada.
Anestésicos locales como la procaína y la novocaína cierran canales iónicos de células sensitivas y neuronas (no hay potencial
de acción, no se transmite el impulso nervioso, o sea, el dolor).

Propagación del potencial de acción

El potencial de acción iniciado se propaga como impulso nervioso a lo largo de la célula hasta las terminaciones nerviosas.
Una vez emitido, una sucesión de potenciales de acción recorrerá toda la longitud de la neurona sin que pierda intensidad.
Llega a la célula blanco con la misma fuerza que tenía en su punto de origen.
↑Diámetro (Velocidad aumenta con la raíz cuadrada del aumento de diámetro)
↑Velocidad de conducción
Mielina (Aumenta hasta 20 veces la velocidad de lo que sería en una fibra amielínica)
La conducción del impulso nervioso por un axón mielinizado se denomina conducción saltatoria. Errores en formación de la
vaina de mielina se observan en la esclerosis múltiple.

Neurotransmisión: SINAPSIS
Las neuronas están vinculadas con sus células blanco mediante uniones
especializadas llamadas sinapsis. Se considera que el cerebro humano
14
posee 10 de sinapsis.
Componentes de la sinapsis:
Célula presináptica: Puede ser una célula receptora o una neurona),
conduce los impulsos hacia la sinapsis.
Célula postsináptica: Puede ser una neurona, una célula muscular o una
célula glandular. Recibe los neurotransmisores emitidos por la célula
presináptica.
Vesícula sináptica: Presentes en los botones terminales. Son sitios de
almacenamiento para los neurotransmisores.
Neurotransmisores: Sustancias de bajo peso molecular, secretadas por la
célula presináptica. Poseen receptores en la membrana de la célula
postsináptica.
Hendidura sináptica: Brecha entre la célula presináptica y la postsináptica.
Mide 20 a 50nm.
Secuencia de la sinapsis:
Mecanismo de la sinapsis:
(1) Llegada del impulso nervioso al botón terminal
(2) Abertura de canales de Ca++ activados por voltaje
(3) Fusión de las vesículas sinápticas con la membrana plasmática
(4) Liberación de neurotransmisores a la hendidura sináptica
(5) Unión selectiva de neurotransmisores a receptores

Receptor excitador: Canal catiónico (Na+)

Despolarización.
Receptor Inhibidor: Canal aniónico (Cl-)
Hiperpolarización.
 Estructura y función de las membranas
EMP
El neurotransmisor debe eliminarse para que el estímulo no sea prolongado.
Se elimina:
a) Por enzimas que destruyen al neurotransmisor en la hendidura sináptica (por ej, acetilcolinesterasa)
b) por proteínas que transportan neurotransmisores de vuelta a la hendidura presináptica (recaptación)

Acciones de drogas sobre la sinapsis

Drogas Proteína Inhibida Acción Efectos
Interfiere en la degradación del Contracción violenta de
DFP (Gas nervioso) Acetilcolinesterasa
neurotransmisor músculos
Antidepresores Transportador de
Evita recaptación de serotonina Mejora el estado de ánimo
(fluoroxetina) serotonina
Transportador de Evita recaptación de dopamina en Euforia y ansias de repetir la
Cocaína
dopamina sistema límbico experiencia
Transportador de Liberación excesiva de dopamina +
Anfetaminas Euforia
dopamina y ¿? evita recaptación de dopamina
Receptores
Evita liberación de Efectos sobre la memoria,
Marihuana carabinoides (CB1) de
neurotransmisores en hipocampo, apetito y coordinación
(tetrahidrocanabinol) terminación
hipotálamo y cerebelo. motora.
presináptica
 Mitocondrias
EMP

RESPIRACIÓN AEROBIA Y MITOCONDRIAS

Los organismos cuyo metabolismo y obtención de energía no depende de oxígeno se denominan anaerobios; los organismos dependientes
de oxígeno se denominan aerobios. En los eucariotas, la utilización de oxígeno como medio de extracción de energía ocurre en un organelo
especializado, la mitocondria.
Anaerobios: Combustibles (Alimentos) Ácido Láctico, Etanol [Se desechan]
Aerobios: Combustibles (Alimentos) CO2, H2O [Se desechan]
Energía

Estructura y Función de la Mitocondria

Las mitocondrias son lo bastante grandes para verse al MO y su presencia en la célula se conoce desde hace más de 100
años. Según sea el tipo celular, las mitocondrias tienen una estructura general muy distinta: (1)organelos individuales en
forma de salchicha de 1 a 4μm de largo y (2)red tubular interconectada muy ramificada.
Las mitocondrias pueden fusionarse entre sí (fusión) o dividirse en dos (fisión). Es probable que el equilibrio entre fusión y
fisión sea un factor determinante del número y morfología mitocondriales.
Mitocondrias Ocupan 15-20% del volumen de un hepatocito promedio de mamífero, contienen >1000 proteínas diferentes.
hepáticas A menudo, se relacionan con gotitas de AG a partir de las que obtienen materias primas para oxidar.
Mitocondrias del Muchas veces se localizan en la porción intermedia [pieza central], justo detrás del núcleo. El ATP producido
espermatozoide por estas mitocondrias impulsa los movimientos del espermatozoide.
Mitocondrias de Principales productoras de ATP en tejidos no fotosintéticos; fuente de ATP en hojas fotosintéticas en periodos
células vegetales de oscuridad.
Funciones de la mitocondria:
* Metabolismo energético de tipo aerobio
* Síntesis de numerosas sustancias (ciertos aminoácidos, grupos hemo)
2+
* Regulación de [Ca ] citosólico junto con el REL
* Muerte Celular Programada
* Producción de calor en células de la grasa parda
La mitocondria posee dos membranas, las membranas mitocondriales
externa e interna. La membrana mitocondrial externa rodea a la
mitocondria completa y sirve como límite exterior. El interior del organelo
contiene una serie de hojas membranosas de doble capa, llamadas crestas,
que poseen una alta superficie de membrana que contiene la maquinaria
necesaria para la síntesis de ATP.
Las membranas de la mitocondria dividen al organelo en dos
compartimentos acuosos: uno en el interior de la mitocondria, llamado
matriz, y el segundo entre las membranas interna y externa, llamado
espacio intermembranoso.
La matriz tiene consistencia gelatinosa por la elevada concentración de
proteínas hidrosolubles (500mg/ml). Las proteínas del EIM son mejor
conocidas por su participación en el inicio del suicidio celular.
Membranas mitocondriales:
Membrana Mitocondrial Externa (MME) Membrana Mitocondrial Interna (MMI)
Cerca del 50% del peso lo constituyen los lípidos (1:1) Proporción proteína/lípido muy alta (más de 3:1)
Contiene más de 100 polipéptidos diferentes; entre ellos: la cadena
Contiene enzimas que participan en actividades como: oxidación de
respiratoria, la ATP sintetasa, y varias participantes en captación y
adrenalina, degradación del Trp, elongación de AG.
liberación de iones calcio; también transportadores.
Contiene proteínas porinas, lo que le da semejanza con la Contiene el fosfolípido cardiolipina, lo que le da semejanza
pared celular bacteriana con la membrana plasmática bacteriana
Cuando las porinas se abren, la membrana externa es Es impermeable: todas las moléculas requieren
permeable a ATP, NAD, CoA, entre otros. transportadores de membrana especiales.
La composición y organización de la MMI son claves para las actividades bioenergéticas de la mitocondria. La configuración de la
membrana interna y la aparente fluidez de su bicapa facilitan las interacciones necesarias para la síntesis de ATP.

Matriz Mitocondrial:
Contiene varias enzimas, ribosomas (de tamaño mucho menor a los citosólicos) y varias moléculas de DNA circular: tienen su
propio material genético y los mecanismos para producir su propio RNA y proteínas. Este DNA no cromosómico codifica:
(a) 13 mRNA que codifican 13 polipéptidos mitocondriales, que se integran a la MMI junto con polipéptidos importados.
(b) 2 rRNA 12S y 16S, que participan en ribosomas 55S mitocondriales.
(c) 22 tRNA que se utilizan en la síntesis proteica dentro del organelo.
El mtDNA es el legado de una sola bacteria aeróbica que se instaló en el citoplasma de una célula primitiva, que al final se convirtió en
ancestro de todas las eucariotas. La mayoría de los genes de este simbionte ancestral se perdió o se transfirió al núcleo y solo dejó un
puñado de genes para codificar algunas de las proteínas más hidrófobas de la MMI.

El mtDNA es apropiado para su uso en el estudio de las migraciones y la evolución del ser humano.
 Mitocondrias
EMP
Glicólisis Es una vía metabólica citosólica destinada a la
oxidación parcial de azúcares. Consiste en una
serie de 10 reacciones catalizadas por 10 enzimas
Glucosa
citosólicas diferentes. Es una vía anaeróbica para
ATP la producción de ATP.

Hexocinasa La glucólisis puede generar una cantidad limitada

de moléculas de ATP en ausencia de oxígeno.
Durante la glicólisis, se forman dos moléculas de
ADP Glucosa - 6 - gliceraldehído – 3 – fosfato por cada glucosa, por
fosfato lo que las reacciones 6 a la 10 ocurren 2 veces por
cada molécula de glucosa oxidada.
Fosfoglucoisomerasa Deben hidrolizarse 2 moléculas de ATP para
iniciar la glucólisis, en cambio, cada molécula de
glucosa que se oxida hasta piruvato genera 4
Fructosa - 6 - moléculas de ATP. Esto deja una ganancia neta
fosfato celular de 2 ATP por cada glucosa oxidada.
ATP
La mayor parte de la energía que estaba presente
Fosfofructocinasa en la glucosa permanece almacenada en el
piruvato.
El piruvato, producto final de la glicólisis, es un
Dihidroxi
ADP Fructosa - 1,6 compuesto clave porque se encuentra en el punto
- bis fosfato acetona
de unión entre la vía anaeróbica y aeróbica.
fosfato
Observación:
Aldolasa El ATP generado en la glicólisis se produce por un
TriosaFosfato mecanismo denominado fosforilación a nivel de
isomerasa sustrato (FaNS).
Gliceraldehído
- 3 - fosfato La FaNS es la síntesis directa de ATP mediante la
2 NAD
transferencia de un fosfato desde un sustrato al
Gliceraldehído - 3 - fosfato ADP (¡no está acoplada a la oxidación de
deshidrogenasa coenzimas ni se realiza mediante ATP sintetasa!)
Las reacciones de la glicólisis ocurren en el citosol
2 NADH 1,3 - bisfosfo y generan piruvato y NADH.
glicerato En ausencia de oxígeno:
2 ADP El piruvato es reducido a lactato o etanol por el
NADH (con el fin de recuperar NAD+ y reutilizarlo
Fosfoglicerato cinasa en la continuación de la glicólisis).
En presencia de oxígeno:
El piruvato se mueve a la matriz mitocondrial,
2 ATP 3-
donde se descarboxila y se une a CoA, formando
fosfoglicerato
AcCoA y generando NADH; el NADH que fue
producido en la glicólisis no puede atravesar la
Fosfoglicero mutasa MMI y dona sus electrones a una molécula que
pueda atravesarla.

2-
fosfoglicerato

Enolasa

Fosfoenol
piruvato
2 ADP

Piruvato cinasa

2 ATP Piruvato
 Mitocondrias
EMP
Si toda la energía del transporte de electrones se usara para la formación de ATP, podrían generarse cerca de 36 moléculas
de ATP a partir de una sola molécula de glucosa.

Metabolismo Oxidativo en la Mitocondria

En presencia de oxígeno, los organismos aerobios son
capaces de extraer grandes cantidades de energía
adicional del piruvato y del NADH producidos durante la
glicólisis, suficiente para sintetizar más de 30 moléculas
adicionales de ATP. Esta energía se extrae en las
mitocondrias.

Descarboxilación Oxidativa del Piruvato:

Síntesis de la Acetil Coenzima A
Cada molécula de piruvato producida en la glicólisis se
transporta a través de la MMI y hacia la matriz, donde
se descarboxila para formar un grupo acetilo. El grupo
acetilo se transfiere a la CoA (derivada del ácido
pantoténico) para producir AcetilCoA.
La reacción es catalizada por el complejo multienzimático deshidrogenasa de piruvato, y produce también 1NADH por cada
molécula de piruvato (es decir, 2 x glucosa).
Piru v ato + C oA SH + N AD + → A ce ti lC oA + C O 2 + N ADH ,H +

Ciclo del ácido tricarboxílico (ATC) o Ciclo de Krebs:

La acetil-CoA ingresa a una vía cíclica, el ATC, en el que se oxida el sustrato y se conserva su energía. Todas las enzimas del
ATC residen en la fase soluble de la matriz, excepto la deshidrogenasa de succinato que reside en el complejo II de la cadena
transportadora de electrones.

Acetil CoA (2C)

Citrato
sintasa Citrato (6C)

Aconitasa
Oxalacetato Isocitrato
NADH (4C) (6C)

Malato Isocitrato NADH

deshidrogenasa deshidrogenasa

α - ceto
Malato (4C)
glutarato (5C)

α ceto glutarato
Fumarasa deshidrogenasa

Fumarato Succinil - CoA NADH

(4C) Succinato Succinato (4C)
sintasa deshidrogenasa

Succinato
(4C)
GTP

FADH
 Mitocondrias
EMP
El primer paso del ATC es la condensación del acetilo (2C) con un oxaloacetato (4C), para formar una molécula de citrato (6C).
Durante el ciclo se reduce la longitud de la molécula de citrato, un carbono a la vez, lo que regenera la molécula de
oxaloacetato de 4C que puede condensarse con otra acetil-CoA.
Los dos carbonos que se desprenden durante el ATC no son los mismos que ingresaron con el acetilo y son los que se oxidan
por completo hasta CO2.
Durante el ATC ocurren 4 reacciones en las que un par de electrones se transfieren de un sustrato a una coenzima receptora
de electrones:
*Tres de las reacciones reducen a NAD+ a NADH
*Una reacción reduce a FAD a FADH2
Ocurre también la formación de un GTP, que da lugar a un ATP.

Sintetizando, el ATC nos produce 3NADH, 1FADH 2 y 1ATP por cada Ac-CoA.
Ac - Co A + 2H 2 O + F A D + 3N AD + + GD P + P i →
2C O2 + FA DH 2 + 3NA DH,H + + GT P + Co A SH

El ATC es una vía metabólica crítica. Los metabolitos de este ciclo son los mismos compuestos generados en la mayoría de las
vías catabólicas de la célula. Parece que todas las macromoléculas que proporcionan energía a la célula (polisacáridos, grasas
y proteínas) se degradan hasta metabolitos del ATC. Por tanto, la mitocondria se convierte en el centro de los pasos finales
para la conservación de la energía sin importar cuál sea la naturaleza del material inicial.
El esquema de abajo resume lo que ocurre en el catabolismo de glucosa y en el catabolismo de los ácidos grasos (β-
oxidación), con los productos resultantes.
Con respecto a los aminoácidos: Hay 7 moléculas que sirven como
“entrada” a los aminoácidos al catabolismo general. Estas moléculas son:
Acetoacetil-CoA; Acetil-CoA; Piruvato;
α-cetoglutarato; Succinil-CoA; Fumarato y Oxaloacetato.

Importancia de las coenzimas reducidas en la formación de ATP

Las coenzimas que se reducen a lo largo de las vías metabólicas revisadas hasta ahora son NADH y FADH2; ambas contienen
electrones de alta energía retirados de los de la oxidación de los alimentos.
El NADH glicolítico es formado en el citosol y las mitocondrias son incapaces de importarlo; en lugar de eso, los electrones de
NADH se utilizan para reducir un metabolito de bajo peso molecular que puede:
*Entrar a la mitocondria y generar NADH (mediante lanzadera de malato – aspartato), lo que deriva a la formación de 3ATP
*Transferir los electrones a FADH2 (mediante lanzadera de glicerol – fosfato), lo que deriva a la formación de 2ATP
Ambos mecanismos permiten que los electrones del NADH citosólico ingresen a la cadena transportadora de electrones.
El uso de las coenzimas reducidas puede dividirse en dos pasos:
Paso 1: Los electrones de NADH o FADH2 pasan al primero de una serie de transportadores de electrones de la cadena, que
se ubica en la MMI. El paso de los electrones por la cadena libera energía que sirve para bombear protones desde la matriz
mitocondrial al espacio intermembranoso: se establece un gradiente electroquímico de protones a través de la MMI. El
aceptor final de los electrones de baja energía es el oxígeno molecular (que se reduce al formar agua).
Paso 2: Los protones bombeados al espacio intermembranoso regresan a la matriz a través de la ATP sintetasa, que fosforila
ADP para formar ATP. Es el mecanismo quimioosmótico para la síntesis de ATP.
 Mitocondrias
EMP
TABLA con los productos del CATABOLISMO de una molécula de GLUCOSA
COENZIMA
VÍA METABÓLICA ENZIMA ATP POR FANS ATP POR FOx DESECHO
REDUCIDA
Hexoquinasa - ATP
Fosfofructoquinasa - ATP
Gliceraldehido3PDH NADH (x2) + 2 ó +3 ATP (x2)
Glicólisis
Difosfogliceratoquinasa + ATP (x2)
Enolasa H2O (x2)
Piruvatoquinasa + ATP (x2)
Formación de AcCoA Piruvato Deshidrogenasa NADH (x2) + 3 ATP (x2) CO2 (x2)
IsocitratoDH NADH (x2) + 3 ATP (x2) CO2 (x2)
AlfacetoglutaratoDH NADH (x2) + 3 ATP (x2) CO2 (x2)
Ciclo del ácido
Succinil CoA sintetasa + GTP (x2)
tricarboxílico
Succinato DH FADH2 (x2) + 2 ATP (x2)
Malato DH NADH (x2) + 3 ATP (x2)
TOTAL DE ATP OBTENIDO POR GLUCOSA 36 a 38 moléculas de ATP
Observaciones: Se muestran entre paréntesis el número de moléculas obtenidas por cada GLUCOSA oxidada. Debe saberse que los electrones de NADH
brindan energía para síntesis de 3ATP mediante FOx; FADH2 brinda energía para síntesis de 2ATP mediante FOx.

Función de la Mitocondria en la Formación de ATP

Las mitocondrias son plantas energéticas en miniatura, pues extraen la energía de materiales orgánicos y la almacenan por
un tiempo en forma de energía eléctrica: la energía obtenida de los sustratos se utiliza para generar un gradiente iónico a
través de la membrana mitocondrial interna.
El uso de gradientes iónicos como forma de energía requiere varios componentes: (1) un sistema para generar el gradiente;
(2) una membrana capaz de mantenerlo y (3) mecanismos para derivar el gradiente de tal manera a realizar un trabajo.
La fosforilación oxidativa (FOx) es el proceso por el que las mitocondrias emplean el gradiente de protones a través de su
26
membrana interna para impulsar la síntesis de ATP. La FOx produce más de 2x10 moléculas (>160Kg) de ATP en el humano
cada día.

Transporte de electrones
COMPLEJO I O NADH DESHIDROGENASA
Los electrones de NADH entran a la cadena respiratoria a través del
complejo I, el cual transfiere electrones a la ubiquinona.
COMPLEJO II O SUCCINATO DESHIDROGENASA
Los electrones de FADH2 entran a la cadena respiratoria a través del
complejo II, el cual transfiere electrones a la ubiquinona. FADH 2
forma parte de la estructura de la succinato deshidrogenasa.
Coenzima Q o Ubiquinona
No forma parte de ningún complejo. No es un grupo prostético. Es
liposoluble en la membrana mitocondrial interna. Transporta
electrones desde el complejo I y el complejo II hacia el complejo III.
COMPLEJO III O CITOCROMO bc1
Recibe a los electrones de ubiquinol y reduce al citocromo c.
Citocromo C
No forma parte de ningún complejo. Es soluble y existe en el espacio
intermembranoso. Transporta electrones desde el complejo III hacia
el complejo IV.
COMPLEJO IV O CITOCROMO OXIDASA
Oxida al citocromo C y reduce al oxígeno molecular. Utiliza protones
para el bombeo y para la formación de agua. Es el único complejo
que contiene átomos de cobre. El monóxido de carbono, la azida y el
cianuro son venenos que afectan al complejo IV.
OJO:
La cadena transportadora es parte de la MMI, a excepción de Citocromo c que es soluble en el espacio intermembranoso.
Los elementos de la cadena transportadora de mamíferos contienen en conjunto cerca de 70 polipéptidos diferentes (74).
Los electrones corren a través de la cadena respiratoria siguiendo un potencial de reducción positivo creciente.
Bombean protones hacia el espacio intermembranoso el complejo I, el complejo III y el complejo IV.
El complejo II es particular porque no bombea protones y contiene a la succinato deshidrogenasa del ciclo de Krebs.
El aceptor final de electrones es el oxígeno molecular, que se reduce para formar dos moléculas de agua.
El agua formada en la reacción catalizada por el complejo IV es el “agua metabólica”. Los seres humanos producen unos
300ml de agua metabólica al día.
 Mitocondrias
EMP

Tipos de portadores de electrones

La cadena transportadora se compone de cinco tipos de portadores de electrones unidos con la membrana: flavoproteínas,
citocromos, átomos de cobre, ubiquinona y proteínas con hierro y azufre. Todos los centros redox de la cadena respiratoria
son grupos prostéticos a excepción de la ubiquinona.
Flavoproteínas: Ubiquinona:
 Consisten en un polipéptido unido con fuerza a FAD o a FMN.  Es liposoluble, contiene una cadena hidrófoba de
 FAD y FMN son grupos prostéticos derivados de vitamina B2. subunidades isoprenoides.
 Aceptan y donan dos protones y dos electrones.  Permanece dentro de la MMI, donde puede difundir hacia los
lados.
 Ejemplos: NADH deshidrogenasa (posee FMN) y Succinato
deshidrogenasa (posee FAD).  Aceptan y donan dos protones y dos electrones.
 Desde el estado más oxidado al más reducido:
Citocromos:
Ubiquinona → ubisemiquinona → ubiquinol.
 Consisten en proteínas con grupo prostético hemo.
Proteínas con hierro y azufre:
 Aceptan y donan un solo electrón.
 Proteínas que contienen hierro no formando parte de hemo,
 Citocromo a, citocromo b y citocromo c difieren entre sí por
sino unidos con átomos de azufre inorgánico.
las sustituciones dentro del grupo hemo.
 Los centros más comunes contienen dos o cuatro átomos de
Átomos de cobre:
hierro y azufre [2Fe-2S] ó [4Fe-4S] vinculados a las Cys.
 Son tres y se localizan en el complejo IV u oxidasa de
 Aceptan y donan un solo electrón.
citocromo.
 Potencial redox depende de la hidrofobicidad y carga de los
 Aceptan y donan un solo electrón.
residuos de su ambiente local.

Complejos transportadores de electrones

Complejo I:  Incluye una flavoproteína con FAD, tres centros de Fe/S y
 También llamado NADH deshidrogenasa. Es el punto de un grupo hemo que atrae electrones escapados.
entrada de los electrones de NADH a la cadena  No bombea protones.
respiratoria. Complejo III:
 Cataliza la transferencia de un par de electrones de NADH  También llamado Citocromo bc1.
a la ubiquinona para formar ubiquinol.  Cataliza la transferencia de electrones de ubiquinol a
 En mamíferos: Forma de L, 46 subunidades (7 de ellas citocromo c.
codificadas en el ADNmt) y PM > 900 000 Da.  11 subunidades (1 de ellas codificada en el ADNmt)
 Incluye una flavoproteína con FMN, siete centros de Fe/S y  Incluye citocromo b, citocromo c1 y una proteína Fe/S.
dos moléculas unidas de ubiquinona.  Un par de electrones causa el bombeo de cuatro protones
 Un par de electrones causa el bombeo de cuatro protones hacia el EIM.
hacia el EIM. Complejo IV:
 Disfunción del complejo I produce neurodegeneración.  También llamado oxidasa de citocromo.
Complejo II:  Cataliza la transferencia sucesiva de electrones del
 También llamado Succinato deshidrogenasa. Es el punto de citocromo c reducido al oxígeno. Cataliza la reducción del
entrada de los electrones de FADH2 a la cadena O2.
respiratoria.  13 subunidades (3 de ellas codificadas en el ADNmt).
 Es una enzima que participa en el ciclo de Krebs.  Incluye dos átomos de cobre y dos citocromos a.
 Alimenta los electrones de baja energía del succinato a  Por cada molécula de O2 reducida se captan 8 protones de
FAD y ubiquinona. la matriz: protones bombeados y protones de sustrato.
 4 subunidades, todas codificadas en el ADN nuclear. 2 son  El CO, la azida y el cianuro son venenos que afectan a la
hidrófobas (transmembranosas) y 2 son hidrófilas oxidasa de citocromo.
(succinato DH).
 Mitocondrias
EMP
Traslocación de Protones y Establecimiento de una Fuerza Protonmotriz
La traslocación de protones a través de la MMI es electrogénica porque aumenta la cantidad de cargas positivas en el EIM y
el citosol, así como una mayor cantidad de cargas negativas dentro de la matriz. El gradiente de protones considera dos
componentes:
*Diferencia de concentración: Es una diferencia de pH de aprox 0,5 entre un lado de la membrana y el otro (20%)
*Diferencia de voltaje: Es producido por la separación de cargas a través de la membrana (80%)
Ambos componentes definen el gradiente electroquímico de protones a través de la MMI. La energía presente en ambos
componentes de este gradiente pueden combinarse y expresarse como “fuerza motriz de protones” o ∆p. Para que se
mantenga una fuerza motriz de protones es necesario que la MMI permanezca muy impermeable a los protones.
Desacople entre oxidación de alimentos y FOx: Conduce a la liberación de energía en forma de calor. Puede ser:
A) Artificial o farmacológico: Dinitrofenol (DNP) es una sustancia liposoluble que continúa la oxidación de sustrato sin poder
generar ATP. Se combina con los protones y, debido a su solubilidad en lípidos, transporta protones a través de la MMI en
favor del gradiente electroquímico.
B) Fisiológico: Proteínas de desacoplamiento (UPC) presentes en la MMI de ciertas células. Son muy abundantes en tejido
adiposo pardo de los mamíferos. Las UCP de la MMI impiden la acumulación de una fuerza protonmotriz excesivamente
grande; de existir tal estado de alta energía se podría bloquear el paso de electrones a través de la cadena, causando escape
de electrones y producción de radicales libres.
UCP en el tejido pardo: Fuente de producción de calor durante exposición a bajas temperaturas. Los lactantes dependen de
la grasa parda para mantener la temperatura corporal; la grasa parda desaparece con el crecimiento del individuo y pasamos
a depender de la contracción muscular para la generación de calor.
UCP1: Blanco farmacológico para la pérdida de peso.
UCP2 a UCP5: En varios tejidos, en especial en sistema nervioso.

Mecanismos para la formación de ATP

La ATPsintetasa es una enzima de la MMI encargada de la síntesis de ATP por fosforilación oxidativa. Las partículas
pediculadas de la ATPsintetasa fueron descubiertas en la MMI con la técnica de tinción negativa. La ATPsintetasa puede
comportarse como una ATPasa, pero las mitocondrias utilizan la fuerza motriz de protones como impulso para que la enzima
produzca ATP en lugar de hidrolizarlo.
Estructura de la ATPsintetasa
La ATPsintetasa es un complejo proteico con forma de hongo; consta
de dos porciones denominadas F1 y F0.
La porción F0 es transmembranosa mientras que la porción F1 se orienta
hacia la matriz mitocondrial, uniéndose a F0 por un tallo proteico
central y otro periférico. Una mitocondria de hígado de mamífero tiene
apenas 15 000 copias de la ATPsintetasa.
Existen ATPsintetasas en: (1)Membrana plasmática de bacterias,
(2)Membrana tilacoidea de cloroplastos y (3)membrana interna
mitocondrial.
Porción F1:
Se orienta hacia la matriz mitocondrial. 90Å Ø.
Formada por cinco polipéptidos con la estequiometria α3β3δγε, todos
codificados en el ADN nuclear y sintetizados en el citosol, importados
postraduccionalmente a la mitocondria.
Subunidades alfa: Se disponen alternadamente con las subunidades beta en la cabeza de F 1.
Subunidades beta: Se disponen alternadamente con las subunidades alfa en la cabeza de F1. La porción F1 posee tres
sitios catalíticos para la síntesis de ATP, uno en cada subunidad beta.
Subunidad delta: Forma un tallo periférico junto a las subunidades b de F 0 que sujeta a las subunidades alfa y beta
en una posición fija.
Subunidad gamma: Forma el tallo central. Se extiende desde la punta exterior de la cabeza de F1 por el tallo central
y hace contacto con la porción basal F0. Transmite los cambios de conformación de F0 a los sitios catalíticos en F1.
Subunidad épsilon: Ayuda a unir la subunidad gamma con la base F0. Gira con la subunidad gamma.
Porción F0:
Incrustada en la MMI. Consiste en tres polipéptidos con la Experimento de partículas submitocondriales
estequiometria ab2c10-14. Contiene un canal por el que se Partículas submitocondriales Partículas submitocondriales
conducen los protones de regreso a la matriz. intactas sin F1
Oxidan sustratos, generan Oxidan sustratos, no generan
Subunidad a: Contiene el canal de protones que +
gradientes de H , sintetizan ATP gradientes, no sintetizan ATP
permite que estos crucen la membrana.
Subunidades b: Forman un tallo periférico junto a la subunidad delta de F 1 que sujeta a las subunidades alfa y beta
en una posición fija.
Subunidades c: Forman un anillo giratorio dentro de la membrana cuyo giro es impulsado por el movimiento de
protones “colina abajo” de regreso a la matriz.
 Mitocondrias
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La base de la formación de ATP de acuerdo con el mecanismo de cambio de unión
1. La energía liberada con el movimiento del protón no se usa para impulsar la fosforilación de ADP de forma directa, sino
que se emplea en cambiar la afinidad de unión del sitio activo por el producto ATP
Cuando el ADP y el Pi se unen dentro del sitio catalítico de la ATPsintetasa, los dos reactivos se condensan con facilidad para
formar una molécula de ATP sin requerimientos de energía para impulsar la formación del enlace, esto ocurre de forma
espontánea.
La energía se requiere para la liberación del producto que está unido con fuerza en el sitio catalítico y no para el fenómeno
mismo de fosforilación.
2. Cada sitio activo progresa de manera sucesiva por tres diferentes conformaciones con afinidades distintas por los
sustratos y productos
En cualquier momento, los tres sitios catalíticos están presentes en conformaciones diferentes, lo cual hace que tengan
distintas afinidades por los nucleótidos. En cualquier instante, las conformaciones diferentes son:
Laxa o “L”, en la que el ADP y el Pi están unidos con soltura.
Ajustada o “T”, en la que los nucleótidos (ADP + Pi ó ATP) están unidos con fuerza. Ocurre la formación de ATP.
Abierta o “O”, que permite la liberación de ATP porque posee afinidad muy baja por los nucleótidos, permite la entrada de
ADP y Pi.
Cada uno de los sitios catalíticos pasa de manera secuencial por las mismas conformaciones: L→T→O.
3. El ATP se sintetiza por catálisis rotatoria, en la que una parte de la ATPsintetasa rota en relación con otra parte
La rotación está impulsada por el movimiento de los protones a través de la membrana por el canal de la base F0. La energía
eléctrica del gradiente de protones se traduce en energía mecánica de un tallo rotatorio, la cual se transforma luego en
energía química almacenada en ATP.

Mecanismo de cambio en la unión y catálisis rotatoria:

La subunidad gamma transmite los cambios de conformación del sector de membrana F 0 a los sitios catalíticos en F1.
El extremo apical de la subunidad gamma es asimétrico, y en cualquier instante, diferentes caras de la subunidad gamma
interactúan con las distintas subunidades beta, lo que hace que adopten conformaciones diferentes (L, T, O).
La conformación del sitio catalítico de la subunidad beta depende de su contacto con la subunidad gamma.
Durante un solo ciclo catalítico, la subunidad gamma gira 360° completos, lo que hace que cada sitio catalítico pase en forma
secuencial por las conformaciones L→T→O.
Con cada giro completo se sintetizan 3 moléculas de ATP.
Estructuras biológicas con
Uso del gradiente de protones para impulsar mecanismos catalíticos: partes rotatorias:
1. Las subunidades c de F0 se ensamblan en un anillo que se encuentra dentro de la ATP sintetasa y bombas afines.
bicapa. Flagelos bacterianos.
2. El anillo c está unido con la subunidad gamma.
3. El movimiento de los protones de regreso a la matriz a
través de la membrana impulsa la rotación del anillo c. Los
protones se recogen del espacio intermembranoso uno a la
vez por cada subunidad c y se transportan por un círculo
completo antes de liberarse en la matriz. La unión de un
protón con una subunidad c hace que el anillo gire 30° en
sentido levógiro.
4. La rotación del anillo c proporciona la fuerza de torsión que
impulsa la rotación de la subunidad gamma unida, lo que
conduce a la síntesis y liberación de ATP. Tanto el anillo c
como la subunidad gamma actúan como rotores durante la
actividad enzimática. El movimiento del anillo se impulsa por
los cambios en la conformación relacionados con la unión y
disociación secuencial con los protones del residuo de ácido
aspártico de cada subunidad c.
 Mitocondrias
EMP
Algunas equivalencias:
OJO, estos valores se cumplen en una ATPsintetasa cuyo F 0 posea estequiometria ab2c12
El giro de 360° del anillo c impulsa la síntesis de 3 ATP.
El giro de 360° del anillo c es producido por el regreso a la matriz de 12 protones.
El regreso a la matriz de 12 protones impulsa la síntesis de 3 ATP.
La síntesis de 1 ATP es debida al regreso de 4 protones, es decir, al giro de 120° del anillo c.

Otras funciones para la fuerza motriz de protones además de la síntesis de ATP:

A diferencia de la mayoría de los organelos que dependen
sobre todo de la hidrólisis de ATP para impulsar sus
actividades, las mitocondrias dependen de una fuente
alternativa de energía: la fuerza motriz de protones.
Es decir: LA MITOCONDRIA PRODUCE EL ATP PERO NO LO
USA COMO FUENTE DE ENERGÍA. LA FUENTE DE ENERGÍA
MITOCONDRIAL ES LA FUERZA PROTON MOTORA!
Actividades mitocondriales que dependen de la fuerza
proton motora:
+
(1) Captación de ADP y Pi a cambio de ATP y H ,
respectivamente.
(2) Interiorizar iones calcio a la mitocondria.
(3) Producción de NADPH, el poder reductor de la célula, por
la transdeshidrogenasa.
(4) Ingreso de polipéptidos específicos a la mitocondria.
Dentro de la mitocondria, el nivel de ADP es el factor
determinante de la velocidad respiratoria:
↓ADP → ↓Velocidad de oxidación de sustratos →
↓Transporte de electrones → ↓Consumo de O2 →
↓Síntesis de ATP
Cuando la proporción ATP/ADP disminuye, el consumo de
oxígeno aumenta de forma súbita.

Peroxisomas
También llamados microcuerpos. Son vesículas limitadas por una membrana, poseen un diámetro de 0,1 a 1μm que pueden
contener un centro denso y cristalino de enzimas oxidativas.
Contienen más de 50 enzimas. Reciben su nombre por ser el sitio donde se genera y degrada peróxido de hidrógeno (H 2O2).
El peróxido de hidrógeno:
**Se produce por acción de las oxidasas peroxisómicas
**Es degradado por la enzima catalasa, que se halla en grandes concentraciones en estos organelos.
Participan en la reducción del oxígeno molecular hasta agua en dos pasos:
Plasmalógenos: Fosfolípidos en
1° paso: Una enzima oxidasa retira electrones de diversos sustratos y los transfiere al
los que uno de los ácidos grasos
oxígeno, formano H2O2.
está unido al glicerol mediante un
2° paso: la enzima catalasa convierte en agua al H2O2 formado en el primer paso.
enlace éter en lugar de uno éster.
Son organelas multifuncionales que participan en: Muy abundantes en las vainas de
(1) oxidación de ácidos grasos de cadena muy larga (24 a 26 carbonos) mielina.
(2) síntesis de plasmalógenos.
Comparten varias propiedades con las mitocondrias:
(1) se forman por división de organelos preexistentes
(2) usan algunas de las mismas proteínas (aminotransferasa de alanina – glioxilato)
(3) ambas organelas importan proteínas desde el citosol
(4) participan en tipos similares de metabolismo oxidativo
En ciertas plantas (maníes) existe un tipo especializado de peroxisoma, el glioxisoma, que sirve para convertir ácidos grasos a
carbohidrato; esta conversión ocurre mediante el ciclo del glioxilato.
El síndrome de Zellweger es una patología relacionada a los peroxisomas, donde se observan peroxisomas vacíos por errores
en las proteínas que importan polipéptidos al organelo.
 Interacciones entre la célula y su ambiente
EMP

INTERACCIONES ENTRE LA CÉLULA Y SU AMBIENTE

Los materiales presentes fuera de la membrana plasmática tienen un papel importante en la vida de una célula.
Las interacciones de las células regulan actividades como la migración, crecimiento y diferenciación de las células, además
determinan la organización 3D de los tejidos y órganos que surgen durante el desarrollo embrionario.
Las uniones celulares abundan en los tejidos epiteliales, que consisten en células muy próximas unidas entre sí y a una capa
acelular subyacente mediante contactos especializados. Estos contactos proporcionan un mecanismo para que las células se
adhieran y se comuniquen entre sí.
Los materiales extracelulares abundan en el tejido conjuntivo; en el material extracelular se incluyen varias fibras que
interactúan entre sí de maneras específicas. Los fibroblastos (células del tejido conjuntivo) poseen receptores que (1) median
las interacciones entre la célula y los componentes de su ambiente y (2) se encuentran conectados con varias proteínas
citoplásmicas. Los receptores de “unión doble” de este tipo son adecuados para transmitir mensajes entre célula y ambiente.

El Espacio Extracelular
Cubierta Celular o Glucocáliz
El glucocáliz es una capa estrechamente aplicada a la superficie externa de la
membrana plasmática. Contiene carbohidratos de membrana secretados por la
célula hacia el espacio externo, donde permanecen en relación estrecha con la
superficie celular.
Los carbohidratos del glucocáliz forman parte de todas las proteínas integrales
de la membrana plasmática, así como de ciertos lípidos de membrana. Estas
moléculas tienen cadenas de azúcares de longitud variable que se proyectan al
exterior y que forman parte de una capa aplicada a la superficie externa de la
membrana plasmática, el glucocáliz.
Este material es muy prominente en algunos tipos de células, como las epiteliales que cubren al tubo digestivo de mamíferos.
Funciones del glucocáliz:
(1) Media interacciones entre células y entre células y sustrato
(2) Suministra protección mecánica a las células
(3) Sirve como barrera contra partículas que se mueven hacia la membrana plasmática
(4) Se une con factores reguladores importantes que actúan sobre la superficie celular

La Matriz Extracelular
**Es más que material inerte de empaque o pegamento inespecífico.
**Posee un papel regulador clave para determinar la forma y actividades de la célula. La membrana basal o lámina basal es
una de las matrices extracelulares mejor definidas:
Membrana basal
Medidas 50 a 200 nm
Bajo la superficie basal de tejidos epiteliales
Ubicación Rodea a células musculares y adiposas
Bajo el recubrimiento endotelial de vasos
Confieren soporte mecánico a las cel que se unen a ellas
Generan señales que mantienen la supervivencia celular
Sirven como sustrato para la migración celular
Funciones
Separan tejidos adyacentes dentro de un órgano
Actúan como barrera al paso de macromoléculas (*)
Barrera contra la invasión de tejidos por células cancerosas

**Las membranas basales poseen un papel importante en la prevención de la salida de proteínas de la sangre hacia los
tejidos, esto es importante en los riñones, por su actividad de filtrar sangre.
La insuficiencia renal crónica en diabéticos puede deberse al engrosamiento anormal de las membranas basales
que rodean a los glomérulos.
**Las MEC de los diferentes tejidos tienden a estar compuestas por macromoléculas similares.
**A diferencia de la mayoría de las proteínas IC (compactas y globulares), las de la MEC casi siempre son fibrosas y
extendidas.
**Las proteínas de la MEC pueden disponerse por sí mismas en una red 3D interconectada y sirven como andamios, vigas,
cables y pegamento.
**Las alteraciones de la secuencia de aminoácidos de las proteínas extracelulares pueden ocasionar trastornos graves.

Colágeno
*Glucoproteínas fibrosas conocidas por su elevada resistencia a la tracción, funcionan solo en de la MEC en el reino animal.
*Gran fuerza tensil, resisten el estiramiento: una fibra colágena de 1mm de diámetro es capaz de mantener suspendido un
peso de 10kg sin romperse.
 Interacciones entre la célula y su ambiente
EMP
*Es la proteína individual más abundante en el cuerpo humano (más del 25% de todas las proteínas).
*Se produce sobre todo en los fibroblastos, también en células epiteliales y de músculo liso.
*Se han identificado 27 tipos distintos, cada uno de los cuales se limita a sitios particulares del cuerpo. A menudo hay dos o
más tipos distintos juntos en la misma MEC.
*Se alcanza una mayor complejidad funcional porque varios tipos de colágena se combinan dentro de la misma fibra.
*Aunque hay muchas diferencias entre los integrantes de la familia de la colágena, todas comparten por lo menos dos rasgos
estructurales importantes:
(1) Todas las moléculas de colágena son trímeros formados por tres cadenas polipeptídicas, llamadas cadenas alfa;
(2) Por lo menos en una parte de su extensión, las tres cadenas polipeptídicas de una molécula de colágena están
entretejidas unas con otras para formar una hélice triple única, parecida a un bastón.
MOLÉCULA DE COLÁGENO
Composición del colágeno: 30% Gly + ↑Pro + ↑Lys.
*Pro y Lys son hidroxiladas por la prolilhidroxilasa y lisilhidroxilasa, que usan
como coenzima al ácido ascórbico o vitamina C.
*Los aminoácidos hidroxilados son importantes para mantener la
estabilidad de la triple hélice por puentes de hidrógeno entre las cadenas COMPOSICIÓN DEL COLÁGENO
componentes.
Escorbuto: Deficiencia de vitamina C, con incapacidad de hidroxilar cadenas
de colágena, lo que trae graves consecuencias para la estructura y función
del tejido conectivo.
Colágenos fibrilares: Son los colágenos I, II y III, entre otros.
Son colágenos fibrilares porque se disponen en fibrillas rígidas parecidas a
cables, que a su vez se disponen en fibras más gruesas, casi siempre lo bastante FIBRILLAS DEL COLÁGENO
grandes para verse al MO.
Moléculas → Fibrillas (Visibles al ME) → Fibras (Visibles al MO)
Las fibrillas se fortalecen por enlaces covalentes entre residuos de lisina e hidroxilisina
en moléculas adyacentes de colágeno. Este proceso de enlace cruzado continúa
durante toda la vida y contribuye a la disminución de la elasticidad de la piel y el
aumento de la fragilidad ósea en los ancianos.
El tejido cicatricial consiste sobre todo en colágeno fibrilar.
A menudo pueden relacionarse las propiedades de un tejido particular con la
organización 3D de las moléculas de colágena. Por ejemplo:
(1)Los tendones:
**Deben resistir fuerzas de tracción muy grandes durante la contracción muscular
**Las fibras de colágeno se alinean paralelas al eje longitudinal del tendón y a la
dirección de las fuerzas de tracción.
(2)La córnea:
**Debe ser durable y transparente.
**La estructura en capas del estroma es similar a la de la madera contrachapada: las
fibrillas en cada capa son paralelas entre sí, pero perpendiculares a las fibrillas de las
capas que están a ambos lados.
Colágenos no fibrilares: Son los colágenos que no forman fibrillas. Uno de los
colágenos no fibrilares es el de tipo IV, que se ubica solo en las membranas basales. El
colágeno de tipo IV se organiza como una red que le confiere soporte mecánico y sirve
como celosía para que se depositen otros materiales extracelulares en la membrana
basal.
Patologías relacionadas al colágeno:
Escorbuto: Déficit alimenticio de ácido ascórbico, se reduce la hidroxilación de
residuos de prolina y lisina del colágeno con lo que se debilitan los tejidos conjuntivos.
Osteogénesis imperfecta: Por mutaciones de los genes del colágeno I.
Alteraciones del tejido cartilaginoso: Por mutaciones de los genes del colágeno II. Cursa con enanismo y deformidades.
Síndrome de Ehler – Danlos: Por mutaciones en varios genes de colágeno que alteran la estructura de la matriz de colágeno.
Síndrome de Alport: Por mutaciones en los genes del colágeno IV.

Proteoglicanos GAGs:
Es un complejo de proteína-polisacárido. Condroitin Sulfato
Consiste en una proteína central a la cual se le unen por enlaces Queratán Sulfato
Heparán Sulfato
covalentes cadenas de GAGs. Los GAGs son muy ácidos por la
Dermatán Sulfato
presencia de grupos sulfato y carboxilo unidos a los azúcares. Los Ácido hialurónico
proteoglicanos pueden ensamblarse en complejos gigantes mediante
la unión de sus proteínas centrales a una molécula de ácido hialurónico, un GAG sin sulfato.
 Interacciones entre la célula y su ambiente
EMP
Uno solo de estos complejos puede ocupar un volumen equivalente al de una célula bacteriana.
A causa de las cargas negativas, los proteoglicanos se unen con cantidades enormes de cationes, que a su vez se unen con
muchas moléculas de H2O: los proteoglicanos forman un gel hidratado poroso que llena el espacio EC como material de
empaque y resiste las fuerzas de aplastamiento (compresión). Esta propiedad complementa a la resistencia a fuerzas de
tracción de las colágenos.
En conjunto, las colágenos y los proteoglicanos dan al cartílago y a otras MEC fuerza y resistencia a la deformación.
Datos sobre los proteoglucanos:
Agrecano: proteoglicano de la MEC que puede contener 30 cadenas de queratán
sulfato y 100 cadenas de condroitín sulfato.
Perlecano y agrina: son proteoglicanos de las membranas basales; tienen solo unas
cuantas cadenas de GAG unidas a la proteína central.
Ácido hialurónico: es un GAG no sulfatado y que no forma proteoglicanos. Es
responsable de la formación de aglomeraciones de proteoglicanos. Los proteoglicanos
se unen al ácido hialurónico gormando un complejo gigante con un PM cercano a 3
000 000 Da.
Proteoglicanos heparán sulfato (HSPG): funcionan directamente sobre la superficie
celular. Ej:
Sindecanos: poseen una proteína central que atraviesa la membrana, los GAGs se unen
al dominio EC de la proteína e interactúan con diversas proteínas, incluidos
importantes factores de crecimiento.

Fibronectina
**Consiste en dos polipéptidos similares, unidos por un par de enlaces disulfuro
localizados cerca del extremo C.
**Cada polipéptido se construye a partir de una secuencia de unos 30 módulos Fn
plegables de manera independiente.
**Los módulos de tipo Fn también forman parte de factores de coagulación
sanguínea, receptores de membrana y otras proteínas de la MEC.
**En la fibronectina, los 30 módulos estructurales se combinan para formar 5 ó 6
dominios funcionales más grandes.
**Cada una de las cadenas polipeptídicas contiene lo siguiente:
(1) Sitios de unión para otros componentes de la ECM (colágenos, proteoglicanos) que facilitan interaxnes que
vinculan las moléculas diversas en una red estable e interconectada.
(2) Sitios de unión para receptores de la superficie celular que sostienen la MEC en unión estable con la célula.
**La importancia de la fibronectina se revela durante la migración de células en el desarrollo embrionario:
- Las células de la cresta neural cruzan trayectos ricos en fibronectina.
- La fibronectina también participa en el desarrollo de pulmón, riñón y glándulas salivales.
Laminina
**Familia de glucoproteínas EC que consisten en tres cadenas polipeptídicas diferentes unidas por enlaces disulfuro.
**La molécula de laminina parece una cruz.
**Se han identificado al menos 15 lamininas diferentes.
**Como la fibronectina, las lamininas EC influyen en grado notorio en el potencial migratorio,
crecimiento y diferenciación de las células:
-Migración de las células germinativas primordiales que darán origen a
espermatozoides y óvulos. Estas células atraviesan superficies muy ricas en laminina.
-Importante en el crecimiento de nervios.
Las lamininas pueden unirse a otras lamininas, proteoglicanos y otros componentes de las
membranas basales. Son fundamentales en el crecimiento de las láminas basales. Sin lamininas,
embriones de ratón mueren hacia el momento de la implantación.
Comparación Fibronectina vs. Laminina
Fibronectina Laminina
Dos polipéptidos similares unidos por dos enlaces disulfuro Tres polipéptidos distintos unidos por enlaces disulfuro en
en C terminal. forma de cruz.
Función como sitio de unión para moléculas de la MEC y Función como sitio de unión para moléculas de la MEC y
proteínas de la superficie celular. proteínas de superficie celular.
FUNDAMENTAL EN EL CRECIMIENTO DE LÁMINAS BASALES.
En la migración embrionaria de células de la cresta neural a En migración embrionaria de células germinativas
su lugar de destino. primordiales desde el saco vitelino hasta las gónadas.
SIRVE COMO SUSTRATO PARA LAS CÉLULAS CUANDO ESTAS SIRVE COMO SUSTRATO PARA LAS CÉLULAS SIEMPRE QUE
NO TIENEN UNA LÁMINA BASAL SUBYACENTE ELLAS TENGAN UNA LÁMINA BASAL SUBYACENTE
 Interacciones entre la célula y su ambiente
EMP

Metaloproteinasas de la matriz (MMP)

La degradación de materiales EC y las proteínas de la superficie celular es tarea de estas enzimas que contienen zinc; pueden
secretarse hacia el espacio EC o estar fijadas a la membrana. Se piensa que las MMP intervienen en remodelado embrionario,
migración de células embrionarias, reparación de heridas y vasculogénesis. Es probable que la actividad excesiva o
inapropiada de las MMP cause enfermedades como artritis, hepatitis, ateroesclerosis, enfermedades dentales y gingivales y
progresión de tumores.

Moléculas de Adhesión Celular

Media interacciones Se une a otra Señalización
CAM ¿Dependencia de calcio? Ejemplos
entre molécula de forma mediante

Célula – matriz Se une a iones

Integrinas Heterotípica αIIbβ3, α6β4 FAK y Src
Célula – Célula divalentes (Ca , Mg , Mn )
2+ 2+ 2+

Selectina E, P y
Selectinas Célula – Célula Heterotípica Dependiente de calcio ????
L (LEU-CAM1)

Típicas (E, P, N) y
Cadherinas Célula – Célula Homotípica Dependiente de calcio Desmocadherinas Cateninas
(Desmogleína y desmocolina)

Superfamilia Homotípica Independiente de

Célula – Célula N-CAM, V-CAM ????
de las Ig Heterotípica calcio

Integrinas
*Comprenden la familia más importante de receptores que adhiere las células a su microambiente extracelular.
*Se encuentran solo en animales.
*Heterodímeros con dos cadenas polipeptídicas que cruzan la membrana plasmática: una cadena alfa y una cadena beta.
Existen 18 subunidades alfa diferentes.
Existen 8 subunidades beta diferentes.
*Las subunidades alfa y beta se combinan para formar cerca de dos docenas de integrinas diferentes.
*La mayor parte de las células posee diversas integrinas distintas.
*La mayor parte de las integrinas se halla en varios tipos celulares distintos.
*Función clave: integración de ambientes extracelular e intracelular.
En EC: se unen con gran variedad de ligandos del ambiente extracelular.
En IC: interactúan de forma directa o indirecta con proteínas para influir en
fenómenos intracelulares.
*Cambios en el dominio interno de la integrina: señalización “de adentro afuera”
Cambios internos dentro de una célula que inician la actividad de la
integrina para unión con su ligando.
*Cambios en el dominio externo de la integrina: señalización “de afuera adentro”
Unión con un ligando extracelular envía señales que inician cambios en las
actividades celulares.
Estructura:
*Cabeza globular extracelular conectada mediante un par de piernas a la membrana.
*Cada pierna atraviesa la membrana en forma de una hélice alfa y terminan en un
dominio citoplásmico. Algunos ligandos de las integrinas:
*El dominio citoplásmico consta de 20 a 70 aminoácidos. Fibronectina (RGD y no RGD)
++ ++ ++ Vitronectina (RGD)
*Las integrinas pueden unirse a cationes bivalentes (Ca , Mg , Mn ).
Factor de von Willebrand (RGD)
*Las integrinas pueden hallarse en dos conformaciones: Fibrinógeno (RGD)
Conformación inactiva Proteoglucanos (RGD)
*La integrinas se dobla en su dominio extracelular a nivel de las “rodillas”. Colágena (No RGD)
*La cabeza globular queda de frente a la superficie externa de la membrana Laminina (No RGD)
plasmática. V-CAM (No RGD)
*La integrina es incapaz de unirse con un ligando. I-CAM (No RGD)
Conformación activa
*Conformación vertical.
*El ligando se une en la hendidura donde las subunidades alfa y beta se unen.
*La capacidad para unirse al ligando del dominio extracelular depende de la disposición espacial de las colas citoplásmicas de
las integrinas.
*La separación de las colas alfa y beta causa la conversión de la integrina de conformación inactiva a conformación activa.
 Interacciones entre la célula y su ambiente
EMP
*Las integrinas activadas tienden a agregarse, lo que invrementa en gran medida la fuerza total de la interacción de la
superficie celular con sus ligandos EC.
Funciones de la integrina:
*Adhesión entre célula y sustrato.
Las integrinas se organizan en:
(1) Adhesiones focales (2) Hemidesmosomas
*Transmisición de señales EC al interior de la célula.
La unión del dominio EC de la integrina con un ligando induce un cambio de conformación en el dominio citoplásmico.
Los cambios en el extremo citoplásmico inducen la activación de proteínas cinasas citoplásmicas FAK y Src.
FAK y Src fosforilan a otras proteínas e inician una reacción en cadena, que puede llegar al núcleo y activar genes.
*Las señales transmitidas por integrinas influyen en diferenciación, motilidad, crecimiento y supervivencia de la célula.
Células normales no crecen ni se dividen si no están sobre un sustrato sólido; sus integrinas deben interactuar con
sustratos celulares para transmitir señales que salven la vida de la célula. Las células cancerosas sí pueden crecer en
un medio líquido.
*Defectos genéticos en subunidades de integrinas:
Subunidad alfa 4: defectos cardíacos.
Subunidad alfa 5: defectos vasculares.
Subunidad alfa 8: defectos renales.
*Las integrinas se unen a RGD (arginina-glicina-ácido aspártico) de otras proteínas.
Los tripéptidos RGD están presentes en proteoglucanos, laminina, fibronectina y otras proteínas extracelulares.
*La agregación de las plaquetas durante la formación de un coágulo (trombo) depende de la interacción de la integrina αIIbβ3
con las proteínas sanguíneas fibrinógeno y el factor de von Willebrand.
*Fármacos antitrombóticos tirofiban y eptifibátido tienen estructura similar a RGD pero se unen de forma selectiva a la
integrina plaquetaria; inhiben la formación del coágulo porque impiden que la integrina se asocie a las proteínas sanguíneas.

Selectinas
*Familia de glucoproteínas integrales de la membrana plasmática que reconocen y se unen con oligosacáridos que tienen
una disposición particular de azúcares y que sobresalen de la superficie de otras células.
*Median la unión entre células dependiente de calcio.
*”Lectina” es un compuesto que se une con carbohidratos específicos, de ahí el
nombre de estas proteínas.
*Median el regreso de los linfocitos a casa.
Estructura:
*Un dominio citoplásmico pequeño.
*Un dominio transmembranoso.
*Un segmento extracelular grande que consiste en varios módulos separados.
*El dominio similar a lectina es el más externo y es el que se une a los residuos
de oligosacárido específicos.
Tipos de selectinas:
*E (Endotelial), P (Plaquetaria), L (Leucocitaria)
*Todas ellas reconocen y se unen a un ligando de carbohidrato similar.
*El oligosacárido reconocido posee dos residuos muy importantes para el
reconocimiento por el ácido siálico: fucosa y ácido siálico.
Selectina L o LEU-CAM1: Se encuentra en los leucocitos.
Es la más pequeña.
Su segmento extracelular consta de:
2 dominios estructurales
1 dominio similar a EGF
1 dominio similar a lectina
Selectina E: Se encuentra en las células endoteliales.
Su segmento extracelular consta de:
6 dominios estructurales
1 dominio similar a EGF
1 dominio similar a lectina
Selectina P: Se encuentra en plaquetas y células endoteliales.
Su segmento extracelular consta de:
Su segmento extracelular consta de:
9 dominios estructurales
1 dominio similar a EGF
1 dominio similar a lectina
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Funciones de las selectinas:
*Adhesión entre células:
(1) Regreso de los linfocitos a casa
(2) Interacciones transitorias entre leucocitos circulantes y las paredes vasculares en sitios de inflamación y
coagulación. Las selectinas son adecuadas para capturar leucocitos circulantes porque los enlaces que forman con
sus ligandos se fortalecen cuando la interacción se somete a tensión mecánica.

Superfamilia de las inmunoglobulinas (SFIg)

*Proteínas formadas por polipéptidos compuestos de varios dominios Ig.
Estructura:
*Los dominios Ig están formados por 70 a 110 aminoácidos.
*Tienen una construcción modular; es decir, dominios individuales de estructura similar a los
dominios de otras proteínas.
*El genoma humano codifica 765 dominios Ig distintos: es el dominio más abundante de las
proteínas humanas.
*Los miembros de la SFIg pueden funcionar como:
-Anticuerpos (la mayoría) -Moléculas de adhesión celular
Funciones de las inmunoglobulinas de adhesión celular:
*Adhesión entre células
(1) Interacciones de los linfocitos con las células necesarias para establecer una
respuesta inmunitaria (macrófagos, linfocitos, células efectoras).
(2) Adhesión entre células no inmunitarias.
VCAM: molécula de adhesión celular vascular (se une a integrinas).
NCAM: molécula de adhesión celular neural.
L1
**NCAM y L1 tienen funciones importantes en el crecimiento nervioso, formación de sinapsis y
otros fenómenos durante el desarrollo del sistema nervioso.
**L1 importante en el desarrollo neural.
Mutaciones graves del gen para L1 causan hidrocefalia letal
Mutaciones menos graves del gen para L1 causan retraso mental y espasticidad.
L1 está implicado en el crecimiento dirigido de axones en el sistema nervioso embrionario.
Deficiencia de L1 causa la ausencia de haces nerviosos que unen las dos mitades del cerebro.

Cadherinas
*Familia de glucoproteínas que median la adhesión intercelular dependiente de calcio y transmiten señales de la MEC al
citoplasma.
Estructura:
*Poseen una construcción modular.
*Segmento extracelular grande de cinco dominios de estructura y tamaño similares.
- Forma dímeros paralelos con las cadherinas la misma superficie celular.
- Los iones calcio forman puentes entre los dominios de una molécula de
cadherina; mantienen el dominio extracelular en una conformación
rígida necesaria para la adhesión celular.
- Interacciona con dominios extracelulares de cadherinas de células
adyacentes para formar la “cremallera de adhesión celular”.
*Un segmento transmembranoso.
*Un pequeño dominio citoplásmico.
Se relaciona con cateninas. Las cateninas pueden:
Unir la cadherina al citoesqueleto
Transmitir señales al citoplasma y al núcleo
*Las interdigitaciones entre moléculas de cadherina asemejan una cremallera.
*Los cúmulos de cadherinas pueden compararse con el cierre de contacto (velcro). Mientras más cadherinas haya en un
cúmulo, mayor fuerza de adhesión entre las células adyacentes.
Tipos de cadherinas y sus funciones:
*Adhesión celular mediante:
Cadherinas típicas (de las uniones adherentes):
Cadherina E (epitelial), cadherina P (placentaria), cadherina N (neural).
Desmocadherinas (de los desmosomas):
Desmogleínas y desmocolinas.
*Debido a su asociación con cateninas: transmisión de señales hacia citoplasma y núcleo.
 Interacciones entre la célula y su ambiente
EMP

Uniones intercelulares en vertebrados

Tipo de unión Sinonimia Filam asociados Proteínas de unión
Zona de oclusión
A. Unión Oclusiva Actina Ocludinas y Claudinas
Unión Estrecha

B. Uniones Adhesivas Macula Adherente Intermedios Cadherinas

1. Desmosoma
Zonula Adherente
2. Unión Adherente Desmosoma en banda Actina Cadherinas típicas
Desmosoma en cinturón

C. Uniones Célula - Matriz

1. Hemidesmosoma — Intermedios Integrinas

2. Adhesiones Focales Contacto focal Actina Integrinas

Nexo
D. Uniones Comunicantes — Conexina
Gap Junction

Complejo de Unión

CUIDADO
Las uniones intercelulares
citadas son las principales,
pero no las únicas

Zonas de oclusión: Sellado del espacio extracelular

Funciones: (1)Barrera a la difusión libre de agua y solutos del compartimento EC de una hoja
epitelial hacia el otro lado, (2)Vallas que ayudan a mantener la polaridad de células epiteliales
[bloqueando la difusión de proteínas], (3)Vía de señalización para numerosos procesos
intracelulares.
Descripción: (1)Las zonas de oclusión entre células epiteliales contiguas evitan el pasaje de solutos
por vía paracelular; (2)Se localizan en el extremo apical de los complejos de unión de células
epiteliales; (3)En un corte que incluya a la MP de células adyacentes se ve que las mismas se unen
 Interacciones entre la célula y su ambiente
EMP
de forma “intermitente” en lugar de una fusión amplia; los sitios de contacto entre las células son sitios en los que las
proteínas integrales de dos membranas adyacentes se hallan en el espacio EC. (4) Congelamiento y fractura → Las MP en
zonas de oclusión poseen “hebras interconectadas” paralelas entre sí y con la superficie apical del epitelio. (5) Las hebras o
fibras corresponden a pares de hileras de proteínas integrales alineadas, que forman fibrillas continuas que rodean a la célula
y contactan con células próximas por todos lados. (6)Las proteínas son ocludinas y claudinas
[cruzan la membrana 4 veces].
Permeabilidad: *↑Hebras, ↑Sellado. *Además del número de hebras, la composición
molecular también toma parte en la permeabilidad.
En el riñón, en la rama gruesa ascendente de las nefronas, existe la Claudina 16, con poros
permeables a magnesio para su absorción renal. Las mutaciones en ambos genes de Claudina
16 produce ↓↓magnesio en sangre y ↑magnesio en orina.
En la piel, una de las capas más externas de la epidermis normal posee Claudina 1, que
contribuye a la impermeabilidad de la piel. Animales de experimentación sin Claudina 1
murieron por deshidratación.
Barreras: La impermeabilidad de las zonas de oclusión les permite encerrar compartimentos de composición particular. Esto
ocurre en varios órganos, donde las barreras de zonas de oclusión determinan la composición diferente de sus contenidos
con respecto al plasma sanguíneo. Las barreras son hematoencefálica, hematotesticular, hematobiliar, hematoocular y
hematotímica.
La barrera hematoencefálica se ubica en el endotelio vascular. NO pueden pasar paracelular# iones pequeños, agua y algunos
fármacos. Sí pueden pasar paracelular# células inmunológicas [envían señales y abren la unión].

Uniones Adherentes
Funciones: (1)Unir a las células entre sí, (2)Vía potencial para la transmisión de señales del
exterior celular al citoplasma.
Descripción: (1)Son el segundo componente del complejo de unión; (2)Forman una unión
dependiente de calcio (pues tiene caderinas); (3)Forman un cinturón que rodea a las células y
la une con sus vecinas, esto pasa, por ejemplo, en el epitelio del recubrimiento intestinal;
(4)Dejan una brecha EC de 30nm, donde se unen las caderinas y el calcio; (5)La región
citoplásmica de las caderinas se une mediante cateninas α y β con filamentos de actina y otras
proteínas; (6)Los cúmulos de caderinas de una unión adherente se asemejan a las integrinas
de las adhesiones focales, donde las integrinas conectan el ambiente con el citoesqueleto de
actina y sirven para transmitir señales desde el exterior.
Las uniones adherentes endoteliales transmiten señales para la supervivencia celular. Sin una
caderina, los animales mueren en la etapa embrionaria.

Desmosomas
Funciones: (1)Unión intercelular
Descripción: (1)Formados por discos intracelulares de 1μmϴ; (2)abundantes en tejidos que
experimentan tensión mecánica (miocardio, piel, cuello uterino); (3)La brecha EC es de 30nm
y es donde los dominios EC de las caderinas se encuentran; (4)Las caderinas poseen una
estructura de dominios diferentes a las tradicionales y se denominan desmogleínas y
desmocolinas; (5)Los discos o placas sirven para la fijación de filamentos intermedios curvos
similares a los de los hemidesmosomas.
La red 3D de filamentos intermedios suministra continuidad estructural y fuerza tensional a la
hoja de células en el epitelio. Están unidos a los dominios intracelulares de caderinas por
proteínas adicionales (desmoplaquina, placoglobina. Debemos conocer cuál está más cerca de la membrana).
El pénfigo vulgar es una enfermedad relacionada a los desmosomas.

Adhesiones Focales
Funciones: (1)Unir a las células con el sustrato transitoriamente, (2)Son las uniones utilizadas en la adhesión de células
cultivadas al sustrato y en la locomoción celular, (3)Las fuerzas mecánicas aplicadas a las
superficies de las células pueden ser convertidas en señales citoplásmicas por las
adhesiones focales.
Descripción: (1)Son estructuras dinámicas que pueden romperse cuando la célula adherida
se estimula para moverse o entrar en mitosis; (2)La MP de la región con adhesiones focales
contiene grandes cúmulos de integrinas; (3)Los dominios citoplásmicos de las integrinas se
conectan por sus subunidades β mediante varios adaptadores (vinculina, talina) a los
filamentos de actina del citoesqueleto; (4)Se encuentran con mayor frecuencia en las
células que crecen in vitro, aunque existen tipos similares de contactos adhesivos en
músculo y tendón.
 Interacciones entre la célula y su ambiente
EMP
Hemidesmosomas
Funciones: (1)Unir a las células con la membrana basal; (2)Sus
integrinas transmiten señales desde la MEC que influyen en la forma y
actividades de las células epiteliales unidas.
Descripción: (1)Son el tipo de unión más fuerte entre una célula y su
MEC dentro del cuerpo; (2)Se hallan en la superficie basal de las células
epiteliales; (3)Contienen una placa densa en la superficie interna de la
membrana con filamentos intermedios de queratina que salen hacia el
citoplasma; (4)Los filamentos intermedios se unen con la MEC
mediante integrinas.
El penfigoide ampolloso y la epidermólisis ampollosa están relacionados con los hemidesmosomas.

Uniones comunicantes
Funciones: (1)Están especializados para la comunicación intercelular;
(2)acoplamiento eléctrico, metabólico y funcional de las células.
Descripción: (1)Presentes en células animales; (2)La conexina es la proteína
integral de las uniones comunicantes; (3)La brecha intercelular es de 3nm, las MP
se aproximan mucho pero no establecen contacto directo; (4)La brecha posee
hebras, que son tuberías moleculares y se abren al citoplasma de las células
contiguas.
6 Conexinas = 1 Conexón. Cada conexón posee una abertura o anillo central de
cerca de 16A en su superficie EC. Los conexones se alinean con los de la célula
adyacente y forman canales intercelulares completos que conectan el citoplasma
de una célula con el de su vecina. Los canales se aglomeran en regiones específicas
de la MP, forman placas de uniones comunicantes que pueden visualizarse con la
técnica de congelamiento y fractura.
La existencia de comunicación intercelular mediante uniones se revela mediante el paso de corrientes iónicas o tintes de bajo
PM como la fluoresceína.
Las uniones comunicantes permiten el paso de moléculas con un PM menor a 1KDa; son canales relativamente no selectivos
(comparándolos con los canales iónicos de la MP). La abertura y cierre del canal están regulados sobre todo por fosforilación
de la conexina (la fosforilación cierra el canal). El cierre puede inducirse también por concentraciones anormalmente altas de
calcio.
La estimulación de células musculares cardíacas y lisas ocurre por un proceso diferente al del músculo liso, en el que
intervienen las uniones comunicantes. La contracción cardíaca y las ondas peristálticas dependen de uniones comunicantes.
Permeabilidad para: Ejemplos:
Integración de actividades de las células de Una sola célula es estimulada y el
cAMP, Inositolfosfatos
un tejido para que funcione como unidad estímulo puede transmitirse a las demás
Cooperación metabólica ATP, Azúcaresfosfato, aminoácidos, coenzimas Tejidos avasculares como el cristalino
Se identificaron aprox. 20 conexinas con distintas distribuciones. Los conexones formados por diferentes conexinas muestran diferencias
en conductancia, permeabilidad y regulación. En ocasiones, los conexones de las células vecinas que se forman de conexinas diferentes
pueden ensamblares y formar canales funcionales, y en otros casos no sucede así.
Conexinas Cx43 (en células miocárdicas) y conexinas Cx40 (en células del sistema de conducción cardíaco) forman conexones
incompatibles: los dos tipos de células conservan el contacto físico pero mantienen aislamiento eléctrico entre sí.

Plasmodesmas
Funciones: (1)Conecta a células vegetales entre sí; (2)Sirven para la comunicación intercelular,
ya que algunas sustancias pasan por el anillo que rodea al desmotúbulo.
Descripción: (1)En vegetales; (2)Canales citoplásmicos que pasan a través de las paredes
celulares de células adyacentes; (3)Están recubiertas por membrana plasmática; (4)Casi
siempre contienen una estructura central densa derivada del SER de una de las dos células: el
desmotúbulo; (5)Son permeables para moléculas de hasta 50KDa; (6)El poro de las
plasmodesmas es capaz de dilatarse [cosa que no pasa con los nexos], esto se observó
mediante virus que se diseminan de una célula a otra a través de las plasmodesmas.
La dilatación de las plasmodesmas se hace mediante la síntesis de proteínas de movimiento (el
virus del que se habló, por ejemplo, sintetizaba su propia proteína de movimiento), que
interactúan con la pared de las plasmodesmas y aumenta el diámetro del poro. Las células
vegetales sintetizan sus propias proteínas de movimiento para el transporte de proteínas y
RNA de una célula a otra.
 Interacciones entre la célula y su ambiente
EMP

Enfermedad Defecto Síntomas

Escorbuto

Osteogénesis Imperfecta

Genes del colágeno II

Síndromes de Ehlers-Danlos

Síndrome de Alport

Claudina 16

Pénfigo Vulgar Anticuerpos antidesmogleína

Penfigoide Ampolloso Anticuerpos contra antígenos del

penfigoide ampolloso

Epidermólisis ampollosa Anomalías genéticas de integrinas,

colágena VII o laminina 5.

Genes para conexinas

 Sistema de Endomembranas
EMP

SISTEMA DE ENDOMEMBRANAS
Las organelas membranosas del interior de la célula no son objetivables en cortes
teñidos para microscopía óptica, sin embargo, a la microscopía electrónica se
visualizan diversas estructuras membranosas que adquieren diferentes formas:
vesículas, cisternas y túbulos.
Cada uno de los organelos contiene un complemento particular de proteínas y está
especializado en actividades específicas; pueden parecer estructuras estables, pero de
hecho son compartimentos dinámicos con un flujo continuo.
Son parte del SEM: retículo endoplásmico (RE), aparato de Golgi, endosomas,
lisosomas y vacuolas. En el SEM los componentes individuales funcionan como parte
de una unidad coordinada.
Las mitocondrias, los cloroplastos y los peroxisomas no forman parte del sistema de
endomembranas por poseer orígenes diferentes.
Las mitocondrias y los cloroplastos son organelas de doble membrana.
Los peroxisomas son organelas de membrana simple pero de origen doble: proteínas importadas del citosol pero membrana
proveída por el SEM.

Revisión del Sistema de Endomembranas

Los organelos del SEM son parte de una red dinámica integrada en la que los materiales se envían y regresan de una parte de
la célula a la otra. Casi en su totalidad, los materiales se trasladan entre los organelos en pequeñas vesículas de transporte
limitadas por membrana que:
(1) se desprenden de compartimentos donantes
(2) se mueven en forma dirigida tiradas por proteínas motoras microtubulares y de FA
(3) se fusionan con el compartimento receptor.
El compartimento receptor recibe el cargamento soluble de la vesícula y su envoltura
membranosa.
Las vías que siguen los cargamentos a través del citoplasma son dos. La vía biosintética
y la vía endocítica.
En la vía biosintética, se sintetizan proteínas en el ER, se modifican en el Golgi y de ahí
se transportan a sus destinos (MP, lisosoma, vacuola vegetal). Se la conoce también
como vía secretora, ya que muchas de las proteínas sintetizadas en el ER o los
polisacáridos complejos sintetizados en el Golgi se secretan de la célula. Esta secreción
puede ser constitutiva o regulada.
Características: La mayor parte de las células la lleva a cabo.
Los materiales se transportan en vesículas secretoras de los sitios
Secreción
donde se producen para descargarse en el espacio EC de forma
constitutiva
continua.
Funciones: Formación de la MEC y de la MP.
Características: Los materiales se almacenan en gránulos secretorios
Secreción
y se descargan solo como respuesta al estímulo apropiado.
regulada
Funciones: Secreción de hormonas, liberación de enzimas
(facultativa)
digestivas, liberación de neurotransmisores.

Mediante la vía biosintética se transportan proteínas, lípidos y polisacáridos

complejos. Las proteínas transportadas son (1)proteínas solubles que se expulsan de la
célula; (2)proteínas integrales de varias membranas y (3)proteínas solubles que
residen en varios compartimentos limitados por endomembranas.
En la vía endocítica, los materiales se mueven de la superficie externa de la célula a los
compartimentos, como los endosomas y lisosomas, que se localizan dentro del
citoplasma.
En el transporte de materiales, algunos tipos de cargamentos [proteínas
secretadas, enzimas lisosómicas y proteínas de membrana] se dirigen a sus
destinos celulares apropiados gracias a señales clasificadoras presentes en la
secuencia de aminoácidos de las proteínas o en los oligosacáridos unidos.

Estudio de las Endomembranas

La microscopía electrónica aporta información estructural sobre el sistema de endomembranas. La autorradiografía permite
obtener información sobre la función del SEM; el uso de la proteína verde fluorescente (GFP) también pero en células vivas.
El fraccionamiento subcelular permite conocer la composición bioquímica de las organelas (proteínas presentes en cada
una); los sistemas libres posibilitan investigar fenómenos imposibles de estudiar en células enteras. El uso de mutantes ayuda
a reconocer las funciones específicas de cada proteína investigada.
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Retículo endoplásmico
El ER se divide en rugoso (RER) y liso (SER). Ambos forman un sistema de membranas que rodea una luz de composición muy
diferente de la del citosol circundante.

Prot y lípidos Proteínas compartidas Actividades comunes.

fluorescentes difunden Ej: síntesis de colesterol y
entre retículos Membranas Interconectadas algunos lípidos

Muchas proteínas en Diferencias estructurales y

un solo tipo de ER funcionales

RER SER
Ribosomas en la superficie citosólica No posee ribosomas asociados
Red de sacos aplanados o cisternas; se Elementos tubulares que
continúa con la membrana externa de forman un sistema
la envoltura nuclear (que también tiene interconectado de tuberías que
ribosomas) se curvan por el citoplasma
A la centrifugación: A la centrifugación:
Microsomas rugosos Microsomas Lisos
Abundante en células que secretan grandes cantidades de Abundante en células secretoras de hormonas esteroideas
proteínas (pancreáticas, de glándulas salivales) (en gónadas y corteza suprarrenal)
Funciones: Síntesis de proteínas, cadenas de CH y Funciones: Síntesis de hormonas esteroideas,
fosfolípidos del inicio de la vía biosintética. desintoxicación, secuestro de calcio.

Retículo Endoplásmico Liso:

Muy desarrollado en músculo esquelético, túbulos renales y glándulas endocrinas productoras de esteroides. Sus funciones:
(1) Síntesis de hormonas esteroideas en células de las gónadas y la corteza suprarrenal. Ej: célula de Leydig del testículo.
(2) Desintoxicación, en el hígado, de compuestos orgánicos (barbitúricos y etanol, por ej) cuyo consumo crónico puede
conducir a la proliferación del SER en hepatocitos.
La llevan a cabo unas oxigenasas (enzimas que transfieren oxígeno), incluida la familia del citocromo P-450. La familia
citocromo P-450 incluye oxigenasas que son poco específicas y sirven para hacer que miles de compuestos hidrófobos se
conviertan en sustancias más hidrofílicas y fáciles de excretar.
Los efectos no siempre son buenos. El benzopireno, formado al quemar carne a las brasas, se convierte en un carcinógeno
por acción de las enzimas desintoxicantes. La variación genética de las enzimas del citocromo P450 explica la variación de
comportamientos frente a medicamentos.
(3) Secuestro de calcio dentro del citoplasma de células de músculo esquelético y cardíaco (el REL de células musculares
estriadas se denomina retículo sarcoplásmico).

Retículo Endoplásmico Rugoso:

Es el punto de inicio de la vía biosintética: se sintetizan las proteínas, cadenas de carbohidratos y fosfolípidos.

Síntesis de proteínas en ribosomas unidos al RER:

El sitio en el que se sintetiza una proteína depende de la secuencia señal: una secuencia de 6 a 15 residuos hidrófobos en el
extremo N-terminal, que dirige al polipéptido emergente y al ribosoma hacia la membrana del ER, y además conduce a la
separa al polipéptido dentro del compartimento del RER. La secuencia señal, en algunos polipéptidos, ocupa una posición
interna.
El polipéptido se mueve en dirección al espacio de la cisterna del ER a través de un canal acuoso recubierto con proteína en
la membrana; este movimiento se hace al mismo tiempo de la traducción, o sea, cotraduccionalmente
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Traslocón es un canal recubierto de proteína Síntesis de proteínas secretoras, lisosómicas o vacuolares vegetales
embebido en la membrana del ER a través en los ribosomas unidos a membranas:
del que pasa el polipéptido en su paso del
(A) La síntesis de un polipéptido inicia después de que un mRNA se une con un
citosol a la luz del ER.
Posee un poro con forma de reloj de arena, ribosoma libre (siempre inicia en citosol).
con un anillo de 6 aa hidrófobos en su ϴ más (B) Una partícula de reconocimiento de la señal (SRP) identifica la secuencia señal
estrecho. En estado inactivo, una corta hidrófoba. Se une tanto a la secuencia señal del polipéptido naciente como al
héliceα que le sirve de tapón a fin de evitar el
ribosoma, con lo que detiene temporalmente la síntesis de más polipéptido.
paso indeseado de calcio u otros iones.
El ϴ del poro inactivo es de 5 a 8A, menor (C) El complejo SRP-ribosoma-péptido naciente se une específicamente a la
que el de una cadena polipeptídica, por lo membrana del ER. La unión ocurre a través de al menos 2 interacciones: (a)La de
que el poro es expansible. SRP con el receptor de SRP y (b)La del ribosoma con el traslocón.
(D) La SRP se libera de su receptor, el ribosoma se une al extremo citosólico del
La SRP de mamíferos contiene:
traslocón y la secuencia señal se inserta en el estrecho canal acuoso del traslocón.
6 polipéptidos + 1 RNA 7S El contacto de la secuencia señal con el interior del traslocón causa el
Sirve como marca que permite que el desplazamiento del tapón y la abertura del pasaje.
complejo SRP-ribosoma-polipéptido naciente (E) El polipéptido se traspone a través del anillo del poro hacia la luz del ER.
se una específicamente a la superficie (F) Cuando terminan la traducción y el paso del polipéptido por el traslocón, el
citosólica de la membrana del ER
ribosoma se libera de la membrana y el tapón se reinserta en el traslocón.

**Varios de los pasos en la síntesis y tránsito de proteínas secretoras se regulan mediante la unión o hidrólisis de GTP
mediante proteínas G.
**Las proteínas G actúan como interruptores moleculares: Una proteína G unida con GTP casi siempre activa el proceso; la
hidrólisis de GTP casi siempre lo apaga.
¡¡La SRP y el receptor de SRP son proteínas G!! La hidrólisis de GTP unido con estas dos proteínas inicia la liberación de la
secuencia de señal por la SRP y su inserción en el traslocón.

Procesamiento de proteínas neosintetizadas en el ER

El péptido naciente se somete a la acción de varias enzimas localizadas dentro de la membrana o en la luz del ER.
Peptidasa Señal: La porción N-terminal que contiene el péptido señal se retira por esta enzima proteolítica.
Integrales
Oligosacariltransferasa: Agrega los carbohidratos a la proteína naciente.
Luminales
Carabinas Moleculares: Reconocen proteínas mal plegadas y le dan la oportunidad de adquirir su estructura nativa.
Disulfuro Isomerasa (PDI): Formadora de puentes disulfuro. También los reordena.
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Los enlaces disulfuro tienen una función esencial en el mantenimiento de la estabilidad de las proteínas que se encuentran
en la superficie EC de la MP o que se secretan al espacio EC.
El ER tiene la construcción ideal para cumplir su papel como puerto de entrada a la vía biosintética:
La membrana del ER suministra una gran superficie para muchos ribosomas (aprox. 13 millones en una célula hepática).
La luz de las cisternas del ER proporciona un ambiente que favorece plegamiento y ensamble de proteínas, así como un
compartimento en el que proteínas secretoras, lisosómicas y vacuolares pueden separarse de otras proteínas recién
sintetizadas.
La separación de las proteínas nuevas en las cisternas del ER las retira del citosol y permite modificarlas y enviarlas a su
destino final.

Síntesis de proteínas integrales de membrana en los ribosomas unidos a la membrana:

Las proteínas integrales de membrana que no se destinan a mitocondrias, cloroplastos y peroxisomas también se sintetizan
en ribosomas unidos a la membrana del ER. Se trasladan a la membrana del ER cotraduccionalmente con los mismos
mecanismos descritos para proteínas secretoras o lisosómicas; sin embargo, a diferencia de estas que pasan por completo a
través de la membrana durante la trasposición, las proteínas integrales contienen uno ó más segmentos transmembranosos
hidrófobos, conocidos como secuencia de paro-transferencia que son desviados directamente del canal del traslocón hacia
el interior de la bicapa.
El traslocón posee una conformación en forma de almeja con un surco o costura a lo largo del costado de la pared, por donde
el canal se abre y se cierra continuamente cuando el polipéptido pasa por el traslocón. Esto da a cada segmento del
polipéptido naciente la oportunidad de dirigirse conforme a su hidrofobia hacia el compartimento acuoso del interior del
canal del traslocón o el centro hidrófobo circundante de la bicapa.

Los segmentos del polipéptido suficientemente hidrófobos se disuelven de manera espontánea en la bicapa y se convertirán
en segmentos transmembranosos de proteínas transmembranosas. Cuanto más hidrófobo el segmento de polipéptido, tanto
mayor la probabilidad de que pase por la pared del traslocón y se integre como un segmento transmembranoso de la bicapa.
Una proteína monopaso puede
orientarse con su N terminal hacia el
citosol o hacia la luz del ER.
El factor determinante más frecuente
de la alineación de la proteína de
membrana es la presencia de residuos
con carga positiva que flanquean el
extremo citosólico de un segmento TM.
Durante la traducción de proteínas de
membrana, el recubrimiento interno
del traslocón orienta al polipéptido
naciente, de manera que el extremo
más positivo se dirija hacia el citosol.
Una proteína multipaso posee
segmentos TM secuenciales con
orientaciones opuestas; uno de cada
dos segmentos TM debe girarse 180°
antes de salir del traslocón.
El traslocón por sí mismo es capaz de orientar en forma apropiada los segmentos TM, es más que un simple paso por la
membrana del ER, es una “máquina” compleja capaz de reconocer varias secuencias de señal y realizar actividades mecánicas
complejas.

Biosíntesis de membrana en el ER:

Surgen solo de membranas preexistentes, no surgen de novo. Crecen conforme las
proteínas y lípidos recién sintetizados se insertan en las membranas existentes en el ER:
los componentes de membrana pasan del ER a todos los demás compartimentos de la
célula.
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Las membranas (sus proteínas y lípidos) son modificadas por las enzimas de cada organela:
cada compartimento de membrana posee una composición única y una identidad distintiva.
La asimetría de membrana se establece en el ER, y se mantiene cuando la membrana se
desprende de un compartimento y se fusiona con el siguiente. De hecho, de muchas
maneras (↑[Ca], potencial de oxidación y ↑carbohidratos) la luz del ER se parece mucho al
espacio EC.
Síntesis de lípidos de membrana
La mayoría de los lípidos de membrana se sintetizan por completo en el ER, excepto:
a) Esfingomielina y glicolípidos: Síntesis inicia en ER pero termina en Golgi.
b) Lípidos únicos de mitocondrias y cloroplastos: Síntesis en esas membranas.
Las enzimas participantes en la síntesis de fosfolípidos son proteínas
integrales del ER y sus sitios activos se dirigen hacia el citosol: los fosfolípidos
recién producidos se insertan en la mitad de la bicapa dirigidos hacia el citosol.
Algunos pueden girar más tarde por acción de flipasas.
Los lípidos son transportados del ER al Golgi y la MP como parte de la bicapa
de vesículas de transporte.
Las membranas de diferentes organelos tienen una composición de lípidos
muy diferente porque se producen cambios a medida que la membrana fluye
por la célula. Los factores que pueden propiciar tales cambios son:
a) La mayoría de los organelos membranosos poseen enzimas que modifican
lípidos de sus membranas.
b) Inclusión preferencial de fosfolípidos en vesículas.
c) Proteínas de transferencia de fosfolípidos a través del citosol acuoso.
Las proteínas de transferencia de fosfolípidos son particularmente
importantes para el traslado de lípidos a los peroxisomas, mitocondrias y
cloroplastos que no son parte normal del flujo de membrana a lo largo de la
vía biosintética.
Glicosilación en el RER
Casi todas las proteínas producidas en ribosomas unidos con membranas se convierten en glucoproteínas. Los grupos de
carbohidratos actúan como (1) sitios de unión para interacción e/ macromoléculas y (2) ayudando al plegamiento correcto de
la proteína a la que están unidos. Las secuencias de azúcares de los oligosacáridos de las glicoproteínas son muy específicas,
su secuencia es consistente y predecible.
¿Cómo se logra el orden de los azúcares en los oligosacáridos? La add de azúcares a una cadena de
UDP-Glc
oligacáridos es catalizada por enzimas unidas a la membrana llamadas glicosiltransferasas, que transfieren un
UDP-NAG
GDP-Man monosacárido específico de un azúcar de nucleótido (ver cuadro) al extremo creciente de la cadena de
carbohidrato. La disposición de los azúcares en las cadenas de oligosacáridos de una glucoproteína depende de
la localización espacial de las enzimas específicas.
2 NAG Oligosacáridos N-unidos: Se sintetizan en el RER; el segmento central de cada carbohidrato no se ensambla
9 Man sobre la proteína, sino que se arma independientemente sobre un lípido portador (el fosfato de dolicol) y
3 Glc luego se transfiere en bloque a los residuos de asparagina específicos del polipéptido (paso invariable en la
síntesis de glucoproteínas). El fosfato de dolicol está incluido en la membrana del ER.
Los azúcares sí se agregan uno a la vez a la molécula de fosfato de dolicol por las glucosiltransferasas: en los mamíferos
comienza con una NAG-1-fosfato, seguida de otra NAG, 9 manosas y 3 glucosas.
Este bloque de 14 azúcares se transfiere por la oligosacariltransferasa a ciertas Asn del polipéptido naciente mientras el
polipéptido naciente se traslada hacia la luz del ER.
Mutaciones que causan la ausencia total de N-glicosilación provocan la muerte de embriones antes de la implantación.
La modificación del oligosacárido inicial inicia en el ER con la eliminación enzimática de las 3 glucosas terminales.
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1. Se transfiere N-AcGlu fosfato y N-Ac-Glu a

un dolicol-PP en el lado citosólico.
2. Se transfieren 5 manosas al dolicol-PP en el
lado citosólico.
3. El dolicol-PP glicosilado se voltea hacia el
lado luminal.
4. Un dolicol-P recibe 1 manosa en el lado
citosólico.
5. El dolicol-P unido a manosa voltea hacia la
luz.
6. El dolicol-P unido a manosa transfiere el
azúcar al dolicol-PP (4, 5 y 6 ocurren x 4)
7. Un dolicol-P recibe 1 glucosa en el lado
citosólico.
8. El dolicol-P unido a glucosa voltea hacia la
luz.
9. El dolicol-P unido a manosa transfiere el
azúcar al dolicol-PP (7, 8 y 9 ocurren x 3)
10. El dolicol-PP se halla unido a 14 azúcares;
la OT transfiere el oligosacárido al polipéptido
naciente.
11. El dolicol-PP usado voltea hacia el citosol
12. El dolicol-PP pierde un fosfato inorgánico
13. Un dolicol se fosforila por acción de CDP
Control de calidad en RER
Mecanismos que aseguran que las proteínas que se sintetizan tengan la estructura apropiada.
(1) Las enzimas glucosidasas I y II eliminan dos residuos de glucosa, y mientras queda uno GT: Reconoce a
(2) Cada glucoproteína se une a la carabina del ER (calnexina o calreticulina) proteínas mal
(3) La eliminación de la glucosa restante por glucosidasa II hace que la carabina libere a la glucoproteína plegadas porque
(4) Si la proteína se encuentra mal plegada, una enzima de vigilancia llamada GT le agrega una glucosa y exponen residuos
hidrófobos
las mismas carabinas reconocen a la proteína “marcada”
(5) La proteína tiene una nueva oportunidad para plegarse correctamente.
Después de cierto tiempo con la carabina, el residuo adicional de glucosa se retira y la enzima de vigilancia la revisa de nueva
cuenta para confirmar si ya tiene su estructura 3D apropiada. Si aún está plegada de forma incompleta, se agrega una nueva
glucosa y el ciclo se repite hasta que (a)la proteína se pliega correctamente y sigue su camino, o (b)permanece mal plegada, o
(c)se destruye en un proteasoma.
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Mecanismos que aseguran la destrucción de proteínas mal plegadas:
DEGRADACIÓN ASOCIADA AL RE: Las proteínas mal plegadas no se destruyen en el ER; sino que se transportan al citosol por
un proceso de trasposición inversa (ocurre a través del traslocón, probablemente). Una vez en el citosol, los oligosacáridos se
retiran y las proteínas mal plegadas se degradan en los proteasomas. Este proceso es el ERAD (Degradación Asociada al ER),
que asegura que proteínas aberrantes no sean transportadas a otras partes de la célula, pero puede tener consecuencias
negativas (Ej, fibrosis quística).
RESPUESTA DE PROTEÍNA NO PLEGADA: En ocasiones, las proteínas mal plegadas pueden generarse a mayor velocidad de la
que pueden transportarse al citoplasma. La acumulación de proteínas mal plegadas puede ser fatal para la célula e inicia un
plan de acción completo conocido como UPR (Respuesta de Proteína No plegada).
El ER contiene sensores de proteínas no plegadas o mal plegadas en la luz del ER inactivados por chaperonas moleculares (Ej,
BiP). Si se acumulan proteínas mal plegadas, las chaperonas BiP de la luz del ER se reclutan al servicio como chaperonas para
proteínas defectuosas, lo que las hace incapaces de inhibir a los sensores (Los sensores pierden a su inhibidor y se activan).
La activación de sensores da origen a señales que se transmiten hacia el núcleo y el citosol cuyos resultados son los sgts:
 Expresión de cientos de genes cuyas proteínas codificadas tienen capacidad de aliviar el estrés en el ER:
A. Chaperonas moleculares del ER.
B. Proteínas que intervienen en el transporte de proteínas fuera del ER.
C. Proteínas que participan en la destrucción selectiva de proteínas anormales.
 Fosforilación de una proteína clave (eIF2α) necesaria para la traducción, lo que inhibe la síntesis proteica y disminuye el
flujo de neoproteínas al ER. Esto suministra a la célula una oportunidad de retirar proteínas que ya están en la luz del ER.
La UPR es más que un mecanismo de supervivencia, pues también puede inducir a la apoptosis. La UPR confiere un
mecanismo para aliviar a la célula en condiciones de estrés; si estas medidas correctivas no tienen éxito, se activa la vía de
muerte celular y la célula se destruye .

Del ER al Golgi, el primer paso en el transporte vesicular:

Los sitios de salida de las cisternas del RER están desprovistos de ribosomas y en ellos se forman las primeras vesículas de
transporte de la vía biosintética. Estas vesículas se fusionan unas con otras para formar vesículas más grandes y túbulos
interconectados entre el ER y el Golgi.
La región entre el ER y el Golgi es el ERGIC (Compartimento Intermedio Golgi / Retículo Endoplásmico) y los transportadores
vesiculotubulares que se forman en él se denominaron VTC (Vesicular-Tubular Carriers). Una vez formados, los VTC se alejan
del ER hacia el Golgi sobre rieles compuestos por MT.

Aparato de Golgi
Descubierto en 1898 con técnicas de tinción metálica (de Ag); se lo
consideró un artefacto hasta que se identificó en células sin fijación
preparadas por congelamiento y fractura.
Posee una morfología característica, consistente sobre todo en:
(1) Cisternas aplanadas parecidas a discos de 0,5 a 1μmϴ
(2) Bordes dilatados
(3) Vesículas y túbulos relacionados
Las cisternas están dispuestas en una pila ordenada (pila de de platos) y
curvadas de forma que semejan un tazón poco profundo. Generalmente,
una pila tiene menos de 8 cisternas.
Una célula puede contener de unas cuantas a varios miles de pilas
distintas. Miles de pilas se consideran parte de un solo Aparato de Golgi. Dictiosoma: Pila de Golgi en una célula vegetal
Una sola cisterna de Golgi muestra dos dominios distintos, uno central y
cóncavo y uno periférico e irregular. El dominio periférico consiste en una 1 dictiosoma : min 3 cisternas
red tubular de la cual se desprenden yemas cubiertas con proteína: las 1 dictiosoma : siempre menos de 8 cisternas
vesículas se desprenden del dominio tubular periférico de cada cisterna. 1 Aparato de Golgi : min 1 dictiosoma
El aparato de Golgi se divide en varios compartimentos con funciones 1 Aparato de Golgi : min 3 cisternas
diferentes, desde la cara cis (de entrada, más cercana al ER) hasta la trans
(de salida, en el lado opuesto de la pila). Relacionamiento del Golgi con proteínas:
Red Cis Golgi (CGN): Estación de clasificación, distingue proteínas que Del esqueleto de MP: Para soporte mecánico
deben regresar al ER y las que pueden avanzar a la siguiente estación del Motoras: Para dirigir movimiento de vesículas y
Golgi. túbulos que entran y salen.
Cisternas cis, mediales y trans: Plantas de procesamiento. Fibrosas: Matriz del Golgi, clave en desarmado y
Red Trans Golgi (TGN): Estación de clasificación. Separa proteínas en rearmado durante la mitosis
diferentes tipos de vesículas que se dirigen a la membrana o a destinos IC.
El aparato de Golgi no tiene una composición uniforme de un extremo a otro; las diferencias de composición de cis a trans
reflejan que el Golgi es sobre todo una planta procesadora. Las proteínas de membrana neosintetizadas, así como las
proteínas secretoras y lisosómicas, salen del ER y entran al Golgi por su cara cis y luego pasan a través de la pila hasta la cara
trans. Conforme avanzan por la pila, las proteínas originales sintetizadas en el RER sufren varias modificaciones específicas.
La actividad Golgiana mejor estudiada es la modificación de los carbohidratos.
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Glicosilación en el Golgi:
Incluye:
Modificación de oligosacáridos N-unidos provenientes del RE
Síntesis de oligosacáridos O-unidos
Síntesis de polisacáridos complejos
El aparato de Golgi tiene una función esencial en el ensamble del carbohidrato de glucoproteínas
y glicolípidos.
Recordemos que los carbohidratos N-unidos elaborados en el ER han perdido sus 3 glucosas.
Conforme las glucoproteínas solubles y de membrana pasan por las cisternas cis y media, la
mayor parte de los residuos de manosa también se retira de los oligosacáridos centrales y se
agregan otros azúcares en forma secuencial por la acción de glicosiltransferasas.
Las glicosiltransferasas son específicas de cada cisterna. Por ejemplo:
*Transferasa de sialilo se localiza en el extremo trans
*Manosidasa II se localiza en las cisternas medias de la pila del Golgi.
Los pasos de la glicosilación en el Golgi pueden ser muy variados y producen dominios de carbohidrato con una notable
diversidad en la secuencia, a diferencia de lo que pasa en el ER.
En el Golgi también se sintetizan la mayoría de los polisacáridos complejos de la célula (cadenas de glicosaminoglucanos de
proteoglicanos) así como pectinas y hemicelulosa de paredes celulares vegetales.
Recordemos también que la Esfingomielina y los glicolípidos terminan su síntesis en el Golgi.
Movimiento de materiales a través del Golgi:
Modelo de maduración de las cisternas: Las cisternas del Golgi se formarían en la cara cis de la pila mediante la fusión de
vesículas provenientes de ER y ERGIC; cada cisterna se mueve físicamente desde el cis al trans de la pila, cambiando de
posición conforme avanza. Cada cisterna “madura” a lo largo de la pila.
Modelo de transporte vesicular: Las cisternas del Golgi permanecen en su sitio como compartimentos estables y el
cargamento se lanza a través de vesículas desde la CGN hasta la TGN en vesículas, que se desprenden de un compartimento y
se fusionan con el compartimento contiguo más avanzado (más trans) de la pila.
Modelo de maduración de cisternas modificado: Las cisternas avanzan del cis al trans, los cargamentos se mueven hacia el
trans dentro de las cisternas y las proteínas propias del Golgi se devuelven a compartimentos más cis mediante vesículas de
transporte anterógrado.

EN EL GOLGI OCURRE:
MOVIMIENTO ANTERÓGRADO DE CISTERNAS: Transportan los sustratos que están siendo procesados.
MOVIMIENTO RETRÓGRADO DE VESÍCULAS: Retroceden las enzimas hacia las cisternas que van madurando.

Tipos de transporte vesicular y sus funciones

La mayoría de estas yemas membranosas que se están por desprender como vesículas, a la microscopía electrónica, están
cubiertas en su superficie citosólica por una capa electrondensa “difusa”; esta capa consta de una cubierta proteínica
formada por proteínas solubles [son periféricas] que se ensamblan en la superficie citosólica de la membrana donante en
sitios en que ocurre el desprendimiento de las vesículas.
El ensamblaje es iniciado por la activación de una pequeña proteína G reclutada específicamente en ese sitio.
Cada yema cubierta se desprende para formar una vesícula cubierta, que pueden formarse también en sistemas libres de
células.
Las cubiertas de proteínas tienen al menos 2 funciones distintas:
(1) dispositivo mecánico que hace que la membrana se curve y forme una vesícula desprendible
(2) mecanismo para seleccionar los componentes que transporta la vesícula.
Los componentes seleccionados incluyen:
(a) cargamento que debe transportarse
(b) estructura necesaria para dirigir y conectar la vesícula con la membrana receptora correcta
Las cubiertas proteicas son capaces de hacer selecciones en virtud de su afinidad específica por las colas citosólicas de
proteínas integrales que residen en la membrana donante.
Las clases de vesículas cubiertas se distinguen por las proteínas que conforman la
cubierta, la apariencia al ME y su papel en el tránsito celular, las tres mejor
estudiadas son:
Vesículas cubiertas con COP-II: Transporta desde el ER al ERGIC y del ERGIC al Golgi
(hacia adelante).
Vesículas cubiertas con COP-I: Transporta en sentido retrógrado. Del ERGIC y cis
Golgi al ER; y de trans Golgi hacia cis Golgi.
Vesículas cubiertas con clatrina: Movilizan materiales de la TGN a los endosomas,
lisosomas y vacuolas vegetales, y de la MP a los compartimentos citoplásmicos en la
vía endocítica. También en el tránsito de endosomas y lisosomas.
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COP – II COP – I
En la 1° parte de la vía biosintética, transporte anterógrado. Transporte retrógrado Golgi-ER
Cubierta formada por 5 proteínas Regresan a proteínas fugitivas del RER desde el ERGIC o
Interaccionan selectivamente con colas citosólicas de Golgi (Señales de recuperación están en el C terminal)
proteínas integrales porque contienen “señales de Receptor KDEL (e/ CGN y ER) para proteínas solubles.
exportación” Las proteínas seleccionadas incluyen: Señal KKXX para proteínas de membrana
a) Enzimas que actúan en etapas avanzadas de la vía biosintética Proteína G asociada: ARF1
[glicosiltransferasas] Hidrólisis de GTP desarticula la cubierta.
b) Proteínas de membrana participantes en fijación y fusión de la
vesícula con el compartimento blanco
c) Proteínas de membrana que pueden unirse con cargamento
soluble
Proteína G asociada: Sar1
Es reclutada en el ER, el cambio de GDP por GTP inicia el
proceso de formación de la vesícula.
1. Sar dobla la membrana
2. Recluta 2 proteínas del COPII que se unen como un dímero en
forma de plátano, lo que da a la membrana su forma redondeada
3. Las restantes proteínas del COPII se add a la vesícula
Para la fusión con la membrana blanco, la cubierta debe
desarticularse (Hidrólisis del GTP por Sar).

Más allá del Golgi. Ordenamiento de proteínas en TGN:

La red trans Golgi o TGN es la última estación en el aparato de Golgi, funciona como una instancia clasificadora y dirige a las
proteínas hacia diversos destinos. La más conocida de las vías posteriores del Golgi es la que lleva enzimas lisosómicas.
Ordenamiento y transporte de enzimas lisosómicas
Las proteínas lisosómicas se sintetizan en ribosomas unidos con la membrana en
el ER y se transportan al Golgi junto con otros tipos de proteínas.
En la cisterna cis del Golgi, ciertas enzimas reconocen a las enzimas lisosómicas
solubles y catalizan la adición de un grupo fosfato a residuos de manosa de los
carbohidratos N unidos. A diferencia de otras glucoproteínas separadas en la
TGN, las enzimas lisosómicas tienen residuos de manosa fosforilados que actúan
como señales de reconocimiento.
Los receptores para manosa-6-fosfato (MPR) reconocen y capturan a las enzimas
lisosómicas; son proteínas integrales que cruzan las membranas de la TGN.
Las enzimas lisosómicas se transportan desde la TGN en vesículas cubiertas con
clatrina.
Una vez que la vesícula se desprende de la TGN, la cubierta de clatrina se pierde y
la vesícula descubierta avanza a su destino, que puede ser un endosoma
temprano, endosoma tardío o vacuola vegetal. Antes de llegar a alguno de estos
organelos, los MPR se separan de las enzimas lisosómicas y regresan a la TGN
para reiniciar otra ronda de transporte.
Separación y transporte de proteínas no lisosómicas
Las proteínas destinadas a la MP y los materiales secretores destinados a la exportación fuera de la célula también se
transportan desde la TGN, pero se sabe poco de los mecanismos implicados. Un modelo sugiere que los portadores
membranosos se producen cuando la TGN se fragmenta en vesículas y túbulos de diversos tamaños; este concepto se adapta
al modelo de maduración de las cisternas.
Las proteínas que se descargan de la célula mediante secreción regulada (enzimas digestivas, hormonas) forman agregados
selectivos que al final se retienen en gránulos secretores grandes y muy concentrados; los gránulos se almacenan en el
citoplasma hasta que su contenido se libera después de un estímulo.
El direccionamiento de las proteínas integrales de la MP parece basarse en las señales de separación en los dominios
citoplásmicos de las proteínas de membrana.
1. En células polarizadas, las proteínas de membrana destinadas a residir en la porción apical de la MP contienen
diferentes señales de separación respecto de las proteínas destinadas a la porción lateral o basal.
2. En células no polarizadas (Fb, leucocitos) no se requieren señales de separación especiales. Tal vez estas proteínas
solo se trasladen de la TGN a la superficie celular en vesículas de la vía secretora constitutiva.

Direccionamiento de proteínas a un compartimento particular.

La fusión de vesículas requiere interacciones específicas entre membranas diferentes. La fusión selectiva es uno de los
factores que asegura un flujo directo por los compartimentos membranosos de la célula. Se asume que una vesícula contiene
proteínas relacionadas a su membrana que regulan los movimientos y el potencial de fusión. Para comprender la naturaleza
de estas proteínas, se consideran los pasos que ocurren desde el desprendimiento de la vesícula hasta su fusión.
1. Movimiento de la vesícula hacia el compartimento blanco específico: mediado sobre todo por MT.
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2. Fijación de las vesículas al compartimento blanco: Es una etapa temprana del proceso de fusión y requiere cierta
especificidad entre vesícula y compartimento blanco. La especificidad la confieren las Rab (proteínas G fijadas a lípidos).
Distintas Rab se vinculan con diferentes compartimentos de membrana, lo que da una identidad de superficie única para
reclutar proteínas implicadas en la especificidad de direccionamiento. Las vesículas se “fijan” a un compartimento blanco
mediante proteínas fibrosas extendidas.
Las Rab reclutan (1)proteínas citosólicas de fijación específicas y (2)motores que participan en
transporte vesicular.
3. Acoplamiento de las vesículas al compartimento blanco: Las membranas de la vesícula y el
compartimento blanco entran en contacto estrecho como resultado de la interacción entre
regiones citosólicas de las proteínas integrales de las dos membranas: las SNARE.
SNARE-t: en el compartimento blanco. Por ej, Sintaxina y Snap 25 en membrana presináptica.
SNARE-v: en la vesícula. Por ej, Sinaptobrevina en vesículas sinápticas.
Las SNARE: 1. forman una familia de más de 35 proteínas de membrana
2. se ubican en compartimentos subcelulares específicos
3. varían en tamaño y estructura, pero todas poseen un motivo SNARE de 60-
70 aa capaces de formar complejo con otro motivo Snare
4. Las SNARE de la vesícula sináptica y de la membrana presináptica son
blancos de toxinas bacterianas (botulismo y del tétanos). Estas toxinas son
proteasas, escinden a las SNARE, inhiben neurotransmisión y causan parálisis.
4. Fusión entre las membranas de la vesícula y el blanco: Las interacciones entre SNARE v y t
son capaces de unir dos bicapas de lípidos con la fuerza suficiente para hacer que se fusionen; pero no es suficiente por sí
misma para inducir la fusión dentro de una célula. La fusión es desencadenada por calcio.
Una vez que se fusionan las bicapas de las dos membranas, las SNARE de ambas membranas residen en la misma membrana.
Una proteína llamada NSF disocia el complejo SNARE por medio de hidrólisis de ATP.
NSF tiene forma de rosquilla y consume ATP.
¿Cómo se determina la especificidad de la interacción entre membranas?
Por de la combinación específica de proteínas que interactúan: proteínas de fijación, proteínas Rab y Snare; en conjunto,
estas interacciones proporcionan una gran especificidad.

Exocitosis
Fusión de una vesícula secretora o gránulo secretor con la membrana plasmática y la descarga subsiguiente de su contenido.
Ocurre en forma continua en la mayoría de las células, conforme se envía proteínas y materiales a la MP y al espacio EC.
Los ejemplos mejor estudiados ocurren durante la secreción regulada, sobre todo en la sinapsis. En estos casos, la fusión de
membranas produce una abertura a través de la cual se libera el contenido de la vesícula o gránulo hacia el espacio EC.
En la sinapsis: La llegada de un impulso nervioso aumenta la entrada de calcio EC con la descarga consecuente de
neurotransmisores por exocitosis. En este caso, la fusión está regulada por una proteína de unión con calcio, la
sinaptotagmina presente en la membrana de la vesícula sináptica.
En otras células: la exocitosis casi siempre se inicia por liberación de calcio de las reservas citoplásmicas.
Lisosomas
Organelos digestivos de una célula animal. Un lisosoma típico contiene cerca de 50 enzimas
hidrolíticas diferentes.
En conjunto, las enzimas lisosómicas pueden hidrolizar todo tipo de macromoléculas biológicas.
Todas las enzimas alcanzan su actividad óptima a un pH ácido, son hidrolasas ácidas [tenemos que
conocer las enzimas, o sea, manejar el Cuadro 8-1].
El pH óptimo de las hidrolasas se sitúa por debajo del pH del lisosoma, que se aproxima a 4.6.
+ +
La ↑[H ] se mantiene por la ATPasa de H de la membrana lisosomal.
Las membranas lisosómicas contienen diversas proteínas integrales muy glicosiladas cuyas
cadenas de carbohidrato forman un recubrimiento protector
que protege a la membrana contra el ataque de las hidrolasas.
La colección de enzimas de un lisosoma es predecible, pero su
apariencia en las micrografías electrónicas no es distintiva ni
uniforme (son polimorfos). Su tamaño es variable.
Clasificación de los lisosomas:
Lisosoma primario: Contiene solo parte de las hidrolasas ácidas y únicamente tras su
fusión con un endosoma tardío adquiere la dotación completa de enzimas.
Lisosomas secundarios: Resultan de la fusión de los lisosomas primarios con vesículas de
la vía endocítica o de la autofagia. Pueden denominarse:
Lisosoma: Resultado de la fusión de varios lisosomas primarios con un endosoma tardío.
Fagolisosoma o heterofagosoma: Resultado de la fusión de varios lisosomas primarios
con un fagosoma.
Autofagolisosoma, vacuola autofágica o citolisosoma: Resultado de la fusión de varios
lisosomas primarios con un autofagosoma.
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Cuerpos residuales: Son resultado de la digestión incompleta de los materiales que estaban dentro del lisosoma secundario.
En algunas células son eliminados por defecación; en otras, terminan acumulándose en el citoplasma.
Enzimas lisosómicas
Enzima Sustrato
Fosfatasas
Fosfatasa ácida Monoésteres de fosfato
Fosfodiesterasa ácida Diésteres de fosfato
Nucleasas
Ribonucleasa ácida ARN
Desoxirribonucleasa ácida ADN
Proteasas
Catepsina Proteínas
Colagenasa Colágeno
Enzimas que hidrolizan glicosaminoglicanos
Sulfatasa de iduronato Dermatán sulfato
Galactosidasa beta Queratán sulfato
Sulfatasa N de heparán Heparán sulfato
N acetil glucosaminidasa alfa Heparán sulfato
Polisacaridasas y oligosacaridasas
Glucosidasa alfa Glucógeno
Fucosidasa Fucosiloligosacáridos
Manosidasa Manosiloligosacáridos
Sialidasa Sialiloligosacáridos
Enzimas que hidrolizan esfingolípidos
Ceramidasa Ceramida
Glucocerebrosidasa Glucosilceramida
Hexosaminidasa beta Gangliósido GM2
Arilsulfatasa A Galactosilsulfátido
Enzimas que hidrolizan lípidos
Lipasa ácida Triacilgliceroles
Fosfolipasa Fosfolípidos

Funciones del lisosoma

*Digestión de materiales extracelulares:
Unicelulares: Ingieren alimento que es degradado enzimáticamente en los lisosomas. Los nutrimentos pasan por la
membrana lisosómica hacia el citosol.
Fagocitos (macrófagos, neutrófilos): Ingieren detritos y microorganismos que pudieran ser peligrosos. Las bacterias
ingeridas se desactivan en el pH del lisosoma y luego se someten a la digestión enzimática.
*Autofagia: Es la rotación de organelas.
Un organelo es rodeado por una membrana doble derivada del ER. La membrana externa se fusiona con un lisosoma
para producir un autofagolisosoma, en el cual el organelo encerrado se degrada y los productos de degradación se
hacen disponibles para la célula. Una mitocondria se somete a autofagia cada 10 min en un hepatocito de mamífero.
↓nutrimentos, ↑autofagia (la célula se mantiene mediante canibalismo de sus propios organelos).
La autofagia ayuda a proteger al organismo contra amenazas intracelulares; puede servir como vía que conduce a la
apoptosis de células malignas.
Una vez terminado el proceso digestivo en el autofagolisosoma, el organelo se conoce como cuerpo residual. El
contenido del cuerpo residual puede eliminarse de la célula por exocitosis o conservarse indefinidamente en el
citoplasma como una inclusión (gránulos de lipofuscina). ↑Edad ↑Lipofuscina en células que no se dividen (neuronas,
miocardio).
Microautofagia: degradación de materiales englobados desde el citosol.
Crinofagia: degradación de gránulos secretorios acumulados en la secreción facultativa.
Patologías del lisosoma
Enfermedad Déficit enzimático Principal sustancia almacenada
Gangliosidosis GM1 Galactosidasa beta GM1 Gangliósido GM1
Enfermedad de Tay – Sachs Hexosaminidasa A Gangliósido GM2
Enfermedad de Fabry Galactosidasa alfa A Trihexosilceramida
Enfermedad de Sandhoff Hexosaminidasas A y B Gangliósido GM2 y globósido
Enfermedad de Gaucher Glucocerebrosidasa Glucocerebrósido
Enfermedad de Niemann – Pick Esfingomielinasa Esfingomielina
Lipogranulomatosis de Farber Ceramidasa Ceramida
Enfermedad de Krabbe Galactocerebrosidasa Galactocerebrósido
Lipidosis sulfatada Arilsulfatasa A Sulfatos
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Vacuolas Vegetales
Hasta el 90% del volumen de muchas células vegetales está ocupado por una sola vacuola central llena con líquido y limitada
por una membrana; aunque su estructura es sencilla, realizan una gran variedad de funciones esenciales:
Almacenamiento: Solutos, macromoléculas, iones, azúcares, aminoácidos, proteínas, y polisacáridos se almacenan de forma
temporal. También se almacenan compuestos tóxicos usados como armas químicas (glicósidos que contienen cianuro y
glicosinolatos), o son solo metabolitos (la digital).
Presión de turgencia: El tonoplasto (membrana vacuolar) contiene diversos sistemas de transporte activo que bombean
iones hacia el compartimento vacuolar a una [↑↑↑] de la que se encuentra en el citoplasma o en el líquido EC, y el agua
entra a la vacuola por ósmosis. La presión hidrostática (de turgencia) que ejerce la vacuola suministra (1)soporte
mecánico a los tejidos blandos y (2)estira a la pared celular durante el crecimiento de la célula.
Digestión intracelular: No son muy distintas a lisosomas; tienen algunas de las mismas hidrolasas ácidas de los lisosomas.
+
Una ATPasa de H tipo V del tonoplasto que bombea protones hacia el líquido vacuolar.

La Vía Endocítica: Movimiento de membrana y materiales dentro de la célula

¿Cómo son las células capaces de incluir materiales que son demasiado grandes para penetrar su membrana sin importar sus
propiedades de impermeabilidad? ¿cómo se reciclan las proteínas que residen en la MP a los compartimentos interiores?
Gracias a la vía endocítica. En ella, segmentos de membrana se invaginan para formar vesículas citoplásmicas que se
transportan al interior de la célula.
La endocitosis y la fagocitosis ocurren por dos mecanismos distintos: la endocitosis es un proceso por el cual la célula
interioriza los receptores de la superficie celular y los ligandos EC unidos a ellos; la fagocitosis describe la captación de
partículas.

Pinocitosis Inespecífica
Endocitosis Endocitosis mediada
Vía endocítica Específica
Fagocitosis por receptor

Endocitosis
Endocitosis por volumen [Pinocitosis]:
Captación inespecífica de líquidos extracelulares (algunos dicen que la célula “bebe”). Cualquier
molécula, grande o pequeña, que esté en el líquido abarcado también entra a la célula. Su
función es el reciclaje de membranas que fueron fusionadas con la MP durante exocitosis.
A mayor actividad de exocitosis, mayor actividad de pinocitosis.

Endocitosis mediada por receptor:

Captación de macromoléculas EC específicas (ligandos) luego de su unión con receptores en la
MP. Proporciona un medio de captación selectiva y eficiente de macromoléculas que pueden
estar en baja concentración en el líquido EC.
Los receptores se reúnen en dominios especializados de la MP, los fosos cubiertos. Se
concentran allí con un nivel 10 a 20 veces mayor que en el resto de la MP.
En las micrografías electrónicas, los fosos cubiertos se reconocen como
1. Sitios en los que la superficie está hundida
2. Sitios donde la MP está cubierta internamente con una cubierta electrodensa que
contiene clatrina.
Cuando se ve desde la superficie citoplásmica, la cubierta erizada parece consistir en una red de
hexágonos parecidos a un panal de abejas; la construcción geométrica de la cubierta deriva de
la estructura de sus bloques de clatrina.
Clatrina: Cada molécula consiste en tres cadenas pesadas + 3 cadenas ligeras unidas para
formar un trípode de clatrina o trisquelion. Las vesículas cubiertas con clatrina contienen
(a) una celosía externa parecida a un panal formada por clatrina, el soporte estructural
(b) una capa interna formada por adaptadores de proteína.
Los adaptadores están presentes tanto en vesículas endocíticas como en vesículas de la TGN.
Adaptadores de vesículas cubiertas con Clatrina
Vesículas de Enzimas Lisosómicas Vesículas endocíticas
Adaptador GGA Adaptador AP2
Una sola subunidad de varios Compuesto por múltiples
dominios que: subunidades con distintas funciones
Se add a clatrina y a receptores Subunidad μ: congrega a receptores
de manosa-6-fosfato; también se Subunidad β-adaptina: congrega a
une también a ARF-1 (Proteína G) clatrina
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A diferencia de las vesículas con coatómeros (los COPs) que tienen una construcción
relativamente sencilla, las vesículas cubiertas con clatrina contienen más de dos docenas
de proteínas accesorias diferentes. La mejor estudiada es la dinamina.
Dinamina:
1. Es una proteína G
2. Necesaria para la liberación de la vesícula cubierta con clatrina de la membrana en la
que se forma.
3. Polimeriza en un collar helicoidal alrededor del cuello de la vesícula.
4. La hidrólisis de GTP unido induce un cambio de conformación en la dinamina que corta
la vesícula de la membrana.
En el minuto siguiente de su formación, la vesícula endocítica pierde su cubierta de
clatrina y se vuelve una vesícula descubierta o de superficie lisa que entra a la vía
endocítica.
La vía endocítica
Receptores Domésticos Receptores de Señalización
1. Encargados de la captación de materiales que se utilizan 1. Encargados de unir ligandos EC que llevan mensajes que
en la célula. Receptor de transferrina (transporta hierro) y cambian las actividades celulares. Receptor de hormonas
de LDL (transporta colesterol). (insulina), factores de crecimiento (EGF)
2. Endocitosis deriva a destrucción del receptor (regulación
2. Endocitosis deriva a la entrega del material unido a la
en descenso del receptor) para reducir la sensibilidad de la
célula y el reciclaje del receptor.
célula a la estimulación de la hormona o factor.
Después de la interiorización, los materiales unidos con la vesícula se transportan a
una red dinámica de túbulos y vesículas conocida en conjunto como endosomas.
Los endosomas
a. Representan los centros de distribución a lo largo de la vía endocítica.
+
b. El interior de los endosomas se acidifica por la ATPasa de H en la
membrana limitante.
3. Se dividen en:
Endosomas tempranos (cerca de la región periférica de la célula)
Endosomas tardíos (más cerca del núcleo)
Ambos tipos de endosomas pueden distinguirse por:
(1) densidad boyante
(2) acidez
(3)composición proteica.
Los endosomas tardíos pueden contener considerables cantidades de membrana
interna que surgen por invaginación de la membrana limitante (las vesículas internas
a menudo contienen proteínas de la MP que van a ser destruidas).
El endosoma temprano sirve como estación clasificadora:
(1) Los receptores domésticos se separan de sus ligandos en el ambiente ácido. Los receptores se reciclan y los ligandos se
envían a un endosoma tardío y luego a un lisosoma.
(2) Los receptores de señalización con sus marcas de ubiquitina no se reciclan. Se envían a un endosoma tardío, luego a un
lisosoma y mueren .
Metabolismo de LDL-Colesterol:
El colesterol se transporta en la sangre como parte de enormes complejos de lipoproteína, por ejemplo, la LDL.
Cada LDL contiene: (1) un centro con 1500 moléculas de colesterol esterificado
(2) una monocapa de fosfolípidos que contiene
(3) una sola copia de una proteína Apo B-100 que se une a los receptores de LDL.
Los receptores de LDL se acumulan en fosos cubiertos de la MP aun en ausencia de ligando. Una vez
endocitado el LDL ligado al receptor, el receptor se recicla de vuelta hacia la membrana y el LDL se
traslada a los lisosomas, donde el componente proteico se degrada y el colesterol se desesterifica.
**El aumento de la concentración de LDL en sangre origina ateroesclerosis.
**Se reducen los niveles de LDL si se administran medicamentos llamados estatinas, que inhiben a una
enzima llamada HMG-CoA reductasa, clave para la síntesis de colesterol.
**HDL es otro transportador de colesterol en sangre, similar a LDL pero con:
**Proteína distinta (Apo A-I)
**Función distinta. LDL transporta colesterol desde el hígado a todas las células del cuerpo, la
HDL lo transporta en sentido contrario.
↑[HDL] en sangre = ↓ riesgo de enfermedad cardíaca.
LDL es el “colesterol malo” y HDL es el “colesterol bueno”.
HDL puede transformarse a LDL por una enzima llamada proteína de transferencia de ésteres de
colesterol, o CETP. La actividad de CETP tiende a reducir niveles de HDL. Inhibiendo CETP aumentan los
niveles de HDL.
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Fagocitosis
Se dice que es cuando la célula “come”.
Es tarea de unos cuantos tipos de células especializadas en la captación de partículas grandes (>0.5μmϴ) del ambiente.
La fagocitosis consiste en encerrar al objetivo dentro de pliegues de MP, que se fusionan para formar una vacuola o
fagosoma que termina fusionándose con un lisosoma: el material se
digiere en el fagolisosoma resultante.
**Los protistas unicelulares (amebas y ciliados) viven porque atrapan
alimento y microorganismos más pequeños mediante fagocitosis.
**En animales, la fagocitosis sirve como mecanismo protector más que
como forma de alimentación.
Los fagocitos profesionales de mamíferos son los neutrófilos y los
macrófagos, que viajan por la sangre para fagocitar microorganismos
invasores, células dañadas, moribundas o detritos.
La fagocitosis se favorece por las actividades contráctiles de FA
subyacentes a la MP.
Etapas de la fagocitosis:
1. Captura (con formación de seudópodos)
2. Encierro
3. Digestión
4. Absorción
Los destinos del fagolisosoma son los mismos que los del
autofagolisosoma.
No todas las bacterias fagocitadas se destruyen:
(1) Mycobacterium tuberculosis, causante de tuberculosis. Los
fagosomas en los que se encierra no se fusionan con un
lisosoma; el microorganismo inhibe la fusión de
membranas y se multiplica dentro de la célula.
(2) Coxiella burnettii el fagosoma se fusiona con el lisosoma,
pero ni el ambiente ácido ni las hidrolasas pueden con ella.
(3) Listeria monocytogenes causa meningitis, destruye la
integridad de la membrana lisosómica y escapa hacia el
citosol. Recordar que ella cruza el citoplasma como un
cohete.

Captación de proteínas por peroxisomas, mitocondrias y cloroplastos

postraduccionalmente
Cuatro de los principales organelos de la célula (núcleo, mitocondrias, cloroplastos y peroxisomas) importan proteínas a
través de una ó más membranas limitantes externas. Las proteínas que importan contienen secuencias de aminoácidos que
sirven como señales que reconocen receptores en la membrana externa del organelo; las proteínas de estos organelos se
importan después de la traducción completa en el citosol.

Captación de proteínas en los peroxisomas: Estos organelos poseen 2 compartimentos posibles: luz y membrana.
La señal de dirección peroxisómica puede ser una PTS (para una proteína de la matriz peroxisómica) o una mPTS para una
proteína peroxisómica de membrana. Los peroxisomas son capaces de importar proteínas en su conformación plegada
nativa, incluso las que tienen varias subunidades.

Captación de proteínas en las mitocondrias:

Estos organelos poseen 4 compartimentos posibles: 2 membranas y 2 compartimentos.
Las mitocondrias sintetizan 13 de sus proteínas en los mamíferos.
El 99% de las proteínas se codifica en el genoma nuclear, se sintetiza en el
citosol y se importa postraduccionalmente.
Lo sgte. se aplica solo a proteínas de la MMI y de la matriz.
Las proteínas de la matriz mitocondrial poseen una secuencia directriz
removible, la secuencia previa, localizada en el N-terminal con varios
residuos de carga positiva.
Las proteínas de la MMI cuentan con secuencias directrices internas que
permanecen como parte de la molécula.
La proteína debe estar relativamente desplegada/extendida; varias
chaperonas (Hsp70) participan en la preparación de péptidos para su
captación en mitocondrias.
La MME contiene un complejo importador, el complejo TOM, que posee:
(1) receptores que conocen y se unen con proteínas mitocondriales
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(2) canales recubiertos con proteína por los cuales pasan los polipéptidos desplegados a través de la MME.
Las proteínas deben pasar por el espacio intermembranoso y acoplarse con un segundo complejo importador: el complejo
TIM de la MMI.
TIM22: Para proteínas integrales de la MMI, las inserta en la bicapa.
TIM23: Para proteínas de la matriz, las traslada a través de la membrana.
La traslocación ocurre en sitios en los que las MME y MMI están muy próximas, de manera que la proteína importada puede
cruzar ambas membranas a la vez.
El movimiento hacia la matriz está impulsado por el potencial eléctrico que actúa sobre la señal directriz de carga positiva.
DNP inhibe la traslocación.
Dentro de la matriz, un polipéptido interactúa con las chaperonas mitocondriales (mtHsp70) que median la entrada al
compartimento acuoso.
El mecanismo de la difusión tendenciosa dice que la chaperona actúa como un trinquete browniano. Browniano por aleatorio;
trinquete porque permite el movimiento en una sola dirección.
 Citoesqueleto y motilidad celular
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CITOESQUELETO Y MOTILIDAD CELULAR

Los elementos del citoesqueleto son los microtúbulos (MT), filamentos de actina (FA) y los
filamentos intermedios (FI) que constituyen una red interactiva.
Los tres filamentos del citoesqueleto son polímeros de subunidades proteicas unidas por enlaces
débiles no covalentes para un ensamble/desensamble rápidos que dependen de una regulación
compleja.
Los procariotas contienen proteínas similares a tubulina y a actina que polimerizan en filamentos
citoplásmicos y realizan actividades semejantes a las del citoesqueleto; también poseen proteínas
relacionadas lejanamente con FI.
Microtúbulos Filamentos Intermedios Microfilamentos
Subunidades Heterodímero GTP-αβ-tubulina Varias proteínas globulares Monómeros ATP-actina
Tubo rígido, hueco, sin Fibras gruesas, resistentes, Filamento helicoidal flexible,
Estructura
ramificaciones similares a cuerdas sólido.
Dimensiones 25 nm Ø 10 nm Ø 8 nm Ø
Soporte, transporte IC,
Funciones principales Soporte estructural Movilidad, contractilidad
organización celular
Distribución Todos los eucariotas Animales Todos los eucariotas
Polaridad Sí (más y menos) No Sí (barbado y afilado)
Actividad enzimática GTPasa Ninguna ATPasa
Proteínas motoras Cinesinas y dineínas Ninguna Miosinas
Prot. relacionadas MAP Plaquinas Proteínas de unión con actina

Principales funciones del citoesqueleto

(1) Andamio dinámico que brinda soporte estructural, da forma a la célula y resiste fuerzas que quieran deformarla.
(2) Marco interno que establece posiciones de las organelas (muy evidente en células polarizadas).
(3) Rieles para movimiento de materiales dentro de la célula (MT y FA). Las organelas se transportan sobre MT o FA.
(4) Generadores de fuerza que mueven a la célula de un sitio a otro.
(5) Maquinaria para la división celular, formando el huso mitótico (MT) y el anillo de citocinesis (FA).

Microtúbulos
Estructura y Composición
(1) Los MT son estructuras tubulares huecas de 25nm de diámetro.
(2) Están compuestos por dímeros de tubulina.
Los dímeros de tubulina están formados por una tubulina α y una tubulina β.
Las dos tubulinas que conforman un dímero de tubulina se unen a GTP.
La tubulina α está unida a un GTP que no se hidroliza ni es intercambiable.
La tubulina β está unida a un GDP que se intercambia a GTP antes de polimerizar.
(3) Están presentes en casi todas las células eucariotas.
(4) Forman parte de estructuras diversas, como cilios, flagelos, huso mitótico y axópodos.
(5) Pueden extenderse a lo largo o ancho de la célula.
(6) Formados por 13 protofilamentos, cada uno de los cuales se ensambla a partir de αβ-
tubulinas.
(7) Los protofilamentos:
**Son hileras de proteínas globulares (dímeros de αβ-tubulina unidos cabeza a
cola) ubicados en la pared del túbulo paralelamente su eje longitudinal.
**Se asocian:
(a) lado a lado, no covalentemente, lo que tiene una función importante para
mantener la estructura del MT
(b) intercalándose cada 1 nm, con lo que la tubulina forma un conjunto helicoidal
alrededor de la circunferencia del microtúbulo.
(8) La costura de un MT es el sitio donde la hélice de tubulinas se interrumpe porque las
subunidades α y β hacen contactos laterales.
(9) Todos los protofilamentos de un MT poseen la misma polaridad, por consiguiente,
todo el polímero también.
(10) El extremo del MT con subunidades beta se denomina más, el extremo contrario es el
extremo menos que termina con subunidades alfa. Esta polaridad es importante en el
crecimiento de los MT y en su capacidad de participar en actividades mecánicas dirigidas.
 Citoesqueleto y motilidad celular
EMP
MAP: Proteínas asociadas con MT
**Contienen un dominio que se une a un MT y otro que sobresale hacia afuera como un 4 nm
filamento de la superficie del MT.
**Se clasifican en estructurales y motoras.
Estructurales: proteína tau, MAP2 Motoras: cinesinas y dineínas
**Las MAPs suelen incrementar la estabilidad de los MT y promover su ensamble.
**La unión de las MAP a los MT se controla mediante fosforilación y desfosforilación.
**La proteína tau participa en el desarrollo de varios transtornos neurodegenerativos letales.
Se forman las llamadas marañas neurofibrilares de proteína tau hiperfosforilada incapaz de
asociarse a MT.
La demencia hereditaria FTDP-17 tiene como causa primaria la alteración genética de la proteína tau.

MT como soportes y organizadores estructurales

Los MT son lo bastante rígidos para soportar fuerzas que quieran comprimir o doblar a la fibra: pueden brindar soporte
mecánico como las vigas de acero que sostienen un gran edificio o los postes que sostienen estructuras de una tienda.
(1) La distribución de los MT citoplásmicos en una célula ayuda a determinar la forma de la misma.
En células animales cultivadas: los MT se extienden en un patrón radial desde el área
perinuclear hacia la periferia.
En células epiteliales cilíndricas: los MT se orientan con el eje longitudinal paralelo al eje
mayor de la célula, ayudando a mantener su forma alargada.
En células vegetales: la función de los MT de mantener la forma celular es indirecta. Se
ubican justo por debajo de la membrana celular y forman una zona cortical distintiva
ayudando a las enzimas que sintetizan celulosa a moverse. La orientación de las
microfibrillas de celulosa, paralelas a los microtúbulos, tiene un papel importante en la
determinación de la forma de la célula. Los microtúbulos y las fibras de celulosa recién
sintetizadas se disponen en dirección perpendicular con el eje longitudinal de la célula,
como aros alrededor de un barril. La presión de turgencia que ejerce el líquido en la vacuola
celular se dirige, entonces, a los extremos de la célula, lo que produce su elongación.
(2) Los MT tienen función como elementos esqueléticos.
Es evidente en cilios, flagelos y axópodos. En los axópodos los MT se disponen en espiral con
MT individuales que atraviesan toda la longitud del proceso.
(3) Los MT participan en el mantenimiento de la organización interna de las
células.
El tratamiento de las células con agentes que rompen los MT (nocodazol,
colquicina) afecta la localización de organelas membranosas, inclusive ER y el
Golgi. El Golgi casi siempre se ubica cerca del núcleo de una célula animal, justo
fuera del núcleo. Al tratar a la célula con nocodazol o colquicina, el Golgi puede
dispersarse hacia la periferia celular. Quitando las drogas del medio y permitiendo
el reensamblaje de MT, el Golgi vuelve a su posición normal.

MT como agentes de motilidad intracelular

Se sabe que el transporte de materiales de un compartimento a otro depende de
la presencia de MT (también de FA) porque el desensamble específico de estos elementos citoesqueléticos detiene los
movimientos.
Transporte Axónico
**Uso de microtúbulos del axón para el transporte de proteínas, neurotransmisores,
RNA, ribosomas y elementos del citoesqueleto.
**Los materiales se mueven a distintas velocidades, el transporte axónico más
rápido alcanza velocidades de 5m/s [40cm/día].
**Las vesículas y los materiales a transportar se unen a los MT mediante proteínas
de enlace, que comprenden motores como la cinesina y la dineína.
**Existen dos tipos de transporte axónico: anterógrado y retrógrado.
Transporte anterógrado: los materiales se mueven del soma neuronal
hasta las terminaciones nerviosas [cinesinas].
Se transportan vesículas con neurotransmisores y organelas (mitocondrias),
ARN, ribosomas y elementos de citoesqueleto.
Transporte retrógrado: los materiales se mueven desde la sinapsis hacia el
cuerpo celular [dineínas citoplásmicas].
Se transportan vesículas endocíticas que se forman en las terminales
nerviosas.
**Los defectos en el transporte anterógrado y retrógrado se han vinculado a varias afecciones neurológicas.
**El axón contiene a los 3 filamentos del citoesqueleto
**El transporte es mediado principalmente por MT.
 Citoesqueleto y motilidad celular
EMP
Centros Organizadores de MT (COMT)
El ensamble de MTs ocurre en dos fases: Nucleación y Elongación. In vitro, la nucleación es lenta y se forma una pequeña
parte del MT. In vivo, la nucleación es rápida y ocurre en COMT.

(1) Centrosomas
Es el COMT mejor estudiado y está presente en animales.
Los centrosomas son centros organizadores de microtúbulos compuestos por un par de
centriolos rodeados por el material pericentriolar.
Centriolos:
*Estructuras con forma de barril formadas por 9 fibrillas compuestas por 3 MT cada
una (9 tripletes de MT).
Los microtúbulos de cada triplete se denominan A, B y C
El MT A de cada triplete es el único que tiene 13 protofilamentos (MT completo)
*Son cilindros de 0,2μm Ø y el doble de largo.
*Tienen apariencia de “rueda con rayos” o “rueda con espigas”.
*Los centriolos se encuentran en pares situados en ángulo recto.
Material pericentriolar:
*Es electrodenso y amorfo
* Es una celosía fibrosa de conformación laxa alrededor de los dos centriolos.
* Es el “COMT verdadero” debido a que en él se ubica la tubulina gamma.
*El centrosoma (específicamente el material pericentriolar) es el principal sitio de nucleación en
animales y se ubica en el centro de la red microtubular.
*Los centriolos servirían para:
(1) El reclutamiento del material pericentriolar durante el ensamble del centrosoma.
(2) El proceso de duplicación del centrosoma.
*La polaridad de los microtúbulos generados en el centrosoma es siempre la misma:
- El extremo menos se relaciona con el centrosoma.
- El extremo más es el extremo de crecimiento y se sitúa en la punta del microtúbulo
contraria al centrosoma.
*Los núcleos de los MT se forman en el COMT y se alargan en el extremo contrario del polímero.
*El extremo creciente del MT puede tener un conjunto de proteínas diferentes que ayudan a unir el MT a un blanco
particular (endosoma, cisterna del Golgi, cromosoma).
EL CUERPO BASAL Y EL CENTRIOLO
(2) Cuerpos basales SON ESTRUCTURAS “9X3”
*Los cuerpos basales son de estructura idéntica a la de un centriolo.
POSEEN NUEVE TRIPLETES DE MT
*Cuerpos basales y centriolos pueden darse origen el uno al otro.
*Para nuclear los microtúbulos externos de un cilio o flagelo existe el cuerpo basal, ubicado en la base del cilio o flagelo.
*El COMT propiamente dicho se encuentra en el extremo más del cuerpo basal.
Centriolo Cuerpo basal
En interfase hay 2 centriolos completos por cada En interfase hay 1 cuerpo basal por cada cilio o flagelo que
centrosoma. Los dos centriolos del centrosoma reciben el presente la célula. Los cuerpos basales se ubican en la base
nombre de diplosoma. de estos procesos.
Estructura 9x3: 9 tripletes periféricos de MT Estructura 9x3: 9 tripletes periféricos de MT

(3) COMT vegetal

*Las células vegetales no tienen centrosomas ni centriolos ni COMT evidentes.
*Los MT están concentrados alrededor de la superficie del núcleo y dispersos en la corteza, donde se forman (¡ahí está la
tubulina gamma!)

A pesar de la apariencia tan diversa, todos los MTOC tienen funciones similares en todas las células:
(a) controlar el número de MT
(b) controlar la polaridad de los MT
(c) controlar el número de protofilamentos en las paredes de los MT
(d) controlar el momento y localización del ensamble de MT
****Todos los COMT comparten un componente proteico: tubulina gamma****
La tubulina gamma representa 0.005% del total de proteínas celulares (las alfa y beta, el 2,5% en una célula no neural).
Los anticuerpos fluorescentes anti-tubulina gamma tiñen todos los COMT. Las tubulinas gamma se agrupan en complejos
anulares (ej, γ-TuRC) de 25nmϴ que sirven como sitios de nucleación.
Un conjunto helicoidal de subunidades de tubulina gamma forman un molde anular sobre el que la primera hilera de
dímeros de tubulina-αβ se ensambla. Solo la tubulina α puede unirse con un anillo de subunidades gamma.
***El anillo gamma determina la polaridad de todo el MT y forma una capa en su extremo menos***
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EMP
Proteínas motoras que cruzan el citoesqueleto microtubular
*Las proteínas motoras convierten energía química (ATP) en energía mecánica.
*Transportan vesículas, mitocondrias, lisosomas, cromosomas y otros filamentos del
citoesqueleto.
*Hay tres grandes familias de proteínas motoras: cinesinas, dineínas y miosinas.
[Miosina se mueve sobre FA].
*Se mueven por pasos en una sola dirección a lo largo del riel del citoesqueleto.
*Las proteínas motoras coordinan los pasos de un ciclo mecánico [cambios
conformacionales en la proteína] con los de un ciclo químico [o catalítico] que se basa
en la hidrólisis de ATP.
*La unión e hidrólisis de una sola molécula de ATP se emplea para impulsar un golpe de
El ser humano posee varias
poder que mueve al motor un número preciso de nanómetros sobre el riel. miosinas y cinesinas diferentes.
*Los ciclos mecánico y químico se repiten una y otra vez, lo que tira del cargamento
unas distancias considerables.
*Las proteínas motoras carecen de inercia (momentum), por lo que se detienen casi de inmediato una vez que el aporte de
energía cesa.

Cinesinas
*Usan microtúbulos como rieles.
*Presentes en casi todas las células eucariotas.
*Tetrámeros de dos cadenas pesadas idénticas y dos cadenas
ligeras idénticas.
*El dominio motor de la cinesina tiene una estructura muy
similar a la de la miosina, aunque la cinesina es mucho más
pequeña y la miosina opere sobre FA.
Movimiento de la cinesina:
(1) Es un motor microtubular dirigido al lado más.
(2) En la neurona, la cinesina transporta cargamentos hacia las
terminaciones sinápticas; en una célula cualquiera, la cinesina transporta materiales hacia la Cinesina
periferia celular. Hacia el +
(3) Una sola molécula de cinesina se mueve sobre un solo protofilamento. Pasos de 8nm
(4) La velocidad es proporcional a la concentración de ATP hasta una Vmax de 1μm/s. Movim. ‘mano s/mano’
(5) A bajas concentraciones de ATP, la cinesina se mueve tan despacio como para que el observador Muy progresiva
concluya que la proteína se mueve por pasos. El motor más pequeño
(6) Cada paso es de unos 8nm de largo, o bien, un dímero de tubulina; y cada paso requiere la hidrólisis de 1ATP.
(7) In vitro e in vivo el movimiento de la cinesina es progresivo; se
mueve grandes distancias (más de 1μm) sin caer del MT. La cinesina
logra esto porque una de las dos cabezas está unida al MT en todo
momento.
(8) Las cabezas de cinesina se comportan de forma coordinada: siempre están en diferentes etapas de sus ciclos químicos y
mecánicos en cualquier momento determinado.
(9) Cuando una cabeza se une al MT, los cambios de conformación resultantes en el cuello hacen que la otra cabeza se
mueva hacia adelante al siguiente sitio de unión del protofilamento!
(10) La actividad catalítica de la cabeza provoca un gran movimiento oscilante del cuello.
KLP [Kinesine Like Proteins]
Cinesina 1 Cinesina convencional.
Cinesina 2 Interviene en la construcción de cilios y
flagelos
Cinesina 13 Despolimerasa. No se mueve! Se une a
cualquier extremo del MT y lo despolimeriza.
Cinesina 14 Se mueve hacia el extremo menos, es diferente
Secuencia de aa Secuencia de aa Secuencias de aa diversas a las demás en la secuencia del cuello.
similar en todas las determina direxn en las KLP por los
Las KLP poseen varios adaptadores potenciales que las unen con
KLP! sobre el MT! diversos cargamentos!
sus cargamentos

Dineína citoplásmica
*Usan microtúbulos como rieles.
*Presente en todo el reino animal.
*Es una proteína enorme, el motor más grande, 1.5millones de Da.
*Su cabeza es 10 veces más grande que la de la cinesina.
*Formada por dos cadenas pesadas idénticas y varias cadenas
intermedias y ligeras.
*Son parte de la cadena pesada: cabeza en forma de rueda, un pie
largo y un tallo.
 Citoesqueleto y motilidad celular
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*Las cabezas son globulares, grandes y con dos proyecciones alargadas.
*La cabeza es la máquina generadora de fuerza.
*Es fundamentalmente distinta a miosina y cinesina tanto en arquitectura como en modo de operación.
Movimiento de la dineína citoplásmica:
Se mueve hacia el extremo menos. Tiene las funciones de:
(1) generador de fuerza para posicionamiento del huso y movimiento de cromosomas durante meiosis
(2) motor microtubular dirigido al menos para situar el aparato de Golgi y para el movimiento de organelos,
vesículas y partículas por el citoplasma.
En neuronas, dineína citoplásmica transporta materiales hacia el soma y microtúbulos hacia el axón; en células cualesquiera,
transporta organelos desde sitios periféricos hacia el centro dela célula. El virus del VIH es cargamento de la dineína.
Dinactina es el complejo proteínico adaptador que usa la dineína
citoplásmica, ella no interactúa de modo directo con su
cargamento! Dinactina también regularía la actividad de dineína
y la add al MT.

Generalizando: Cinesina se mueve hacia el más, o sea, hacia la

periferia celular y Dineína Citoplásmica se mueve hacia el
menos, o sea, hacia el centro celular.

Propiedades dinámicas de los MTs

Del huso mitótico Los MT presentan morfología similar, pero diferencias marcadas en su
MT muy lábiles estabilidad. Son estabilizados por:
Del citoesqueleto
(1) su unión a MAPs
MT estables De neuronas maduras
(2) algunas PTM de las tubulinas [acetilación]
De centriolos
MT muy estables Se puede desensamblar MT con:
De cilios y flagelos
(1) frío
(2) presión hidrostática
MT en interfase tienen semividas 5 a 10 veces
(3) concentración de calcio iónico elevada
mayores que los MT mitóticos
(4) químicos colquicina, vinblastina, vincristina, nocodazol, podofilotoxina
El taxol es una droga que:
**detiene actividades dinámicas de los MT uniéndose con el polímero e impidiendo su desensamble
**impide que la célula ensamble las nuevas estructuras microtubulares necesarias
Estos compuestos químicos pueden usarse en quimioterapia contra el cáncer porque destruyen a las células tumorales
preferencialmente por falta de polimerización de MT y por falta de punto de revisión.
Los MT están sujetos a despolimerización/repolimerización conforme cambian los requerimientos de la célula, este carácter
dinámico se ilustra bien en células vegetales. En ellas, a lo largo del ciclo celular, los MT se reorganizan formando:
microtúbulos corticales → una banda preprofase → el huso mitótico → un fragmoplasto.
Esto se logra mediante la combinación de dos mecanismos separados: (1) Nuevo arreglo de MT preexistentes y (2)
desensamble de MT existentes y reensamble de otros en regiones distintas.
Microtúbulos in vitro: Tubulina puede polimerizar in vitro con las Polimerización de
Magnesio + GTP Desensamble y
condiciones de la tabla. Los MT creados in vitro pueden poseer tubulina en
+ EGTA [quelante ensamble ↑T° y
cantidades anormales de protofilamentos (11, por ejemplo) ya de calcio] + 37°C
homogeneizados
↓T°
que carecen del molde apropiado que, in vivo, está dado por de cerebro
tubulinas gamma. El ensamble in vitro es favorecido por la adición de MAPs o con
fragmentos de MT (o estructuras que los contengan); además, se agregan subunidades de
tubulina sobre todo al extremo más del polímero existente.
Microtúbulos in vivo: Aún en ausencia de cambios morfológicos, las subunidades de
tubulina se incorporan con rapidez a los MT del citoesqueleto. Examinados con el
microscopio de fluorescencia, la elongación es más lenta que el encogimiento. El
encogimiento ocurre de manera rápida e inesperada; la mayoría de los MT desaparece de
la célula en cuestión de minutos y se sustituye por MT nuevos que crecen a partir del
centrosoma.
La inestabilidad dinámica es una característica del extremo más; se refiere a que:
(1) Los MT en crecimiento y encogimiento pueden coexistir en la misma
región de una célula.
(2) Un MT determinado puede cambiar en uno u otro sentido de modo
impredecible entre el crecimiento y acortamiento.
Las células contienen proteínas +TIP que se unen a los extremos dinámicos más y regulan :
1. la velocidad de crecimiento/encogimiento
2. la frecuencia de interconversión entre las dos fases
 Citoesqueleto y motilidad celular
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La inestabilidad dinámica es un mecanismo por el cual:
(1) los extremos positivo de los MT pueden explorar rápidamente el citoplasma en busca de sitios de fijación apropiados; la
fijación estabiliza temporalmente a los MT permite a la célula construir las complejas redes citoesqueléticas.
(2) permite a las células reaccionar rápidamente a condiciones cambiantes que requieran la remodelación del citoesqueleto
microtubular (mitosis).
Polimerización de Microtúbulos: El ensamble de MT requiere GTP. Tanto tubulina α como β
poseen GTP, pero el que se utiliza en este proceso es el de la tubulina β. Es importante saber
que en la célula interfásica, el extremo más es el que experimenta la
polimerización/despolimerización; el menos se mantiene bloqueado.
1. Unión de GTP a tubulina β del dímero [Remplaza a un GDP previo].
2. Incorporación de GTP-tubulinaαβ al polímero
3. Hidrólisis del GTP a GDP.
La incorporación del dímero en el extremo más del GTP no necesita hidrólisis de GTP; el GTP
se hidroliza poco después que el dímero se incorpora al microtúbulo y el GDP resultante
permanece unido en el polímero armado.
Si un microtúbulo posee un capuchón de tubulina GTP en su extremo
más, tiende a la polimerización (¡siempre que se disponga de tubulina
GTP libre para polimerizar!)
Si un microtúbulo posee el extremo más con tubulina GDP, tiende a la
despolimerización catastrófica (¡ocurre cuando ya no se dispone de
tubulina GTP para polimerizar!)
*Cuando un microtúbulo crece, el extremo más se ve como una hoja
abierta: es el capuchón de tubulina GTP sobre el que polimerizan
tubulinas GTP.
*Crecimiento rápido: cuando los dímeros de tubulina GTP se agregan al
extremo más con más rapidez de lo que el GTP se puede hidrolizar.
*Los microtúbulos con extremos abiertos se cierran espontáneamente;
el cierre del tubo se acompaña de la hidrólisis del GTP, generando
subunidades de tubulina GDP.
*Las tubulinas GDP son menos adecuadas para formar un
protofilamento recto; adquieren tensión mecánica que disminuye la
estabilidad del microtúbulo.
*La energía de tensión se libera cuando los protofilamentos se curvan hacia afuera del extremo más y se someten a
despolimerización catastrófica.
Es importante saber que:
**La energía de tensión almacenada en el MT como resultado de hidrólisis de GTP torna a los MT inestables y capaces de
desarmarse rápido en ausencia de estabilizadores como las MAP.
**La hidrólisis de GTP es un elemento fundamental de la calidad dinámica de los microtúbulos.
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Cilios y Flagelos: Estructura y Función

Son órganos móviles similares a pelos que sobresalen en la superficie de diversas células eucariotas. Los flagelos procariotas
son filamentos simples sin relación evolutiva con sus contrapartes eucariotas.
Los cilios y flagelos son, en esencia, la misma estructura (axonema rodeado de membrana) y surgen de los cuerpos basales,
que son sus COMT. Si un cilio o flagelo se arrancara de la superficie de una célula viva, un nuevo organelo se regenera como
excrecencia del cuerpo basal.
Los cilios tienden a encontrarse en grandes cantidades sobre la superficie celular y su actividad suele ser coordinada, entre
sus funciones encontramos:
(1) Mover a las células [como un remo].
(2) Mueven líquidos y partículas a través de diversas vías en
pluricelulares (el epitelio de las vías respiratorias barre moco e
impurezas).
(3) Función sensorial [el cilio inmóvil o cilio primario] vigilando
propiedades de los líquidos EC.
Dan un golpe de poder durante el que se mantienen rígidos y un movimiento
de recuperación durante el cual se vuelven flexibles.
Los flagelos tienen diversos patrones de movimientos (ondas) según el tipo celular.
Cilios Flagelos
Estructura Idéntica (Axonema + membrana) Idéntica (Axonema + membrana)
Longitud Más cortos Más largos
Cantidad Más abundantes Más escasos
Función Locomoción Locomoción
Barrido de mucosas
Sensorial
Todo el cilio o flagelo está cubierto por una continuación
de la membrana plasmática; el centro del cilio es el
axonema, que contiene MT que corren en sentido
longitudinal por todo el organelo.
Axonema: Es el centro de un cilio o de un flagelo que
contiene microtúbulos. La mayor parte de los axomenas
consisten en nueve dobletes perfiféricos, dos
microtúbulos centrales y muchas estructuras accesorias.
El axonema posee una disposición 9+2: Son nueve
dobletes de MT periféricos y un par central.
Todos los MT poseen la misma polaridad, siempre con el
extremo más como extremo creciente:
*Los extremos más se ubican en la punta
*Los menos en la base [el cuerpo basal]
Los dobletes periféricos poseen un MT A (completo) y un
MT B de 11 u 10 protofilamentos (incompleto). Los MT A y
B son prolongaciones de los MT A y B del cuerpo basal.
*Una vaina central encierra al doblete central.
*Los rayos radiales emergen de los MT A y conectan los
dobletes periféricos con la vaina central.
*La proteína nexina, es elástica, y forma puentes
permanentes entre parejas de MT periféricos. Une el MT
A de un doblete con el MT B del doblete vecino.
*Los brazos de dineína emergen del MT A. Son dos: brazo
interno y externo. Conectan de manera intermitente el
MT A de un doblete con el MT B del doblete vecino. El
brazo externo puede tener tres cabezas.

Transporte intraflagelar
Movimiento de partículas en el espacio entre las parejas periféricas y la membrana Deficiencias en genes del
plasmática circundante. Se encarga de ensamblar y mantener a los cilios y flagelos. transporte intraflagelar:
**Cinesina II mueve los materiales hacia la punta del axonema en crecimiento en el Enfermedad renal y
extremo más ceguera
**Dineína citoplásmica 1b trae de vuelta a cinesina II a la base del cilio y transporta
proteínas axonémicas recicladas hacia el menos.
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Brazos de dineína
La maquinaria para la locomoción ciliar y flagelar se encuentra dentro del axonema. El axonema de la cola de
2+
espermatozoide, sin membrana, es capaz de efectuar movimientos sostenidos y normales en presencia de Mg y ATP.
↑[ATP] - ↑frecuencia de movimientos.
La proteína ATPasa que se encarga de la locomoción ciliar fue el primer motor microtubular descubierto y es la dineína ciliar
(o axonémica), que se encuentra como brazos que sobresalen de los MT A. Son los brazos de dineína los que liberan energía
necesaria para la locomoción. Las dineínas del brazo externo pueden poseer 3 cabezas; las del brazo interno poseen 2
cabezas.

Locomoción ciliar
*El movimiento ciliar ocurre por el deslizamiento de parejas de MT adyacentes entre sí.
*Los brazos de dineína actúan como puentes balanceantes que generan las fuerzas necesarias para el movimiento.
*En el axonema intacto, el tallo de cada dineína está anclado con firmeza al MT A (de la pareja 2), con las cabezas globulares
y los pies dirigidos hacia el MT B de la pareja vecina (pareja 1).
(A) Los brazos de dineína de la pareja 2 se adhieren a los sitios
de unión del MT B de la pareja 1.
(B) Las dineínas experimentan un golpe de poder que
ocasiona el deslizamiento de la pareja 2 hacia el extremo
basal de la pareja 1 (el axonema se dobla).
(C) Los brazos de dineína se desprendieron del MT B de la
pareja 1.
(D) Los brazos de la pareja 2 se unieron de nuevo a la pareja 1
para iniciar un nuevo ciclo.
*Los puentes de nexina limitan la distancia de deslizamiento
de los dobletes adyacentes uno sobre otro.
*La resistencia al deslizamiento ejercida por la nexina hace que el
axonema se doble como respuesta a la fuerza de deslizamiento
ejercida por la dineína ciliar.

El deslizamiento de un lado del axonema se alterna con el

deslizamiento del otro lado; una parte del cilio se flexiona
primero en una dirección y luego en la contraria. Para esto, los
brazos de dineína de un lado del axonema están activos mientras
los del otro lado no. Las parejas del lado interno del doblez se
extienden más hacia la punta que las del lado contrario del
axonema.

Filamentos Intermedios
*Al ME se observan como filamentos sólidos, no ramificados con Ø de 10nm.
*Solo se identifican en células animales.
*Son fuertes, similares a cuerdas,
proporcionan fuerza mecánica a células que
se someten a tensión física como neuronas,
miocitos y células epiteliales.
*Los FI se esparcen por el citoplasma de una
gran variedad de células animales.
*A menudo se conectan con otros elementos
del citoesqueleto por medio de puentes que
consisten en una enorme proteína alargada
llamada plectina, de varias isoformas.
*La plectina tiene, en un extremo, el sitio de unión para el FI y, en el otro un sitio de unión
para FI, MT o FA.
*A diferencia de MT y FA, los FI son un grupo heterogéneo de estructuras compuestas por
proteínas globulares, codificadas en humanos por más de 70 genes distintos.
*Las subunidades pueden dividirse en 5 clases principales.
*Todos los polipéptidos de los FI contienen:
- Un dominio helicoidal alfa central y cilíndrico con longitud similar y secuencia
homóloga de aa en las diferentes proteínas de filamentos intermedios
- 2 dominios globulares de tamaño y secuencia variables en los extremos de la
hélice
*Formación del dímero: Dos proteínas interaccionan cuando sus cilindros helicoidales alfa
se enrollan uno con otro para formar una cuerda de 45 nm de largo; las proteínas se
alinean paralelamente, por lo que el dímero es polar (extremos C y extremos N).
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*Formación del tetrámero: Tetrámero, formado por 2 dímeros que se alinean lado a lado y en forma intercalada con sus
extremos N y C apuntando en direcciones contrarias o antiparalelas: el tetrámero es apolar. Los tetrámeros se relacionan
entre sí
(1) Ocho tetrámeros en disposición lateral (lado a lado) para formar un filamento de 60nm de largo.
(2) De forma terminoterminal, formando el filamento intermedio muy largo.
El tetrámero es el bloque de construcción básico del ensamble de filamentos intermedios.
El filamento resultante no tiene polaridad y tampoco puede servir como riel para motores.

Tipos de FI y sus funciones

Filamentos Funciones Complicaciones
Principales proteínas estructurales epiteliales (epidermis,
Epidermólisis ampollar simple por
Queratinas hepatocitos, células acinares pancreáticas). Forman una red
deleciones en el gen que codifica K14
similar a una jaula alrededor del núcleo que se esparce por el
de la capa basal de la epidermis.
citoplasma.
NF-L; NF-H y NF-M dispersos en haces flojos en el axón. H&M ALS y Enf. de Parkinson por agregados
Neurofilamentos poseen brazos laterales que mantienen espacio entre los FI del de NF que bloquean transporte
axón. axónico.
Desmina Mantiene alineación de miofibrillas Miopatía relacionada con Desmina
Anomalías menores, no son tan
Vimentina En fibroblastos, macrófagos y leucocitos
esenciales

Microfilamentos o Filamentos de Actina o Actina F

*Compuestos por subunidades globulares de actina G.
*Los monómeros de actina G polimerizan, en presencia de ATP, para formar un filamento helicoidal y flexible de actina F.
*La hélice da una vuelta completa cada 13 subunidades o 36nm.
*Miden alrededor de 8nmØ.
*un filamento de actina tiene dos hendiduras helicoidales que recorren toda su longitud.
*Los monómeros son polares, y todos ellos se orientan en la misma dirección: todo el filamento es polar
*El filamento consta de un extremo más o barbado y de un extremo menos o afilado.
*Los FA pueden organizarse en conjuntos muy ordenados, en redes laxas y poco definidas o en haces anclados con firmeza.
*Los FA participan en casi todos los procesos motrices de la célula.
(1)La motilidad celular depende de la presencia de FA.
Ejemplos de motilidad celular:
Células de la cresta neural: migran desde la cresta neural para formar melanocitos, dientes, etc.
Leucocitos: patrullan los tejidos del cuerpo.
Células epiteliales en el borde de una herida: emiten proyecciones para cubrir área dañada y cerrar herida.
Borde líder de un axón en crecimiento: guía a la célula hacia el blanco sináptico.
(2)La motilidad intracelular: movimiento de vesículas, fagocitosis y citocinesis. Las células vegetales dependen sobre todo de
FA para transportar por largas distancias a organelas y vesículas.
*La actina puede localizarse:
a) Usando fragmentos S1 de miosina en citoquímica: Se add a la actina a todo lo largo del filamento, los identifica y
revela su polaridad [extremos barbado y afilado]
b) Usando faloidina marcada con fluorescencia y observando al MO
c) Usando anticuerpos fluorescentes contra actina
*La actina es la principal proteína en todos los tipos de células eucariotas examinadas.
*Las actinas poseen varios genes que las codifican.
*Moléculas de actina de distintas fuentes pueden polimerizarse juntas para formar filamentos híbridos.
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Ensamble y desensamble de FA
Antes de incorporarse en un microfilamento, la actina debe unirse con ATP.
La actina es una ATPasa y la función del ATP en el ensamble de la actina es similar
al del GTP en el armado de un MT; o sea, el ATP unido con un monómero de actina
se hidroliza en ADP en algún momento después de su incorporación en el
filamento, por tanto la mayor parte del microfilamento consiste en subunidades
ADP-actina.
[IN VITRO] Soluciones con monómeros ATP-actina.
*La etapa inicial, la nucleación, es lenta. Se evita si se incluyen filamentos de actina ya formados en la solución.
*La elongación es mucho más rápida.
*Cuando los filamentos de actina ya formados se incuban con una concentración elevada de monómeros ATP-actina,
ambos extremos del FA crecen: el extremo barbado crece 10 veces más rápido que el extremo afilado.
*Los fenómenos que ocurren in vitro dependen de la [ATP-actina]
Experimento:

*El extremo barbado es el que posee mayor afinidad por los monómeros ATP-actina (10 veces más que el afilado)
*El efecto noria es un ejemplo de estado estable, ocurre cuando la
actina alcanza concentraciones de 0,1 μM. La longitud del
microfilamento se mantiene constante a pesar de que las subunidades
se recambian continuamente.
*El efecto noria ocurre in vivo.
**Las células mantienen un equilibrio dinámico entre las monómeros
y polímeros de actina, como lo hacen con los MT.
**La velocidad de ensamble/desensamble de los FA depende de varias
“proteínas accesorias” diferentes.
**Con el control del equilibrio, la célula puede reorganizar su
citoesqueleto de microfilamentos para la locomoción, los cambios de forma celular y la citocinesis.
**Los procesos mediados por FA se detienen pronto cuando alguno de los compuestos de la tabla ingresa a la cel.

Miosina, el motor de los FA

*Todos los motores que operan sobre FA son de la superfamilia de la miosina.
*Todas (excepto la VI) se mueven hacia el extremo + o barbado.
*Las miosinas poseen una cabeza, una cola y varias cadenas de bajo PM (ligeras).
Todas las miosinas comparten un dominio motor característico (la cabeza), que contiene dos sitios: (1)uno que se une al FA y
otro (2)que se une con el ATP y lo hidroliza [La cabeza de miosina es una ATPasa].
Los dominios de la cabeza son muy similares entre diferentes miosinas, pero las colas son diferentes (recordar a la cinesina).
*Los humanos poseen cerca de 40 miosinas.

2 cadenas pesadas + 2 pares de cadenas ligeras.

2 Cabezas: globulares, contienen el sitio catalítico
2 Cuellos: c/u formado por una sola héliceα y 2 cadenas ligeras unidas
Cola: Cilíndrica, 150nm, formada por las hélicesα de las cadenas pesadas
Toda la maquinaria para la actividad motriz está contenida en una sola cabeza de miosina (los
Miosinas Convencionales fragmentos S1 pueden deslizar FA).
(Tipo II) La porción fibrosa de la cola permite que forme filamentos. Se ensamblan de tal modo que los
extremos de las colas apuntan al centro del filamento y las cabezas globulares señalan al lado
contrario del centro: el filamento se describe como bipolar, con una polaridad invertida dentro
del filamento.
Los filamentos de miosina II musculares son muy estables, los que se forman en células
extramusculares son a menudo de construcción transitoria y se ensamblan y desensamblan
cuando y donde se necesita.
 Citoesqueleto y motilidad celular
EMP

X: solo en vertebrados VIII y XI: solo en plantas

I, V y VI: Se relacionan con diversos tipos de vesículas y organelos. Pueden vincularse con
cinesinas o dineína citoplásmica (Fig9-53)
I, V, VI, VII y XV: en diversos sitiosde las células pilosas del oído interno.
Miosina I: Se ubica en microvellosidades. Es incapaz de ensamblar filamentos. Función
desconocida.
Miosinas No
Convencionales Miosina V: Posee dos cabezas que se mueven progresivamente sobre el FA. Su cuello de 23nm
(I, III a XVIII) mide 3 veces más que el de la miosina II y le permite dar pasos muy grandes (Su paso es de
Son los motores basados 36nm, o sea, una vuelta de hélice de FA). Utiliza el modelo mano sobre mano para deslizarse
en microfilamentos sobre el filamento.
Va: Transporta melanosomas de las células pigmentarias. Su déficit ocasiona Sx de Griscelli con
albinismo parcial y síntomas relacionados al transporte de vesículas.
VIIa: Su mutación causa el Sx de Usher tipo 1B con sordera y ceguera.
VI: Se mueve hacia el extremo – (afilado). Es transportador de organelas en muchas células en
sentido inverso. Interviene en la formación de vesículas cubiertas y en el movimiento de
vesículas hacia los endosomas tempranos.

Contracción Muscular
Existen tres tipos de células musculares en nuestro organismo: las células
musculares esqueléticas, que son voluntarias y obtienen su nombre por estar
anclados a los huesos que mueven; las células musculares cardíacas, que son
involuntarias y están en el corazón; y las células musculares lisas, involuntarias
y que se ubican en las paredes de los vasos y órganos. Los primeros dos tipos, el
esquelético y cardíaco, son células musculares estriadas por su apariencia al
MO. El estudio de la contracción muscular lo haremos sobre la base de las
Células Musculares Esqueléticas (CME).

*Las CME tienen 10 a 100μm de grosor, más de 100mm de largo y cientos de

núcleos, por lo que se las llama fibras musculares.
*Tienen muchos núcleos porque surgieron de la fusión de muchos mioblastos mononucleares en el embrión.
*La estructura interna de las CME es, posiblemente, más ordenada que la de cualquier célula del cuerpo.
*Están formadas por miofibrillas, que consisten en un conjunto lineal y repetido de sarcómeras.
*Cada sarcómera tiene un patrón de bandas característico que brinda la apariencia estriada.

*Con el ME se observa que el patrón de bandas es resultado de la superposición de filamentos distintos: los filamentos
delgados y los filamentos gruesos.
*La sarcómera se extiende de una línea (o disco) Z a la siguiente línea Z; contiene bandas oscuras y zonas claras.
Banda Características Contenido Durante la contracción
Banda I Clara, localizada en los bordes externos. Filamentos Finos Se acorta
Banda A Oscura, entre las bandas I. Filamentos Finos y Gruesos Se mantiene constante
Zona H Zona clara en el centro de la banda A. Filamentos Gruesos Se acorta
Línea Z En los extremos de la sarcómera CapZ Se acercan a línea M hasta tocar a banda A
Línea M Oscura, en el centro de la zona H. Proteínas de la línea M
 Citoesqueleto y motilidad celular
EMP
Desde los filamentos gruesos, se desprenden a intervalos regulares puentes que los conectan a los filamentos finos; son las
cabezas de miosina. En el nivel de superposición de filamentos, cada filamento grueso se rodea por un conjunto hexagonal
de filamentos finos., cada filamento fino se sitúa entre dos filamentos gruesos.

El modelo del filamento deslizante

*Todos los músculos esqueléticos operan por acortamiento.
*Las unidades de acortamiento son las sarcómeras, cuya disminución de longitud combinada causa el acortamiento del
músculo completo.
*El acortamiento de las sarcómeras se debe al deslizamiento de filamentos unos sobre otros, no al acortamiento de ellos.
*El deslizamiento de filamentos delgados hacia el centro de la sarcómera produciría el aumento de superposición de
filamentos y la disminución de la anchura de las bandas I y H.

Proteínas de la sarcómera: Filamentos finos y gruesos

Proteínas Características
Actina Filamentos anclados al disco Z por sus extremos barbados.
Alargada, 40nm de largo, en las hendiduras del FA. C/u se relaciona con 7
Tromomiosina subunidades de actina a lo largo del filamento bloqueando los sitios de
Filamentos Finos unión de para miosina.
C Fija 4 iones calcio. Similar a calmodulina.
Complejo globular, cada
Complejo de
40nm sobre el filamento, se T Unida a tropomiosina
Troponinas add a actina y tropomiosina.
I Inhibidora de la ATPasa de miosina
Filamentos de polaridad invertida. El centro del filamento está formado por
la cola y carece de cabezas; las cabezas sobresalen en todo el resto de la
Filamentos Gruesos Miosina II
extensión del filamento por la posición intercalada de las moléculas de
miosina del filamento.
La más grande descubierta: Su gen codifica un polipéptido de 3,5millones
de dáltones y más de 38mil aa. Se originan en la línea M, se extienden a lo
largo del filamento de miosina, continúan luego de la banda A hasta la línea
Titina
Z. Es elástica y se estira cuando ciertos dominios (de la banda I) de la
Proteínas Accesorias molécula se desdoblan. Mantiene en su posición a los filamentos de
miosina en el centro de la sarcómera durante la contracción.
Relacionadas con la actina. Actúan como una “regla molecular” que regula
Nebulina
el número de monómeros permitidos por cada filamento delgado.

La base molecular de la contracción

*Durante una contracción, cada cabeza de miosina se extiende hacia afuera y se add con firmeza al filamento delgado, con lo
que se forman los puentes que se ven entre los dos tipos de filamentos.
*Las cabezas de un filamento de miosina interactúan con 6 filamentos de actina circundantes.
*Cada filamento de actina entra en contacto con un equipo de casi 100 cabezas de miosina que se mueven sincrónicamente,
por ello el filamento delgado realiza un movimiento continuo durante el ciclo contráctil.
*Una sola molécula de miosina puede mover el filamento de actina unos 10nm con un solo golpe de poder.
*La hidrólisis de ATP en la cabeza de miosina produce un pequeño cambio de conformación de 0,5nm (mientras está unida a
la actina) que se amplifica 20 veces gracias al balanceo del cuello helicoidalα subyacente.
*El cuello actúa como una “palanca rígida” que logra que el filamento se deslice una distancia mucho mayor.
 Citoesqueleto y motilidad celular
EMP
*Las cadenas ligeras de la miosina confieren rigidez a la palanca.
*La longitud del golpe de poder tiene relación proporcional con la longitud del
cuello.
*La miosina II es un motor no progresivo: no está unida mucho tiempo a la actina
(aprox 5% del tiempo del ciclo).
La energética del deslizamiento del filamento
La miosina convierte la energía química del ATP en energía mecánica del
deslizamiento del filamento. El ciclo comienza cuando:
(1) Una molécula de ATP se une a la miosina, la miosina se separa de la actina.
(2) El ATP es hidrolizado por la cabeza de miosina antes de un nuevo contacto actina-
miosina. ADP y Pi se mantienen unidos al sitio activo de la enzima y la proteína
absorbe la energía de la hidrólisis. La miosina queda como “un resorte estirado”
energéticamente hablando.
(3) Miosina cargada de energía se add a la actina
(4) Miosina libera el fosfato y se da un cambio de conformación (se libera la energía)
(5) Se libera el ADP luego del golpe de poder, a lo que sigue la unión de un nuevo
ATP para volver a separar la miosina de la actina.
En ausencia de ATP, la miosina no puede separarse de la actina: Rigor Mortis.
Coordinación de la excitación-contracción
Unidad motora: Son grupos de fibras musculares inervados las terminaciones de una sola neurona motora, se contraen en
forma simultánea cuando reciben el estímulo de un impulso transmitido por esa neurona.
Unión neuromuscular: Contacto extremo (sinapsis) entre una neurona y una fibra muscular.
Coordinación excitación/Contracción: Proceso que incluye los pasos entre la llegada de un impulso nervioso a la membrana
plasmática muscular y el acortamiento de las sarcómeras en la profundidad de la fibra.
Túbulos T (Transversos): Invaginaciones de la membrana plasmática que terminan muy cerca de las cisternas del retículo
sarcoplásmico, encargadas de propagar el impulso de la membrana plasmática al interior de la célula.
Retículo Sarcoplásmico: Retículo endoplásmico del miocito especializado en almacenamiento de calcio. Forma una manga
membranosa alrededor de la miofibrilla. Aprox 80% de la proteína integral del SR consiste en ATPasas de calcio encargadas
de sacar el ion del citosol hacia la luz del SR.
Tríadas: Es el conjunto de túbulo T + 2 cisternas de retículo sarcoplásmico
Sarcolema: Membrana plasmática del miocito.

Pasos del ciclo excitación contracción:

(1) Se libera acetilcolina en la unión neuromuscular
(2) Se activan canales regulados por ligando para Na+
(3) Se despolariza la membrana del túbulo Y
(4) Se abren canales de calcio regulados por voltaje del SR
(5) Calcio invade el citosol, activa a troponinas C que mueven 1,5nm a tropomiosina, con lo que se liberan los sitios de unión
de la actina para la miosina
(6) Unión de la miosina contracción
(7) Recaptación de calcio por el SR mediante bombas de calcio una vez que el estímulo neuronal cesa.
La relajación puede considerarse una competencia entre la proteína de transporte de calcio y la troponina, donde la bomba
tiene mayor afinidad por el ion.
 Citoesqueleto y motilidad celular
EMP
Movilidad Extramuscular
*Los componentes de la movilidad extramuscular se limitan a una corteza delgada justo debajo de la membrana plasmática.
*La corteza citoplásmica celular es rica en filamentos de actina.
*Es una región activa encargada de procesos como:
(1) ingestión de materiales EC (seudópodos para fagocitosis)
(2) extensión de prolongaciones durante el movimiento celular (seudópodos para locomoción)
(3) la constricción de una célula animal en dos células hijas durante la división celular (anillo contráctil de citocinesis)

Proteínas de unión con la actina

Actina in vitro: Bajo el MO se parecen a un piso cubierto de paja. No interactúan ni realizan actividades útiles.
Actina in vivo: Organizados en varios patrones, como haces, redes delgadas 2D y gelatinas 3D complejas.
El comportamiento de actina in vivo depende de una notable variedad de proteínas de unión con actina que afectan el
ensamble/desensamble, las propiedades físicas, las interacciones de los filamentos entre sí y con otros organelos.
Se han aislado más de 100 que pertenecen a muchas familias. Pueden dividirse en varias categorías según su función:
Categorías Utilidad Proteínas Función
Funciona como tubulinaγ. Forma redes de FA
Complejo Arp2/3
La nucleación es lenta y necesita de un molde de cortos. En el extremo afilado.
Proteínas de
al menos 2 o 3 monómeros en orientación Forma filamentos no ramificados, como los
nucleación adecuada. Sirven como plantilla. Formina de add focales y citocinesis. En el extremo
barbado.
Encargadas de la elevada concentración de actina
Proteínas que en células extramusculares. Pueden modificar el
Se une a monómeros actina-ATP (actina G) e
secuestran equilibrio monómeros/polímeros en ciertas Timosinaβ4
impide su polimerización
monómeros regiones y determinar si se favorece la
polimerización/despolimerización

Regulan la longitud de FA uniéndose a alguno de Se add a actina en el extremo barbado, en

Proteínas CapZ
los extremos, bloquean tanto pérdida como línea Z de músculo estriado.
tapas
ganancia de subunidades. Si se tapa el barbado, Bloquea el extremo afilado de los filamentos
(bloqueadoras la despolimerización ocurre; si se tapa el afilado
de extremos) Tropomodulina finos del músculo estriado. Si se altera, se
también, la despolimerización no ocurre. agregan monómeros!
Proteínas Se une al mismo sitio que timosina. Sustituye
polimeri Promueven el crecimiento de los filamentos de un ADP por un ATP y el monómero profilina-
Profilina
zadoras de actina ATP-actina puede ensamblarse a un extremo
monómeros barbado.

Se unen con el extremo afilado de las Cofilina* Esenciales para locomoción, fagocitosis y
Proteínas
subunidades actina-ADP en el cuerpo. Participan citosinesis.
despoli ADF
en el recambio rápido de FA en sitios de cambios La cofilina tiene 2 actividades: fragmentar FA
merizadoras dinámicos de la estructura del citoesqueleto. Depactina y promover despolimerización en el -

Alteran la organización 3D de una población de Forma de cilindro, promueve formación de

Proteínas que Filamina
FA; por ej, un gel elástico 3D que resiste redes de FA conectados en ángulos rectos.
forman
presiones mecánicas locales [filamina]. Presentes Vilina Forma globular, promueven el agrupamiento
enlaces en microvellosidades y estereocilios
cruzados de FA en conjuntos paralelos ajustados y
[vilina/fimbrina]. Fimbrina rígidos que dan soporte a las estructuras.
Proteínas Gelsolina Puede crear más extremos barbados libres y
Se unen con un filamento ya formado y lo
cortadoras de favorecer la polimerización, también puede
rompen en dos También cofilina*
filamentos taparlos.
Vinculina
Proteínas de Familia ERM: Ezrina, radixina y moesina
Unen indirectamente los FA a la membrana para Familia ERM
unión con Miembros de la familia de la espectrina:
que sobresalga o se invagine.
membrana Familia de fodrina, espectrina, distrofina
espectrina

Ejemplos de movilidad y contractilidad extramuscular

Los FA que a menudo interactúan con motores de miosina son encargados de:
Fagocitosis Formación de corrientes citoplásmicas
Tráfico de vesículas Activación de plaquetas
Movimientos laterales de proteínas integrales Interacciones célula/sustrato
Locomoción celular Crecimiento axónico y cambios de forma celular
 Citoesqueleto y motilidad celular
EMP
Polimerización de actina como mecanismo generador de fuerza
*La bacteria se impulsa por polimerización de actina; no se requiere acción de miosina.
*Lysteria monocytogenes es una bacteria que causa encefalitis e intoxicación alimentaria.
*Lysteria monocytogenes infecta a macrófagos y se impulsa como un cohete por el citoplasma de la célula
infectada mediante la polimerización de monómeros de actina por detrás de la bacteria.
*Lysteria contiene una proteína llamada ActA que se encuentra solo en un extremo de la bacteria
*Cuando queda expuesta dentro del citoplasma, ActA recluta y activa al complejo Arp2/3 y trabajan juntas
para dirigir el proceso de polimerización de actina.
*Los mismos fenómenos se utilizan en actividades celulares normales, como la propulsión de vesículas
citoplásmicas y organelos hasta el movimiento de las células.

Locomoción celular
La locomoción celular es necesaria para muchas actividades:
*desarrollo de tejidos y órganos
*formación de vasos sanguíneos
*desarrollo de axones
*cicatrización y protección contra infecciones
*La locomoción es la encargada de la diseminación de tumores
cancerosos.
*La locomoción celular comparte propiedades con otros tipos de
locomoción, como la marcha, porque presenta una secuencia de
actividades similares.
1) Protrusión de la superficie celular: formación del lamelipodio.
2) Adhesión formando sitios de anclaje temporal (complejos focales)
3) Tracción, la célula se impulsa al frente sobre los contactos adhesivos.
4) Retracción de cola por rotura de contactos traseros con el sustrato.
Movimiento de células en cultivo:
*En un buen día, un fibroblasto puede avanzar cerca de 1mm.
*Conforme se mueven, las células se aplanan y se aproximan mucho al
sustrato; adquieren forma de abanico con un borde frontal ancho y una
cola posterior estrecha.
*Lamelipodio: es el borde frontal de la célula, una protrusión ancha
aplanada y semejante a un velo. Presenta un margen ondulante y
apariencia arrugada.
*El lamelipodio se extiende desde la célula y se adhiere al sustrato
subyacente en puntos específicos: son sitios de anclaje temporal para
que la célula tire de sí misma.
*Las fuerzas de tracción se ejercen detrás del borde de avance de la
célula; donde se adhiere al sustrato. Los sitios donde se ejerce tracción se denominan complejos focales y se forman cerca
del margen líder de una célula. Se desensamblan casi siempre conforme la célula avanza.

Crecimiento axónico
*Los axones se desarrollan por un crecimiento y elongación activos.
*La punta del axón en crecimiento es muy distinta del resto de la célula: el cono de crecimiento es la punta y se parece a un
fibroblasto reptante de gran movilidad.
*Posee varios procesos locomotrices; un lamelipodio, microespigas, y filópodos.
*Los MT llenan el axón y la parte central del cono de crecimiento; pueden tener un papel importante en la determinación de
la dirección del crecimiento axónico.
*El cableado correcto de todo el sistema nervioso depende de la capacidad de los conos de crecimiento para tomar
“decisiones” de dirección correcta que los conducen a los órganos blanco que deben inervar.

Cambios en la forma durante el desarrollo embrionario

*El desarrollo de la morfología característica de un órgano se requiere cambios
programados en la forma celular.
*Los cambios en las formas de las células se producen sobre todo por cambios en
la orientación de los elementos del citoesqueleto dentro de las células. Ejemplo:
*Al final de la gastrulación, las células de la placa neural se alargan cuando sus MT
se orientan con sus ejes longitudinales paralelos al eje celular.
*Luego, las células se constriñen en un extremo, adquieren forma de cuña y toda
la capa celular se curva hacia adentro; ocurre por contracción de FA en la región
cortical de la célula por debajo de la membrana celular apical.
*Los bordes externos de la curva terminan tocándose, con lo que se forma un
tubo cilíndrico y hueco que da origen a todo el sistema nervioso del animal.
 Citoesqueleto y motilidad celular
EMP

Estructuras Celulares con Esqueletos de Actina

Microvellosidades
*Las microvellosidades permiten acrecentar la superficie de
membrana sin producir cambios apreciables del tamaño
celular.
*La mayoría de las células con superficies libres exhiben
microvellosidades de diferentes tipos.
*¡Son abundantes en células absortivas! Intestino y riñón.
*Las microvellosidades no son visibles al MO. Pueden, sin
embargo identificarse al MO como:
Una chapa estriada en los enterocitos
Un ribete en cepillo en los túbulos renales
Estructura de la microvellosidad:
*En el centro de cada microvellosidad existe un manojo de
filamentos paralelos de actina; poseen el extremo + dirigido
hacia la punta de la microvellosidad.
*la membrana plasmática rodea los manojos de filamentos de
actina.
*Los filamentos de actina son mantenidos en una disposición
altamente ordenada por vilina y fimbrina.
*Miosina I se dispone entre la membrana plasmática y los
filamentos de actina periféricos.

Estereocilios
*Estructuras similares a las microvellosidades, más largas,
ramificadas.
*Son estructuras rígidas, similares a pelos que se proyectan
desde la superficie apical de la célula.
*Existen en el oído interno y en el epidídimo y el conducto
deferente.
*En el oído: el desplazamiento de los estereocilios por
estímulos mecánicos genera impulsos nerviosos que se
perciben como sonidos.
*En el testículo y conducto deferente: reabsorben el fluido
que acompaña a los espermatozoides.
Estructura de los estereocilios:
*Carecen de relación con los cilios verdaderos.
*Son sostenidos por un un paquete de filamentos de actina
paralelos; posee el extremo + en la punta del estereocilio y los
extremos – en la base.
 Naturaleza del gen y Genoma
EMP

NATURALEZA DEL GEN Y DEL GENOMA

Los genes son factores retenidos a través de la vida de un organismo que pasan a su progenie; se hallan en los cromosomas y
están formados por ADN. El genoma es el cuerpo colectivo de información genética presente en una especie. Contiene los
genes necesarios para “construir” un organismo específico. En el humano, el genoma está contenido en un juego haploide de
cromosomas (22 autosomas + XY)

Concepto de Gen como Unidad de la Herencia

La genética apareció hacia 1860 con los trabajos de Mendel. Mendel cruzó plantas de guisantes con diferentes características
hereditarias y determinó el patrón por medio del que estas propiedades se transmiten a la descendencia. Las conclusiones de
Mendel en la terminología actual son:
1) Las características de las plantas dependían de genes (factores o unidades de Conceptos:
herencia). Existen dos copias del gen que controla cada rasgo (P. ej, poseemos dos Alelos son las formas alternativas
copias de cada uno de los genes que codifican a cada péptido), estas dos copias que puede poseer un mismo gen.
pueden ser idénticas o no. Cada alelo se localiza en un locus,
2) Cada gameto (célula germinativa) solo tiene una copia del gen correspondiente a que es un sitio determinado en un
cada característica. Los individuos se originan por la unión de un gameto masculino cromosoma.
con otro femenino; por consiguiente, el nuevo individuo tiene dos copias de cada Un alelo es dominante cuando su
gen, una proveniente del progenitor masculino y otra del progenitor femenino. expresión enmascara la presencia
3) Ley de la segregación: Dos alelos que controlan un rasgo permanecen unidos por de otro alelo diferente. Un alelo
toda la vida pero se separan al momento de la formación de gametos. es recesivo cuando su expresión
4) Ley de la permutación independiente: La separación de los alelos que es enmascarada por la presencia
corresponden cada rasgo no tiene efecto sobre la separación de los alelos de otro de otro alelo diferente.
rasgo.

Cromosomas como Portadores Físicos de los Genes

Si bien Mendel introdujo un concepto acerca de factores discretos que controlan los rasgos hereditarios, no se preocupó por
la naturaleza física de estos elementos o su localización dentro del organismo.

El descubrimiento de los cromosomas

Toda información genética necesaria para generar y conservar una planta o animal complejo debe estar presente por
completo dentro de una sola célula. Teniendo en cuenta esta afirmación, se realizaron los siguientes descubrimientos:
Flemming (1880): Estudió células en división. Sus observaciones revelaron que el
contenido citoplásmico de una célula en división se distribuye al azar entre ambas células Conceptos:
hijas, a diferencia del contenido del núcleo que se divide por igual entre ambas células Se denomina Cromosoma al
hijas. material del núcleo que se
hace visible durante la
Boveri: Estudió el fenómeno de polispermia en huevos de erizo. Concluyó que el proceso
división celular. Es el máximo
ordenado del desarrollo normal es “dependiente de una combinación particular de
grado de compactación de la
cromosomas y esto solo puede significar que los cromosomas individuales deben poseer
cromatina.
diferentes cualidades”. Fue la primera evidencia de una diferenciación cualitativa entre
cromosomas.
van Beneden (1883): Estudió al gusano Ascaris sp. Observó que las células somáticas poseen un contenido diploide de
cromosomas, mientras que los gametos poseen un contenido haploide de crosmosomas.
Weismann (1887): Propuso que la meiosis (formación de gametos) es una división reducida, donde el contenido diploide
normal de las células se reduce a un contenido haploide ya que los gametos no deben contener un número diploide de
cromosomas.
Sutton (1903): Estudió espermatozoides de
saltamontes. Destacó a los cromosomas como
portadores físicos de los factores genéticos de
Mendel. La presencia de pares de cromosomas o
cromosomas homólogos se correlaciona con los
pares de factores hereditarios descubiertos por
Mendel.
En las células germinales de las gónadas ocurren dos
tipos de divisiones: la mitótica, mediante la cual las
gametogonias producen más espermatogonias, y la
meiótica, durante la que la gametogonia genera
espermatozoides.
Los gametos tienen una versión de cada gen; dos
gametos que se unen en fecundación producen un
individuo con dos alelos para cada rasgo.
 Naturaleza del gen y Genoma
EMP
Cromosomas como grupo de ligamiento: Los genes ubicados en un mismo cromosoma se encuentran unidos como
las cuentas de un rosario y tienden a ser heredados en conjunto; por lo que se dice conforman un grupo de ligamiento. El
ligamiento no cumple con la ley de la permutación independiente.
Alelos de genes diferentes que se hallan juntos en un cromosoma no siempre permanecen unidos durante la producción de
gametos: la relación entre alelos sobre el mismo cromosoma es incompleta. El ligamiento puede romperse por un fenómeno
denominado recombinación o entrecruzamiento. En la meiosis I, los cromosomas homólogos se relacionan entre sí formando
bivalentes o tétradas mientras ocurre el fenómeno de recombinación; los puntos en los que se cruzan los homólogos se
denominan quiasmas y son los sitios donde ha ocurrido la recombinación.
La frecuencia de recombinación entre dos genes provee una medida de la distancia que separa a estos dos genes, es decir: a
mayor frecuencia de recombinación, es mayor la distancia entre ambos genes dentro del cromosoma; a menor frecuencia de
recombinación, es menor la separación entre ambos genes dentro del cromosoma. Puede emplearse las frecuencias de
recombinación para elaborar mapas cromosómicos de diferentes organismos.

Naturaleza Química del Gen

La estructura del ADN
La unidad básica de construcción del ADN es un nucleótido, que nucleótido consiste en desoxirribosa + fosfato inorgánico +
base nitrogenada. Las bases nitrogenadas pueden ser:
*Purinas: Estructuras de dos anillos. Adenina y Guanina.
*Pirimidinas: Estructuras de un anillo. Citosina y Timina.
Los nucleótidos se unen covalentemente entre sí mediante uniones 3'-5'fosfodiéster para formar un polímero lineal o
cadena. El esqueleto de esta cadena está compuesto por azúcar y fosfato.
El extremo 5' de cada cadena posee un trifosfato libre. El extremo 3' de cada cadena posee un -OH libre.
En 1950, Chargaff determinó la composición de bases de varias muestras de ADN.
Encontró que la relación de las cuatro bases fue muy distinta de un organismo a otro. Teoría del tetranucleótido:
Por ejemplo, la relación A:G para el bacilo de la tuberculosis fue de 0.4, pero la relación Afirmaba que la composición
A:G del ADN humano fue 1.56. La composición de bases permanece constante para cada de bases en las moléculas de
especie sin importar el tejido del cual se extrae el ADN. ADN era de 25% para cada
una; es decir, una relación
Existe una importante relación entre las bases:
1:1:1:1.
En una muestra determinada de ADN, el número de purinas siempre es igual al número
Fue desmentida por Chargaff
de pirimidinas.
El número de adeninas es igual al número de timinas
El número de guaninas es igual al número de citosinas
Reglas de Chargaff en la composición de bases del ADN:
[A] = [T] ; [G] = [C] ; [A] + [T] ≠ [G] + [C]
Los datos de Chargaff confirieron especificidad e individualidad a la molécula de ADN de un organismo a otro.

La propuesta de Watson y Crick

1. La molécula es bicatenaria.
2. Las cadenas se enrollan una sobre otra en un par de hélices
derechas. Esta estructura quedó clara en la difracción de RX.
3. Las hélices son antiparalelas.
4. El esqueleto de azúcar fosfato se ubica hacia afuera de la
molécula, los fosfatos dan la característica ácida (carga
negativa) a la molécula.
5. Las bases se orientan hacia el centro de la molécula en un
plano más o menos perpendicular al eje de ella. Las bases
confieren estabilidad a la molécula gracias a fuerzas de van der
Walls entre las “pilas de platos”.
6. Las bases de las dos cadenas se unen por puentes de
hidrógeno. La fuerza de los puentes de hidrógeno es aditiva.
7. El ancho de la doble hélice es de 2 nm (20 A)
8. Pu siempre se aparea con Pi.
9. Los únicos pares posibles en la doble hélice de ADN son AT y
CG. AT unidos por 2 puentes de hidrógeno y CG unidos por 3.
10. Los espacios entre los giros crean un surco mayor y un
surco menor que sirven para interacciones con proteínas de
unión a DNA (Ej, TBP se adosa al surco menor, algunos factores
de transcripción se unen al surco mayor)
11. La doble hélice da una vuelta completa cada 10 residuos o
3,4 nm (34 A).
12. Las cadenas son complementarias. La complementariedad
es de gran importancia en casi todas las actividades y
mecanismos en los cuales intervienen los ácidos nucleicos.
 Naturaleza del gen y Genoma
EMP
La importancia de la propuesta de Watson y Crick: Las funciones principales
que debe cumplir cualquier molécula que funciona como material genético son:
a) Almacén de información genética: El ADN debe contener un registro grabado de
instrucciones que determina todas las características heredables que un organismo
pueda exhibir. Debe contener la información para el orden específico de aminoácidos de
todas las proteínas que sintetiza un organismo.
b) Replicación y herencia: El ADN debe tener información para replicarse. La replicación
permite que las instrucciones genéticas se transmitan a las células hijas y del individuo a
su descendencia.
c) Expresión del mensaje genético: El ADN es un centro de almacenamiento y también
dirige la actividad celular. La información del ADN debe usarse para dirigir el orden por
medio del cual los aminoácidos específicos se incorporan dentro de una cadena
polipeptídica.
De acuerdo al modelo de Watson y Crick:
*La información contenida en el ADN residía en una secuencia lineal en sus
bases. A cada gen corresponde determinado segmento de ADN. La secuencia específica
de nucleótidos de dicho segmento provocaría una mutación hereditaria en dicho gen.
*Durante la replicación, los enlaces de hidrógeno que mantienen a las dos
cadenas deberían romperse de manera secuencial, lo que ocasiona una separación
gradual de las cadenas. Cada una de las cadenas separadas debería servir como una
plantilla o molde para dirigir el orden en el cual los nucleótidos complementarios se
ensamblarían para formar la cadena complementaria. Cuando la replicación se completa,
deben generarse moléculas de ADN que son: (A)idénticas una a la otra y (B)idénticas al
ADN original. O sea, cada doble hélice debería contener una cadena de la molécula
original y una cadena sintetizada de nueva cuenta.

ADN super enrollado

Dos moléculas de ADN circular de idéntica masa molecular pueden presentar grados muy diferentes de sedimentación
durante una centrifugación o de migración durante una electroforesis. Este fenómeno ocurre por el superenrollamiento,
donde el ADN superenrollado se compacta más y adquiere mayor capacidad de sedimentación y/o migración.
Una molécula de ADN relajada posee 10 pares de bases por vuelta de hélice. El superenrollamiento puede ser de dos tipos:
*Superenrollamiento positivo: Menos de 10 pares de bases por vuelta de hélice, se genera por retorcimiento.
*Superenrollamiento negativo: Más de 10 pares de bases por vuelta de hélice, se genera por desenrollamiento.
El superenrollamiento existe normalmente en:
*ADN circular (p. ej, el mitocondrial, bacteriano o viral): Presenta invariablemente superenrollamiento negativo.
*ADN lineal: El superenrollamiento negativo permite que el ADN de los cromosomas se compacte y llene los
espacios del núcleo celular; también es requerido en la replicación y en la transcripción. Se puede observar
superenrollamiento positivo por delante de las horquillas de replicación y transcripción.
Las enzimas topoisomerasas sirven a las células, tanto procariotas como eucariotas, para cambiar el estado de
superenrollamiento del ADN. Reciben el nombre de topoisomerasas por cambiar la topología del ADN. Existen dos tipos:
Topoisomerasa I Topoisomerasa II (Girasa)
Crea una rotura transitoria en una cadena del Hacen una rotura transitoria en ambas cadenas del
ADN dúplex. ADN dúplex.
El corte de una cadena permite que la cadena El corte de ambas cadenas permite que otro segmento
intacta sufra una rotación controlada, lo que de ADN (o una molécula separada por completo) se
relaja el superenrollamiento. transporte a través de la rotura.
Se requiere para separar las moléculas de ADN antes
Es esencial en la replicación y en la
de la duplicación de cromosomas. También es
transcripción.
requerida en la replicación.
La topoisomerasa II es capaz de realizar algunos “trucos”: (1) Superenrollar y desenrollar al ADN; (2) Enlazar a una molécula
de ADN en nudos o desanudarla y (3) Encadenar una población de círculos de ADN independientes o separarlos.
La topoisomerasa II es blanco de fármacos antitumorales (etopósido y doxorrubicina).

La Estructura del Genoma

El ADN es tanto una macromolécula como un almacén de información. Si un gen corresponde a un segmento particular de
ADN, la suma de información genética que un organismo hereda de sus padres es equivalente a la suma de todos los
segmentos de ADN presentes en el huevo fecundado que inicia la vida.
Genoma humano:
Individuos de una misma especie: Comparten el mismo grupo de genes, si bien los Información presente en un
individuos presentan diferentes alelos de muchos de estos genes que los hacen únicos. juego haploide de cromosomas
Individuos de distintas especies: Poseen un contenido único de información genética, cada (22 autosomas diferentes y los
especie posee un genoma particular. cromosomas sexuales X y Y)
 Naturaleza del gen y Genoma
EMP
La complejidad del genoma
Para comprender cómo se determina la complejidad del genoma, es necesario considerar la desnaturalización del ADN. La
desnaturalización es la separación del ADN de doble hélice en dos cadenas sencillas.

Desnaturalización del ADN: Cuando el ADN se disuelve en solución salina y

se somete a calentamiento lento, se alcanza cierta temperatura cuando las dos
cadenas de ADN comienzan a separarse. Pueden separarse del todo en cadenas
sencillas con pocos grados más. El progreso de la desnaturalización (fusión del
ADN) se cuantifica por el incremento de absorbancia de luz UV por el ADN
disuelto. Mientras más se separen las cadenas, es mayor la absorbancia de luz UV.
La temperatura que corresponde a la mitad del cambio de la absorbancia se llama
temperatura de fusión (Tm). A mayor proporción de pares CG es mayor la Tm.

Renaturalización del ADN: La renaturalización o recocido del ADN es la

revinculación de moléculas de ADN monocatenario complementarias que habían
sido desnaturalizadas. Puede realizarse por enfriamiento lento; se reduce la
absorbancia de luz UV y se recuperan las funciones de material genético.
La renaturalización:
(1) Ha servido como base para la investigación de la complejidad del genoma.
(2) Llevó al desarrollo de la técnica conocida como hibridación de ácidos nucleicos. La hibridación:
Juega un papel clave en (a)secuenciación, (b)clonación y (c)amplificación del ADN.

Complejidad de genomas virales y bacterianos: Son varios los

factores que determinan la frecuencia de renaturalización de una preparación
de ADN: (1)La fuerza iónica de la solución, (2)la temperatura de incubación,
(3)La concentración de ADN, (4)el período de incubación y (5)el tamaño de las
moléculas que interactúan.
Comparando la velocidad de renaturalización de los genomas de virus y
bacterias, se puede concluir que el genoma más pequeño tiene una
renaturalización más rápida.
La curva de renaturalización muestra una sola pendiente, simétrica y muy
simple; tiene estas características porque todas las secuencias están presentes
en la misma concentración. Se ha sugerido que el ADN de estos cromosomas
contiene un gen tras otro en disposición lineal.

Complejidad de genomas eucariotas: A diferencia de los

genomas más simples, los fragmentos de ADN de un genoma de
mamífero se renaturalizan a velocidades muy distintas; esto ocurre
porque, en una preparación de fragmentos de ADN eucariota, las
diferentes secuencias de nucleótidos se encuentran en concentraciones
muy variables. El ADN eucariota no es tan solo la sucesión de un gen
tras otro, como en las bacterias o virus, sino una organización mucho
más compleja.
La curva típica muestra tres tipos distintos, que corresponden a la
renaturalización de tres clases muy abundantes de secuencias de ADN.
De renaturalización más rápida a más lenta contamos:
Secuencias altamente repetidas → Secuencias moderadamente
repetidas → Secuencias no repetidas
Las tres clases se renaturalizan a diferente velocidad porque difieren en cuanto al número de veces que su secuencia de
nucleótidos se repite dentro de la población de fragmentos.
 Naturaleza del gen y Genoma
EMP
SECUENCIAS DE ADN MUY REPETIDAS
5
1. Secuencias presentes en por lo menos 10 copias por genoma, constituye casi 1 al 10% del ADN total.
2. Por lo general son cortas, de unos pocos cientos de nucleótidos en su mayor longitud.
3. Se presentan en tándem, que quiere decir que la secuencia se repite una y otra vez sin interrupción.
ADN SATÉLITES
 Secuencias cortas de cinco a pocos cientos de pb de longitud.
 Forman segmentos muy largos, cada uno con varios millones de pb de ADN.
 Aparecen rápido en el curso de la evolución.
 Sirven para diferenciar especies emparentadas debido a la variabilidad de sus secuencias.
 Se localizan dentro de los centrómeros de los cromosomas (ADN satélite alfa, que es una secuencia de 171 pb repetida en
tándem y extendida por lo menos a 500 kilobases).
ADN MINISATÉLITES
 Secuencias cortas de 10 a 100 pb de longitud.
 Se encuentran en segmentos de unas 3 000 repeticiones. Ocupan tramos considerablemente más cortos que las
secuencias satélite.
 Son muy inestables y el número de copias varía en la población, incluso entre parientes.
 Se emplean para identificar criminales o en casos de paternidad.
ADN MICROSATÉLITES
 Secuencias muy cortas de uno a cinco pb de longitud.
 Se hallan en segmentos de unos 10 a 40 pb de longitud. Se ubican de forma uniforme en el ADN en más de 100 000 loci
diferentes en el genoma humano.
 Los segmentos cambian de longitud a través de las generaciones.
 Se han utilizado para analizar relaciones entre las diferentes poblaciones de grupos étnicos.

Satélites Minisatélites Microsatélites

Secuencias Cinco a pocos cientos pb 10 – 100 pb 1 – 5 pb

Longitud de segmentos
Largos. Millones de pb 3000 repeticiones 10 a 40 pb
ocupados
Dispersas en los cromosomas.
Ubicación Centrómeros Uniforme en todo el genoma
Telómeros
Varía entre especies Pruebas de paternidad o Relaciones entre grupos
Utilidad
emparentadas violación étnicos

SECUENCIAS DE ADN MODERADAMENTE REPETIDAS

En plantas y animales varía desde el 20% hasta más del 80% del ADN total, según sea el organismo. Incluye secuencias
repetidas en cualquier parte del genoma, desde unas pocas hasta varias decenas de miles de veces.
ADN MODERADAMENTE REPETIDOS CON FUNCIONES CODIFICANTES
Son secuencias repetidas casi siempre idénticas que se disponen en una configuración semejante al tándem.
Corresponde a:
 Genes que codifican a las histonas: Se necesitan muchas copias de estas proteínas durante el desarrollo temprano y por tanto deben
estar presentes cientos de ADN molde.
 Genes que codifican a ARN ribosómico: Estos ARN se requieren en grandes cantidades y su síntesis no se beneficia de la amplificación
adicional observada en los ARNm unidos a polisomas.
 Genes que codifican a ARN de transferencia
OJO: Es correcto afirmar que estos genes se disponen en tándem separados por espaciadores no transcriptos (Cap 11)
ADN MODERADAMENTE REPETIDOS SIN FUNCIONES CODIFICANTES
Constituyen la mayor parte de las secuencias de ADN moderadamente repetidas. No se agrupan en tándem sino que
se dispersan a través del genoma como elementos individuales. Se pueden agrupar en dos clases:
 SINE: Elementos cortos interpuestos. Ej: Familia Alu.
Diseminadas en más de un millón de diferentes sitios a lo largo del genoma humano.
Familia de secuencias cortas y relacionadas que poseen casi 300pb de longitud.
Poseen secuencias muy similares a los ARN de las partículas de reconocimiento de la señal.
 LINE: Elementos largos interpuestos. Ej: Familia L1.
El genoma humano posee 500 000 copias de L1.
Una secuencia L1 completa codifica una proteína única con dos actividades enzimáticas (transcriptasa inversa + endonucleasa).
La gran mayoría de las L1 en humanos son elementos incompletos.

Alu L1
Tipo de DNA moderadamente repetido SINE LINE
Pares de bases 300 6mil
Número de copias Más de un millón 500mil
Producto codificado SRP Proteína TR + endonucleasa
 Naturaleza del gen y Genoma
EMP

SECUENCIAS DE ADN NO REPETIDAS O DE COPIAS ÚNICAS

Es la fracción de ADN eucariota de renaturalización más lenta. Se asume que hay una sola copia por genoma. Incluye a los
genes de herencia mendeliana. Estas secuencias siempre se localizan sobre un sitio específico de un cromosoma en
particular.
La fracción no repetida contiene, con mucho, una mayor cantidad de información genética. Encontramos en estas secuencias
a las que codifican a virtualmente todas las proteínas diferentes a las histonas.
Familias multigénicas: Agrupamientos de proteínas originadas a partir de un mismo gen ancestral común que experimentó
una serie de duplicaciones y modificaciones posteriores durante el transcurso de la evolución. Los genes que codifican a los
polipéptidos son por lo regular miembros de una familia multigénica, donde encontramos secuencias génicas relacionadas
pero diferentes.
Ejemplos de familias multigénicas: actinas, miosinas, colágenas, tubulinas, integrinas y la mayor parte de otras proteínas de
una célula eucariota.

Menos del 1,5% del genoma humano codifica a los aminoácidos de las proteínas.

Bonus:
FISH (HIBRIDACIÓN IN SITU CON FLUORESCENCIA)
La hibridación de ácidos nucleicos tiene la capacidad de localizar secuencias específicas de ADN. FISH se usa para mapear la
ubicación relativa de secuencias diferentes a lo largo de secuencias únicas de ADN.
 Expresión de los genes: Transcripción y Traducción
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EXPRESIÓN DE LOS GENES: TRANSCRIPCIÓN Y TRADUCCIÓN

Relación entre Genes y Proteínas
Los descubrimientos sobre la relación entre un gen y las proteínas propiciaron una hipótesis que se modificó con el tiempo:
“Un gen = Una enzima” → “Un gen = Un polipéptido” → “Un gen = Varios polipéptidos”
La mutación en un gen es capaz de causar una sustitución aminoacídica en la secuencia de un polipéptido, como el caso de la
hemoglobina en los eritrocitos de la anemia falciforme, donde un residuo de ácido glutámico es sustituido por una valina
como resultado de una mutación. Es decir, un cambio en la secuencia de nucleótidos de un gen es capaz de propiciar un
cambio en la secuencia de aminoácidos de una proteína específica.
Revisión del tránsito de la información genética dentro de las células

La síntesis de un ARN a partir de un ADN molde se denomina transcripción. Ocurre en el núcleo eucariota y en el citoplasma
procariota.
La molécula intermediaria entre un gen y su polipéptido es el ARNm. Un ARNm se ensambla como una copia complementaria
de una de las dos cadenas de ADN que constituyen un gen.
La secuencia de nucleótidos del ARNm es complementaria de la del gen a partir del cual se transcribió, por lo que el ARNm
tiene la misma información contenida en el propio gen. El uso del ARNm permite a la célula separar la información
almacenada (ADN) de la información utilizada (ARNm). El ARNm es:
a) Movible: mucho más pequeño que el ADN y capaz de llegar al citoplasma.
b) Molde: para controlar la incorporación de aminoácidos en el orden específico codificado por la secuencia de
nucleótidos en el ADN y el ARNm.
c) Amplificador de la actividad de la célula: Una molécula de ADN puede servir como molde en la formación de
muchas moléculas ARNm; cada una de las cuales, a su vez, puede usarse para la síntesis de gran número de cadenas
de polipéptidos.
Las proteínas se sintetizan en el citoplasma por un proceso complejo conocido como traducción. La traducción es la actividad
sintética más compleja que realizan las células. La traducción requiere la participación de docenas de componentes
diferentes, incluidos los ribosomas.
Los ribosomas son componentes inespecíficos y programables de la maquinaria de traducción. Son complejos
ribonucleoproteicos citoplásmicos compuestos por:
a) ARNr: Cada uno transcripto a partir de las cadenas de ADN de un gen. Estos ARN poseen funciones de
(1)reconocimiento de otras moléculas, (2)apoyo estructural y (3)catálisis de la formación del enlace peptídico.
b) Proteínas
Los ARNt son también requeridos en la traducción, donde funcionan como adaptadores. Son
necesarios para traducir la información codificada en los nucleótidos de ARNm en el alfabeto
de aminoácidos de un polipéptido.
Los ARNr y ARNt deben sus actividades a sus complejos secundarios y estructuras terciarias.
Muchos ARN adoptan formas 3D complejas por medio del plegamiento. Los ARN pueden
efectuar diversas funciones debido a que adoptan gran variedad de formas.
El plegamiento de ARN integra regiones que formen pares de bases complementarias. Los
ARN contienen a menudo pares de bases que no son comunes y bases nitrogenadas
modificadas; las regiones de la molécula que no son convencionales:
a) sirven como sitios de reconocimiento para proteínas y otros ARN
b) promueven el plegamiento del ARN y
c) ayudan a estabilizar estructuras de la molécula.
El apareamiento de bases puede ocurrir también entre moléculas de ARN y tiene una función central en la mayoría de las
actividades en las que intervienen los ARN.
Así, los ARN que poseen funciones vitales en el metabolismo celular son:
ARNm: ARN mensajero ARNr: ARN ribosómico
ARNt: ARN de transferencia ARNsn: ARN pequeño nuclear
ARNsno: ARN pequeño nucleolar ARNsi: ARN pequeño de interferencia
ARNmi: micro ARN
Sinopsis de la Transcripción en Procariotas y Eucariotas
La transcripción es un proceso en el que una cadena de ADN provee la información para la síntesis de una cadena de ARN.
Las enzimas que llevan a cabo la transcripción en eucariotas y procariotas se denominan ARN polimerasas dependientes de
ADN (ARN polimerasas).
 Expresión de los genes: Transcripción y Traducción
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Las ARN polimerasas incorporan nucleótidos, uno a la vez, dentro de una cadena de ARN cuya secuencia es complementaria
de una de las cadenas de ADN, la que se denomina plantilla o molde.
El primer paso en la síntesis de ARN es la vinculación de la ARN polimerasa con el ADN molde. El promotor es el sitio de la
molécula de ADN donde se une la ARN polimerasa antes de iniciar la transcripción. Las ARN polimerasas no son capaces de
reconocer promotores por sí mismas y requieren la ayuda de factores de transcripción.
PROMOTOR
La polimerasa de ARN, luego de unirse al ADN, desenrolla de manera temporal al ADN y:
(1) Sitio de unión de la ARN
Se mueve sobre el molde de ADN en dirección 3’ → 5’ polimerasa al ADN
Sintetiza una cadena de ARN complementaria desde el extremo 5’ → 3’ (2) Determina qué cadena de
La ARN polimerasa cataliza la reacción: ADN se transcribe
ARNn + NPPP → ARNn+1 + PPi (3) Determina el sitio de inicio
Donde: n = cantidad de nucleótidos del ARN; NPPP = nucleótidos trifosfato; de la transcripción
PPi = Pirofosfato inorgánico
En esta reacción los NPPP se hidrolizan a nucleósidos monofosfato al polimerizar en una cadena mediante enlaces
covalentes. Se asegura la irreversibilidad de la polimerización mediante una reacción secundaria.
La enzima pirofosfatasa cataliza la reacción: PPi → 2Pi
La hidrólisis del pirofosfato torna a la incorporación del nucleótido irreversible.
A medida que la polimerasa se mueve a lo largo del ADN molde, éste incorpora nucleótidos complementarios dentro del ARN
en crecimiento. Un nucleótido se incorpora dentro de la cadena de ARN si es capaz de formar pares de bases Watson-Crick
con el nucleótido del ADN que se transcribe.
Una vez que la ARN polimerasa se ha movido en un segmento particular de ADN, la doble hélice de ADN se vuelve a formar;
la cadena de ADN no permanece vinculada con su molde como un híbrido ADN-ARN excepto por unos nueve nucleótidos
justo al lado del sitio donde la polimerasa opera.
Las ARN polimerasas son capaces de incorporar alrededor de 20 a 50 nucleótidos/segundo en una molécula de ARN y muchos
genes se transcriben de forma simultánea por cientos o más polimerasas.
Las ARN polimerasas son enzimas procesivas, es decir, son
capaces de formar ARN muy largos por permanecer unidas
al ADN en largos segmentos sin caer.
Experimentalmente, se ha calculado que las moléculas de
ARN polimerasa se pueden mover con una fuerza más de
dos veces superior respecto que la de la miosina.
Las ARN polimerasas no se encuentran siempre en
movimiento continuo: pueden sufrir pausas en ciertos
puntos a lo largo del molde e incluso retroceder antes de ϾjϿ
reasumir su avance. En algunos casos, una polimerasa que (1) La ARN polimerasa cubre alrededor de 35 pares de bases del ADN.
permanece detenida debe digerir más allá del extremo 3’ (2) El sitio donde las cadenas de ADN se separan se denomina burbuja de
de la transcripción sintetizada de manera reciente y transcripción, contiene cerca de 15 pares de bases.
(3) El híbrido ADN-ARN incluye más o menos 9 pares de bases.
resintetizar la porción errónea antes de reiniciar el (4) Por delante de la burbuja se crea un superenrollamiento (+)
movimiento. (5) Por detrás de la burbuja se crea un superenrollamiento (-)
Transcripción en bacterias
Las eubacterias contienen un solo tipo de ARN polimerasa compuesto de cinco
subunidades que conforman un núcleo enzimático. El núcleo enzimático es capaz de
sintetizar ARN; sin embargo, las moléculas generadas por una ARN polimerasa purificada
no son las mismas que las halladas dentro de las células: el núcleo enzimático se une a
sitios de ADN de manera aleatoria, no reconoce promotores por si mismo.
Si un polipéptido denominado factor sigma (σ) se agrega a la polimerasa, la transcripción
comienza en sitios específicos; es decir, factor sigma aumenta la afinidad de la enzima por
los promotores y disminuye la afinidad por el ADN en general.
El inicio de la transcripción parece ser difícil de activar debido a que la ARN polimerasa lleva a cabo casi siempre diferentes
intentos infructuosos para ensamblar una transcripción de ARN. Una vez que 10 a 12 nucleótidos se han incorporado de
manera satisfactoria a la transcripción en crecimiento, la enzima se transforma en un complejo transcripcional de elongación
que se mueve de forma procesiva sobre el ADN. A la formación del complejo de elongación le sigue la liberación del factor σ.
Promotores bacterianos: Se localizan en la región de ADN justo antes del sitio de inicio de la síntesis de ARN. Contiene:
Elemento -35 o Secuencia de consenso: a 35 nucleótidos antes del sitio de inicio, es decir, a 35 nucleótidos corriente
arriba del sitio de inicio. Presenta la secuencia TTGACA.
Caja de Pribnow: a 10 nucleótidos antes del sitio de inicio, es decir, a 10 nucleótidos corriente arriba del sitio de
inicio. Presenta la secuencia TATAAT. La caja de Pribnow se encarga de identificar el nucleótido preciso que activa la
transcripción.
Terminación de la transcripción en bacterias: Puede darse por dos mecanismos ante la llegada de la transcripción a una
secuencia específica
a) Proteína rho, en forma de anillo, se requiere en casi la mitad de los casos. Rodea al ARN neosintetizado, se mueve
en dirección 3’ hacia la polimerasa, donde esta separa al ARN transcrito del ADN molde.
b) La polimerasa detiene la transcripción cuando alcanza una secuencia de terminación, se libera la cadena sin
necesidad de factores adicionales.
 Expresión de los genes: Transcripción y Traducción
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Transcripción y procesamiento del ARN en eucariotas

Las células eucariotas tienen tres proteínas transcriptoras distintas en el núcleo, cada una encargada de la síntesis de un
grupo distinto de ARN.
Enzima ARN sintetizado
ARN polimerasa I ARNr mayores (28S, 18S, 5,8S)
ARN polimerasa II ARNm, ARNsn, ARNsno, ARNmi, ARN de telomerasa
La ARN polimerasa III difiere de las demás en que puede
ARN polimerasa III* ARNt, ARNr 5S, ARNsn de U6 unirse a un promotor situado dentro de la porción
ARN polimerasa IV ARNsi transcripta del gen blanco (en ARNr 5S y ARNt).

A pesar de que la enzima de levadura tiene siete o más subunidades que sus contrapartes bacterianas, el núcleo estructural
de la enzima y su mecanismo básico de transcripción son idénticos.
Una diferencia importante entre la transcripción en procariotas y eucariotas es el requerimiento de factores
transcripcionales por parte de los eucariotas. Estas proteínas participan casi sin excepción en cada aspecto del proceso de
transcripción y contribuyen a:
a) La unión de la polimerasa al molde
b) El inicio de la transcripción
c) La elongación del ARN
d) La terminación de la transcripción
Transcripción primaria (preARN) es el nombre que se da a moléculas precursoras de los ARN principales (ARNm, ARNr, ARNt)
que son mucho más grandes que el ARN final. Este preARN es equivalente en longitud a la longitud completa del ADN que se
transcribe. Los preARN evolucionan a un producto final por el procesamiento.
Unidad de transcripción es el segmento de ADN del cual procede una transcripción primaria. Es la porción transcrita del gen.
Las transcripciones primarias no existen dentro de la célula como ARN desnudo, se vinculan a proteínas apenas después de
sintetizarse para procesarse mediante reacciones de corte y empalme.
El procesamiento de ARN requiere ARN pequeños (de 90 a 300 nucleótidos) y proteínas relacionadas.

Síntesis y Procesamiento de ARNr y ARNt

Ribosomas y Nucléolo
Composición de ribosomas de mamífero (80S):
*Subunidad grande (60S) = 49 proteínas ribosomales
+ ARNr 28S + ARNr 5,8S + ARNr 5S
*Subunidad pequeña (40S) = 33 proteínas ribosomales
+ ARNr 18S
 Expresión de los genes: Transcripción y Traducción
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Recordemos que las secuencias de de genes que codifican ARNr son secuencias moderadamente repetidas codificantes que
se disponen en tándem en las constricciones secundarias de los cromosomas acrocéntricos 13, 14, 15, 21 y 22.
El ADN que codifica al ARNr se conoce como ADNr; el genoma humano posee 5 regiones ADNr, cada una en distintos
cromosomas. En una célula en interfase, los grupos de ADNr están reunidos como parte de uno ó más nucléolos.
Los nucléolos son estructuras nucleares no rodeadas de membrana, de forma irregular, que funcionan como organela que
produce ribosomas. Pueden ser únicos o múltiples en un núcleo celular. El nucléolo es un compartimento dinámico en estado
estable cuya existencia depende de su actividad contínua.
Estructura del nucléolo:
Se pueden distinguir tres regiones distintas:
(1) Componente granular:
La mayor parte de un nucléolo. Se compone de subunidades ribosomales.
(2) Componente fibrilar denso:
Contiene la transcripción del preARNr emergente.
(3) Componente fibrilar:
Contiene el ADNr.
La transcripción del preARNr se realiza en la frontera entre el componente fibrilar y
el componente fibrilar denso.
En el nucléolo se encuentran todos los ARNr, pero en él se sintetizan solo los mayores (18, 28 y 5,8S)

Síntesis del precursor de ARNr

Los oocitos de rana son ideales para el estudio de la síntesis y procesamiento del ARNr debido a que contienen cientos de
nucleolos, cada uno de los cuales elabora ARNr de modo activo. Se observa la síntesis de ARNr al microscopio electrónico
como un “árbol de navidad”.

+ Los genes que codifican al ARNr se sitúan uno después del otro a lo
largo de un ADN, es decir, se ordenan en tándem.
+ Las ramas del árbol, es decir, las 100 ó más fibras que emergen del
ADN, son transcripciones nacientes de ARN en proceso de
elongación. Las fibrillas más cortas son moléculas cercanas
al sitio de inicio de la transcripción. Las fibrillas más largas
están más cerca de la terminación de la transcripción.
+ En la base de cada rama, es decir, de cada fibrilla de preARNr,
puede observarse a la polimerasa de ARN como puntos. Hay
aproximadamente una polimerasa por cada 100 pares de
bases de ADN (gran velocidad de síntesis).
+ Cada rama se asocia a nudos y partículas; son ARN y proteínas (U3)
que trabajan para convertir a los preARNr en sus productos
finales y ayudar a ensamblar a estos en las subunidades
ribosomales.
+ El tronco del árbol, es decir, la longitud de ADN entre las ramas /
fibrillas más cortas y más largas de ARN corresponde a una
unidad de transcripción.
+ La región entre dos genes que no contiene ramas no se transcribe,
es el espaciador no transcripto. Contiene el promotor del
ARNr 45S. Este espaciador existe en genes que codifican
ARNr, ARNt e histonas.

Procesamiento del ARNr precursor

Los ARNr de los ribosomas eucariotas son 4. Tres se localizan en la subunidad grande ribosomal
(28S, 5,8S y 5S); uno se localiza en la subunidad ribosomal menor (18S).
Primero analizaremos el procesamiento del preARNr 45S, precursor de los ARNr 28S, 18S y 5,8S.
El preARNr tiene como características la metilación de nucleótidos y la presencia de seurouridina.
a) Se agregan 100 grupos metilo a las ribosas (en relación con ARNsno de caja C/D).
b) 95 uridinas se convierten a seudouridinas (en relación con ARNsno de caja H/ACA).
Estas modificaciones se realizan de forma postranscripcional. Los
nucleótidos modificados permanecen como parte de los productos DISQUERATOSIS
finales, mientras que las secciones no modificadas se descartan Enfermedad fatal por
mutaciones en la enzima
durante el proceso. Los metilos y seudouridinas podrían:
que convierte U a Ψ en los
a) Proteger partes del preARNr del corte enzimático
ARNr.
b) Promover el plegamiento del ARNr en su estructura 3D final
c) Promover interacciones del ARNr con otras moléculas
 Expresión de los genes: Transcripción y Traducción
EMP
Los ARNr 45S tienen una longitud de 13 000 nucleótidos. Sus productos: el ARNr 28S (5 000 LONGITUD DE ARNr:
nucleótidos), ARNr 18S (2 000 nucleótidos) y ARNr 5,8S (160 nucleótidos) tienen una longitud ARNr 28S:
combinada aproximada a 7 000 nucleótidos. ARNr 18S:
ARNr 5,8S:
Mediante la metodología de “pulso-persecución” puede analizarse algunos pasos que sigue la vía ARNr 5S:
del procesamiento del preARNr 45S:
1. El preARNr es sintetizado en el nucléolo. Desaparece del nucléolo luego de una hora.
2. A los 40 min aparecen el ARN 32S y el ARNr 18S:
* El ARN 32S se detecta en el nucléolo, es precursor de los ARNr 28S y ARNr 5,8S.
* El ARNr 18S maduro abandona rápido el nucléolo y aparece en el citoplasma.
3. A las 2 horas o más, los ARN abandonan el nucléolo y se los observa en el citoplasma
como ARNr 28S y 5,8S.
Estos pasos están representados en el esquema de la derecha. Se cree que algunos de los
cortes enzimáticos indicados en dicha figura los cataliza el exosoma. El exosoma es una
máquina que degrada ARN y posee alrededor de 12 exonucleasas diferentes.

El papel de los ARNsno: El procesamiento completo de los preARNr se completa con

ayuda de un gran número de ARNsno. Los ARNsno se agregan con proteínas particulares
para formar ribonucleoproteínas pequeñas nucleolares (RNPsno). Los RNPsno comienzan a
relacionarse con los preARNr antes de que éste se transcriba por completo.
La primera partícula de RNP que se une a una transcripción de preARNr contiene el ARNsno U3 y más de dos docenas de
proteínas diferentes. U3 se une con el extremo saliente de cada cadena de ARN, donde se cataliza la remoción del extremo
5’ terminal de la transcripción.
Clasificamos a los ARNsno debido a la cantidad presente en la célula:
4
U3 Los ARNsno presentes en baja concentración (10 copias) pueden
dividirse en dos grupos de acuerdo con su función y similitudes en su
106 copias
secuencia de nucleótidos:
Otros
ARNsno de caja C/D: Determinan qué nucleótidos del preARNr se
ARNsno metilan en sus residuos de ribosa. Presentan la secuencia invariable
Caja C/D CUGA en su estructura.
104 copias ARNsno de caja H/ACA: Establecen las uridinas que se convierten en
Caja H/ACA seudouridinas. Poseen una secuencia ACA 3’ compartida.
Los ARNsno contienen segmentos relativamente largos (10 a 21
nucleótidos) que se complementan con secciones de preARNr.
Cada ARNsno: 1. Se une a una porción específica del preARNr para formar un dúplex ARN-ARN.
2. Guía a una enzima (metilasa o seudouridilasa) para modificar un nucleótido en particular del preARNr.
Recordemos que son 100 los nucleótidos metilados y 95 las uridinas que se modifican a seudouridinas; así, la célula posee
alrededor de 200 diferentes ARNsno, uno para cada sitio en el preARNr metilado en la ribosa o seudouridilado.
Los ARNsno se codifican dentro de las secuencias internas de otros genes. La mayoría de los ARNsno se halla dentro de los
intrones de genes que codifican a los polipéptidos que intervienen en el ensamble de ribosomas y su función. Cuando estos
genes se transcriben y los intrones se eliminan de las transcripciones primarias, más que descartarlos, algunos de estos
intrones se procesan en ARNsno. Se ha descubierto otros genes que son transcritos y sus intrones se procesan en ARNsno,
mientras que los exones se degradan sin dar lugar a un ARNm.

Síntesis y procesamiento del ARNr 5S

Sintetizado fuera del nucleolo pero dentro del núcleo por la ARNPIII. Es un ARNr común de las subunidades grandes pro y eu.
Un ARNr 5S es parte de la subunidad ribosomal grande, sea de procariotas o eucariotas. Un gran número de genes idénticos,
separados de los otros genes de ARNr y localizados fuera del nucléolo, codifica a las moléculas de ARNr 5S. El ARNr 5S es
transportado luego de su síntesis al nucléolo para unirse a la subunidad ribosomal grande. El gen posee un promotor interno
y por ello es transcripto por la ARNPIII,

Síntesis y procesamiento del ARNt

Las plantas y animales tienen cerca de 50 especies diferentes de ARNt, cada uno codificado por una secuencia repetida de
ADN. Se estima que los seres humanos tienen un total de 1 300 genes que codifican ARNt. Los genes poseen promotor
interno y por ello son transcriptos por ARNPIII. Los genes que codifican ARNt se encuentran en regiones pequeñas
diseminadas en el genoma (ADNt). De manera característica:
1. Una sola región contiene múltiples copias de diferentes genes de ARNt.
2. El gen de un ARNt epecífico se encuentra por lo general en más de una región.
Los genes de ARNt tienen secuencias espaciadoras no transcritas; las secuencias codificantes se sitúan en intervalos
irregulares en un ordenamiento repetido en tándem.
La transcripción primaria de un ARNt es mucho más grande que la transcripción final, por lo que los extremos 5’ y 3’
terminales del precursor deben eliminarse. Una enzima que interviene en el procesamiento del preARNt es la ribonucleasa P,
una endonucleasa presente en bacterias y eucariotas. La ribonucleasa P está integrada por subunidades proteicas y ARN. El
ARN de la ribonucleasa P es el que cataliza el corte en el preARNt.
 Expresión de los genes: Transcripción y Traducción
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Síntesis y Procesamiento de ARNm
Los ARNhn (ARN heterogéneos nucleares) son precursores de los diferentes ARNm. Estos ARNhn presentan las siguientes
propiedades:
1. Muestran pesos moleculares altos (hasta 80S o 50 000 nucleótidos)
2. Se representan como grupo por ARN diversos con distinta secuencia nucleotídica
3. Se encuentran solamente en el núcleo
Los ARN más abundantes de las células son los ARNr 28S y 18S, mientras que la mayor parte del ARN sintetizado en cualquier
momento por una célula corresponde al ARNhn.
Los ARNhn y los ARNm se degradan después de lapsos relativamente breves, en especial los ARNhn, que se procesan a ARNm
o se degradan por completo incluso mientras son sintetizados.
Comparando las vidas medias de los diferentes ARN, obtenemos que:
a. La vida media de los ARNr y ARNt se mide en días o semanas (por ello se acumulan y corresponden a las especies
predominantes en la célula).
b. Los ARNm tienen diferentes vidas medias de acuerdo a la especie de ARNm particular: los límites oscilan entre 15
minutos y algunos días.
La maquinaria para la transcripción del ARNm
Todos los ARNm precursores de eucariotas se sintetizan por la ARN polimerasa II, una enzima de 12 subunidades. El inicio de
la transcripción por la ARN polimerasa II se realiza con la cooperación de factores de transcripción generales (GTF).
Los promotores de la ARN polimerasa II se localizan en el extremo 5’ de
cada unidad de transcripción; una porción crítica del promotor es la
caja TATA, ubicada 24 a 32 bases corriente arriba del sitio de inicio;
contiene la secuencia de consenso 5’-TATAAA-3’.
La caja TATA es el punto donde se ensambla el complejo de preinicio,
que contiene 6 factores de transcripción generales y la ARNPII.
El complejo de preinicio debe ensamblarse antes de comenzar la
transcripción.
Ensamble del complejo de preinicio:
1. Unión de TFIID a la caja TATA.
+ TBP de TFIID es la subunidad que se une a caja TATA.
+ La unión de TFIID al ADN dobla al ADN cerca de 80°.
+ TBP se inserta en el surco menor del ADN.
2. Unión de TFIIB y TFIIA.
3. Unión de la ARNPII junto con TFIIF.
4. Unión de TFIIE y TFIIH.
La unión del último par de factores de transcripción convierte a la
polimerasa en la forma activa de la maquinaria de transcripción. La
actividad helicasa de TFIIH separa las cadenas de ADN del promotor, lo
que hace posible el acceso de la ARNPII al molde.
Una vez iniciada la transcripción:
a. Algunos factores de transcripción se liberan del complejo.
b. TFIIF viaja con la polimerasa durante la elongación.
c. TFIID permanece unido al promotor.
Cuanto más permanezca TFIID unido al promotor, más moléculas de
ARNPII pueden unirse al promotor e iniciar nuevos procesos de
transcripción sin retraso.
La CTD (dominio C-terminal) de la subunidad más grande de la ARNPII
contiene un heptapéptido que se repite 52 veces en mamíferos:
– Tyr1 – Ser2 – Pro3 – Thr4 – Ser5 – Pro6 – Ser7 –
PARTICULARIDADES DE LOS GTF:
De los siete residuos, las serinas 2 y 5 son las fosforiladas por cinasas de
TFIID: Posee la proteína de unión a TATA (TBP) y
proteínas. La fosforilación de CTD pueden hacerla al menos cuatro una docena o más TAF.
cinasas diferentes (incluidos TFIIH y PTEFb). TFIIF: No abandona a la polimerasa durante la
* La ARNPII que se ensambla en el complejo de preinicio no se fosforila. elongación.
* La ARNPII comprometida con la elongación está muy fosforilada. TFIIH: Posee 9 subunidades. Tres de ellas con
La ARNPII comprometida con la elongación puede relacionarse con actividades catalíticas: una cinasa y dos helicasas.
diferentes proteínas accesorias grandes, la CTD sirve como andamiaje
para la organización de factores de procesamiento. Una polimerasa de ARN en elongación es parte de un gran complejo
constituido por más de 50 componentes y una masa molecular de más de 3 000 000 de daltones.
La ARNPII y sus factores de transcripción generales son suficientes para promover un nivel basal bajo de transcripción. Los
factores de transcripción específicos son los que determinan:
a) si un complejo de preinicio se ensambla o no en un promotor particular.
b) la velocidad a la cual la polimerasa inicia nuevos ciclos de transcripción desde ese promotor.
 Expresión de los genes: Transcripción y Traducción
EMP
La estructura de los ARNm: Los ARNm muestran ciertas propiedades:
1. Contienen secuencias continuas de nucleótidos que codifican un polipéptido específico.
2. Se encuentran en el citoplasma.
3. Se vinculan con los ribosomas cuando se traducen.
4. Poseen regiones no codificantes en 5’ y en 3’ (UTR 5’ y UTR 3’). Estas regiones poseen secuencias reguladoras.
5. Modificaciones especiales en 5’ (capuchón) y en 3’ (cola de poliadeninas). Estas no se encuentran en ARNr ni ARNt.
Procesamiento de genes: Conceptos
El ARNhn es precursor del ARNm. El ARNhn se halla en el núcleo y
tiene un tamaño mucho más grande que su producto, el ARNm. El
ARNm se halla en el citoplasma y tiene menor tamaño que su
precursor, el ARNhn. La diferencia de tamaños fue la diferencia más
importante para el descubrimiento de las secuencias interpuestas
del ADN, que dan origen a los intrones.
Los genes eucariotas son genes de procesamiento de corte y
empalme. Las partes de un gen de procesamiento de corte y
empalme que contribuyen a la maduración del producto de ARN se
conocen como exones, en tanto que las secuencias interpuestas se
denominan intrones.
Exones: Partes de un gen de procesamiento de corte y empalme
que contribuyen al producto de ARN maduro.
Intrones: Partes o secciones de un gen de procesamiento de corte y
empalme que corresponden a las secuencias interpuestas.
Los intrones se encuentran en todos los tipos de genes, incluidos
los que codifican a los ARNt, ARNr y ARNm.
Los intrones de los eucariotas más simples casi siempre muestran un número y tamaño menores respecto de los más
complejos.
Realizando la hibridación del ADN molde con sus productos resultantes (ARNhn y ARNm) y con posterior observación al MET
se puede resaltar que:
1. La transcripción primaria del gen (ARNhn) es equivalente en longitud y secuencia a la cadena molde. No se
observan asas de ADN de doble cadena.
2. El ARNm es complementario a ciertas regiones del molde, mientras que las regiones no complementarias
conforman asas de ADN dúplex. El número de asas formadas es equivalente al número de intrones.
Los exones individuales promedian alrededor de 150 nucleótidos.
Los intrones individuales promedian cerca de 3 500 nucleótidos.
El gen de la disfrofina humana tiene 100 veces la longitud necesaria para codificar su ARNm.
El gen de la colágena I contiene más de 50 intrones.
Un gen humano tiene cerca de nueve intrones.

Procesamiento de ARNm en eucariotas

Las transcripciones de ARN se vinculan con diferentes proteínas y numerosas partículas distintas mientras aún se encuentran
en proceso de transcripción. Estas partículas consisten en proteínas y ribonucleoproteínas, entre las que se encuentran
encargadas de convertir a la transcripción primaria en un ARNm maduro.
El procesamiento del ARNm en eucariotas contempla tres procesos:
a. Capping en el extremo 5’: Adición de un casquete de 7-metilguanosina en el extremo 5’.
b. Poliadenilación del extremo 3’: Adición de una secuencia de 50 a 250 residuos de adenosina en el 3’.
c. Corte y empalme o Splicing del ARN: Eliminación de intrones y empalme de exones.
Una vez completado el procesamiento, el RNPm (ARNm + proteínas) está listo para exportarse del núcleo.

Capping: El extremo 5’ de todos los ARN posee un trifosfato libre. Este extremo es modificado en el ARNm.
Una vez que el 5’ de un precursor de ARNm se sintetiza, diferentes actividades enzimáticas actúan en este extremo de la
molécula. El procesamiento es cotranscripcional y ocurre en la siguiente secuencia:
1. El último de los tres fosfatos del ARN se remueve y el extremo 5’ se convierte en un difosfato (trifosfatasa de ARN).
2. Se adiciona un GMP en orientación invertida: el 5’ de la guanosina se halla frente al 5’ del ARN (transferasa de guanilo).
3. Ocurre metilación (transferasas de metilo):
a. En el nitrógeno 7 de la guanina de la guanosina terminal invertida.
b. En el carbono 2 de la ribosa del nucleótido en la cadena interna del puente de trifosfato.
La CTD de la ARNPII recluta a las enzimas del capping.
El capuchón tiene diferentes funciones:
a. Previene que las exonucleasas digieran el 5’ del ARNm.
b. Favorece el transporte del ARNm fuera del núcleo.
c. Papel importante en el inicio de la traducción del ARNm.
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Poliadenilación: Adición de 250 o más adenosinas en el 3’ de un ARNm.
La cola de poliA comienza unos 20 nucleótidos corriente abajo de la secuencia AAUAAA. En la transcripción primaria, esta
secuencia sirve como sitio de reconocimiento para el ensamble de un complejo proteínas que procesan el 3’ del ARNm.
Dentro de las proteínas del complejo de procesamiento se encuentran:
1. Una endonucleasa, que corta al ARNm corriente abajo del sitio de reconocimiento.
2. Polimerasa de poliA, agrega 250 o más adenosinas sin necesidad de un molde.
La longitud de la cola de poliA es menor en eucariotas menores.
La CTD de la ARNPII se relaciona también con los factores de poliadenilación.
Las colas de poliA tienen diferentes funciones:
a. Protegen, junto con una proteína adjunta, al ARNm de la degradación prematura por exonucleasas.
b. Para los biólogos, es útil en el aislamiento de ARNm.
Remoción de intrones: Llamado también splicing o corte y empalme.
Las secuencias intrónicas son eliminadas por un proceso complejo denominado splicing del ARN. Para procesar un ARN
deben efectuarse cortes en la cadena de ese ARN en los extremos 5’ y 3’ de cada intrón (los sitios de splicing); los exones
ubicados a cada lado de los sitios de splicing deben ligarse de nueva cuenta de manera covalente.
Es importante la exactitud del procedimiento, debido a que la adición o pérdida de un solo nucleótido en cualesquiera de las
uniones de splicing podría causar que el ARNm resultante se tradujera mal.
Los sitios de splicing son:

Sitio de splicing 5’: G/GU en el sitio 5’ del intrón. Sitio de splicing 3’: AG/G en el extremo 3’ del intrón.
También es importante la secuencia de polipirimidinas, que es cercana al sitio de splicing 3’.
Existen señales adicionales que permiten a la maquinaria de splicing distinguir entre intrones y exones, por ejemplo:
secuencias exónicas denominadas ESE (aumentadores de splicing exónico).
Se estima que más de 15% de las enfermedades hereditarias humanas se
Para el reconocimiento de los intrones son
debe a mutaciones que alteran el splicing del preARNm.
necesarios:
Analicemos los tipos de intrones para comentar el proceso de splicing: A. Sitio de splicing 5’
Intrones de tipo II: Presentes en mitocondrias de hongos, cloroplastos, B. Sitio de splicing 3’
variedad de bacterias y arqueas. C. Aumentadores de splicing exónico (ESE)
Efectúan auto splicing. Llevan a cabo el splicing siguiendo los siguientes D. Polipirimidinas
pasos: E. Punto de bifurcación (A)
1. Corte en el sitio de splicing 5’.
2. Formación de un lazo por un enlace covalente entre el 5’ del intrón y una adenosina cercana al 3’ del intrón.
3. Corte del sitio 3’ con liberación del lazo.
4. Ligación de exones.
Intrones de tipo I: No pueden procesarse por sí mismos, requieren un grupo de ARNsn y sus proteínas vinculadas. Cada
molécula de ARNhn se transcribe y relaciona con proteínas para formar una RNPhn (ribonucleoproteína heterogénea
nuclear), la cual representa el sustrato para el splicing.
El espliceosoma o empalmosoma es un complejo macromolecular que posee diferentes proteínas y un número de diferentes
partículas ribonucleoproteicas, las RNPsn. Los espliceosomas no existen en estado prefabricado. Los intrones seccionados por
el espliceosoma constituyen alrededor de 90% del preARNm de mamíferos y se degradan en el núcleo.
Los pasos llevados a cabo durante la remoción de intrones en células animales son similares a los de los intrones de tipo II,
con la participación de las RNPsn U1, U2, U4/U6 Y U5.
La secuencia de pasos es:
1. Unión de U1 al sitio de splicing 5’.
La secuencia nucleotídica de U1 es complementaria del sitio de splicing 5’.
2. Unión de U2 al complejo de splicing.
U2 se une al intrón, lo que ocasiona que un residuo de adenosina se exponga hacia afuera de la hélice; esa adenosina
será el futuro punto de ramificación para la formación del lazo.
U2 es reclutado por U2AF. U2AF se une a la secuencia de polipirimidinas.
U2AF también interacciona con las proteínas SR de los aumentadores de splicing exónico (ESE)
3. Unión de U4/U6 y U5 + desplazamiento de U1.
U6 es una ribozima, U4 es su inhibidor.
U6 se aparea con U2 y con el sitio de splicing 5’.
Una vez que U1 y U4 se han desplazado, U6 se encuentra en posición para catalizar las dos reacciones químicas.
4. Catálisis (U6 cataliza ambos cortes requeridos para la eliminación de intrones).
1°: Corte del sitio de splicing 5’ con formación de exón 5’ libre y un lazo del intrón.
2°: Corte del sitio de splicing 3’ con unión de los exones vecinos y liberación del lazo.
U5 se mantuvo unido al sitio de splicing 3’ y mantuvo en posición al exón 5’ libre en una ubicación adecuada.
5. Liberación de los RNPsn. Eliminación del intrón.
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EMP

Cada RNPsn posee ARNsn y una docena de proteínas o más. Las proteínas Sm están presentes en todos los RNPsn y
conforman el núcleo de las RNPsn. Las proteínas Sm son el blanco de anticuerpos en pacientes con lupus eritematoso
sistémico. Las demás proteínas del RNPsn son únicas para cada partícula.
Los reordenamientos múltiples entre las moléculas de ARN que pueden tener lugar durante el ensamblaje de un
espliceosoma están mediados con probabilidad por helicasas consumidoras de ATP. Por lo menos 8 helicasas diferentes
intervienen en el splicing de preARNm en levaduras.
Como los componentes catalíticos del espliceosoma son las moléculas de ARNsn, el espliceosoma es una ribozima; se cree
que sus proteínas tienen funciones complementarias como:
a. mantener la propia estructura 3D de los ARNsn.
b. Controlar los cambios en la conformación del ARNsn.
c. Seleccionar los sitios utilizados durante el procesamiento de un preARNm específico.
Los aumentadores del splicing exónico (ESE) son secuencias ubicadas en los exones y participan en el reconocimiento de
exones por medio de la maquinaria de splicing. Las ESE sirven como sitios de unión para una familia de proteínas de unión a
ARN, conocidas como proteínas SR (poseen gran número de dipéptidos Arg-Ser).
Las proteínas SR:
1. Interactúan en complejos que abarcan uniones intrón/exón.
2. Ayudan a movilizar a los RNPsno a los sitios de splicing.
3. Se pueden unir por fuerza electrostática a la CTD de la polimerasa al iniciar la transcripción.
Como resultado, el ensamble de la maquinaria de
procesamiento en un intrón ocurre en conjunción con la
síntesis del intrón por la polimerasa.
Se piensa que la CTD recluta amplia variedad de factores
de splicing. Recordemos que el CTD de la subunidad
grande de la ARNPII sirve como andamiaje para la
organización de los factores que intervienen en el
procesamiento de ARN, incluidos los que participan en el
capping, poliadenilación y splicing.
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EMP
Codificación de la Información Genética
La secuencia de nucleótidos del ADN de un gen especifica la secuencia aminoacídica de un
CÓDIGO GENÉTICO
polipéptido. La información almacenada en la secuencia nucleotídica está presente en un
Forma en la que las
código genético.
secuencias nucleotídicas
Las propiedades del código genético de ADN codifican la
Codones: Son tripletes de nucleótidos, cada uno de ellos codifica (significa) un aminoácido. información para elaborar
Existe un total de 64 codones, 61 de los cuales codifican sirven para la codificación de solo un producto proteico.
20 aminoácidos.
Código genético no superpuesto: Si el código genético fuera superpuesto, un único nucleótido tomaría parte en la formación
de tres codones adyacentes. El código genético es no superpuesto y por ello cada nucleótido es parte de un solo codón.
Degeneración del código genético: Más de un codón codifica a algunos de los aminoácidos. El código genético es muy
degenerado.
La información genética se halla escrita en un código genético formado por 64 tripletes de nucleótidos o codones, los
codones no son superponibles y más de uno puede codificar a un único aminoácido, es decir, el código es degenerado.

La identificación de los codones: Transcribiendo in vitro una secuencia de nucleótidos de poliU, se obtiene un
polímero del aminoácido fenilalanina, se demostró así que el codón UUU codifica a la fenilalanina. Experimentalmente,
pueden elaborarse ARNm sintéticos para probar las codificaciones de aminoácidos de los 64 codones.
OJO:
+ De los 64 codones, solo 61 codifican aminoácidos.
+ De los 64 codones, 3 no codifican aminoácidos y funcionan como codones de terminación.
Debemos prestar especial atención a varios codones:
*Codones no degenerados:
a) Codones de terminación: UAA, UGA, UAG
b) Aminoácidos codificados por un solo codón: AUG (Met); UGG (Trp)
*Codones más degenerados: Existen aminoácidos codificados cada uno por seis codones
a) Arginina (Arg)
b) Serina (Ser)
c) Leu (Leu)
El código genético es en esencia universal, esto es, está presente en todos los organismos vivos de manera idéntica. Existen
excepciones a la universalidad del código genético en mitocondrias, protistas y hongos:
ADN mitocondrial ADN nuclear
AGG Terminación Arginina
AGA Terminación Arginina
AUA Metionina Isoleucina
UGA Triptófano Terminación

Los codones que codifican a un mismo aminoácido tienen similitud entre

sí. Como resultado, las mutaciones espontáneas que causan cambios en
una sola base del gen no generan a menudo un cambio en la secuencia
aminoacídica de la proteína. A su vez, los aminoácidos con propiedades
similares tienden a estar codificados por codones parecidos.
OJO: Las principales semejanzas entre aminoácidos y codones
relacionados aparecen en los primeros dos nucleótidos del triplete, en
tanto que la mayor variabilidad ocurre en el tercer nucleótido.
Un cambio en la secuencia de nucleótidos que no afecta la secuencia de
aminoácidos se denomina cambio sinónimo.
P. ej: CAU (Hys) → CAC (Hys)
Un cambio en la secuencia de nucleótidos que causa una sustitución de
aminoácidos se denomina cambio no sinónimo.
P. ej: GAA (Glu) → GUA (Val)
Los cambios sinónimos no suelen alterar el fenotipo de un organismo, no
sufren selección natural positiva ni negativa.
Los cambios no sinónimos probablemente alteran el fenotipo de un organismo y están sujetos a la selección natural.
Tal vez los genes que poseen un exceso de sustituciones no sinónimas en sus regiones codificadoras hayan sido influidos por
la selección natural.
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Decodificación de Codones: Los ARNt
La traducción requiere que la información codificada en la secuencia nucleotídica de un
ARNm se decodifique y utilice para dirigir el ensamble secuencial de aminoácidos en una
cadena polipeptídica. Los ARNt actúan como adaptadores y llevan a cabo la decodificación
de la información de un ARNm.
Por un lado, cada ARNt se une a un aminoácido específico y, por el otro, puede reconocer un
codón en el ARNm. La interacción entre codones sucesivos en el ARNm y el ARNt-ami
específico lleva a la síntesis de un polipéptido con una secuencia ordenada de aminoácidos.

La estructura de los ARNt

En los humanos existe un total de 31 ARNt para adaptar 20 aminoácidos al mensaje genético. Todas las moléculas de ARNt
constan del mismo número de nucleótidos (73 a 93) y tienen un porcentaje significativo de bases raras que son resultado de
modificaciones enzimáticas postranscripcionales de una de las cuatro bases estándar.
Bases raras del ARNt: D (dihidrouridina); Ψ (pseudouridina); I (inosina); T (ribotimidina) y bases metiladas.
Los ARNt poseen secuencias de nucleótidos en un segmento que son complementarias de
secuencias localizadas en otras partes de la molécula; a causa de estas secuencias
complementarias, todos los ARNt tienen la posibilidad de plegarse de manera parecida para
formar:
Bidimensionalmente: Molécula en forma de hoja de trébol.
Tridimensionalmente: Molécula en forma de L.
Las bases raras del ARNt se encuentran en las asas, actúan para interrumpir la formación de
puentes de hidrógeno y también como sitios de reconocimiento para diferentes proteínas.
Todos los ARNt maduros poseen una secuencia CCA en su extremo 3’. Estos tres nucleótidos
pueden:
a) Ser codificados en el gen del ARNt (procariotas).
b) Ser agregados por una enzima en orden sin un molde de ADN o ARN (eucariotas).
Todos los ARNt tienen la misma forma porque poseen bases invariables, que tienen importancia particular para formar la
estructura terciaria común en forma de L. La forma común refleja el hecho de que todos deben tomar parte en la misma
serie de reacciones. Aún así, cada ARNt posee características únicas que lo distinguen de otros ARNt.
El anticodón es la parte del ARNt que participa en la interacción específica con un codón del ARNm. Dicha asa anticodón se
compone invariablemente de siete nucleótidos, los tres mediales conforman el anticodón.
El anticodón se sitúa en un extremo de la molécula opuesto al extremo al cual se une el aminoácido.
Puesto que son 61 codones diferentes los que pueden codificar a un aminoácido,
sería de esperar que una célula tuviera cuanto menos 61 ARNt diferentes, cada
uno con un anticodón específico. Esto no ocurre.
¿Cómo se soluciona la escasez de ARNt ante la abundancia de codones?
Los codones que codifican a un mismo aminoácido tienen similitudes más
notorias en los dos primeros nucleótidos del triplete, en tanto que la mayor
variabilidad de estos mismos codones se observa en el tercer nucleótido del
triplete.
La hipótesis del bamboleo propone que un ARNt es capaz de reconocer a más de un codón. Sugiere que el requerimiento
estérico entre el anticodón del ARNt y el codón del ARNm es muy estricto para las dos primeras posiciones y quizá más
flexible en la tercera posición; esto permite a dos codones que codifican el mismo aminoácido (solo difieren en la tercera
posición) emplear un mismo ARNt.
Las reglas del bamboleo son:
1. La U de la primera posición del anticodón puede aparearse con A o G de la tercera posición del codón en el ARNm.
2. La G de la primera posición del anticodón puede aparearse con C o U de la tercera posición del codón en el ARNm.
3. La I de la primera posición del anticodón puede aparearse con U, C o A de la tercera posición del codón en ARNm.

Activación de aminoácidos: Los aminoácidos se unen mediante enlaces covalentes a los extremos 3’ de su ARNt por
acción de la sintetasa de aminoacil-ARNt (aaRS). Típicamente, los organismos poseen 20 aaRS, una para cada uno de los 20
aminoácidos. Cada una de las sintetasas es capaz de “cargar” todos los ARNt apropiados para ese aminoácido. Las enzimas
reconocen a los ARNt específicos y discriminan a otros a través de la interacción con el brazo aceptor y el brazo anticodón.
Las sintetasas de aminoacil-ARNt llevan a cabo las siguientes reacciones, en dos pasos:
ATP + aminoácido → aminoacil-AMP + PPi
Aminoacil-AMP → aminoacil-ARNt + AMP
En el primer paso, la energía del ATP activa al aminoácido, el cual se une a la enzima. Este es el paso primario del
requerimiento de energía de la reacción química que lleva a la síntesis del polipéptido. La hidrólisis de PPi fuerza más la
reacción hacia la formación de productos. En el segundo paso, la enzima transfiere su aminoácido unido al extremo 3’ de un
ARNt.
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Traducción
La síntesis de proteínas o traducción es la actividad sintética más compleja en una célula. El ensamblado de una proteína
requiere:
a) Todos los diferentes ARNt con sus aminoácidos unidos (ARNt-ami)
b) Un ARN mensajero
c) Proteínas de funciones distintas
d) Cationes
e) GTP
El análisis siguiente es sobre la traducción bacteriana, es similar al mecanismo eucarionte. Se realizan acotaciones sobre
eucariotas.
La síntesis de una cadena polipeptídica puede dividirse en tres actividades distintas: inicio, elongación¸y terminación.

Inicio
Una vez unido al ARNm, el ribosoma siempre se mueve a lo largo del ARNm de un codón al próximo. Para asegurar que los
tripletes se lean, el ribosoma se une al ARNm en el codón de inicio (AUG, codifica metionina en eucariotas y formil-metionina
en procariotas). La unión a este codón pone al ribosoma en el marco de lectura de tal modo que el ribosoma lee el mensaje
entero, de manera correcta, desde el punto de inicio.
El inicio de la traducción puede dividirse en tres pasos:
(1) Traslado de la subunidad ribosomal pequeña al codón de inicio
(2) Traslado del primer ARNt-ami al ribosoma
(3) Ensamblado del complejo de inicio completo
1. Traslado de la subunidad ribosomal pequeña al codón de inicio
a. El ARNm se no se une a un ribosoma intacto, sino a las subunidades pequeña y grande por separado.
b. El primer paso de inicio es la unión de la subunidad pequeña a la primera secuencia AUG en el ARNm.
Se logra ya que el ARNm bacteriano posee una secuencia específica de nucleótidos (secuencia Shine.Dalgarno) que se localiza a
10 nucleótidos del codón de inicio. La secuencia Shine-Dalgarno se une al ARNr 16S de las subunidad ribosomal pequeña.
c. Los factores de inicio (IF) son varios, se unen a la subunidad pequeña ribosomal y tienen las siguientes características:
IF1: Facilita la unión de la subunidad pequeña al ARNm. Previene la entrada del ARNt-ami a un sitio incorrecto.
IF2: Proteína G. Se requiere para la unión del primer ARNt-ami.
IF3: Previene la unión prematura de las subunidades ribosomales. Facilita la entrada del ARNt-ami inicial.
2. Traslado del primer ARNt-ami al ribosoma
a. Met es el primer aminoácido que se incorpora en el extremo N naciente del polipéptido. (En procariotas, es la formil-met o f-Met).
En muchos casos, la metionina o la f-Met se eliminan por medio de una enzima.
b. La metionina posee 2 ARNt.
Un ARNt se utiliza en el inicio de la síntesis de proteínas, es el que se aparea con el codón de inicio.
Otro ARNt incorpora metionina en el interior del polipéptido.
c. El ARNt-met iniciador entra al sitio P del ribosoma, se une a AUG y IF2. Se liberan IF1 e IF3.
3. Ensamblado del complejo de preinicio completo
a. Ya que el IF3 se desplaza, la subunidad grande se une al complejo y IF2 hidroliza su GTP unido.
b. La hidrólisis de GTP por IF2 genera un cambio conformacional en el ribosoma necesario para la liberación de IF2-GDP.

En eucariotas, el inicio de la traducción tiene varias diferencias:

Requieren por lo menos 12 factores de inicio que incluyen más de 25 cadenas polipeptídicas. Se forman dos complejos:
a) Complejo 43S: Subunidad ribosomal 40S + eIF1 + eIF1A + eIF2 + eIF3 + eIF5. Estos factores preparan a la subunidad para su
union con ARNm.
b) El ARNm se encuentra unido a:
1. eIF4A: Se moviliza a lo largo del 5’ del mensaje y remueve regiones de doble cadena.
2. eIF4E: Se une al casquete 5’ del ARNm.
3. eIF4G: Sirve como puente entre el casquete 5’ y la cola de poliA. Convierte al ARNm lineal en circular.
 Expresión de los genes: Transcripción y Traducción
EMP
La subunidad ribosomal pequeña, junto con sus factores relacionados y el ARNt, busca el extremo 5’ del ARNm, que tiene el
casquete de metilguanosina. Una vez que el complejo 43S se une al extremo 5’ del ARNm, el complejo recorre el mensaje
hasta alcanzar una secuencia nucleotídica 5’-CCAACCAAUGC-3’ que contiene el codón de inicio. El complejo 43S alcanza el
codón de inicio, eIF2-GTP se hidroliza, eIF2-GDP y otros factores se eliminan y la subunidad 60S se une al complejo para
completar el inicio.

La función del ribosoma:

Son máquinas similares a los motores moleculares. Durante la traducción, un ribosoma sufre un ciclo repetitivo de cambios
mecánicos que se realizan con la liberación de energía por la hidrólisis de GTP.
Los ribosomas son máquinas programables: la información almacenada en los ARNm determina la secuencia de los ARNr-ami
que el ribosoma acepta en la traducción.
Los ARNr que componen el ribosoma ejercen funciones esenciales en la selección de los ARNt y aseguran una traducción
precisa al unir factores proteicos y polimerizar aminoácidos.
Cada ribosoma tiene tres sitios para la vinculación con ARNt: Sitio A (aminoacilo), Sitio P (peptidilo), Sitio E (salida)
*Los anticodones de los ARNt unidos hacen contacto con la subunidad pequeña, la cual tiene una función importante al
decodificar la información contenida en el ARNm.
*Los extremos aceptores del ARNt contactan con la subunidad grande, que posee una función relevante al catalizar la
formación del enlace peptídico.
Algunas características estructurales:
1. El sitio activo está conformado con ARN. Reside en una cavidad profunda de la subunidad grande que protege al
enlace peptídico recién formado de la hidrólisis.
2. Antes de entrar al sitio A, el ARNm es despojado de cualquier estructura secundaria por una helicasa ribosomal.
3. La subunidad grande proyecta un túnel desde el sitio activo hacia el exterior, provee una vía de paso para la
traslocación del polipéptido durante la elongación.

Elongación
La elongación durante la traducción puede dividirse en cuatro pasos:
(1) Selección del ARNt-ami
(2) Formación del enlace peptídico
(3) Traslocación
(4) Liberación del ARNt desacilado
1. Selección del ARNt-ami
a. Los ARNt-ami entran al sitio A del ribosoma durante la elongación.
La entrada de un segundo ARNt-ami al sitio A representa el primer paso de la elongación.
b. Para entrar al sitio A, el ARNt-ami debe combinarse con un factor de elongación EF-Tu (pro) o eEF1α (eu) (proteína G).
EF-Tu se requiere para liberar los ARNt-ami hacia el sitio A del ribosoma. Cualquier complejo ARNt-ami + EF-Tu-GTP
puede ingresar al sitio A, pero solo el que tiene el anticodón complementario del codón de ARNm alojado en el sitio
A permanecerá unido en el centro de decodificación.
c. El GTP de EF-Tu se hidroliza una vez que el complejo ARNt-ami + EF-Tu-GTP correcto se une al codón del ARNm.
Se abandona al ARNt-ami en el sitio A del ribosoma.
d. EF-Tu-GTP se regenera a partir del EF-Tu-GDP liberado, lo que requiere el factor de elongación EF-Ts.
2. Formación del enlace peptídico
a. Los dos aminoácidos unidos a sus ARNt dentro del ribosoma se yuxtaponen en una posición en la que pueden reaccionar.
b. Ocurre la formación del enlace peptídico.
Se realiza con el grupo amino del aminoácido del sitio A con el grupo carbonilo del aminoácido del sitio P.
Como resultado, el ARNt en el sitio A tiene un péptido unido y el ARNt del sitio P se encuentra desacilado.
La formación del enlace peptídico es catalizada por la ribozima transferasa de peptidilo de la subunidad grande.
La formación del enlace peptídico no requiere el ingreso de energía externa, es espontánea.
3. Traslocación
a. La traslocación se caracteriza por cambios notorios en la posición entre las dos subunidades del ribosoma.
El ribosoma se mueve un codón a lo largo del ARNm en dirección 5’ → 3’.
b. La traslocación se acompaña del movimiento del péptido con ARNt del sitio A al sitio P, y del ARNt desacilado del sitio P al
sitio E.
c. La traslocación se lleva a cabo por hidrólisis de GTP relacionado a otro factor: EF-G (pro) o eEF2 (eu), tras la hidrólisis de
GTP.
 Expresión de los genes: Transcripción y Traducción
EMP
4. Liberación del ARNt desacilado
a. El ARNt desacilado abandona el ribosoma y queda vacío el sitio E.
Por cada ciclo de elongación, se hidrolizan dos GTP: uno en la selección del ARNt-ami y otro durante la traslocación. Cada
ciclo de elongación toma alrededor de 1/20 segundos, la mayor parte de ese tiempo se perdido en buscar los ARNt-ami del
citosol.

Terminación
Los codones UAA, UGA y UAG sirven como codones de terminación. No existen ARNt cuyos anticodones sean
complementarios de los codones de detención. Cuando el ribosoma alcanza algún codón de terminación, se detiene todo el
alargamiento adicional y se libera el polipéptido relacionado hacia el último ARNt.
La terminación requiere factores transcripcionales:
En procariotas En eucariotas
RF1 Reconoce UAA y UAG
eRF1 Trabajan en forma conjunta y
RF2 Reconoce UAA y UGA
reconocen todos los codones de
RF3 No reconoce codones, incrementa eRF3
terminación.
(Prot G) actividad de RF1 y RF2. (Prot G)
Se hidroliza un enlace éster entre el polipéptido y el ARNt y el polipéptido se libera. El ribosoma se separa y las subunidades
se preparan para iniciar otro ciclo de traducción.

Mutaciones
Mutaciones de marco de lectura equivocado / Por cambio en el marco de lectura:
Mutaciones en las cuales un solo par de bases se agrega o desaparece del ADN, el resultado es un marco de lectura
incorrecto a partir del punto de mutación a través del resto de la secuencia codificante.
La estreptomicina es un antibiótico que cambia el marco de lectura en bacterias al unirse a la subunidad ribosomal pequeña.
Mutaciones finalizadoras / De sentido equivocado:
Alteraciones en el genoma que producen codones de paro dentro de los genes, de esa forma dan lugar a la terminación
prematura de una cadena polipeptídica codificada. A ellas se atribuye cerca de 30% de las alteraciones hereditarias en
humanos. Los codones de terminación prematura son introducidos comúnmente en los ARN durante el empalme.
Decaimiento mediado por mutación de sentido equivocado (NMD): Protege a las células de la producción de proteínas
cortas no funcionales. Cuando un espliceosoma remueve un intrón, un complejo de proteínas se deposita en el transcrito 20
a 24 nucleótidos corriente arriba de la unión exón-exón recién formada. Este conglomerado de proteínas se conoce como
complejo de unión exónico (EJC), el cual permanece unido al ARNm hasta que se traduce.
Cuando un ARNm sufre traducción, los EJC son desplazados por el avance del ribosoma. Si un ARNm posee un codón de
terminación prematura, el ribosoma se detendría en el sitio de la mutación y entonces se disociaría, dejando cualesquiera EJC
que estuviera unido al ARNm corriente abajo del sitio de la terminación prematura. Por tanto, la presencia de uno o más EJC
en un ARNm traducido sirve como marca que identifica al ARNm como transcripción defectuosa. Esto pone en marcha la
destrucción enzimática del mensajero anormal.
NMD es conocido por eliminar ARNm transcripto de genes mutantes, como los de la fibrosis quística o la distrofia muscular.
 Expresión de los genes: Transcripción y Traducción
EMP
Polirribosomas
Complejo ribosomal unido al ARNm conocido como polirribosoma o polisoma. Se observa a la microscopía electrónica como
diferentes ribosomas unidos a lo largo de un ARNm.
Inicialmente, cada ribosoma se ensambla a partir de
sus subunidades en el codón de inicio y se desplaza
hacia el extremo 3’ del ARNm hasta el codón de
terminación. Tan pronto como cada ribosoma se
moviliza una distancia suficiente a lo largo del
mensaje a partir del codón de inicio (unos 90
nucleótidos, o 30 codones), otro ribosoma se fija al
ARNm y comienza su actividad de traducción.
La traducción simultánea de un mismo ARNm por un gran número de ribosomas incrementa en grado notorio la tasa de
síntesis proteica en la célula. Algunos ARNm tienen mucha mayor densidad de ribosomas relacionados que otros.
Los polisomas pueden estar libres en el citosol o unidos a la membrana del RER. Puede observárselos formando asas y
espirales.

EUCARIOTAS PROCARIOTAS
Transcripción en núcleo y traducción Transcripción y traducción en
en citoplasma citoplasma
Traducción se lleva a cabo luego de Traducción se lleva a cabo antes de que
síntesis y procesamiento del ARNm la síntesis de ARNm concluya
Ocurren en dos pasos separados Ocurren en forma simultánea
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EMP

NÚCLEO CELULAR Y CONTROL DE LA EXPRESIÓN GÉNICA

Núcleo Eucariota
El contenido del núcleo se presenta como una masa amorfa y viscosa de material encerrada por una envoltura nuclear
compleja, que forma una transición entre el núcleo y el citoplasma. En el núcleo interfásico la célula tiene:
1. Cromosomas: Se observan como fibras de nucleoproteína muy extendidas, la cromatina.
2. Nucléolos: Estructuras electrodensas de forma irregular que funcionan en la síntesis de ARNr y ensamble de ribosomas.
3. Nucleoplasma: Líquido donde los solutos se disuelven.
4. Matriz nuclear: Red fibrilar que contiene proteínas.

La envoltura nuclear (EN)

La envoltura consta de dos membranas paralelas, separadas por
un espacio de 10 a 50 nm. Estas membranas sirven como barrera
que protege los iones, solutos y las macromoléculas que pasan
entre el núcleo y el citoplasma.
Las membranas se fusionan en sitios que forman poros circulares
que contienen proteínas organizadas en complejos.
Una célula de mamífero promedio contiene varios miles de
proteínas nucleares.
La membrana externa suele estar tapizada con ribosomas y se
continúa con la membrana del RER.
El espacio entre las membranas se continúa con la luz del RER.
La superficie interna de la EN de las células animales se une
mediante proteínas integrales a la lámina nuclear.

Lámina nuclear: Es una delgada red de filamentos intermedios de 10 nmØ compuestos por láminas.
Funciones de la lámina nuclear:
1. Brinda el apoyo mecánico a la envoltura nuclear.
2. Sirve como sitio de unión para las fibras de heterocromatina de la periferia nuclear.
3. Participa en la duplicación y transcripción de ADN.
La integridad de la lámina nuclear se regula por fosforilación/desfosforilación. El desensamble de la lámina nuclear previo a la
mitosis se induce por fosforilación de las láminas mediante una cinasa de proteína específica.
Mutaciones en genes de láminas:
+ Distrofia muscular EDMD2: Por mutaciones en los genes LMNA de la lámina.
+ Síndrome de progeria de Hutchinson-Gilford: Mutaciones en la lámina A.
En la progeria existe una mutación sinónima (el codón mutado codifica el mismo aminoácido que el codón normal), pero el
cambio de nucleótidos causa el modo en que se empalma la transcripción génica. Esto es porque la secuencia de un gen sirve
como un “código doble”: uno que dirige la maquinaria de traducción y otro que dirige la maquinaria de empalme.

Complejo del poro nuclear e intercambio nucleocitoplásmico: La EN es la barrera entre núcleo y citoplasma, y
los poros nucleares son las compuertas para cruzar la envoltura nuclear.
La EN es un punto de actividad para el movimiento de ARN y proteínas
entre núcleo y citoplasma en ambas direcciones.
**Las proteínas nucleares se sintetizan en el citoplasma y son importadas
al núcleo. P. ej: Proteínas para la replicación y la transcripción.
** Los ARNm, los ARNt y las subunidades ribosomales que se
manufacturan en el núcleo deben exportarse desde el núcleo al
citoplasma.
**Los ARNsno del espliceosoma se mueven en ambas direcciones: se
sintetizan en el núcleo, se ensamblan en las partículas de RNPsn en el
citoplasma y luego entran al núcleo, donde participan en el
procesamiento de ARN.
¿Cómo pasan todos estos materiales a través de la EN?
Los poros nucleares no son simples canales abiertos; contienen un aparato complejo en forma de canastilla denominado
complejo del poro nuclear que sella el poro de manera similar a un tapón que se proyecta tanto al citoplasma como al
nucleoplasma.
El complejo del poro nuclear es un complejo supramolecular, de 15 a 30 veces la masa del ribosoma, presenta simetría
octagonal a causa de la repetición óctuple de varias estructuras.
Los complejos del poro nuclear contienen solo alrededor de 30 proteínas diferentes, denominadas nucleoporinas. Cada
nucleoporina está presente en por lo menos ocho copias. Los solutos de bajo peso molecular penetran con rapidez los poros
nucleares por difusión simple, difunden a través de las ranuras entre las columnas que conectan los anillos citoplásmicos y
nucleares del complejo del poro nuclear.
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Las proteínas y los ARN pasan a través del canal central del
complejo del poro nuclear en una difusión mediada por receptor;
el paso de estas macromoléculas hacia adentro y hacia afuera del
núcleo requiere la ayuda de sistemas de transporte especial.
Señal de localización nuclear (NLS): Capacita a una proteína para
pasar por los poros nucleares y penetrar en el núcleo. La secuencia
clásica consiste en una o dos secuencias cortas de aminoácidos de
carga positiva en C-terminal. Si un aminoácido apolar remplaza a
uno de los aminoácidos básicos en la secuencia, la proteína no
puede localizarse en el núcleo.
Los receptores de transporte son proteínas que mueven
macromoléculas a través de la EN. Las importinas mueven
macromoléculas del citoplasma hacia el núcleo. Las exportinas
mueven materiales del núcleo hacia el citoplasma.
Consideraciones sobre el transporte a través de la envoltura
nuclear:
La proteína Ran es una proteína G. Puede presentarse en forma
Complejo del poro nuclear
activa (unida a GTP) o inactiva (unida a GDP). La función de RAN en
Ocho columnas conectan dos anillos:
la regulación del transporte nucleocitoplásmico se basa en
Anillo citoplásmico: A partir de donde se
mecanismos en los que la célula mantiene:
desprenden 8 filamentos citoplásmicos que se
a. Alta concentración de proteína Ran-GTP en el núcleo
unen a los materiales en importación
b. Muy baja de proteína Ran-GTP en citoplasma Anillo central: A partir de donde se forma una
El gradiente tan alto de Ran-GTP a través de la envoltura nuclear canastilla nuclear.
depende de la compartimentalización de ciertas proteínas Los dominios de las nucleoporinas que asoman al
accesorias: canal contienen repeticiones FG desordenadas e
a. RCC1: En núcleo, promueve conversión de Ran-GDP a hidrófobas que bloquean el paso por el canal de
Ran-GTP. Mantiene alto el nivel nuclear de Ran-GTP. moléculas mayores a 40 000Da
b. RanGAP1: En citoplasma, facilita hidrólisis de Ran-GTP a
Ran-GDP. Mantiene el bajo nivel citoplásmico de Ran-GTP.
La energía liberada por la hidrólisis de GTP se emplea en la
conservación del gradiente de Ran-GTP a través de la envoltura
nuclear. El gradiente de Ran-GTP impulsa el transporte nuclear en
un proceso que solo depende de la difusión mediada por receptor,
no participan proteínas motoras ni ATPasas.
Importación de proteínas:
1. Una proteína que contiene NLS se une a un receptor
heterodimérico, el complejo importina alfa/beta que reside en el
citoplasma.
2. El receptor de transporte escolta a la proteína “de carga” a la
superficie externa del núcleo donde se ancla a los filamentos
citoplásmicos del anillo externo del complejo del poro.
3. El complejo receptor – carga se mueve a través del poro
mediante “brincos” de un sitio de unión al siguiente en el complejo
del poro. Ciertos componentes del poro pueden cambiar de
conformación para permitir que la proteína “de carga” entre al
nucleoplasma.
4. El complejo importina – carga es recibido en el nucleoplasma por
Ran-GTP, que se une al complejo y causa su desensamble.
5. La carga importada se libera en el nucleoplasma. La importina
beta se lanza de regreso al citoplasma junto con Ran-GTP, la
importina alfa vuelve al citoplasma mediante su unión a una de las
exportinas.
6. En el citoplasma, Ran-GTP se hidroliza a Ran-GDP y se libera de la importina beta.
7. Ran-GDP regresa al núcleo, donde se convierte nuevamente en Ran-GTP para efectuar ciclos adicionales de actividad.
OJO: 1. Ran-GTP induce el desensamble de complejos importados.
2. Ran-GTP promueve el ensamble de complejos de exportación.
Las proteínas exportadas del núcleo contienen secuencias aminoacídicas, las señales de exportación nuclear (NES). Son
reconocidas por receptores de transporte que las acarrean a través de la EN hacia el citoplasma. La mayor parte del
movimiento de tránsito en esa dirección consiste en varios tipos de moléculas de ARN (ARNm, ARNr, ARNt). En la mayoría de
los casos, estos ARN se mueven a través del complejo del poro nuclear como ribonucleoproteínas.
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Exportación de ARNm:
Cuando un preARNm se somete a splicing, un complejo de proteínas (EJC) se deposita sobre el ARNm cerca del sitio de cada
union exón-exón (20 a 24 nucleótidos corriente arriba de cada unión exón-exón). Una de las proteínas del EJC , la proteína
Aly, tiene una función importante en la exportación de ARNm mediante la unión con un receptor de transporte especializado
(Exportina TAP) para formar un complejo que puede moverse por el complejo del poro nuclear hacia el citoplasma.
Después de pasar por el complejo del poro nuclear, Aly y TAP se despegan del RNPm y el ARNm se traduce. Los EJC se
desplazan desde el ARNm durante el primer ciclo de traducción.
Solo los ARNm maduros pueden transportarse fuera del núcleo; si un ARNm aún contiene un intrón no sometido a splicing, el
ARN se retiene en el núcleo.

Cromosomas y cromatina
Los cromosomas aparecen al principio de la mitosis y desaparecen una vez que la división celular concluye. ¿Cuál es la
naturaleza de los cromosomas en una célula no mitótica?
Empaquetamiento del genoma:
 Una célula humana promedio contiene cerca de 6,4 mil millones de pares de bases de ADN divididos en 46 cromosomas
(valor para cromosomas diploides no replicados).
 Cada cromosoma no replicado contiene una molécula contínua y única de ADN. Entre más largo el cromosoma, más largo el
ADN que contiene.
 Como cada par de bases mide 0,34nm de longitud, los 6 mil millones de pares de bases pueden constituir una molécula
completa de aproximadamente 2 m.
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Nucleosomas: el nivel mínimo de compactación cromosómica. Relación de empaquetamiento 7:1
Los cromosomas se componen de ADN y proteínas relacionadas, que en conjunto se conocen como cromatina. El
empaquetamiento ordenado del ADN eucariota depende de las histonas.
Las histonas son proteínas pequeñas que poseen un inusual contenido alto de arginina y lisina.
Se dividen en cinco clases, que pueden distinguirse por su relación
Histona Residuos Masa %Arg %Lys
Arg/Lys. Las secuencias de aminoácidos de las histonas, en particular H3
H1 215 23kDa 1 29
y H4, experimentaron pocos cambios durante la evolución porque:
1. Las histonas interaccionan con el esqueleto de la molécula H2A 129 14kDa 9 11
de ADN, que es idéntico en todos los organismos. H2B 125 13,8kDa 6 16
2. Casi todos los aminoácidos de una histona interaccionan con H3 135 15,3kDa 13 10
otra molécula (ADN u otra histona). H4 102 11,3kDa 14 11
Como resultado, muy pocos aminoácidos de una histona pueden remplazarse con otros aminoácidos sin afectar de manera
significativa la función de la proteína.
Experimento:
1. Tratar cromatina con nucleasas inespecíficas. Resultado: Los ADN se convierten en fragmentos de aproximadamente 200
pares de bases de longitud.
2. Tratar ADN desnudo con nucleasas inespecíficas. Resultado: Producción al azar de una población de fragmentos de ADN de
diferentes tamaños.
Conclusión: El ADN cromosómico está protegido del ataque enzimático, excepto en ciertos puntos repetidos a lo largo de su
longitud. Las proteínas relacionadas al ADN le conferirían esta protección.
El ADN y las proteínas histónicas se organizan en subunidades repetidas: los nucleosomas.
Cada nucleosoma contiene una partícula nuclear del nucleosoma que consiste en:
+ 1,8 vueltas de ADN (146 pb) superenrollado de forma negativa alrededor de
+ Un octámero de histonas en forma de disco. Consta de dos copias de cada histona
H2A, H2B, H3 y H4.
La histona H1: 1. Reside fuera de la partícula nuclear del nucleosoma.
2. Es la histona de unión porque enlaza parte del ADN de unión que conecta
una partícula del núcleo del nucleosoma con la siguiente.
3. Se disocia y vuelve a unirse continuamente con la cromatina.
Las moléculas de histona H1 y el octámero de histonas interactúan juntos con alrededor de 168 pares de bases.
Cuando la cromatina se libera de la histona H1 y se observa bajo el microscopio electrónico, las partículas nucleares del
nucleosoma y el ADN desnudo que establece la unión histona-histona pueden verse separados: apariencia de “cuentas de
collar”.
Las ocho moléculas de histona de la partícula nuclear del nucleosoma se
organizan en cuatro heterodímeros:
+ H3-H4: En el centro de la partícula nuclear. Los dos dímeros H3-H4 forman
un tetrámero.
+ H2A-H2B: Los dos dímeros se colocan uno a cada lado del tetrámero H3-H4.
Cada dímero de histona une 27 a 28 pares de bases de ADN, con contactos
que ocurren donde el surco menor del ADN toca el núcleo de histona, lo que
ocurre a intervalos aproximados de 10 pares de bases.
Cada histona consta de:
1. Dominio C-terminal o histona plegada: Región globular de tres hélices α, media la dimerización de las histonas.
2. Dominio N-terminal (También C-terminal de H2A): toma la forma de una cola flexible y larga que se extiende más allá del
ADN y hacia los alrededores. Son blancos de variedad de modificaciones covalentes del código de histonas.
Existen versiones alternativas de núcleo de histonas que se sintetizan en la mayor parte de las células:
Tipo de histona Variante Localización Función
H2AX A lo largo de cromatina Reparación de ADN
H2A H2AZ Eucromatina Transcripción
macroH2A Inactivación de cromosoma X Silenciamiento transcripcional
CENP-A Centrómero Ensamble del cinetocoro
H3
H3.3 Transcripción de loci Transcripción
El ADN y los núcleos de histona se mantienen juntos mediante distintos tipos de enlaces no covalentes (enlaces iónicos entre
fosfatos del ADN y residuos básicos de las histonas).
Fibra de cromatina de 30 nanómetros. Relación de empaquetamiento 40:1
La cromatina no existe dentro de la célula en su estado de “cuentas de collar”. Los cortes transversales de fibras de
cromatina en un núcleo revelan que esta tiene alrededor de 30nm Ø. La fibra de cromatina de 30 nanómetros muestra dos
modelos:
Fibra de 30 nanómetros en zigzag: + ADN de unión en estado recto.
+ Partículas centrales se organizan en pilas adyacentes de nucleosomas
Fibra de 30 nanómetros en solenoide: + ADN de unión se curva.
+ Partículas centrales se organizan en una estructura helicoidal continua de 6 a 8 nucleosomas por vuelta.
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El mantenimiento de la cromatina de 30 nm depende de la interacción entre las moléculas de histona y los nucleosomas
vecinos. Las histonas de unión y las histonas nucleares participan en un empaquetamiento de orden superior de la cromatina.
Si las histonas H1 se extraen de manera selectiva de la cromatina compactada, las fibras de 30 nm no se enrollan para formar
así las cuentas de collar. La nueva adición de H1 conduce a la restauración de la estructura de orden superior.
La cola N-terminal de H4 puede alcanzar el exterior y hacer contacto con:
+ ADN de enlace (linker) entre las partículas de nucleosoma.
+ Dímero H2A/H2B de partículas adyacentes.
Se cree que estos tipos de interacción median el plegamiento de los filamentos nucleosómicos en fibras mucho más gruesas.

Dominios en forma de asa

La cromatina de 30 nm se organiza en una serie de asas muy amplias superenrolladas que pueden compactarse en fibras aún
más gruesas (80 a 100 nm). Las asas de ADN se unen en sus extremos con proteínas que forman parte de un andamiaje
nuclear organizado o matriz. Entre estas proteínas hay una topoisomerasa II, que regula el grado de superenrollamiento del
ADN, también podría desenredar las moléculas de ADN de diferentes asas cuando están entrelazadas.
Cromosomas mitóticos. Relación de empaquetamiento 10 000:1
Representan la última etapa del empaquetamiento de la cromatina; un cromosoma mitótico de 1μm de longitud suele
contener cerca de 1cm de ADN, lo que representa una relación de empaquetamiento de 10 000:1.

Heterocromatina y eucromatina

Una vez que la mitosis termina, la mayor parte de la cromatina de los cromosomas regresa a su condición difusa de interfase;
cerca del 10% permanece en forma condensada o compactada durante la interfase.
La eucromatina es la que ha retornado al estado disperso, presenta actividad transcripcional.
La heterocromatina es la que se mantiene compactada durante la interfase, no presenta actividad transcripcional.
La heterocromatina se observa compactada, teñida en forma densa y presente en la periferia del núcleo. Se divide en:
1. Heterocromatina constitutiva
2. Heterocromatina facultativa
Heterocromatina constitutiva: Permanece en estado compactado en todas las células durante todo el tiempo. Representa al
ADN permanentemente silenciado. La mayor parte se encuentra en: Efecto de posición: Silenciamiento de genes por un cambio
a. Región que flanquea a los telómeros. de posición (por traslocación, trasposición) a un sitio
b. Región que flanquea a los centrómeros. cercano a heterocromatina.
c. Parte distal del brazo del cromosoma Y. Bloquean diseminación de heterocromatina:
Elementos de frontera (secuencias especializadas) o H2AZ
Consiste sobre todo en secuencias repetidas y contiene pocos genes.
Heterocromatina facultativa: Se inactiva de manera específica en ciertas fases de la vida de un organismo o en ciertos tipos
de células diferenciadas. Ejemplo: Cuerpo de Barr.
Otros ejemplos: En una neurona no se expresan los genes correspondientes a hemoglobina, pero sí se expresan genes para
canales regulados por liganto; en el eritroblasto, sin embargo, se expresan genes para síntesis de hemoglobina pero no los
correspondientes a canales regulados por liganto. Los genes que una célula no utiliza para su función se guardan a manera de
heterocromatina facultativa.
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Células de macho Células de hembra
Dos cromosomas sexuales: Dos cromosomas sexuales:
Un cromosoma Y pequeño Un cromosoma X transcripcionalmente activo
Un cromosoma X mucho más grande Un cromosoma X compactado
a. Los cromosomas X e Y tienen pocos genes en común a. El cromosoma compactado es heterocromatina
b. Los machos poseen 1 sola copia de los genes que se (Cuerpo de Barr)
portan en cromosomas sexuales b. Asegura que machos y hembras tengan el mismo número
de X activos.
Inactivación del cromosoma X:
1. La heterocromatinización del X ocurre en la fase temprana del desarrollo embrionario; conduce a la inactivación de
los genes en ese cromosoma.
2. La heterocromatinización es un proceso aleatorio. En el tiempo de inactivación, el cromosoma X paterno puede
inactivarse en una célula y el cromosoma X materno puede hacerlo en una célula vecina. Una vez desactivado un
cromosoma X en una célula, el mismo cromosoma es inactivo en todas sus células descendientes.
3. La reactivación del X heterocromatinizado ocurre en células germinales antes del inicio de la meiosis. Todos los
cromosomas X son activos durante la oogénesis, todos los gametos recibe un cromosoma X eucromático.
Como los cromosomas X paterno y materno pueden contener alelos diferentes para un mismo rasgo, las hembras
adultas son mosaicos genéticos en los que alelos diferentes funcionan en células diferentes.
Ejemplos del mosaicismo genético en hembras:
a. Gatas calicó: Los genes de pigmentación de la piel residen en el cromosoma X de los gatos. Una gata heterocigota
para ese rasgo, con un alelo para el pelo negro en un X y otro para el pelo naranja en el otro X, presentará parches
de colores en la piel. Cada mancha comprende los descendientes de una sola célula que estuvo presente en el
embrión en el momento de la inactivación.
b. Humanas: Las humanas pueden ser portadoras de diversas enfermedades ligadas al X, ya que poseen
cromosomas sanos funcionando en otras células.
Inicio de la inactivación del X: Lo hace una molécula de ARN no codificante, producto del gen XIST ubicado en el
cromosoma X que se convierte en inactivo. Este ARN:
a. Es una transcripción muy larga (17 kilobases de longitud).
b. Se acumula a lo largo de los cromosomas antes de su inactivación.
El gen XIST es necesario para iniciar la inactivación, no para mantenerla de una generación de la célula a la siguiente.
Mantenimiento de la inactivación del X: Se realiza por (a) metilación de ADN y (b) modificaciones histónicas.

Código de histonas y formación de heterocromatina

Las células contienen un ordenamiento destacado de enzimas que son capaces de agregar grupos químicos o removerlos de
residuos de aminoácidos específicos en las colas de histona. Las modificaciones covalentes de las colas de histona son:
metilación, acetilación y fosforilación.
De acuerdo al código de histona:
1. El estado de actividad de una región de la cromatina depende de modificaciones específicas, o combinaciones de
modificaciones, de las colas de histona de esa región.
2. El patrón de modificaciones que adorna las colas de histona nucleares contiene información codificada que
determina las propiedades de esos nucleosomas.
Se piensa que las modificaciones de la cola de histona actúan principalmente como sitios de acoplamiento para reclutar
proteínas no histónicas, que luego determinan las propiedades y actividades de ese segmento de cromatina.
La modificación de histona influye en la estructura y función de la cromatina al afectar:
1. El grado de compactación (heterocromatina – eucromatina)
2. La probabilidad de que un gen o un grupo de genes vaya a ser transcrito.
Acetilación Metilación Fosforilación
Lisina Sí Sí, hasta 3 metilos. No
GENERALMENTE:
Arginina No Sí, hasta 2 metilos. No
Acetilación = Eucromatinización
Serina No No Sí
Metilación = Heterocromatinización
Metilación puede causar Acetilación + desmetilación = Eucromatinización
Restricción Activación Desacetilación + metilación = Heterocromatinización
H3K9 ; H3K27 ; H4K20 H3K4 ; H3K36

Cromosomas mitóticos y Cariotipo:

La cromatina de una célula mitótica se encuentra en un estado muy compactado, que favorece la liberación de un ADN
intacto “empaquetado” a cada célula hija. Los cromosomas contienen un grupo complejo de material genético y pueden
hacerse visibles mediante técnicas simples.
Cuando un cromosoma experimenta compactación durante la profase mitótica, adopta una forma distina y predecible
determinada sobre todo por la longitud del ADN y la posición del centrómero.
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Clasificación de los cromosomas de acuerdo a la posición del centrómero:
1. Metacéntricos: Poseen el centrómero en posición más o
menos central, existe poca o ninguna diferencia en la longitud
de los brazos de las cromátidas.
2. Submetacéntricos: El centrómero se encuentra alejado del
punto central. Las cromátidas poseen un brazo largo y un brazo
corto.
3. Acrocéntricos: El centrómero se halla cerca de uno de los
extremos del cromosoma. Los brazos cortos de las cromátidas
son muy pequeños. Poseen constricción secundaria y una
terminación de heterocromatina denominada satélite. Son
cromosomas acrocéntricos: 13, 14, 15, 21 y 22.
Un cariotipo es el ordenamiento de los 23 pares de cromosomas homólogos, ordenados según su tamaño de mayor a menor.
Los cromosomas en un cariotipo se tiñen con técnicas de bandeado. El patrón de bandas es muy característico de cada
cromosoma de cada especie y da la pauta para identificar cromosomas y compararlos con especies distintas.
Los cariotipos se utilizan para examinar a individuos con anomalías cromosómicas: con estas técnicas pueden detectarse
alteraciones del tipo:
a. Cromosomas adicionales. b. Cromosomas con alteraciones. c. Ausencia de cromosomas.

Telómeros
Las puntas de cada molécula de ADN están compuestas por un inusual tramo de secuencias repetidas, el telómero. Contiene
una secuencia GGGATT que se repite aproximadamente 500 a 5 000 veces. La misma secuencia se encuentra en los
vertebrados, y secuencias similares existen en la mayoría de los organismos: los telómeros tienen una función conservada en
diversos organismos. Se identifican proteínas de unión a ADN que se enlazan de forma específica con la secuencia telomérica
y son esenciales para la función telomérica (RAP-1).
Los telómeros son partes muy importantes del cromosoma:
1. Se requieren para la replicación completa de los cromosomas.
2. Forman capas que protegen los cromosomas del ataque de nucleasas y otros desestabilizantes.
3. Impiden que los extremos de los cromosomas se fusionen entre sí.
Si las células no fueran capaces de replicar los telómeros, los cromosomas serían más cortos con cada ciclo de división
celular. Este predicamento se denomina “el problema de replicación de los extremos”.
La telomerasa es una enzima que resuelve el “problema de replicación de los extremos” al elongar los telómeros.
1. Es una transcriptasa inversa que sintetiza ADN mediante un molde de ARN
2. A diferencia de la mayoría de las transcriptasas inversas, la telomerasa por sí misma contiene el ARN molde.
3. La carencia genética de telomerasa produce la fusión de los extremos de los cromosomas, con consecuencias
como la fractura de los cromosomas en las divisiones celulares subsecuentes.
4. Su expresión decrece en células somáticas a medida que aumenta la edad.
Los telómeros se acortan de manera progresiva con cada división celular porque la mayoría de las células pierde la enzima
telomerasa (ocurre en células somáticas, no en células germinales). El acortamiento de los telómeros continúa hasta un
punto crítico conocido como “crisis” cuando las células presentan anomalías extensas en los cromosomas y dejan de
dividirse. Las células que son forzadas a expresar telomerasa continúan proliferando por cientos de divisiones más.
Las células que expresan telomerasa siguen dividiéndose y lo hacen sin mostrar los signos de envejecimiento fisiológico.
Si los telómeros son un factor tan importante para limitar el número de veces que una célula se divide, podría esperarse que
sea un factor decisivo en el envejecimiento humano.
A telómeros más cortos, más riesgo de enfermedades cardiovasculares o infecciones graves
El mantenimiento anormal de los telómeros causa envejecimiento mucho más rápido de lo normal (Sx de Werner)
Mujeres sometidas a estrés crónico tienen telómeros más cortos y menor actividad telomerasa

El acortamiento de telómeros protege al ser humano contra el cáncer al limitar el número de divisiones de una célula
potencialmente tumoral. A diferencia de las células normales que pierden actividad telomerasa, cerca del 90% de los
tumores humanos consiste en células que contienen enzima telomerasa activa. El crecimiento de los tumores se relacionaría
con una intensa selección de células en las que la expresión de telomerasa se reactivó. La activación de telomerasa no basta
para que una célula se vuelva cancerosa.

Centrómeros
También llamados constricciones primarias. En humanos, el centrómero contiene:
a. Secuencia de ADN satélite alfa en tándem, de 171 pares de bases que se extiende a por lo menos 500 kilobases.
b. CENP-A, variante de la histona H3. Remplaza a la H3 convencional en muchos de los nucleosomas.
Los centrómeros se unen a proteínas específicas (cinetocoros) que sirven como sitio de unión para los microtúbulos duran te
la división celular. El centrómero ensambla al cinetocoro gracias a la presencia de CENP-A. Los cromosomas sin centrómero
tienen problemas para ensamblarse a un cinetocoro y se pierden durante la división celular.
El ADN centromérico presenta diferencias en la secuencia, incluso entre especies muy relacionadas: la secuencia de ADN del
centrómero por si misma no es un determinante de la estructura y función del centrómero.
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Alrededor de 1 de cada 2 000 humanos nacen con un cromosoma diminuto adicional, el cromosoma marcador. Estos
cromosomas pueden no tener ADN satélite alfa pero poseer una constricción primaria y centrómero por completo funcional,
que permite a los cromosomas duplicados separarse en las células hijas en cada división.
Los cromosomas marcadores se transmiten de manera estable a través de tres generaciones de miembros de una familia.

El núcleo como organelo organizado

El examen microscópico, el núcleo suele mostrar cromatina dispersa y uno o más nucleolos
irregulares. Otros estudios han demostrado que el núcleo mantiene un orden considerable.
Por ej: las fibras de cromatina de un cromosoma en interfase se concentran en un territorio
distinto que no se traslapa extensamente con los territorios de otros cromosomas.
Así, conocemos ahora que:
a. Los cromosomas ocupan distintos territorios
b. Fibras individuales de cromatina pueden extenderse a distancia considerable de
estos territorios
c. Genes que residen en diferentes cromosomas pero participan en el mismo proceso
pueden reunirse para transcribirse simultáneamente (ADNr en nucleolo, p.ej.)
Ubicación de los cromosomas:
+ Los cromosomas más pequeños y los ricos en genes tienden a residir más cerca del centro del núcleo.
+ Los cromosomas más grandes y los pobres en genes tienden a residir más lejos del centro del núcleo.
Pueden unirse a la envoltura nuclear los centrómeros y los telómeros de los cromosomas (en núcleos de plantas y levadura).
Estructuras que pueden ser halladas en el núcleo:
Nucléolo: Ya descripto en el capítulo anterior. Nucléolo y motas
Motas: De 20 a 50 dominios irregulares. Funcionan como depósitos de almacenamiento + Son compartimentos
dinámicos en estado estable.
dinámico que aportan los factores de splicing para utilizarlos en los sitios de transcripción
+ Su existencia depende de su
cercanos. actividad contínua.
Cuerpos de cajal, GEM y cuerpos PML: Contienen gran número de proteínas que se
mueven hacia adentro y afuera de la estructura de modo dinámico. No parecen ser esenciales para la viabilidad de la célula.
Matriz nuclear:
Es una red fibrilar insoluble que posee la misma forma que el núcleo original, pero se compone de una red fibrilar de
proteínas plegadas que se entrecruzan en el espacio nuclear. El citoplasma contiene una matriz de citoesqueleto diferente.
La matriz nuclear se observa luego de tratar al núcleo con detergentes no iónicos y ricos en sal y una ADNasa.
La matriz nuclear tiene las funciones de:
1. Esqueleto o andamiaje para mantener la forma del núcleo
2. Andamiaje en el que las asas de cromatina se organizan
3. Anclar gran parte de la maquinaria que participa en las actividades del núcleo (transcripción, procesamiento de
ARN, replicación)

Control de la Expresión Génica en Eucariotas

El huevo fertilizado contiene instrucciones genéticas completas que se copian con la mayor fidelidad y se distribuyen a cada
célula del organismo en desarrollo; por ello, las células diferenciadas portan mucha más información de la que alguna vez
pueden llegar a necesitar. Las células disponen de mecanismos que les permiten expresar la información genética que
contienen de manera selectiva. Las células de un organismo no pierden información genética durante la diferenciación, sino
que retienen los genes necesarios para convertirse en otra célula de ese mismo organismo. El núcleo de una célula contiene
toda la información necesaria para desarrollar un organismo nuevo;
es decir, contiene la información necesaria para la diferenciación en
otros tipos celulares. Por tanto, no es la presencia o ausencia de
genes en una célula la que determina sus propiedades, sino la forma
en que estos genes se utilizan.
Se estima que una célula de mamífero típica produce por lo menos 5
000 polipéptidos distintos en cualquier momento.
La regulación de la expresión génica en eucariotas ocurre sobre todo
en tres niveles distintos:
1. Control a nivel transcripcional: Determina si un gen particular
puede transcribirse y con qué frecuencia.
2. Control a nivel del procesamiento: Determina la vía por la que el
preARNm se procesa en un ARNm que puede traducirse en un
polipéptido.
3. Control a nivel traduccional: Determina cuándo un ARNm se
traduce y con qué frecuencia y durante cuánto tiempo.
4. Control a nivel postraduccional: No es técnicamente un
mecanismo de control de la expresión génica. Determina si una
proteína es degradada o no.
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Control a Nivel Transcripcional
La transcripción diferencial de genes es el mecanismo aislado más importante por el que las células eucariotas determinan
qué proteínas se sintetizarán en cualquier momento de su vida.
Una técnica para estudiar el control a nivel transcripcional es el uso de microordenamientos de ADN (microchips de ADN).
1. Los fragmentos de los genes a estudiar se
generan mediante técnicas de clonación (PCR,
clonación de ADN). Se coloca un volumen
pequeño que contiene un gen específico clonado
en cada base o pocillo de la placa.
Luego, los ADN clonados se depositan en gotas,
uno a la vez y ordenadamente, sobre un
portaobjetos.
2. Se purifican los ARNm presentes en las células
en estudio.
3. Se preparan ADN complementarios (ADNc) a
partir de los ARNm utilizando la enzima
transcriptasa inversa.
4. Se marca a los ADNc con fluorescencia.
5. Se incuba al ADNc con el portaobjetos que
contiene el ADN génico inmóvil.
Los ADN del microordenamiento que se hibridaron con ADNc exhiben fluorescencia y pueden ser identificados bajo el
microscopio. Cualquier mancha en el microordenamiento que exhibe fluorescencia representa un gen transcripto por la
célula que se estudia.
Los microordenamientos de ADN se utilizan para estudiar:
a. Los cambios en la expresión génica que ocurren durante una amplia variedad de sucesos biológicos, como la división
celular y la transformación de una célula normal en una célula maligna.
b. La diversidad de ARN que una sola célula tumoral produce, luego de la amplificación de los ADNc por PCR.
c. Grado de variación genética en la población humana.
d. Identificar alelos para genes particulares que una persona porta en sus cromosomas.

La función de los factores de transcripción en la regulación de la expresión génica

El control transcripcional es orquestado por factores transcripcionales. Los factores de transcripción pueden ser:
Generales: Se unen a los sitios promotores nucleares en relación con la ARN polimerasa.
Específicos: Se unen a varios sitios reguladores de genes particulares. Pueden actuar como:
Activadores: Estimulando la transcripción. Represores: Inhibiendo la transcripción.
Un solo gen puede controlarse mediante muchos reguladores diferentes de ADN que unen una variedad de factores
de transcripción.
Un solo factor de transcripción puede unirse a numerosos sitios reguladores alrededor del genoma y controlar la
expresión de diferentes genes de un hospedador.
La extensión a la que un gen particular se transcribe parece depender de la combinación específica de factores de
transcripción que se unen a elementos reguladores corriente arriba.
Cada tipo de célula tiene un patrón característico de transcripción de genes, que está determinado por el complemento
particular de factores de transcripción contenidos en la célula.
Las células expuestas a diferentes estímulos responden mediante la síntesis de factores transcripcionales diferentes, que se
unen a distintos sitios en el ADN.
5 al 10% del genoma codifica factores transcripcionales.

Estructura de los factores transcripcionales

La estructura 3D de complejos ADN-proteína se determina por cristalografía de rayos X y espectroscopía de resonancia
magnética nuclear.
Los factores transcripcionales contienen al menos dos dominios:
1. Dominio de ADN que se enlaza a secuencias específicas de pares de bases de ADN
2. Dominio de activación que regula la transcripción al interactuar con otras proteínas
La formación de dímeros es una característica que muchos factores transcripcionales comparten y se cree que desempeña un
papel importante en la regulación de la expresión génica.
Estructuras relacionadas de factores transcripcionales
Los dominios de unión a ADN de los factores de transcripción pueden agruparse en diferentes clases. La mayoría de estas
estructuras contiene un segmento en hélice alfa que se inserta en el surco mayor del ADN, donde reconoce la secuencia de
pares de bases que se localizan en el surco. La unión de la proteína al ADN se realiza mediante una combinación específica de
fuerzas de van der Walls, enlaces iónicos y puentes de hidrógeno entre los residuos de aminoácidos y diferentes segmentos
del ADN (incluido el esqueleto).
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DEDOS DE ZINC: La clase más grande de factores transcripcionales contiene una estructura conocida como Dedos de zinc.
1. El ion zinc se coordina con dos cisteínas y dos histidinas (los residuos de cisteínas forman parte de una hoja
plegada β y los residuos de histidina forman parte de una hélice alfa corta)
2. Las proteínas tienen cierto número de dedos que actúan independientemente uno de otro, espaciados para
proyectarse en sucesivos surcos mayores.
3. Ejemplos:
TFIIIA tiene nueve dedos de zinc. Se requiere para la transcripción del gen 5S mediante ARNPIII.
Egr contiene dedos de zinc y participa en la activación de genes que se requieren para la división celular.
GATA contiene dedos de zinc y participa en el desarrollo del músculo cardíaco.
GLI contiene 5 dedos de zinc.
HÉLICE ASA HÉLICE (HLH): Dos segmentos de hélice alfa separados por un asa intermedia.
1. EL dominio HLH suele ser precedido por aminoácidos muy básicos cuyas R hacen contacto con el ADN y
determinan la especificidad de secuencia del factor transcripcional.
2. Siempre se presentan como dímeros. Las dos subunidades del dímero suelen estar codificadas por genes distintos.
La heterodimerización expande mucho la diversidad de factores de regulación que pueden generarse a partir de
pocos polipéptidos.
3. Ejemplos:
MyoD contiene HLH. Participa en la diferenciación del músculo esquelético.
Myc, SCL, LYL-1, E2A contienen HLH. Participan en el control de la proliferación celular y en ciertos cánceres.
Linfoma de Burkitt: ocurre por la traslocación del gen MYC del cromosoma 8 al cromosoma 14.
CREMALLERA DE LEUCINA (bZIP): Las leucinas están presentes cada 7 aminoácidos a lo largo de la secuencia de la hélice alfa.
1. Todas las leucinas de un polipéptido se encuentran en la misma dirección. Dos hélices alfa son capaces de juntarse
en una cremallera para formar una estructura superenrollada. Existen como dímeros.
2. Contiene un grupo de aminoácidos básicos en un lado de la hélice alfa que contiene leucina. Las porciones hélice
alfa son importantes en la dimerización, el grupo de aminoácidos básicos permite la unión con ADN específico.
3. Ejemplos:
AP-1, contiene dos péptidos en bZIP: Fos y Jun. Los genes FOS y JUN desempeñan una función importante en la
proliferación celular y su mutación puede ocasionar que la célula se convierta en maligna.
CAJA HMG: Proteínas de alta motilidad. Se definen como “factores arquitectónicos” porque doblan al ADN.
1. Consisten en tres hélices alfa organizadas en estructuras con forma de boomerang, capaz de unir ADN.
2. Ejemplos:
SRY contiene caja HMG. El doblez en el ADN ocurre ante la unión de SRY al surco menor. Tiene participación
importante en la diferenciación sexual en hombres. Es una proteína codificada en el cromosoma Y y activa la
transcripción de genes en una vía que lleva a la diferenciación testicular. Su mutación causa “inversión sexual”
(Individuos con cromosomas XY pero fenotipo ♀)
UBF contiene 10 cajas HMG. Factor dimérico que dobla al ADN y lo convierte en un molde para la ARNPI. Las cajas
HMG distorsionan la hélice de ADN para que sus asas rodeen la proteína. Las asas de ADN exponen dos secuencias
reguladoras que normalmente están separadas por 120 pares de bases, donde pueden unirse de forma cooperativa
mediante uno o más factores transcripcionales.

Sitios de ADN que participan en la regulación de la transcripción

Promotor: Es la región corriente arriba de un gen que regula el inicio de la transcripción.
Elementos del promotor proximal: Son las cajas TATA, CAAT y CG. Cuando están presentes, casi siempre se localizan en los
100 a 150 pares de bases corriente arriba del sitio de inicio de la transcripción.
Promotor nuclear: Es la región promotora que se extiende desde la caja TATA al sitio de inicio de la transcripción. Es el sitio
de ensamble del complejo de preinicio, que consiste en una ARNPII y diferentes factores de transcripción. La caja TATA
determina el sitio de inicio de la transcripción.
Las cajas CAAT y GC: Se localizan un poco más corriente arriba del gen, suelen requerirse para que una polimerasa inicie la
transcripción del gen. Se unen con factores transcripcionales (p. ej. NF1 y SP1). Regulan la frecuencia con que la polimerasa
transcribe el gen.
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Receptor de glucocorticoides, un ejemplo de activación transcripcional:
Las hormonas pueden actuar mediante factores transcripcionales específicos que se unen al ADN.
Elemento de respuesta: Sitio donde un factor de transcripción específico se une a una secuencia reguladora en el ADN. El
siguiente ejemplo habla sobre el receptor de glucocorticoides.
Una célula que responde a los glucocorticoides debe poseer un receptor específico capaz de unir la hormona. El receptor de
glucocorticoides funciona como factor de transcripción que se une al ADN.
1. Cuando una hormona glucocorticoide entra a una célula blanco, se une con la proteína receptora de glucocorticoide
soluble en el citosol y cambla la conformación de la proteína. Este cambio expone una señal de localización nuclear, que
facilita la traslocación del receptor hacia el núcleo.
2. El receptor unido al ligando se vincula a una secuencia específica del ADN: el elemento de respuesta a glucocorticoides, que
se localiza corriente arriba del gen de PEPCK y activa la transcripción de este gen. El receptor dimeriza para poder unirse al
elemento de respuesta.
La misma secuencia del elemento de respuesta a glucocorticoides se localiza corriente arriba de diferentes genes en
cromosomas distintos. En consecuencia, un estímulo único (alta concentración de glucocorticoides) puede activar de manera
simultánea a diferentes genes cuya función se requiere para responder al estrés.
Palíndromo: Secuencia simétrica de ADN donde las dos cadenas tienen la misma secuencia de 5’ a 3’. Los elementos de
respuesta suelen consistir en secuencias palindrómicas.
Ej: 5’-AGAACATGTTCT-3’
3’-TCTTGTACAAGA-5’

Activación transcripcional: aumentadores, promotores, coactivadores

Aumentador o Enhancer: Sitio regulador de ADN que puede localizarse a considerable distancia, corriente arriba o corriente
abajo, del promotor regulador. La unión de uno o más factores transcripcionales a la secuencia aumentadora llega a
incrementar en grado notable la velocidad de la transcripción en un gen. Los aumentadores son elementos distales al
promotor. Sobre ellos, hay que saber que:
1. Por lo general, un aumentador se extiende cerca de 200 pares de bases.
2. Un aumentador puede tener múltiples sitios de unión para activadores específicos de la transcripción.
3. Se diferencian de los elementos promotores por una propiedad única: pueden cambiarse experimentalmente de
un lugar a otro dentro de una molécula de ADN o aun invertirse (rotarse 180°), sin afectar la capacidad de unión de
los factores transcripcionales para estimular la transcripción.
4. La deleción de un aumentador puede disminuir el nivel de transcripción alrededor de 100 veces o más.
5. Pueden localizarse a miles o decenas de miles de pares de bases corriente arriba o corriente abajo del gen cuya
transcripción estimulan.
Los aumentadores estimulan la transcripción mediante su influencia en fenómenos que ocurren en el promotor nuclear. Los
aumentadores y promotores pueden colocarse en relación estrecha por la formación de un asa de ADN.
Aislador: Secuencias de ADN especializadas que aíslan a los aumentadores y promotores de un gen, evitando que un
aumentador se una a un promotor no apropiado. Las secuencias aisladoras se unen a proteínas de la matriz nuclear y los
segmentos de ADN entre los aisladores corresponden a los dominios de asa de la
cromatina.
La unión de un factor transcripcional con el aumentador estimula el inicio de la
transcripción mediante la acción coactivadores.
Los coactivadores son grandes complejos que constan de numerosas
subunidades, pueden dividirse en:
1. Coactivadores que interactúan con la maquinaria de transcripción basal
(TAF ; mediador)
2. Coactivadores que remodelan la cromatina
(Acetiltransferasa de histonas: CBP ; remodelador de cromatina: SWI)
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TAF: TFIID, uno de los factores de transcripción generales, consiste en una docena o más de TAF. Se
Que interactúan cree que algunos factores de transcripción ejercen cierta influencia sobre eventos en el promotor
con maquinaria nuclear al interactuar con una o más subunidades de TFIID.
de transcripción Mediador: Es un enorme complejo de subunidades que interactúa con la ARNPII. Es necesario para el
basal funcionamiento de una amplia variedad de activadores de transcripción; tal vez sea un elemento
esencial en la transcripción de la mayor parte de los genes que codifican proteína.
Coactivadores

Acetiltransferasa de histonas (HAT): Funcionan en las regiones promotoras de los genes durante la
activación de la trascripción. Las enzimas HAT (p. ej. CBP) agregan grupos acetilo a residuos de lisina
específicos de las histonas nucleares en la región promotora, creando así un sitio de unión para
complejos remodeladores de cromatina: se incrementa la accesibilidad del promotor a los
componentes de la maquinaria de transcripción.
Que remodelan Remodeladores de cromatina: Utilizan la energía liberada por la hidrólisis de ATP para alterar la
la cromatina estructura y localización del nucleosoma en el ADN, lo que permite la unión de varias proteínas a los
sitios reguladores en el ADN. P. ej. los complejos SWI/SNF (de 9 a 12 subunidades, incluyendo la
proteína actina y otras relacionadas).
Una vez que los complejos de remodelación de la cromatina se reclutan en el promotor, alteran las
interacciones histona-ADN y pueden causar:
1. Deslizamiento (SWI/SNF) 2. Cambio conformacional (SWI/SNF)
3. Intercambio de histonas (SWR1) 4. Disociación de histonas (FACT)

Represión de la transcripción
En procariotas, el control de la transcripción recae especialmente en represores, que son proteínas que se unen al ADN y
bloquean la transcripción de un gen cercano. Los eucariotas también poseen estos mecanismos de regulación negativa.

Desacetilasas de histona (HDAC): Se presentan como subunidades de correpresores. Es posible que

el avance de determinados tipos de cáncer dependa de la capacidad de las células tumorales de
Que remodelan
Correpresores

reprimir la actividad de varios genes. Hay fármacos anticancerosos que inhiben HDAC específicas.
cromatina
Metiltransferasas de histona: La metilación de K9 de H3 es un paso clave en la formación de
heterocromatina.
Metiltransferasas de ADN: Codificadas por genes DNMT. En el ADN de mamífero, uno de cada 100
nucleótidos porta un metilo en el carbono 5 de una citosina. Los residuos de metilcitosina son parte
Que metilan
del dinucleótido 5’-CpG-3’ dentro de una secuencia simétrica (palindrómica).
ADN
La mayoría de los residuos metilcitosina en el ADN se localizan dentro de secuencias repetidas no
codificadoras, por lo que estas secuencias permanecen inactivas.

Metilación de ADN y represión transcripcional:

1. La metilación del promotor de los genes se correlaciona con la represión de los genes.
2. La metilación de ADN sirve más para mantener un gen en estado inactivo que como mecanismo inicial de inactivación.
3. El mantenimiento del estado reprimido es mediado por MeCP2, que se unen a los dinucleótidos 5’-CpG-3’ metilados y
reclutan a complejos correpresores (HDAC y Metiltransferasas de histona).
4. Los patrones de metilación anormal, a menudo, se relacionan con enfermedad (cáncer).
5. La metilación de ADN no es irreversible.
Cambios en niveles de metilación:
a. Desmetilación: Entre la fertilización y la primera
división del cigoto, el ADN pierde las marcas de
metilación que heredó de los padres (no afecta a los
genes tipo huella)
b. Metilación: Cerca de la implantación, una onda de
metilación se disemina a través de las células y
establece un nuevo patrón de metilación en todo el ADN.
Una vez que el patrón de metilación de ADN se establece dentro
de una célula, se mantiene durante las divisiones celulares (se
metila a las cadenas hijas según el patrón de metilación de las
cadenas parentales).
6. Las levaduras y nematodos no metilan ADN. Las plantas metilan muchísimo al ADN.

Huella genómica (Impronta genómica)

Fenómeno exclusivo de mamíferos. El grupo de cromosomas heredados del padre no es del todo equivalente en funciones al
grupo de cromosomas heredados de la madre. El hecho de que ciertos genes sean activos o inactivos durante el desarrollo
temprano de mamíferos depende solo de si fueron aportados al cigoto por el oocito o por el espermatozoide, situación
conocida como huella genómica. Ejemplos:
Gen del factor de crecimiento fetal (IGF2): Es activo solo en el cromosoma paterno.
Gen del canal de potasio KVLQT1: Solo tiene actividad en el cromosoma heredado de la madre.
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La huella es un fenómeno epigenético a causa de diferencias entre los alelos heredados de uno de los padres, pero no se
basa en las diferencias de secuencia del ADN. El genoma de mamíferos contiene cuando menos 80 genes sometidos a huella.
Los genes se convierten en huella por metilación selectiva, decimos esto porque:
1. Los genes huella difieren de manera importante en su grado de metilación en sus versiones paterna y materna.
2. Al perder una metiltransferasa clave, no puede mantenerse el estado de huella de los genes heredados.
Las ondas de metilación/remetilación en el embrión temprano no afectan la metilación de los genes de tipo huella. O sea, los
mismos alelos que se inactivan a causa del proceso de huella en los huevos fertilizados serán inactivos en las células del feto
y en la mayoría de los tejidos adultos. En el proceso de huella participan ARN no codificantes.
CUIDADO: EN CÉLULAS GERMINALES LA HUELLA GENÓMICA SE BORRA DURANTE EL DESARROLLO TEMPRANO Y SE
RESTABLECE CUANDO EL INDIVIDUO PRODUCE SUS PROPIOS GAMETOS.
Las alteraciones en la huella de genes producen enfermedades:
Síndrome de Prader – Willi: El cromosoma 15 heredado del padre porta una deleción de la región con genes de huella.
Existen genes que pierden la huella. La pérdida de huella del gen IF2 ocurre en 10% de la población y se relaciona con riesgo
para cáncer colorrectal. La huella es indispensable para el desarrollo temprano de los individuos.

Control a Nivel del Procesamiento

El splicing alternativo regula la expresión génica a nivel del procesamiento de ARN y provee el mecanismo por el que un solo
gen puede codificar dos o más proteínas relacionadas. La vía de procesamiento de un preARNm puede depender de:
1. El estadio de desarrollo.
2. La célula o el tejido a considerar.
Ejemplo: Síntesis de fibronectina, que se encuentra en el plasma sanguíneo y en la matriz extracelular.
Fibronectina generada por fibroblastos: En MEC, contiene dos péptidos más que la versión plasmática.
Fibronectina generada por hepatocitos: En plasma, es más pequeño que la versión fibroblástica.
Esto ocurre porque hay porciones del preARNm que se retienen durante el procesamiento en los fibroblastos, pero se
remueven durante el procesamiento en el hepatocito.
La mayoría de las veces, las proteínas generadas por un gen mediante splicing alternativo son:
a. Idénticas en casi toda su longitud.
b. Difieren en regiones clave que pueden afectar propiedades importantes como:
+ Localización celular
+ Ligandos que se unen
+ Cinética catalítica
Diferentes factores de trascripción derivan de genes que pueden experimentar splicing alternativo, lo que genera variantes
que pueden determinar la vía de diferenciación que toma la célula.

El mecanismo por el que un exón se incluye o

excluye depende sobre todo de si la maquinaria de Los ESE se unen a proteínas SR específicas
splicing selecciona los sitios específicos 5’ y 3’ como Si una célula produce la proteína Si una célula no produce la
sitios de corte. Existen sitios de splicing frágiles (los proteína
espliceosomas pueden “saltarlos” en ciertas La proteína puede unirse al ESE y Los sitios de splicing no se reconocen
reclutar al espliceosoma: el exón se y el exón se elimina junto con los
condiciones). El reconocimiento y uso de los sitios
incluye en el ARNm. intrones flanqueantes.
de splicing frágiles se controlan mediante los
aumentadores de splicing exónico (ESE).
Se estima que más de 60% de los genes humanos está sujeto a splicing alternativo.
El splicing alternativo tiene el potencial de generar un gran número de polipéptidos a partir de un solo gen. Esta diversidad
de proteínas tiene la importante función de dirigir la formación de sinapsis específicas.
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Control a Nivel Traduccional
Comprende mecanismos que afectan la traducción del ARNm transportado con anterioridad desde el núcleo hasta el
citoplasma. Suelen operar por medio de interacciones entre ARNm específicos y varias proteínas presentes dentro del
citoplasma. Las regiones no codificantes 5’ y 3’ del ARNm (UTR 5’ y UTR 3’) contienen secuencias nucleotídicas que la célula
utiliza para mediar el control a nivel traduccional.
La UTR 5’ se extiende desde la caperuza de metilguanosina hasta el codón de inicio AUG.
La UTR 3’ se extiende desde el codón de terminación en el extremo de la región codificante hasta el final de la poliA.

Localización citoplásmica del ARNm

La información necesaria para que un oocito fertilizado inicie la formación de un embrión se localiza
dentro del oocito durante la oogénesis. Analicemos un ejemplo en la mosca de la fruta:
La localización del ARNm en el oocito de la mosca anticipa el desarrollo del eje anteroposterior de la
larva. Estos ARNm se traducen después en el sitio de localización.
Las proteínas que el ARNm de bicoid codifica tienen función en el desarrollo de la cabeza y el tórax.
La proteína que el ARNm de oskar codifica se requiere para la formación de células germinales en la
parte posterior de la larva.
1. La información que regula la localización citoplásmica de un ARNm reside en el UTR 3’.
2. La localización del ARNm está mediada por proteínas específicas que reconocen secuencias de localización del ARNm.
3. El transporte del ARNm a localizaciones específicas está mediado por microtúbulos y proteínas motoras.
4. Los microfilamentos anclan a los ARNm después de que llegan a destino final.
5. Durante el proceso de localización, la traducción de los ARNm es inhibida de manera específica por proteínas relacionadas.

Control de la traducción del ARNm

Los ARNm se almacenan en un huevo no fecundado hasta su fertilización para la síntesis de proteínas durante los estadios
tempranos del desarrollo; no se utilizan para la síntesis de proteínas en el huevo mismo. Las proteínas del huevo fecundado
se sintetizan a partir de ARNm preexistentes que se activan luego de la fertilización. El inicio de la traducción de estos ARNm
almacenados comprende por lo menos dos fenómenos distintos:
1. La inactivación de proteínas inhibidoras de unión.
2. Un incremento en la longitud de las colas de poliA.
Mecanismos que regulan la tasa de traducción del ARNm en respuesta a estímulos cambiantes:
Mecanismos globales: Afectan la traducción de todos los mensajes. Recordemos el
estrés del RER, que producía la activación de una cinasa que fosforila a eIF2, lo que bloquea la
síntesis de proteínas. La versión fosforilada de eIF2 no puede intercambiar su GDP por GTP,
que se requiere para que eIF2 se comprometa en otro ciclo de inicio de traducción.
Existen cuatro cinasas capaces de fosforilar el mismo residuo de serina de eIF2; cada una de
estas cinasas se activa después de un tipo de estrés celular diferente.
Mecanismos específicos: Influyen en el ritmo de traducción de ARNm específicos a
través de la acción de proteínas que se unen a UTR de estos ARNm. Ejemplo: ARNm de
Ferritina (proteína que secuestra átomos de hierro del citoplasma). La traducción del ARNm de
ferritina ese regula por un represor específico, el IRP, cuya actividad depende de la [Fe libre] en
la célula.
A bajas concentraciones de hierro: IRP se une a una secuencia específica en UTR 5’, llamada IRE (elemento de respuesta al
hierro); lo que interfiere con la unión del ribosoma al 5’ del mensaje: se inhibe el inicio de la traducción.
A altas concentraciones de hierro: IRP pierde afinidad por las secuencias IRE. La disociación de IRP del ARNm permite el
acceso de la maquinaria de traducción al ARNm y ocurre traducción de ferritina.
Los miARN también actúan como reguladores traduccionales de gran importancia.

Control de la estabilidad del ARNm

El tiempo que dura un ARNm en la célula es, la mayoría de las veces, para la síntesis de un polipéptido. A diferencia del ARNm
procariota, que comienza a degradarse en su extremo 5’ antes que su extremo 3’ esté completo, la mayoría de los ARNm
eucariotas tienen una vida media hasta cierto punto larga (la vida media del ARNm es corta al comparar con ARNr ni ARNt).
La vida media (Vm) de los ARNm es muy variable:
a. Poco tiempo: ARNm de FOS, que participa en control de la división celular. Vm de 10-30 min.
b. Bastante tiempo: ARNm de proteínas dominantes en una célula (ARNm de hemoglobina en un eritrocito). Vm > 24h.
1. La longevidad de un ARNm se relaciona con la longitud de su poliA:
Al abandonar el núcleo, un ARNm típico contiene una cola de poliA de cerca de 200 adenosinas.
Mientras permanece en el citoplasma, la poliA tiende a reducirse gradualmente conforme se degrada por la ribonucleasa de poliA.
Una vez que la cola de poliA se acorta a alrededor de 30 adenosinas, el ARNm es degradado con rapidez por dos vías
Degradación 5’→3’: Inicia en 5’ luego de la remoción de la cola de poliA. Ocurre mediante dos reacciones que tienen lugar dentro de
pequeñas estructuras citoplásmicas llamadas cuerpos P. El ARNm sufre la eliminación de la caperuza 5’ y degradación de 5’ a 3’. Los
cuerpos P podrían tener función en el almacenamiento y la destrucción de ARNm que ya no se traducen.
Degradación 3’→5’: La digestión de la cola de poliA es seguida por la digestión continua del ARNm desde el 3’. Es efectuada por una
exonucleasa que es parte de un complejo llamado exosoma.
 Núcleo interfásico y Control de la Expresión Génica
EMP
2. Existen ARNm de vidas medias muy diferentes con colas de poliA similares; así que también hay secuencias en UTR 3’ que
participan en la longevidad del ARNm.
CCUCC: Repeticiones de esta secuencia en ARNm de globina sirven como sitio de unión para proteínas que estabilizan el mensaje.
AUUUA: Elementos ricos en AU se unen a proteínas que desestabilizan el mensaje. Las secuencias desestabilizantes sirven como sitios de
unión para proteínas (AUF1) y para miARN que inducen desadenilación y posterior destrucción del ARNm.
Si la secuencia desestabilizante del gen FOS se pierde por una deleción, la vida media del ARNm de FOS se incrementa y las células suelen
tornarse malignas.

El control de la expresión génica también puede controlarse mediante otras actividades

Cambio en el marco traduccional: el que el ribosoma cambia el marco de lectura en algún a lo largo del ARNm. Es posible
que se generen dos polipéptidos distintos a partir del mismo ARNm.
Lectura a través del codón de terminación: el ribosoma continúa después de estos codones.
Edición de ARNm: nucleótidos específicos se convierten en otros nucleótidos postranscripcionalmente. Puede crear nuvos
sitios de splicing, generar codones de paro u ocasionar sustituciones aminoacídicas.
Iniciación de traducción alternativa: diferentes AUG en el mismo ARNm se utilizan como codón de inicio.
Salto traduccional: el ribosoma salta sobre una secuencia en el ARNm y deja una porción del ARNm sin traducir.
Splicing de proteína: un segmento de polipéptido específico se elimina y los dos extremos se unen de manera covalente.

Control Postraduccional
Las células poseen mecanismos para controlar el período que las proteínas sobreviven una vez que son funcionales. La
degradación de proteínas celulares se realiza en proteosomas. Son estructuras proteicas cilíndricas que se encuentran tanto
en el núcleo como en el citosol de las células. También son encontrados en células procariotas, pero con una estructura más
simple.
Los proteosomas digieren proteínas anormales y proteínas normales marcadas para su destrucción.
1. Proteínas anormales: Mal plegadas o vinculadas
VIDA MEDIA DE LAS PROTEÍNAS incorrectamente con otras proteínas.
Días o semanas: Enzimas de Pocos minutos: Proteínas que regulan 2. Proteínas marcadas: Depende de la estabilidad
la glicólisis, globinas del inicio de replicación de ADN, que activan biológica de la proteína en la célula. Los
eritrocito. división celular. determinantes que controlan el tiempo de vida de
una proteína son:
a. Secuencia de aminoácidos en el N-terminal.
b. Secuencia interna degrón, secuencia específica que asegura que
no sobrevivan mucho tiempo en la célula.
c. Fosforilación de ciertos residuos.
La estructura del proteosoma: Cada proteosoma consiste en dos grandes
caperuzas en el extremo de un núcleo en forma de túnel, que está formado
por cuatro anillos apilados. Cada anillo consta de siete subunidades que se
dividen en dos clases: tipo alfa y tipo beta.
Los dos anillos externos: Se componen de subunidades alfa sin actividad
catalítica. Forman una abertura estrecha (13Å) a través de la cual los
polipéptidos sustrato desplegados se introducen para llegar a la cámara
central.
Los dos anillos internos: se componen de subunidades beta, que rodean
una cámara central.
En eucariotas: Tres de las siete subunidades beta de cada anillo tienen actividad proteolítica, las otras cuatro son inactivas.
En procariotas: Todas las subunidades beta son activas.
La ubiquitina es una proteína pequeña que se une a las proteínas en un proceso llamado ubiquitinación. La ubiquitinación
puede derivar a diferentes actividades:
1. Monoubiquitinación: Incorporación de los receptores monoubiquitinados de manera selectiva en vesículas
endocíticas; es una señal de direccionamiento.
2. Poliubiquitinación: Reconocimiento de la proteína por la caperuza del proteosoma y degradación de la proteína
poliubiquitinada.
Pasos de la destrucción de proteínas mediada por la vía del proteosoma/ubiquitina:
1. La proteína que se degradará se une de manera covalente a un grupo de moléculas de ubiquitina.
La unión de las ubiquitinas requiere de tres ligasas de ubiquitina diferentes: E1, E2 y E3.
2. La proteína poliubiquitinada es reconocida por la caperuza del proteosoma.
3. La cadena de ubiquitina es removida del polipéptido por la caperuza del proteosoma.
4. El polipéptido no plegado entra a la cámara central del proteosoma.
5. Degradación del polipéptido por las subunidades beta hasta péptidos pequeños.
6. Liberación de los productos peptídicos al citosol, donde se degradan a aminoácidos
 Replicación del ADN y Reparación
EMP

REPLICACIÓN DEL ADN Y REPARACIÓN DEL ADN

La maquinaria que replica el ADN también tiene la capacidad de repararlo. Se piensa que la
autorreplicación fue una de las primeras propiedades importantes durante la evolución de las formas de La replicación es:
vida primitiva. Los portadores tempranos de la información genética fueron, tal vez, las moléculas de ARN Semiconservadora
Semidiscontinua
capaces de autorreplicarse. A medida que la evolución progresó y las moléculas de ARN se remplazaron Bidireccional
por ADN como material genético, la replicación adquirió complejidad y requirió un gran número de Asimétrica

componentes auxiliares. Entonces, a pesar de que un ADN contiene la información para su propia
duplicación, carece de la capacidad de replicarse por sí mismo.

Replicación del ADN

La estructura que propusieron Watson y Crick para el ADN incluía un mecanismo que sugería su
“autoduplicación”. Se supuso que la replicación ocurre por separación gradual de las cadenas del dúplex.
Cada cadena contiene la información requerida para la construcción de la otra debido a la
complementariedad. Una vez que las cadenas se separan, cada una puede actuar como molde para dirigir la
síntesis de la cadena complementaria y restaurar el estado de doble cadena.

Replicación semiconservadora
La replicación del ADN es semiconservadora porque cada ADN hijo contiene una cadena parental completa y
otra cadena completa sintetizada de nueva cuenta. Existen tres modelos de replicación:
REPLICACIÓN
Semiconservadora Conservadora Dispersadora
Los dúplex hijos contienen cada uno: Un dúplex hijo conserva las dos Cada cadena de los dúplex hijos
Una cadena parental + Una cadena cadenas parentales. El otro dúplex hijos contiene tanto ADN parental como
nueva contiene solo cadenas nuevas. ADN nuevo.

Replicación en bacterias
Técnicas utilizadas para el estudio de la replicación bacteriana:
1. Uso de mutantes sensibles a temperatura: Los mutantes no pueden sintetizar una u otra proteína requerida para la
replicación. Los mutantes sensibles a temperatura poseen deficiencias solo a una temperatura elevada (temperatura no permisiva,
temperatura restrictiva). Las bacterias mutantes crecen a temperatura permisiva, donde la proteína mutante funciona de manera
adecuada. Al aumentar la temperatura a un punto no permisivo, se observa el defecto consecuente al fallo de la proteína mutante.
2. Sistemas in vitro: La replicación puede estudiarse mediante componentes celulares purificados. Pueden eliminarse proteínas
específicas con sospecha de ser esenciales y observar las consecuencias; puede incubarse ADN con una gran variedad de proteínas
purificadas cuya actividad está bajo prueba.
Estas técnicas revelaron la actividad de al menos 30 proteínas diferentes requeridas para la replicación en E. coli. La
replicación en procariotas y eucariotas tiene lugar por mecanismos muy similares y la mayor parte de la información sobre la
replicación bacteriana se aplica también a las células eucariotas.

Horquillas de replicación y replicación bidireccional

El origen es un solo sitio específico del cromosoma bacteriano donde comienza la
replicación. En E. coli, el origen de replicación es una secuencia específica llamada
OriC, en la que diferentes proteínas se unen para iniciar el proceso de replicación.
Tras comenzar, la replicación se aleja del origen en ambas direcciones, es decir, de
forma bidireccional.
Las horquillas de replicación son puntos donde el par de segmentos replicados se
une con los segmentos no replicados. Cada horquilla de replicación corresponde al
sitio donde:
a) La doble hélice parental se separa.
b) Los nucleótidos se incorporan en las cadenas complementarias resintetizadas.
Las dos horquillas de replicación se mueven en direcciones opuestas hasta que
llegan a un punto a través del círculo desde el origen, donde la replicación
concluye. Las dos cadenas dúplex replicadas se separan una de la otra y, al final, se
segregan a las células hijas.
 Replicación del ADN y Reparación
EMP

Resumen de los acontecimientos principales de la replicación

Desenrollamiento del dúplex y separación de las cadenas

En la separación de las dos cadenas de una
Un cromosoma de E.
molécula de ADN (tanto circular bacteriano coli contiene
como lineal eucariota), la tensión que se alrededor de 400mil
vueltas y es
desarrolla dentro de la molécula no puede replicado en 40 min.
liberarse por rotación de toda la molécula.
Una molécula de ADN se sobrenrolla y adquiere un
superenrollamiento positivo. El movimiento de la horquilla de
replicación genera un superenrollamiento positivo en la porción no
replicada del ADN por delante de la horquilla.
En E. coli, una topoisomerasa de tipo II llamada girasa de ADN:
a. libera la tensión mecánica que se crea durante la replicación
b. se desplaza a lo largo del ADN por delante de la horquilla de
replicación y eliminan los superenrollamientos positivos.
c. realiza esta tarea al cortar las dos cadenas del dúplex de ADN, un segmento de ADN pasa a través de la rotura del dúplex y
entonces se ligan de nueva cuenta los cortes. Este proceso requiere ATP.
Propiedades de las ADN polimerasas
Las ADN polimerasas
(1) No pueden iniciar la formación de una cadena de ADN; más bien, solo pueden agregar nucleótidos en el extremo OH 3’
terminal de una cadena preexistente.
(2) Las ADN polimerasas sintetizan ADN en la dirección 5’→3’, moviéndose sobre el un molde en dirección 3’→5’.
(3) Para efectuar la reacción de polimerización requiere la presencia de ADN y los cuatro desoxirribonucleótidos trifosfato
(dATN, dGTP, dCTP, dTTP).
(4) Todas las ADN polimerasas, de procariotas y eucariotas, tienen dos requerimientos:
a. Una cadena de ADN molde para copiar.
b. Una cadena iniciadora en la cual los nucleótidos puedan agregarse. El iniciador es la cadena que provee el OH 3’.
 Replicación del ADN y Reparación
EMP

Las ADN polimerasas seleccionan nucleótidos para la incorporación basandose en su capacidad para formar pares en los
nucleótidos de la cadena molde.
De las bacterias debemos conocer dos ADN polimerasas:
ADN polimerasa I: También llamada “enzima de Kornberg”. Interviene en la reparación del ADN; elimina iniciadores de ARN y
los remplaza con ADN. Posee tres actividades enzimáticas (polimerasa de ADN, exonucleasa 5’→3’ y exonucleasa 3’→5’).
ADN polimerasa III: Principal enzima responsable de la replicación de ADN.
Una célula bacteriana típica contiene 300 a 400 moléculas de ADN polimerasa I, pero solo unas 10 copias de la ADN
polimerasa III.
Replicación semidiscontinua
En la replicación, ambas cadenas recién sintetizadas se ensamblan en dirección
5’→3’; las moléculas de polimerasa encargadas de la construcción de las dos
cadenas de ADN se mueven en dirección 3’→5’ a lo largo del molde y ambas
construyen una cadena que crece desde su extremo 5’ fosfato terminal. Por
consecuencia, una de las cadenas resintetizadas crece en dirección de la horquilla
de replicación donde las cadenas de ADN parental se separan, mientras la otra
cadena crece y se aleja de la horquilla.
La cadena adelantada o continua: Es la cadena que crece hacia la horquilla; se
construye mediante la adición continua de nucleótidos a su extremo 3’. Se sintetiza Fragmentos de Okazaki:
conforme avanza la horquilla de replicación. Pequeños segmentos de
La cadena retrasada o discontinua: Crece y se aleja de la horquilla de replicación; se ADN, sintetizados de
construye de manera discontinua, en fragmentos. El inicio de cada fragmento debe esperar a manera previa y ligados con
rapidez para elaborar
que las cadenas progenitoras se separen y expongan un fragmento. Una vez iniciada la
grandes piezas y formar la
síntesis del fragmento, cada fragmento crece y se aleja de la horquilla de replicación hacia el cadena retrasada.
extremo 5’ de un fragmento preformado, al que se une con posterioridad.
Ambas cadenas son polimerizadas por medio de la ADN polimerasa III
Como una cadena se sintetiza de modo
continuo y la otra de manera discontinua,
la replicación es semidiscontinua.
Los fragmentos cadena retrasada se
reconocen como fragmentos de Okazaki.
En las bacterias, mediante el marcado de
ADN con timidina tritiada por pocos
segundos, se encontró fragmentos
pequeños de ADN de unos 1 000 a 2 000
nucleótidos de longitud. Si las células son
incubadas por un minuto o dos, ya no se
observan fragmentos sino moléculas de
ADN mucho más grandes. Estos resultados indican que una porción del ADN se construye en pequeños segmentos
(fragmentos de Okazaki) que se ligan con rapidez a piezas mucho más grandes sintetizadas con anterioridad.
La enzima que une los fragmentos de Okazaki en una cadena continua se conoce como ligasa de ADN.

¿Cómo comienza la síntesis de los fragmentos de Okazaki?

**El inicio de la síntesis de los fragmentos es llevado a cabo por una ARN polimerasa denominada primasa.
**La primasa sintetiza una secuencia corta de ARN de aproximadamente 10 nucleótidos que funciona como iniciador.
¡La primasa es una ARN polimerasa!
**La cadena adelantada, cuya síntesis inicia en el origen de replicación, también la inicia una molécula de primasa.
**El fragmento corto de ARN lo sintetiza una primasa en:
- en el extremo 5’ de la cadena adelantada
- en el extremo 5’ de cada fragmento de Okazaki
**El ARN sintetizado por la primasa sirve como
el iniciador que se requiere para la síntesis de
ADN por una ADN polimerasa.
**Los iniciadores se ARN se eliminan después y
los espacios resultantes en la cadena se llenan y
entonces se ligan por medio de una ADN ligasa.
El empleo de un segmento corto de ARN que
puede degradarse elimina la inclusión de bases
erróneas al inicio durante el inicio de la
formación de una cadena.
 Replicación del ADN y Reparación
EMP

La maquinaria que opera en la horquilla de replicación

El desenrollamiento del dúplex y la separación de las cadenas requiere la ayuda de dos tipos de proteínas de unión al ADN:
Helicasa: Enzima que desenrolla ADN. SSB: Proteínas que se unen a ADN de cadena sencilla.
Las helicasas de ADN desenrollan al ADN dúplex en una reacción que requiere ATP para separar los puentes de hidrógeno
que mantienen juntas a las dos cadenas, lo que expone a los moldes de ADN de cadena sencilla. E. coli tiene por lo menos 12
helicasas, que usa en diferentes aspectos del metabolismo del ADN y ARN.
La helicasa DnaB (producto del gen dnaB) :
1. Sirve como maquinaria principal de desenrollamiento durante la replicación.
2. Consiste en seis subunidades estructurales que forman una proteína semejante a un
anillo que encierra a una sola cadena de ADN.
3. Se coloca primero en el origen de replicación con ayuda de la proteína DnaC.
4. Se desplaza en dirección 5’→3’ a lo largo del molde de la cadena retrasada.
El desenrollamiento del ADN por la helicasa se mantiene por la unión de las proteínas
SSB a las cadenas separadas de ADN.
Las proteínas SSB:
1. Unen de manera selectiva a las cadenas sencillas de ADN.
2. Conservan en forma extendida a las cadenas sencillas de ADN.
3. Previenen que se vuelvan a enrollar o se dañen.
En las bacterias, la primasa y la helicasa se relacionan de manera transitoria para formar
lo que se llama primosoma.
La helicasa: Se mueve a lo largo del molde de la cadena retrasada de forma procesiva.
La primasa: Se une de manera periódica a la helicasa y sintetiza los iniciadores de ARN que comienzan la formación
de los fragmentos de Okazaki.
Recordemos que tanto la cadena adelantada como la cadena retrasada son polimerizadas mediante la ADN polimerasa III.
**Se sugiere que la misma polimerasa III sintetiza fragmentos sucesivos en la cadena retrasada.
Para llevar esto a cabo, la ADN polimerasa III se recicla del sitio donde ha terminado un fragmento de Okazaki y pasa
al próximo sitio a lo largo de la cadena retrasada muy cerca de donde se desenrolla el ADN. Una vez en su nuevo
sitio, la ADN polimerasa III se une al OH 3’ del iniciador de ARN que se ha colocado por delante de una primasa y
comienza a incorporar desoxirribonucleótidos en el extremo del ARN corto.
Las dos polimerasas (la de la cadena adelantada y la de la
retrasada) se mueven en direcciones opuestas a lo largo de sus
respectivas cadenas y pueden actuar como si fueran parte del
mismo complejo de proteínas.
Las dos polimerasas pueden replicar ambas cadenas al formar un
asa en el ADN de la cadena retrasada sobre sí misma, lo que causa
que el molde de la cadena retrasada tenga la misma dirección que
la cadena adelantada. Las dos polimerasas pueden moverse juntas
como parte de un solo complejo de replicación, sin violar la regla
5’→3 para la síntesis de una cadena de ADN.
El modelo del trombón se refiere a la forma en la que se replica la
cadena retrasada: Una vez que las polimerasas ensamblan la
cadena retrasada, alcanzan el extremo 5’ del fragmento de
Okazaki sintetizado durante la vuelta previa; entonces, la plantilla
se libera y la polimerasa comienza a trabajar en el extremo 3’ del
próximo iniciador de ARN hacia la horquilla de replicación.
Estructura y funciones de las ADN polimerasas
La enzima que sintetiza las cadenas de ADN durante la replicación en E. coli es la ADN polimerasa III, la cual parte de una
maquinaria de replicación llamada holoenzima ADN polimerasa III o replisoma. Las polimerasas de ADN:
1. Tienen que permanecer vinculadas con el molde por largos tramos para sintetizar una cadena complementaria continua.
2. No se pueden fijar con tanta fuerza que les impida desplazarse de un nucleótido al siguiente.
Componentes de la holoenzima ADN polimerasa III: 10 distintas subunidades organizadas en diferentes componentes.
1. 2 moléculas ADN polimerasa III
2. 2 subunidades τ:
a. Mantienen a las polimerasas unidas en el complejo.
b. Unen helicasa.
3. Dos ó más pinzas beta:
a. Poseen forma de dona.
b. Permiten a la polimerasa relacionarse con el ADN.
c. Rodea al ADN y se desliza de manera libre a lo largo de él.
 Replicación del ADN y Reparación
EMP

d. La polimerasa relacionada a la pinza beta se puede mover de forma progresiva de un nucleótido al próximo sin
pasarse más allá del molde.
e. OJO: La polimerasa de la cadena adelantada permanece unida a una sola pinza deslizante durante la Replicación.
La polimerasa de la cadena retrasada, al completar la síntesis de un fragmento de Okazaki, se desengancha
de la pinza beta y se une a otra pinza beta, la cual se halla ensamblada a la unión entre el iniciador de ARN y
el ADN molde localizado corriente arriba, muy cerca de la horquilla de replicación.
4. Complejo de pinza o pinza gamma: Velocidad de mutación
a. Cierra cada una de las pinzas deslizantes en el ADN. espontánea en E. coli: 1
alteración nucleotídica por
b. El cargador unido a ATP se une a una unión iniciador-plantilla, manteniendo a la pinza cada 100 replicaciones.
beta abierta. Cuando el ADN pasa a través de la abertura en la pared de la pinza beta, el ATP del
cargador se hidroliza, con lo que se libera de la pinza; entonces ésta se cierra alrededor del ADN.
La ADN polimerasa I consiste en una sola subunidad, interviene de manera primaria en la reparación del ADN, también
elimina los iniciadores de ARN en el extremo 5’ de cada fragmento de Okazaki durante la replicación y los remplaza con
ADN.
Actividades de la exonucleasa de las ADN polimerasas
Todas las polimerasas bacterianas poseen actividad de exonucleasa. Las exonucleasas pueden dividirse en actividades de
exonucleasa 5’→3’ y 3’→5’, según la dirección en la que se degrada la cadena.
La ADN polimerasa I tiene tres actividades localizadas en el mismo polipéptido:
a. ADN polimerasa:
Rellena con desoxirribonucleótidos el espacio dejado por la eliminación de ribonucleótidos del iniciador.
Funciona a medida que progresa la remoción de los iniciadores por la exonucleasa 5’→3’.
b. Exonucleasa 5’→3’:
Puede degradar los dos tipos de ácido nucleico (ADN o ARN).
Remueve el segmento de ARN en el extremo 5’ de cada fragmento de Okazaki.
Función clave para remover los iniciadores de ARN.
c. Exonucleasa 3’→5’:
Es utilizada en la “lectura y corrección”.
Función clave en el mantenimiento de la presición de la síntesis de ADN.
Es correcto decir que la ADN polimerasa I posee tres enzimas en una.

Garantizar la alta fidelidad durante la replicación de ADN

**Un error durante la replicación del ADN crea una mutación permanente y la posible eliminación de la progenie celular.
**En E. coli, la probabilidad de que un nucleótido incorrecto se incorpore en el ADN durante la replicación y permanezca allí
-9
es menor de 10 (tan baja como 1 en mil millones de nucleótidos).
**en E. coli, esta frecuencia de error corresponde a una alteración nucleotídica por cada 100 ciclos de replicación.
**La incorporación de un nucleótido en particular en el extremo de una cadena naciente depende de que el nucleótido
entrante pueda formar una complementación correcta con el nucleótido de la cadena molde.
**Los apareamientos de bases A-T y G-C tienen una geometría muy parecida en tamaño y forma.
**Cualquier desviación de estos apareamientos resulta en una geometría diferente.
**En cada sitio a lo largo del molde, la ADN polimerasa debe discriminar entre los cuatro diferentes precursores potenciales
conforme se mueve dentro y fuera del sitio activo de la enzima.
1. Entre los cuatro posibles nucleótidos trifosfato que pueden entrar, solo uno con geometría apropiada puede encajar
perfectamente con el ADN molde y producir un apareamiento A-T o G-C que puede llenar el sitio activo de la enzima.
2. Si la enzima percibe el nucleótido entrante como correcto se observa un cambio conformacional (el dedo de la polimerasa
gira hacia la palma)
Si el apareamiento de bases recién formado presenta una geometría inadecuada, el sitio activo no puede adquirir la
conformación requerida para la catálisis y el nucleótido incorrecto no se incorpora.
Si el apareamiento de bases presenta una geometría adecuada, el nucleótido entrante se une de manera covalente
al extremo de la cadena en crecimiento.
**En ocasiones, la polimerasa incorpora un nucleótido incorrecto (un apareamiento de bases diferente de A-T o G-C).
5 6
**Un apareamiento incorrecto ocurre de manera aleatoria una vez por cada 10 a 10 nucleótidos incorporados, una
3 4 -9
frecuencia que es 10 a 10 veces mucho más grande que la frecuencia de mutación espontánea próxima a 10 .
¿Por qué la frecuencia de mutación es tan baja?
Cuando un nucleótido incorrecto es incorporado por la polimerasa, el extremo nuevo de la cadena tiene una tendencia
aumentada para separarse del molde y formar una cadena sencilla 3’ terminal. Cuando sucede esto, la enzima sufre un
cambio conformacional que dirige el extremo de la cadena recién sintetizada al sitio de exonucleasa 3’→5’ que remueve al
nucleótido erróneo.
Este trabajo de “lectura y corrección” es una de las más importantes de todas las actividades enzimáticas.
-7 -8
La actividad 3’→5’ remueve cerca de 99 de cada 100 bases mal apareadas, lo que incrementa la fidelidad a casi 10 a 10 .
Además, la bacteria posee un mecanismo llamado reparación del apareamiento erróneo que opera luego de la replicación y
corrige casi todas las uniones erróneas que escapan al paso de lectura y corrección.
 Replicación del ADN y Reparación
EMP

Velocidad de la replicación bacteriana: La replicación de un

cromosoma bacteriano completo en 40 min a 37 °C exige que cada
horquilla se mueva cerca de 1 000 nucleótidos/s, lo cual es
equivalente a la longitud de un fragmento de Okazaki.
El proceso completo de la síntesis de un fragmento de Okazaki:
formación del iniciador + elongación de ADN + lectura y corrección
+ eliminación de ARN + remplazo por ADN + ligación de cadenas,
ocurre en alrededor de 1 segundo.
Un nuevo ciclo de replicación puede iniciar antes de que el ciclo
previo se complete: las E. coli pueden duplicar su número en
alrededor de 20 minutos.

Replicación en células eucariotas

Un solo núcleo celular de unos 10μm de diámetro puede copiar todo el ADN en unas cuantas horas.
Técnicas utilizadas para el estudio de la replicación en eucariotas:
1. Uso de mutantes de levaduras: Los mutantes no pueden sintetizar una u otra proteína requerida para la replicación.
2. Análisis de la estructura y el mecanismo de acción de proteínas de duplicación de arqueas: En estos procariotas, la duplicación
requiere de proteínas homólogas a las de las células eucariotas pero menos complejas y más fáciles de estudiar.
3. Sistemas in vitro: La replicación puede estudiarse mediante componentes celulares purificados o con mezclas de proteínas
purificadas.

Inicio de la replicación en eucariotas

**Las células de los organismos superiores pueden tener más de mil veces el ADN que las bacterias tienen.
**Las polimerasas eucariotas incorporan nucleótidos en el ADN a velocidades mucho más lentas que las bacterianas.
**Para adecuar estas diferencias, las eucariotas replican su genoma en pequeños replicones.
**Cada replicón tiene su propio origen de replicación desde el cual avanza la horquilla de replicación en ambas direcciones.
**En celulas humanas la replicación comienza en alrededor de 10 000 a 100 000 diferentes orígenes de replicación.
**10 al 15% de los replicones se dedica activamente a la duplicación en cualquier momento dado durante la fase S del ciclo
de la vida.

Los replicones que se encuentran muy cerca entre sí en un cromosoma dado tienden a efectuar la replicación en forma
simultánea; estos replicones activos en un tiempo determinado durante un ciclo de síntesis de ADN tienden a ser activos en
un estado comparable en los ciclos subsecuentes.
En mamíferos, el tiempo de la replicación se correlaciona de manera regular con:
1. La actividad de los genes en la región
2. El estado de compactación.
La presencia de histonas acetiladas (relacionadas con la transcripción) es un factor común en la determinación de la
replicación temprana de loci génicos activos. Las regiones menos acetiladas, es decir, más compactadas, son las últimas en
replicarse.
La diferencia en el tiempo de replicación no se relaciona con la secuencia de ADN: La heterocromatina del cromosoma X en
células de hembra de mamífero se replica en la parte final de la fase S, en tanto que la eucromatina del cromosoma X activo
se replica en un estadio mucho más temprano.
Orígenes de replicación en levaduras: En secuencias que promueven la replicación, las secuencias ARS (autonomous
replicating sequences).
Las ARS contienen un elemento central, que consiste en una secuencia de 11 pb que funciona como sitio de unión para un
complejo multiproteínico, el ORC (complejo de reconocimiento del origen). Si la ARS muta y es incapaz de unirse a ORC, no es
posible el inicio de la duplicación.
Orígenes de replicación en vertebrados: El ADN de vertebrados no posee secuencias específicas en las que inicia la
replicación. La replicación inicia en sitios específicos a lo largo del ADN.
 Replicación del ADN y Reparación
EMP

Una molécula de ADN contiene muchos sitios donde la duplicación puede iniciar, pero solo un subconjunto de estos sitios se
usa en un momento dado en una célula dada. La elección de sitios de origen es regida por factores epigenéticos:
1. Posiciones de los nucleosomas
2. Tipos de modificaciones de histonas
3. Estado de metilación de ADN
4. Grado de superenrollamiento
5. Nivel de transcripción

La replicación se restringe a una por cada ciclo celular

Es esencial que cada porción del genoma se replique una vez, y solo una vez,
durante el ciclo celular. Existen mecanismos que evitan el reinicio de la replicación
en el sitio en que ya se ha duplicado. El inicio de la replicación en un origen en
particular requiere el paso del origen a través de diferentes estados. Ej: Replicación
en ARS de las levaduras.
1. Al origen de replicación se une ORC; se relaciona con el origen a través del ciclo
celular. ORC es una “pista de aterrizaje molecular”.
2. Unión de “factores permisivos” al ORC para ensamblar un complejo proteico-
ADN, llamado complejo de prerreplicación, que es permisivo para iniciar la
replicación.
Los factores permisivos son seis proteínas Mcm (Mcm2-Mcm7) que se cargan en el
origen de replicación en una fase tardía de la mitosis, o poco tiempo luego de ella,
donde permanecen inactivos hasta el inicio de la duplicación un tiempo más tarde.
3. Antes del inicio de la fase S, la activación de cinasas de proteínas clave lleva al
inicio de la replicación. Una de ellas es una cinasa dependiente de ciclina (Cdk),
cuya actividad es importante desde la fase S hasta la mitosis, la que suprime la
formación de nuevos complejos de prerreplicación. En consecuencia, cada origen
solo puede activarse 1 vez por ciclo celular.
El final de la actividad Cdk en la última parte de la mitosis posibilita el ensamble del
complejo de prerreplicación para iniciar el próximo ciclo celular.
4. Cuando la replicación comienza en la parte inicial de la fase S, las proteínas Mcm
se mueven con la horquilla de replicación y son esenciales para completar la
replicación de un replicón.
Las proteínas Mcm2-Mcm7 son capaces de relacionarse en un complejo semejante
a un anillo que posee actividad helicasa; el complejo Mcm podría ser la helicasa de
replicación de eucariotas.
5. En levaduras, las proteínas Mcm se desalojan de la cromatina y se movilizan
desde el núcleo. En mamíferos, las Mcm se desplazan del ADN pero permanecen
en el núcleo. Las proteínas Mcm no pueden volver a relacionarse con un origen de
repliicación ya “utilizado”.
La horquilla de replicación eucariota
Todos los sistemas de replicación requieren:
1. Helicasas 2. Proteínas de unión a cadena sencilla
3. Topoisomerasas 4. Primasa
5. ADN polimerasa 6. ADN ligasa
Las helicasas eucariotas que desenrollan al ADN durante la replicación no se han identificado con certidumbre. In vitro, los
investigadores combinan proteínas de replicación de mamífero con una helicasa vírica, el antígeno T del virus SV40 (¡Es la
que tenía una señal de localización nuclear en el capítulo 12!).
**El ADN eucariota también se sintetiza de manera semidiscontinua.
**Los fragmentos de Okazaki de la cadena retrasada son considerablemente más pequeños que en una bacteria, cercanos a
150 nucleótidos de longitud.
**La polimerasa que replica el ADN eucariota también está presente como un dímero, lo que sugiere que las cadenas
adelantada y retrasada se sintetizan de una manera coordinada por un solo complejo de replicación o replisoma.
Polimerasas de ADN eucariotas:
ADN polimerasa α (alfa): Muy relacionada a la primasa. ADN polimerasa α y primasa inician juntas la síntesis de cada fragmento de
Okazaki. La primasa sintetiza el iniciador corto de ARN, el cual se amplía por la adición de 20 dNTPs por la ADN polimerasa α.
ADN polimerasa β (beta): Funciona en la reparación de ADN.
ADN polimerasa γ (gamma): Replica el ADN mitocondrial.
ADN polimerasa δ: Principal enzima que sintetiza ADN (principalmente en la cadena adelantada). Requiere PCNA.
ADN polimerasa ε: Probablemente actúa en la replicación de la retrasada. Requiere PCNA.
ADN polimerasas eta, kappa, iota: Permiten a la célula replicar el ADN dañado.
 Replicación del ADN y Reparación
EMP

Comparación de enzimas que intervienen en la replicación bacteriana y eucariota.

En bacterias En eucariotas Función
DnaA Proteínas ORC Reconocimiento del origen de replicación.
Girasa Topoisomerasa I/II Libera supercolas positivas antes de la replicación.
DnaB Mcm Desenrolla el ADN dúplex parental.
DnaC ? Coloca helicasa sobre el ADN.
SSB RPA Mantiene el ADN en estado de cadena sencilla.
Complejo γ RFC Montan la pinza deslizante sobre el ADN.
Polimerasa III Polimerasa δ/ε Síntesis de cadena continua y Okazakis, capacidad de lectura y corrección.
Pinza β PCNA Pinza la polimerasa replicante sobre el ADN.
Primasa Primasa Sintetiza iniciadores de ARN.
 Polimerasa α Sintetiza oligonucleótidos cortos de ADN como parte de un iniciador ARN-ADN
ADN ligasa ADN ligasa Une fragmentos de Okazaki en una cadena continua
Polimerasa I FEN-1 Remueve iniciadores de ARN. Polimerasa I también llena los espacios con ADN.

La polimerasa delta es al parecer la enzima que sintetiza de modo primario al ADN durante la replicación. La polimerasa delta
(y la épsilon) requiere una pinza deslizante que mantiene unida la enzima al ADN y ello hace posible moverse de manera
continua a lo largo del molde.
La pinza deslizante de eucariotas, el PCNA, es muy similar en estructura y función a la pinza beta bacteriana. La pinza
cerradora que coloca al PCNA sobre el ADN se llama RFC y es análoga al complejo cerrador de pinza de la bacteria.
Después de sintetizar un iniciador de ADN-ARN, la polimerasa alfa es sustituida en la unión de plantilla e iniciador por el
complejo PCNA-ADNPδ, que completa la síntesis del fragmento de Okazaki.
Cuando la polimerasa δ alcanza el extremo 5’ del fragmento de Okazaki recién sintetizado, la polimerasa continúa a lo largo
de la plantilla de la cadena seguidora, desplazando al iniciador. El iniciador desplazado es cortado del ADN recién sintetizado
por la endonucleasa FEN-1 y una ADN ligasa sella la muesca resultante en el ADN.
Todas las polimerasas eucariotas construyen cadenas de ADN en dirección 5’→3’, ninguna es capaz de iniciar la síntesis de
ADN sin un iniciador.
Las polimerasas gamma, delta y épsilon poseen una exonucleasa 3’→5’, cuya actividad de lectura y corrección garantiza
que esta replicación ocurra con gran eficiencia.

Replicación y estructura nuclear

**La maquinaria de replicación está presente en estrecha conexión con la lámina nuclear y con la matriz nuclear.
**El ADN en replicación se mueve a través de un aparato de replicación inmóvil.
**La horquilla de replicación activa en un momento particular no se distribuye aleatoriamente a través del núcleo celular; en
realidad, se localiza en 50 a 250 sitios, conocidos como lugares de replicación.
**Cada lugar de replicación contiene alrededor de 40 horquillas de replicación que incorporan nucleótidos en las cadenas de
ADN de manera simultánea.
**El agrupamiento de asas de horquillas de replicación puede proveer un mecanismo para la coordinación de la replicación
de los replicones adyacentes en cromosomas individuales.

Estructura de la cromatina y replicación

El examen de una molécula de ADN en replicación por medio
de microscopía electrónica muestra nucleosomas en ambas
cadenas dúplex apenas formadas muy cercanas a la horquilla
de replicación, lo que indica que el ensamble de ADN en los
nucleosomas es un suceso muy rápido.
 Replicación del ADN y Reparación
EMP

Se sugiere que los tetrámeros (H3H4)2 presentes antes de la replicación permanecen intactos y se distribuyen de modo
aleatorio entre los dos dúplex hijos: los tetrámeros (H3H4)2 viejos y nuevos están entremezclados en cada molécula hija.
Los dímeros H2A/H2B de cada nucleosoma parental no permanecen juntos: los dímeros de un nucleosoma se separan el uno
del otro y parecen unirse azarosamente a los nuevos y viejos tetrámeros (H3H4) 2 ya presentes en los dúplex hijos.

Reparación del ADN

Es esencial que la información genética permanezca sin cambio conforme ésta pasa de una célula a la siguiente y de un
individuo a otro. Por otra parte, el ADN es una de las moléculas celulares más susceptibles a daño ambiental.
Estímulos dañinos y sus consecuencias sobre el ADN:
Radiación ionizante: El esqueleto de la molécula de ADN sufre con frecuencia roturas
Químicos (endógenos o exógenos): Las bases de una molécula de ADN pueden alterarse estructuralmente.
Radiación UV: Las pirimidinas adyacentes en las cadenas de ADN tienen tendencia a interactuar de manera
covalente y crear un dímero.
Absorción de energía térmica: Eliminación de bases de adenina y guanina de su unión al esqueleto del ADN.
Un mamífero de sangre caliente pierde alrededor de 10 000 bases por día; la falla en la reparación de estas lesiones produce
anomalías permanentes (mutaciones) en el ADN.
Mutación en células somáticas: Pueden interferir con la transcripción y la replicación, lo que causa la transformación maligna
de una célula o acelera el envejecimiento del organismo.
Mutación en células destinadas a ser gametos: La alteración puede pasar de una generación a la próxima.
Las células tienen una amplia variedad de sistemas de reparación que corrigen casi cualquier tipo de daño al cual una
molécula de ADN es vulnerable. Se estima que menos de un cambio de base en miles escapa a los sistemas de reparación en
una célula.
Tanto los eucariotas como los procariotas poseen una variedad de proteínas que recorren extensos tramos de ADN y buscan
alteraciones químicas o distorsiones sutiles del ADN dúplex.
El daño puede repararse:
De modo directo, por ejemplo, los seres humanos tienen enzimas que pueden reparar de
forma inmediata el daño producido por agentes alquilantes capaces de causar cáncer.
Posterior a la eliminación de la sección dañada de ADN: Casi todos los sistemas de
reparación requieren la eliminación selectiva del ADN dañado.
En el ADN dúplex, cada cadena contiene la información necesaria para la construcción de su contraparte. Si uno o más
nucleótidos se remueven de una cadena, la cadena complementaria puede servir como molde para la reconstrucción del
dúplex. La reparación de ADN requiere de máquinas que remodelan la cromatina: enzimas modificadoras de histonas y
complejos remodeladores de nucleosomas.
Mecanismos de Reparación de ADN
Mecanismo Lesiones reparadas Enzimas implicadas (en orden)
XPC (vía global) o CSB + ARNP (acoplada a transc)
1) Dímeros de pirimidinas
Reparación por escición de Helicasas XPB y XPD
2) Nucleótidos en los cuales distintos
nucleótidos (NER) Endonucleasas XPG y XPF-ERCC1
grupos químicos se unen
Ligasa I
Glicosidasa
1) Nucleótidos alterados por
Reparación por escición de Endonucleasa AP + Fosfodiesterasa de ADNPβ
reactivos químicos presentes en
bases (BER) ADN polimerasa β
dieta o metabolismo
Ligasa III
1) Bases mal unidas incorporadas por
Reparación de la unión
la ADN polimerasa, que escaparon a
deficiente (MMR)
la lectura y corrección
Reparación de rotura de doble 1) Radiación ionizante Proteína Ku
cadena (DSB) por unión de 2) Químicos (bleomicina) ADN-PKcs
extremos no homólogos (NHEJ) 3) Radicales libres Ligasa IV

Reparación de la escición nucleotídica (NER)

Remueve dímeros de pirimidina y nucleótidos en los cuales distintos grupos químicos se unen. Opera por un mecanismo de
corte y pegado; se conocen dos vías de NER:
1. Vía acoplada a la transcripción: Se repara de manera preferencial a las cadenas de ADN molde de los genes que se
transcriben de forma activa. La reparación ocurre al parecer a medida que el ADN se transcribe. La presencia de la lesión
puede señalarla una ARN polimerasa atorada.
Esta vía garantiza que los genes de gran importancia para la célula, que son los que ella transcribe de forma activa, reciban la
más alta prioridad en la “lista de reparación”.
2. Vía genómica global: Mecanismo lento y menos eficiente, corrige las cadenas de ADN en el resto del genoma.
 Replicación del ADN y Reparación
EMP

Pasos en la reparación de la lesión por escición de nucleótidos

1. Reconocimiento del daño: Proteína XPC en la vía global; Proteína CSB y ARN polimerasa en la vía acoplada a la
transcripción.
2. Separación de las cadenas del dúplex: XPB y XPD, son helicasas que forman parte de TFIIH. TFIIH participa en el inicio de la
transcripción y es un nexo entre la transcripción y la reparación.
3. Corte de la cadena dañada en ambos lados de la lesión: La endonucleasa XPG corta en el extremo 3’. La endonucleasa
XPF-ERCC1 corta en el extremo 5’.
4. Eliminación del segmento de ADN dañado
5. Reparación del ADN por medio de la síntesis de ADN: Por la ADN polimerasa delta o por la ADN polimerasa épsilon.
6. Ligación: Mediante la ligasa de ADN I.

Reparación de la escición de bases

Opera para eliminar los nucleótidos alterados generados por reactivos químicos de la dieta o del metabolismo.
Bases alteradas en ADN:
Uracilo: Formado por remoción hidrolítica del grupo amino de la citosina.
8-oxo-guanina: Secundaria al daño de radicales libres del oxigeno
3-metiladenina: Generada por transferencia de un grupo metilo a un donante.
Pasos en la reparación de la lesión por escición de bases
1. Reconocimiento de la alteración: Glicosidasa de ADN. La glicosidasa reconoce la alteración y remueve la base nitrogenada
por medio del corte del enlace glucosídico base – desoxirribosa. Las glicosidasas son más o menos específicas para cada tipo
de base alterada. La glicosidasa elimina una purina o una pirimidina y deja un remanente “decapitado”.
2. Eliminación del remanente decapitado: Endonucleasa AP corta el esqueleto de ADN, la actividad fosfodiesterasa de la
ADN polimerasa beta remueve el fosfato-azúcar remanente.
3. Inserción del nucleótido complementario a la cadena no dañada: Por la actividad polimerasa de la ADN polimerasa beta.
4. Ligación: Por la ADN ligasa III.

Reparación de la unión deficiente

Es la eliminación de bases mal unidas incorporadas por la ADN polimerasa que escapan de la lectura y corrección. El
apareamiento incorrecto de bases causa una distorsión en la geometría de la doble hélice, lo que es reconocido por la enzima
de reparación. En bacterias, la cadena progenitora (que posee el nucleótido correcto) es reconocida por la presencia de
 Replicación del ADN y Reparación
EMP

grupos metilo. La cadena parental tiene grupos metilo unidos en ciertos residuos de adenosina, la cadena sintetizada de novo
no se metila por un periodo después de la replicación.
El sistema de reparación vigila al ADN antes de este paso de metilación. Cuando un apareamiento erróneo se reconoce, la
enzima siempre remueve y remplaza los nucleótidos de la cadena no metilada, lo que garantiza que esta restaure el par de
bases original.
En eucariotas no se utiliza la metilación como sistema de reparación de apareamiento erróneo; el mecanismo de
reconocimiento de la cadena neosintetizada está indefinido.

Reparación de la rotura de doble cadena

La rotura de doble cadena puede ser causada por:
1. Radiación ionizante: rayos gamma, rayos X y partículas liberadas por átomos radiactivos.
2. Ciertos químicos: bleomicina, un quimioterápico.
3. Radicales libres generados por el metabolismo normal de la célula.
4. Daño al ADN durante la replicación.
La unión de extremos no homólogos (NHEJ) es la vía principal de reparación de las
roturas de doble cadena. Otra vía de reparación de la rotura de doble cadena
incluye la recombinación genética y es más compleja. Los defectos en ambas vías
se vinculan con incremento de la susceptibilidad al cáncer.
Pasos en la reparación de la lesión por rotura de doble cadena mediante unión de
extremos no homólogos (NHEJ)
1. Detección de la lesión: Proteína Ku, se une a los extremos rotos del ADN y
recluta a PKcs.
2. Fosforilación de sustratos por PKcs: PKcs es la subunidad catalítica de una
cinasa dependiente de ADN. Los sustratos de PKcs mantienen juntos los extremos
del ADN roto.
3. Unión de los extremos: Ligasa IV. Regenera un ADN dúplex intacto.

Entre la Replicación y la Reparación

En ocasiones, una lesión en el ADN no se repara al momento que este segmento se somete a replicación. En ciertas
ocasiones, la maquinaria de replicación llega al sitio dañado de la cadena molde y permanece allí. Cuando esto sucede, algún
tipo de señal emitida lleva al reclutamiento de una polimerasa especializada que es capaz de saltar la lesión.
Ejemplo: Cuando la ADN polimerasa delta alcanza un obstáculo, como un dímero de timina, la enzima se remplaza
temporalmente por una ADN polimerasa ƞ, una polimerasa especializada capaz de insertar dos residuos de A en la cadena
neosintetizada frente a los dos residuos de T que están unidos de manera covalente. Una vez que este “salto del daño” se
realiza, la célula regresa a la ADN polimerasa delta y la replicación continúa sin mostrar signos de que un problema serio ha
sido resuelto. La ADN polimerasa ƞ:
1. Es una ADN polimerasa especializada en incorporar nucleótidos de tipos opuestos en las lesiones del ADN molde.
2. Están capacitadas en la síntesis translesional.
3. Tienen una capacidad única para incorporar nucleótidos que deberían estar pareados con la versión del molde no dañada.
4. No son procesivas, agregan solo unos cuantos nucleótidos.
5. No poseen la capacidad de lectura y corrección.
6. Es mucho más común que incorporen un nucleótido equivocado que las polimerasas comunes.
Procariotas Eucariotas
Replicación mucho más rápida Replicación mucho más lenta
Menor cantidad de ADN Mayor cantidad de ADN
Inicio de la replicación en un solo origen Inicio de la replicación en varios orígenes (10 000 a 100 000
en células humanas)
Fragmentos de Okazaki de 1 000 a 2 000 nucleótidos Fragmentos de Okazaki de 150 nucleótidos
Fragmentos de Okazaki iniciados por primasa Fragmentos de Okazaki iniciados por primasa y ADNPα
Iniciadores de ARN Iniciadores de ARN-ADN
 Reproducción celular: Mitosis y Meiosis
EMP

REPRODUCCIÓN CELULAR
De acuerdo con la tercera doctrina de la teoría celular, las células nuevas solo se originan de otras células vivas. El proceso
por el que esto ocurre se llama división celular. La división celular ocurre en todos los organismos, aunque es llevada a cabo
de manera muy diferente en procariotas y eucariotas. En este momento detallaremos la versión eucariota en dos tipos
diferentes de división celular:
1. La mitosis: conduce a la producción de células con características genéticas idénticas a las de su antecesora. Sirve
de base para producir células nuevas.
2. La meiosis: Se producen células con la mitad del contenido genético de la célula madre. Es la base para producir
nuevos organismos con reproducción sexual
Ciclo Celular
El ciclo celular representa las etapas a través de las que una célula pasa de una división celular a otra. Este ciclo puede
dividirse en dos fases principales con base en las actividades celulares visibles al microscopio óptico:
1. Interfase: Período entre las divisiones celulares. Intervalo donde la célula crece y efectúa diversas actividades metabólicas.
Puede extenderse por días, semanas o más tiempo según el tipo celular y las condiciones del medio.
2. Fase M: Incluye la mitosis, que es la separación de los cromosomas duplicados en dos núcleos y la citocinesis, en la que
toda la célula se divide en dos células hijas. Suele durar alrededor de 1 hora en las células de mamíferos.
La fase M es el período en el que el contenido de la célula se divide. La fase M incluye los fenómenos sucesivos de la mitosis y
la citocinesis:
Mitosis: Es el proceso de división nuclear; los cromosomas duplicados se separan entre sí y producen dos núcleos,
cada uno con una copia completa de todos los cromosomas presentes en la célula original.
Citocinesis: Es la división física de la célula para generar dos células hijas. El citoplasma se divide en dos paquetes
celulares.
Durante la interfase ocurren preparativos para la mitosis próxima; esta interfase puede dividirse en tres fases con base en el
momento de la síntesis de ADN:
G1: Es el periodo siguiente a la mitosis y previo a la síntesis de ADN. La célula crece y mantiene su metabolismo
normal. Los organelos se duplican.
S: Ocurre la replicación del ADN. Se sintetizan también las histonas adicionales que se necesitarán cuando la célula
duplique el número de nucleosomas en sus cromosomas.
G2: Periodo definido entre el final de la fase S y el principio de la fase M. La célula crece y se prepara para la mitosis.

Ciclos celulares in vivo

La capacidad para crecer y dividirse es una de las propiedades que distingue a
los diversos tipos de células dentro de una planta o un animal. Se reconocen
tres categorías celulares amplias:
1. Células muy especializadas que carecen de la capacidad para dividirse: Una
vez que estas células se diferencian, permanecen en ese estado hasta que
mueren. Ej: neuronas, células musculares y eritrocitos.
2. Células que no se dividen normalmente, pero lo hacen en respuesta al
estímulo apropiado: Estas células pueden inducirse para iniciar la síntesis de
ADN y dividirse. Ej. Hepatocitos (luego de una extirpación parcial del hígado) y
linfocitos (luego de interaccionar con algún antígeno apropiado).
3. Células con un nivel alto de actividad mitótica en condiciones normales: En
tejidos con renovación contínua, con formación constante de nuevas células
por división celular. Ej. espermatogonias, células primordiales hemopoyéticas,
células basales de muchos epitelios, células del meristemo apical (en
vegetales).
La duración de los ciclos celulares varía desde 30 minutos en un embrión de
rana cuyas células carecen de G1 y G2, hasta varios meses en los tejidos de
crecimiento lento, como el hígado de los mamíferos.
Las células que dejan de dividirse, ya sea de forma temporal o permanente, se
encuentran casi sin excepción en una etapa previa al inicio de la síntesis de
ADN. Se dice que las células que se detienen en tal estado (la mayor parte de
las células del cuerpo) se encuentran en el estado G0 para distinguirlas de las
células en G1 típica que pronto podrían entrar en la fase S. Una célula debe
generar una señal interna para pasar de G0 o G1 a la fase S; una vez que la
señal para iniciar la replicación se produce, la célula siempre completa la
ronda de síntesis de ADN y continúa a través de la mitosis.

Control del ciclo celular

El citoplasma de las células contiene factores reguladores que afectan las actividades del ciclo celular. Esto se ve en
diferentes experimentos de fusión celular:
 Reproducción celular: Mitosis y Meiosis
EMP
Fusión de células 1: Célula en fase G1 + célula en fase S
El núcleo de la célula híbrida proveniente de la célula en G1 se activa con el
citoplasma de fase S para iniciar la replicación.
Conclusión: El citoplasma de una célula en replicación contiene factores capaces
de difundir que estimulan el inicio de la síntesis de ADN en los núcleos G1.
Fusión de células 2: Célula en fase G2 + célula en fase S
El núcleo en fase G2 no inicia otra ronda de síntesis de ADN.
Conclusión: Los núcleos G2 que ya replicaron ADN no pueden responder más a
los factores de iniciación presentes en el citoplasma de la célula en fase S.
Fusión de células 3: Célula en interfase + célula en fase M
El núcleo interfásico siempre presenta compactación cromosómica prematura.
Célula en G1 + Célula en fase M: Los cromosomas G1 se compactan
prematuramente para formar un conjunto de cromosomas alargados.
Célula en S + Célula en fase M: Conduce a la formación de cromosomas
“pulverizados” debido a que el ADN en replicación es muy sensible al
daño.
Célula en G2 + Célula en fase M: Los cromosomas G2 compactados se
ven duplicados.
El conjunto de resultados de estos experimentos sugirió que las transiciones de G1 a S y de G2 a M están bajo un control
positivo, es decir, ambos cambios se debían a la presencia de un agente estimulante.

Función de las proteíncinasas

En oocitos y embriones jóvenes de ranas e invertebrados, el ingreso de la célula a la fase M se inicia por una proteína llamada
factor promotor de la maduración (MPF). El MPF tiene dos subunidades:
1. Una cinasa: Subunidad que transfiere fosfatos del ATP a residuos de Ser y Thr de sustratos proteicos específicos.
2. Una ciclina: Subunidad reguladora. Su concentración se eleva y disminuye con un patrón predecible en cada ciclo celular.
Cuando la concentración de ciclina es baja, la cinasa carece de la subunidad ciclina y permanece inactiva.
Cuando la concentración de ciclina es elevada, la cinasa se activa, lo que hace que la célula ingrese a la fase M.
Conclusiones: a. La progresión a la mitosis depende de una enzima cuya única actividad es fosforilar otras proteínas.
b. La actividad de esta enzima está controlada por una subunidad cuya concentración varía de una etapa a
otra del ciclo celular.
Las enzimas similares al MPF se denominan cinasas dependientes de ciclina o Cdk. Las Cdk no solo participan en la fase M,
sino que son agentes clave que dirigen las actividades durante todo el ciclo celular.
La progresión por de una célula eucariota por el ciclo celular está
regulada en distintas etapas. Las etapas de la regulación donde la
célula se ocupa del principio fenómenos cruciales ocurren:
1. Cerca del final de G1: La célula se ocupa del inicio de la
replicación.
2. Cerca del final de G2: La célula se ocupa del principio de la
mitosis.
En células de levadura con fisión, la Cdk es denominada cdc2 y se
encarga del paso por ambos puntos de compromiso, aunque en
conjunto con diferentes ciclinas. En estas levaduras con fisión:
El paso de G1 a S: Es el primer punto de transición y se denomina START (en
mamíferos se denomina punto de restricción). Ocurre antes del final de G1. Una vez
que la célula ha pasado START, está destinada en forma irrevocable a replicar su ADN
y, al final, completar el ciclo celular.
El paso por START requiere la activación de cdc2 por una o más ciclinas G1, cuyos
niveles se elevan al final de G1. La activación de cdc2 por estas ciclinas conduce al
inicio de la replicación en sitios en los que los complejos de replicación se
ensamblaron antes.
El paso de G2 a M: Requiere la activación de cdc2 por las ciclinas mitóticas. Las Cdk
con ciclinas mitóticas fosforilan sustratos necesarios para que la célula inicie la
mitosis.
Entre los sustratos se incluyen proteínas necesarias para los cambios en la
organización de: a. Cromosomas y b. Citoesqueleto.
Las células establecen un tercer compromiso durante la parte media de la mitosis
que determina si completan la división celular y reingresan a G1 del siguiente ciclo. La salida de la mitosis con ingreso a G1
depende de un descenso rápido de la actividad de Cdk, que es consecuencia de una caída en la concentración de las ciclinas
mitóticas.
Las actividades de las cinasas dependientes de ciclinas están reguladas por diversos factores que operan en combinación.
Estos son:
1. Unión de ciclina: Cuando la ciclina está presente en la célula, se une con la subunidad catalítica de Cdk, lo que permite qye
Cdk fosforile sus sustratos proteicos.
 Reproducción celular: Mitosis y Meiosis
EMP
2. Fosforilación de Cdk: El nivel de ciclinas mitóticas se eleva durante las fases S y G2, Las ciclinas mitóticas presentes en la
levadura en ese periodo se unen con Cdk para gormar un complejo ciclina-Cdk, pero el complejo muestra poca actividad
de cinasa. Más adelante, en una etapa tardía de G2, el complejo ciclina-Cdk se activa y la mitosis se desencadena. Esto se
debe a la actividad de otras tres enzimas reguladoras: dos cinasas y una fosfatasa.
Cinasa CAK: Cinasa activadora de Cdk, durante G2 fosforila un residuo específico de treonina de la Cdk. Esta fosforilación
es necesaria, pero no suficiente, para que la Cdk se active.
Cinasa Wee1: Cinasa inhibidora de Cdk, durante G2 fosforila un residuo de tirosina. Si esta tirosina es fosforilada, la Cdk
permanece inactiva sin importar el estado de fosforilación por CAK. El efecto de Wee1 rebasa el efecto de CAK, lo que
mantiene a la Cdk inactiva.
Fosfatasa Cdc25: Retira el fosfato inhibidor colocado por Wee1 al final de G2. Esta desfosforilación cambia las moléculas
de ciclina-Cdk a su estado activo, lo que impulsa a las levaduras hacia la meiosis.
El equilibrio entre las actividades de Wee1 y Cdc25 determina si una célula permanece en G2 o avanza hacia la mitosis.
Estas vías pueden detener a la célula para que no inicie la mitosis bajo condiciones que conducirían a una división celular
anormal.
3. Inhibidores de Cdk: En levaduras con gemación, una proteína llamada Sic1 actúa como inhibidor de la Cdk durante la G1.
La degradación de Sic1 permite que los complejos ciclina-Cdk inicien la replicación. En humanos, p21 y p27 son dos de los
por lo menos 7 inhibidores de Cdk conocidos.
4. Proteolisis controlada: Las células regulan la concentración de ciclinas y otras proteínas mediante el ajuste de tanto la
síntesis como la velocidad de destrucción de la molécula en diferentes fases del ciclo celular. La degradación se logra por
la vía de la ubiquitina-proteosoma.
La degradación es un proceso irreversible que ayuda a impulsar el ciclo celular en un solo sentido.
La regulación del ciclo celular requiere dos clases de complejos multiunitarios que funcionan como ligasas de ubiquitina:
Complejo SCF Complejo APC
Activo desde el final de G1 hasta mitosis temprana. Actúa en la mitosis.
Media la destrucción de ciclinas G1 e inhibidores Degrada ciclinas mitóticas.
de Cdk.
5. Localización subcelular: Es un fenómeno dinámico en el que los reguladores del ciclo celular se mueven a distintos
compartimentos en diferentes etapas. P. ej: una ciclina mitótica de animales, la ciclina B1, se acumula en el núcleo justo
antes del inicio de la mitosis. La acumulación nuclear de ciclina B1 se facilita por la fosforilación de residuos de serina que
se encuentran en su señal de exportación nuclear. Esto bloquea la exportación posterior de la ciclina hacia el citoplasma.

Ciclo celular en mamíferos

Las oleadas sucesivas de síntesis y degradación de las distintas ciclinas
desempeñan una función clave en la conducción de las células de
mamíferos de una etapa a la siguiente. A diferencia de las levaduras, que
tienen una sola Cdk, las células de mamíferos producen varias versiones
distintas de esta proteincinasa.
El emparejamiento entre ciclinas individuales y las Cdk es muy específico y
solo se encuentran ciertas combinaciones. Ejemplos:
Cdk4 / Cdk6 + Ciclina D: En mitad de G1. Fosforilan pRb.
Cdk2 + Ciclina E: Impulsa a la célula hacia fase S.
Cdk2 + Ciclina A: Junto con Cdk2 + Ciclina E, impulsa la transición G1 a S.
Cdk1 + Ciclina A: Inicia la transición G2 a M junto con Cdk1 + Ciclina B.
Cdk1 + Ciclina B: Durante G2, impide que la célula replique de nuevo el
ADN; conduce a la célula hacia la mitosis.
La cinasa Cdk1 de mamíferos es equivalente a la cdc2 de las levaduras con fisión.
En ratones con eliminación génica que carecen de un gen funcional para una de estas proteínas se observa que:
Ratones incapaces de sintetizar Cdk1 o ciclina B: No sobreviven. Estos genes son esencials para un ciclo celular normal.
Ratones incapaces de sintetizar ciclina D1: Ratones más pequeños que los animales control por reducción de la intensidad
de la división celular en todo el cuerpo. También falta de proliferación durante el desarrollo de la retina.
Ratones incapaces de sintetizar Cdk2: Desarrollo normal, pero defectos específicos durante la meiosis.

Puntos de revisión, inhibidores de cinasa y respuestas celulares

La ataxia telangiectasia es un transtorno hereditario recesivo; los pacientes con esta
enfermedad son en extremo sensibles a la radiación ionizante. Las células de estos
pacientes carecen de una respuesta protectora crucial que se observa en células
normales. El gen causante de la ataxia telangiectasia es el gen ATM.
Cuando las células normales se someten a tratamientos que dañan el ADN, como
radiación ionizante o fármacos que alteran el ADN, su avance en el ciclo celular se detiene
mientras el daño se repara. Por ejemplo:
1. Si una célula recibe radiación durante la fase G1, la progresión a la fase S se retrasa.
2. Las células radiadas en fase S posponen la síntesis adicional de ADN.
3. Las células afectadas en G2 retrasan su ingreso a la mitosis.
 Reproducción celular: Mitosis y Meiosis
EMP
Los puntos de revisión o puntos de control están dados por mecanismos que detienen el progreso del ciclo celular si:
a. Cualquier ADN cromosómico se daña.
b. Procesos críticos, como la replicación o el alineamiento de cromosomas durante la mitosis, no se completan apropiada#
Los puntos de revisión aseguran que cada uno de los fenómenos del ciclo celular ocurran en forma precisa y en orden
apropiado.
Muchas de las proteínas de los puntos de revisión no tienen ninguna función en un ciclo
celular normal y solo actúan cuando alguna anormalidad aparece.
Los puntos de revisión se activan durante todo el ciclo celular mediante sensores que
reconoce el daño del ADN y las anormalidades celulares. Si un sensor detecta la presencia
de un defecto, inicia una respuesta que detiene en el ciclo de forma transitoria. Entonces,
la célula puede emplear ese retraso para reparar el daño o corregir el defecto en lugar de
continuar a la etapa siguiente. Las células de los mamíferos que se dividen con daños
genéticos corren riesgo de transformarse malignamente. Si el ADN está dañado más de lo
que puede repararse, es posible que el mecanismo de revisión transmita una señal que
conduce a la muerte de la célula.
Estudiaremos dos proteíncinasas encargadas de la detención del ciclo celular: ATM y ATR. Ambas forman parte de sendos
complejos multiproteicos capaces de unirse con el ADN dañado. Una vez unidas, ATM y ATR pueden fosforilar gran variedad
de proteínas que participan en los puntos de revisión del ciclo celular y en la reparación del ADN.
ATM ATR
Se activa con roturas en la cadena Se activa con la radiación UV o con
doble del ADN replicación incompleta
Detiene al ciclo celular en G1 Detiene al ciclo celular en G2
1. ATR activada y activa a la cinasa Chk1
1. ATM activada fosforila y activa a
2. Chk1 fosforila a Cdc25 en un residuo
la cinasa Chk2
de serina específico
2. Chk2 fosforila a p53, un factor
3. Cdc25 fosforilada se encuentra
de transcripción
desactivada
3. p53 conduce a la transcripción y
4. Cdc25 fosforilada se une con una
traducción de p21
proteína adaptadora en el citoplasma y
4. p21 inhibe a Cdk
no puede importarse de vuelta al núcleo
La molécula p21 es uno de los por lo menos 7 inhibidores conocidos de Cdk. Otro
inhibidor conocido es p27, que inhibe a Ciclina A + Cdk2. En muchas células, p27
debe fosforilarse y luego degradarse antes de de que pueda avanzar a la fase S.
Los inhibidores de Cdk, como p21 y p27, participan en la diferenciación celular:
1. Justo antes que las células comiencen a diferenciarse (células musculares,
hepáticas, sanguíneas, etc), por lo general se retiran del ciclo celular y dejan de
dividirse.
2. Los inhibidores de Cdk permiten o inducen en forma directa el retiro del ciclo
celular.

Fase M: Mitosis y Citocinesis

La mitosis es un proceso de división nuclear en el que las moléculas replicadas de ADN de cada cromosoma se reparten con
exactitud en dos núcleos. La mitosis suele acompañarse de la citocinesis, un proceso por el que una célula en división se
separa en dos, con lo que el citoplasma se divide en dos paquetes celulares. Las dos células hijas resultantes de la mitosis y la
citocinesis tienen un contenido genético idéntico entre sí y al de la célula madre de la que provienen.

MITOSIS
 La mitosis mantiene el número de cromosomas y genera nuevas células para el crecimiento y el mantenimiento de un
organismo.
 La mitosis puede ocurrir en células haploides o diploides.
 Durante la mitosis, la célula dedica toda su energía a una sola actividad: la separación cromosómica.
 Durante la mitosis, la mayoría de las actividades metabólicas de la célula, como la transcripción y la traducción, se detienen.
 Durante la mitosis, la célula entra en una falta relativa de respuesta a los estímulos externos.
 La mitosis se divide en cinco etapas: Profase → Prometafase → Metafase → Anafase → Telofase. Cada una se caracteriza
por una serie particular de sucesos.

Profase
La célula que ingresa a la mitosis posee como características:
Pérdida de la forma y polaridad: la célula se vuelve esférica
Pérdida de contacto con las células vecinas: las uniones intercelulares se desactivan temporalmente
Estos fenómenos se explican por el desensamble del citoesqueleto que ocurre durante la mitosis.
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La profase mitótica la etapa donde los cromosomas duplicados se preparan para la separación y la maquinaria mitótica se
ensambla. La profase incluye tres sucesos:
1. Formación del cromosoma mitótico.
2. Formación del huso mitótico.
3. Disolución de la envoltura nuclear y partición de organelas citoplásmicas.

Formación del cromosoma mitótico

*Cada uno de los cromosomas mitóticos se compone de dos cromátidas hermanas, imagen en el espejo una de la otra: son el
producto de la replicación en la interfase previa.
*Antes de separar sus cromosomas, una célula los convierte en estructuras mucho más cortas y gruesas por un proceso
notable de compactación de los cromosomas o condensación cromosómica.
*La condensación cromosómica ocurre en etapas iniciales de la profase.
*La cromatina en interfase se organiza en fibras de 30nm de diámetro. Los cromosomas mitóticos están compuestos por
fibras similares; la compactación no altera la naturaleza de la fibra de cromatina, sino la manera en que la fibra se empaca.
*Las asas de ADN se unen por su base con las proteínas no histonas que conforman el andamiaje cromosómico (como
topoisomerasa II y condensinas).
Condensinas: Complejos de múltiples proteínas.
1. En presencia de topoisomerasa y ATP, condensina se une al ADN y lo enrolla en rizos superplegados positivamente.
2. La compactación de los cromosomas durante la profase requiere topoisomerasa II.
3. Topoisomerasa II y condensina están presentes como parte del andamiaje proteico del cromosoma.
4. La condensina es activada al inicio de la mitosis mediante fosforilación de sus subunidades por la ciclina – Cdk.
5. La estructura subunitaria de una molécula de condensina tiene forma de V.
6. La molécula de cohesina se compone de dos subunidades SMC y tres subunidades no SMC.
7. La eliminación experimental de condensinas impide la compactación de los cromosomas.
Cohesinas: Complejo de proteínas con el que se relaciona cada cromosoma interfásico antes de la replicación.
1. Después de la replicación, la cohesina funciona como puente que sostiene las dos cromátidas hermanas juntas
durante G2 y hacia la mitosis, en la que al final se separan.
2. La cohesina adopta la configuración circular con un pestillo en un extremo que puede abrirse y cerrarse en
respuesta de la unión o hidrólisis de ATP.
3. El anillo de cohesina rodea dos moléculas de ADN hermanas (mantiene unidas a las cromátidas hermanas).
4. La cohesina se libera de los cromosomas en dos etapas distintas:
A. En profase: La mayor parte de las cohesinas se separa de los brazos de los cromosomas conforme se compactan
durante la profase. La disociación es inducida por la fosforilación de subunidades de cohesina a cargo de dos cinasas
mitóticas, Polo y Aurora B. Como resultado, las cromátidas de cada cromosoma mitótico se mantienen
relativamente holgadas a lo largo de sus brazos extendidos, pero mucho más apretadas en sus centrómeros.
B. En anafase: Se piensa que la cohesina permanece en los centrómeros debido a la presencia ahí de una fosfatasa
que elimina cualquier grupo fosfato agregado a la proteína por las cinasas.
La liberación de la cohesina desde los centrómeros normalmente se retrasa hasta la anafase. Si la fosfatasa se
desactiva experimentalmente, las cromátidas hermanas se separan entre sí de manera prematura antes de la
anafase.
Comparación entre condensinas y cohesinas
Condensinas Cohesinas
Intervienen en la condensación de la cromatina Funcionan como puentes entre las cromátidas hermanas
Presente en el andamiaje proteico del cromosoma Presentes en el componente lateral del complejo
sinaptonémico
Es activada al inicio de la mitosis (profase) Ejerce su función después de la replicación
Estructura en forma de V Estructura en forma circular

Centrómeros y cinetocoros:
La marca distintiva más notable de un cromosoma mitótico es la constricción primaria, que marca la posición del centrómero.
El centrómero es la residencia de secuencias de ADN muy repetidas que sirven como sitios de unión para proteínas
específicas. En la constricción primaria se aloja una estructura proteinácea similar a un botón, el cinetocoro, en la superficie
externa del centrómero de cada cromátida.
Cada cromátida consta de su propio cinetocoro; es decir, un cromosoma se une a dos cinetocoros (uno de cada cromátida).
El cinetocoro se ensambla en el centrómero durante la profase. A la microscopía electrónica presenta una estructura
trilaminar. Los microtúbulos del huso terminan en el cinetocoro por su extremo más.
Placas del cinetocoro:
Placa interna: contiene proteínas unidas con la heterocromatina centromérica del cromosoma.
Placa externa: Relacionada con una corona fibrosa, que une las proteínas motoras que participan en el movimiento
cromosómico. Ejs de proteínas motoras:
*Dineína citoplásmica (se mueve hacia el menos)
*CENP-E (se mueve hacia el más); despolimerasa (se une al extremo +)
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El cinetocoro funciona como:
1. Sitio de unión del cromosoma a los microtúbulos dinámicos del huso mitótico.
2. Residencia de varias proteínas motoras participantes en la motilidad de los cromosomas.
3. Componente clave en la vía de señalización de un punto de revisión mitótico importante.

Formación del huso mitótico

Conforme la célula pasa de G2 a M, los microtúbulos del citoesqueleto se desensamblan con rapidez en preparación para su
reensamble como componentes del huso mitótico.
Se cree que el desensamble rápido del citoesqueleto de la interfase se produce por la desactivación de las proteínas que
estabilizan a los microtúbulos (MAP) y por la activación de proteínas que disminuyen la estabilidad de estos polímeros.
Ciclo del centrosoma: Cuando una célula animal sale de la mitosis, el citoplasma
contiene un solo centrosoma con dos centriolos situados en ángulo recto uno del
otro.
** Cada centriolo del centrosoma inicia su replicación en el citoplasma al principio de
la fase S.
** El proceso inicia cuando los centriolos se separan dentro del centrosoma.
** Pronto, existe un pequeño centriolo hijo que puede verse cerca de cada centriolo
preexistente y orientado en ángulo recto de éste.
** La elongación ulterior de los microtúbulos convierte el centriolo hijo en un
centriolo de tamaño completo.
** Al principio de la mitosis el centrosoma se separa en dos centrosomas adyacentes,
cada uno con un par de centriolos padre e hijo.
El inicio de la duplicación del centrosoma en la transición G1-S se desencadena mediante la fosforilación de una proteína
centrosómica por efecto de la ciclina E – Cdk2, el mismo agente que se encarga del inicio de la replicación del ADN.
Los errores en la duplicación del centrosoma pueden derivar en una división anormal y contribuir al desarrollo de cáncer.
* La primera etapa en la formación del huso mitótico en una célula animal típica es la aparición de microtúbulos dispuestos
en una “corona solar” o astro, alrededor de cada centrosoma durante la profase inicial.
* Después de la formación del astro, los centrosomas se separan uno del otro y se mueven alrededor del núcleo hacia los
extremos contrarios de la célula.
* La separación de los centrosomas está impulsada por proteínas motoras relacionadas con los microtúbulos adyacentes.
* Conforme los centrosomas se separan, los microtúbulos que se estiran entre ellos aumentan en cantidad y longitud.
* Los dos centrosomas llegan a puntos opuestos uno del otro, lo que establece los dos polos de un huso mitótico bipolar.
* Después de la mitosis, un centrosoma se destina a cada célula hija.
Varios tipos de células animales carecen de centrosomas, lo mismo que las células vegetales, aunque todas estas células
construyen un huso mitótico bipolar y pasan por una mitosis típica. En todos estos casos, los microtúbulos del huso se
nuclean cerca de los cromosomas y no en los polos. Entonces, una vez que se polimerizan, los extremos negativos de los
microtúbulos se enfocan en cada polo mediante la actividad de proteínas motoras.
Entonces, existen dos vías para la formación del huso:
Vía asociada al centrosoma: MT se nuclean en centrosomas y se elongan a partir del polo.
Vía asociada al cromosoma: MT se nuclean en relación a los cromosomas, proteínas motoras direccionan
sus extremos menos hacia los polos celulares
Ambas vías para la formación del huso operan simultáneamente en la misma célula, incluso células con centrosomas
funcionales nuclean una fracción significativa de microtúbulos del huso en los cromosomas.

Disolución de la envoltura nuclear, partición de organelos citoplásmicos

El huso mitótico se ensambla en el citoplasma y los cromosomas se compactan en el nucleoplasma. La rotura de la envoltura
nuclear posibilita la interacción entre el huso y los cromosomas.
La fosforilación de las moléculas de lámina por la Cdk promueve el desensamble de la lámina nuclear. Se dice que la
envoltura se fragmenta en vesículas que se dispersan por la célula mitótica.
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Los organelos membranosos del citoplasma que permanecen más o menos intactos durante la mitosis son: las mitocondrias,
los peroxisomas, los cloroplastos y los lisosomas.
Aparato de Golgi:
Teoría n° 1: el contenido del aparato de Golgi se incorpora al retículo endoplásmico durante la profase y el Golgi deja
de existir por un breve período como organelo distintivo.
Teoría n°2: las membranas del Golgi se fragmentan para formar una población distinta de vesículas que se reparten
entre las células hijas.
Teoría n° 3: todo el organelo se divide en dos y cada célula hija recibe la mitad de la estructura original.
Es posible que los diferentes tipos de células u organismos utilicen distintos mecanismos de herencia del Golgi.
Retículo endoplásmico: la red del retículo endoplásmico permanece hasta cierto punto intacta durante la mitosis.

Eventos de la profase

Prometafase
Inicia con la disolución de la envoltura nuclear, en ella ocurren tres sucesos: Los cinetocoros se unen
1. Se completa el ensamble del huso mitótico a un total de 20 – 30 MT,
2. Unión de los cinetocoros a los microtúbulos del huso que juntos se
3. Los cromosomas se mueven hacia el ecuador celular denominan fibra del
huso
Unión de los cinetocoros a los microtúbulos del huso
*Al principio, los cromosomas compactados se diseminan por el espacio que era la región nuclear.
*Los microtúbulos del huso penetran en la región central de la célula.
*Los extremos libres (+) de los microtúbulos crecen y se encogen de manera dinámica buscando un cromosoma.
*Los microtúbulos pueden crecer de modo preferencial hacia sitios que contienen cromatina.
*Los microtúbulos que hacen contacto con un cinetocoro se “capturan” y estabilizan.
*El cinetocoro establece contacto inicial con la pared lateral de un microtúbulo y no con su extremo, algunos cromosomas se
mueven a lo largo de la pared del microtúbulo, impulsados por motores moleculares que se localizan en el cinetocoro.
*Poco después, el cinetocoro tiende a relacionarse de manera estable con el extremo (+) de uno o más microtúbulos de uno
de los polos del huso.
*Los cinetocoros no unidos pueden servir como sitios de nucleación para el ensamble de microtúbulos que crecen hacia el
polo opuesto del huso.
*Las cromátides hermanas de cada cromosoma se conectan por sus cinetocoros con los microtúbulos de polos opuestos.

Movimiento de los cromosomas hacia el ecuador celular

(Congresión)
*Los cromosomas de la prometafase relacionados con los microtúbulos del
huso no se mueven de forma directa al centro del huso, sino que oscilan
adelante y atrás, hacia el polo y en sentido contrario.
*Los cromosomas se mueven mediante un proceso llamado congresión hacia el
centro del huso mitótico, a la mitad entre ambos polos.
*Las fuerzas necesarias para los movimientos cromosómicos durante
prometafase provienen de proteínas motoras relacionadas (1)con los
cinetocoros y (2)con los brazos de los cromosomas.
*La dinámica de microtúbulos facilita también los movimientos del cromosoma
durante la prometafase.
Conforme los cromosomas se congregan hacia el centro del huso:
(1) los MT más largos unidos con un cinetocoro se acortan
(2) los MT más cortos unidos con el cinetocoro hermano se alargan
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*Los cambios de longitud de microtúbulos se rigen por diferencias de fuerza de tensión en los dos cinetocoros hermanos.
*El acortamiento y la elongación de los microtúbulos se deben a la pérdida o ganancia de subunidades en el extremo (+). Esta
actividad dinámica tiene lugar mientras el extremo (+) permanece unido con el cinetocoro.
*Cada cromosoma se coloca en posición sobre un plano en el centro del huso, de manera que los microtúbulos de ambos
polos tienen una longitud equivalente

Eventos de la prometafase

Metafase
Es la etapa donde todos los cromosomas se alinean en el huso ecuatorial, con una cromátide en cada cromosoma conectada
por su cinetocoro con los microtúbulos de un polo y su cromátide hermana conectada por su cinetocoro con los microtúbulos
del polo contrario.
La placa metafásica es el plano de alineación de los cromosomas.
El huso de la célula en metafase contiene un conjunto muy ordenado de microtúbulos que es ideal para la tarea de separar
las cromátides duplicadas situadas en el centro de la célula.
En esta etapa, se reconocen tres tipos de microtúbulos:
1. Microtúbulos astrales
2. Microtúbulos cromosómicos (del cinetocoro)
3. Microtúbulos polares (interpolares)
Microtúbulos astrales
Irradian hacia fuera desde el centrosoma hacia la región exterior del cuerpo del huso.
Ayudan a colocar el aparato del huso en la célula; contribuyen a establecer el plano de citocinesis.
Microtúbulos cromosómicos (del cinetocoro)
Van desde el centrosoma a los cinetocoros de los cromosomas.
Cada cinetocoro está unido con una fibra del huso, que consiste en 20 a 30 microtúbulos.
Los microtúbulos cromosómicos ejercen una fuerza de tracción sobre los cinetocoros, manteniendo a los cromosomas en el
plano ecuatorial por una competencia de “tirar la cuerda” entre fuerzas de tracción equilibradas.
Los microtúbulos cromosómicos son necesarios para el movimiento de los cromosomas hacia los polos durante la anafase.
Microtúbulos polares (interpolares)
Se extienden desde el centrosoma y más allá de los cromosomas.
Los microtúbulos interpolares de un centrosoma se superponen con sus contrapartes del centrosoma opuesto.
Forman una canasta estructural que mantiene la integridad mecánica del huso.
Al observar imágenes, parece que la metafase es una etapa durante la que la célula hace una pausa, como si todas las
actividades mitóticas se detuvieran. El análisis experimental revela que en metafase ocurren sucesos importantes.
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Flujo de microtúbulos en metafase
No se observan cambios evidentes en la longitud de los microtúbulos cromosómicos, pero
los microtúbulos cromosómicos se encuentran en un estado muy dinámico.
Las subunidades se pierden y agregan con rapidez en los extremos (+) de los microtúbulos
cromosómicos aunque estén unidos al cinetocoro. Mientras tanto, en los extremos (-)
existe una pérdida neta, por lo que las subunidades de tubulina se mueven a lo largo de los
microtúbulos cromosómicos desde el cinetocoro hacia el polo; esto es el flujo hacia los
polos. Las tubulinas se mueven sobre los microtúbulos del huso hacia el polo a una
velocidad de 1μm/min.
En la pérdida de subunidades de tubulina en los polos interviene la cinesina 13 o
despolimerasa.
Eventos de la metafase

Anafase
Comienza cuando las cromátidas hermanas de cada cromosoma se separan e inician su movimiento hacia polos opuestos.
Todos los cromosomas de la placa de metafase se dividen en sincronía al principio de la anafase.
Eventos de la anafase:
1. Anafase A: el movimiento de los cromosomas hacia los polos.
2. Anafase B: separación de los polos del huso.
Las cromátidas separadas (llamadas cromosomas) comienzan su migración hacia el polo.
Cuando el cromosoma se mueve, el centrómero luce como su borde delantero y los brazos
del cromosoma hacia atrás.
El movimiento de los cromosomas hacia el polo contrario es muy lento (1μm por minuto).
La baja velocidad de movimiento de los cromosomas asegura que se separen con exactitud,
sin enredos.
El movimiento de los cromosomas hacia el polo se acompaña del acortamiento de los
microtúbulos cromosómicos.

Flujo de microtúbulos en anafase

En los microtúbulos cromosómicos: pérdida de tubulina en el extremo + y en el –
El cambio en la tensión de los cinetocoros luego de la separación de las cromátidas
hermanas induce el cambio de comportamiento del extremo +
RESULTADO: acortamiento de los microtúbulos cromosómicos.
En los microtúbulos interpolares: adición neta de tubulina en los extremos más.
RESULTADO: alargamiento de los microtúbulos interpolares.
Las tubulinas se retiran de los microtúbulos cromosómicos y se incorporan a los
microtúbulos interpolares.

Fuerzas necesarias para movimientos cromosómicos durante anafase

Modelo del desensamble: la despolimerización de microtúbulos cromosómicos sería
la causa del movimiento de los cromosomas hacia los polos. Se dice que los
cromosomas unidos con microtúbulos se mueven como resultado de la
despolimerización de los mismos.
Los microtúbulos que constituyen las fibras del huso cromosómico sufren despolimerización tanto en + como en – durante la
anafase; tales actividades combinadas causan el movimiento de los cromosomas hacia el polo.
La despolimerización en menos sirve para transportar los cromosomas hacia los polos.
La despolimerización en más sirve para masticar la fibra que tira de los cromosomas.
Tanto el extremo más como el extremo menos de las fibras cromosómicas son sitios donde se localizan despolimerasas
(cinesina 13). La despolimerización mediada por cinesinas dependientes de ATP constituye la base de la segregación
cromosómica durante la mitosis.
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¿Cuál es el mecanismo por el que los cinetocoros pueden sujetar el extremo más que pierden
subunidades de tubulina?
En levaduras:
Cada cinetocoro contiene un complejo proteico anular Dam1.
El diámetro de Dam1 es de 32 nm (el microtúbulo mide 25nm Ø y cabe dentro de Dam1).
En presencia de microtúbulos, Dam1 se ensambla formando anillos y hélices que los rodean.
La despolimerización de los microtúbulos causa el deslizamiento de los anillos sobre los
microtúbulos, justo detrás de la punta en despolimerización.
La energía liberada por los protofilamentos al desprenderse del microtúbulo se utiliza para empujar
al anillo Dam1 hacia el extremo opuesto del microtúbulo.
Como el anillo está unido al cinetocoro del cromosoma en anafase, todo el cromosoma se mueve
hacia el polo del huso.
En vertebrados:
Complejos denominados Ncd80 se extienden como fibrillas para hacer contacto con los extremos +
del microtúbulo.
De ser capaces de moverse sobre el microtúbulo conforme éste se acorta, podría asumirse que
Ncd80 tendrían una función similar a Dam1.

Función de la proteólisis en el avance por la mitosis

Recordemos que los complejos SCF y APC agregan ubiquitina a las proteínas en diferentes etapas
del ciclo celular para que, ulteriormente, sean destruidas en un proteosoma. SCF actúa en interfase. APC (complejo promotor
de la anafase) desempeña una función en la regulación de los eventos que ocurren durante la mitosis.
APC posee una proteína adaptadora que sirve para determinar cuáles proteínas sirven como sustrato para APC. Existen dos
versiones alternativas de esta proteína adaptadora: Cdc20 y Cdh1.
Cdc20 Cdh1
Los complejos APC que tienen uno u otro adaptador se reconocen como APC o Apc .
Se activa en transición metafase – anafase
Ubiquitina a un inhibidor principal de la anafase denominado securina
Cdc20

La destrucción de la securina al final de metafase libera a la separasa (una proteasa)

APC

La separasa fragmenta las cohesinas que mantienen unidas a las cromátidas a nivel del centrómero
La fragmentación de cohesinas inicia la separación de las cromátidas para marcar el inicio de la anafase
Cdc20 se destruye cerca del final de la mitosis y es remplazado por Cdh1
Se activa luego de la destrucción de Cdc20, una vez iniciada la anafase
Ubiquitina a las ciclinas B
Cdh1

La destrucción de las ciclinas B mitóticas conduce a la caída en la actividad de la Cdk mitótica (Cdk1 – ciclina B)
APC

Esto conduce a la progresión de la célula para entrar a G1 del siguiente ciclo celular
Para completar la mitosis es necesario suspender la actividad de Cdk1 (por destrucción de su ciclina)
Es importante que la ciclina B se destruya por proteólisis para que el ciclo celular avance en un solo sentido irreversible

Punto de comprobación del ensamble del huso

El punto de revisión del huso opera en la transición metafase – anafase; se revela cuando un cromosoma no se alinea en
forma apropiada en la placa de la metafase.
Cuando un cromosoma no se alinea correctamente, el mecanismo del punto de control retrasa el inicio de la anafase hasta
que el cromosoma mal alineado asuma la posición apropiada en el ecuador. Si la célula no es capaz de posponer la anafase,
el riesgo de que las células reciban un número anormal de cromosomas se eleva mucho.
Si un cinetoroco se encuentra unido a microtúbulos de un polo y el otro no se encuentra unido a microtúbulos:
Los cinetocoros no unidos contienen un complejo de proteínas Mad2 (es la proteína que media el punto de control del
huso). La presencia de proteínas Mad2 en el cinetocoro dispara una señal de “espera” que impide que se continúe la
anafase. Una vez que el cromosoma irregular se une a las fibras de ambos polos y se alinea bien en la placa de metafase, el
complejo Mad2 sale del centrómero, se apaga la señal de “espera” y se permite que la célula avance hacia anafase.
Cdc20 Cdc20
Mad2 inhibe el avance en el ciclo mediante interacción directa entre Mad2 y APC . Mientras APC se mantenga
unido a Mad2, no se puede ubiquitinar a la securina (inhibidor de la anafase), lo que mantiene las cromátidas
hermanas unidas una con la otra por cohesinas.
 Reproducción celular: Mitosis y Meiosis
EMP
Si los dos cinetocoros de las cromátidas hermanas se unen a microtúbulos pero del mismo polo (adherencia sintélica):
Se corrigen las adherencias sintélicas mediante la cinasa Aurora B, que es parte de un complejo proteico móvil de los
cinetocoros durante prometafase y metafase.
Aurora B tiene como sustratos:
Dam1 y Ncd80 (proteínas implicadas en unión cinetocoro – microtúbulo)
Despolimerasa
Aurora B fosforila sustratos proteicos,
desestabilizando la unión de los
microtúbulos con los cinetocoros.
Una vez liberados de los microtúbulos,
los cinetocoros de cada cromátida
tienen una nueva oportunidad de
unirse con los microtúbulos de los
polos opuestos del huso.

Eventos de la anafase

Telofase
Reunión de los cromosomas en una masa cuando estos se aproximan a sus polos. Es el inicio de la telofase.
La envoltura nuclear se reforma, los cromosomas se dispersan hasta que desaparecen de la vista en el microscopio.
Eventos de la telofase

Fuerzas necesarias para los movimientos mitóticos

La mitosis se caracteriza por movimientos extensos de las estructuras celulares.
En profase: Movimiento de los polos del huso a los extremos opuestos de la célula
En prometafase: Movimiento de los cromosomas al ecuador del huso
En anafase A: Movimiento de los cromosomas desde el ecuador del huso hacia sus polos
En anafase B: Elongación del huso mitótico
Todos los motores vinculados con los movimientos mitóticos son motores microtubulares (cinesinas y dineínas). Estos
motores se mueven al extremo más del microtúbulo, otros hacia el extremo menos; una de las cinesinas (13) no se mueve a
ninguna parte sino que promueve la despolimerización desde los extremos más y menos.
Las proteínas motoras se ubican en (1)los polos, (2)las fibras del huso, (3)los centrómeros y (4)los brazos de los cromosomas.
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EMP
**Las proteínas motoras localizadas a lo largo de los microtúbulos polares contribuyen a mantener separados los polos.
**Las proteínas motoras que residen en los cromosomas son importantes para:
1. Los movimientos de los cromosomas en prometafase
2. Mantener los cromosomas en la placa durante metafase
3. Separar los cromosomas durante anafase
**Las proteínas motoras situadas a lo largo de los microtúbulos polares superpuestos en la región ecuatorial del huso son las
causantes del deslizamiento de los microtúbulos unos sobre otros, lo que alarga el huso durante anafase B.

FUERZAS NECESARIAS PARA LOS MOVIMIENTOS MITÓTICOS

Separación de los polos del huso
Motores dirigidos al + de los microtúbulos polares
Ubicados en regiones superpuestas de microtúbulos polares
Movimientos cromosómicos hacia el polo
Prometafase Motores dirigidos al – de los microtúbulos cromosómicos
Ubicados en el cinetocoro
Movimientos cromosómicos que se alejan de los polos
Motores dirigidos al + de los microtúbulos cromosómicos
Ubicados sobre todo en los brazos, también en el cinetocoro
Se mantiene separación de los polos del huso
Motores dirigidos al + de los microtúbulos polares
Ubicados en regiones superpuestas de microtúbulos polares
Metafase
Mantenimiento de cromosomas en plano ecuatorial
Actividad equilibrada de proteínas motoras
Ubicadas en el cinetocoro
Separación de los polos del huso
Motores dirigidos al + de los microtúbulos polares
Ubicados en regiones superpuestas de microtúbulos polares
Anafase Movimiento de cromosomas hacia los polos
Motores dirigidos al – de los microtúbulos cromosómicos
Motores que anclan los cromosomas a los microtúbulos
mientras despolimerizan
Ubicados en el cinetocoro

Resumiendo la mitosis:
Profase: Formación del cromosoma mitótico La célula pierde su forma de
Formación del huso mitótico interfase y se vuelve esférica;
Desensamble de la envoltura nuclear y organelas pierde contacto con sus vecinas
Prometafase: Unión de las fibras del huso a los cinetocoros
Movimiento de congresión
Metafase: Alineación de los cromosomas en el ecuador del huso
Anafase: Anafase A: viaje de los cromosomas hacia los polos La célula se elonga, volviéndose
Anafase B: separación de los polos del huso ovoidea
Primeros indicios de citocinesis
Telofase: Llegada de los cromosomas a los polos
Reensamble de la envoltura nuclear

DINÁMICA MICROTUBULAR EN LA MITOSIS

Flujo hacia el polo
PRO Adición lenta de tubulina en el + de mt cromosómicos
Pérdida lenta de tubulina en el – de mt cromosómicos
META
Congresión
FASE Adición rápida de tubulina en el + de mt cromosómicos
Pérdida rápida de tubulina en el + de mt cromosómicos

META Flujo hacia el polo

Adición rápida de tubulina en el + de mt cromosómicos
FASE Pérdida rápida de tubulina en el – de mt cromosómicos
Anafase A
Pérdida rápida de tubulina en el + de mt cromosómicos
Por cambios de tensión en cinetocoro
ANA
Pérdida lenta en el – de mt cromosómicos
FASE Por flujo hacia el polo
Anafase B
Adición de tubulina en el + de los microtúbulos interpolares
 Reproducción celular: Mitosis y Meiosis
EMP
Citocinesis
La célula se divide en dos células hijas por un proceso separado de la mitosis que se denomina citocinesis.
1. El primer indicio de citocinesis aparece durante anafase, como una indentación en la superficie celular
en una banda angosta alrededor de la célula.
2. Esta indentación se profundiza para formar una hendidura que rodea por completo la célula.
3. A medida que la célula se divide en dos, se libera membrana adicional a la superficie celular mediante
vesículas citoplásmicas que se fusionan con el surco divisorio que aumenta.
En fases finales de la citocinesis (abscisión), el surco se profundiza pasando por los
remanentes densamente empacados de la región central del huso, lo que forma el
cuerpo central.
El cuerpo central o cuerpo medio está compuesto por microtúbulos interpolares que
quedan atrapados por el anillo contráctil de la citocinesis.
4. Las superficies opuestas del surco se fusionan entre sí en el centro de la célula, con lo que
se divide en dos.
El plano del surco está en el mismo plano que los cromosomas de la placa de la metafase y es
establecido por los microtúbulos astrales; se ubica a la mitad de la distancia entre los polos
del huso.
Teoría del anillo contráctil
La fuerza necesaria para dividir la célula se genera en una banda de citoplasma cortical
contráctil, justo debajo de la membrana del surco. En esta banda cortical se encuentran
filamentos de actina y filamentos bipolares de miosina.
Los filamentos de actina se intercalan con filamentos bipolares cortos de miosina; el
ensamblaje de esta maquinaria contráctil en el plano del surco de escición es dirigido por
RhoA (proteína G). Si se elimina RhoA o se desactiva, no se form a el surco de división.
El mecanismo generador de fuerza durante la citocinesis es similar a la contracción muscular.
El deslizamiento de los filamentos del anillo contráctil tira de la corteza y la membrana
plasmática unida hacia el centro de la célula: el anillo contráctil constriñe la región ecuatorial
de la célula.
La posición del surco divisorio está determinada por el huso mitótico en anafase, lo que activa
a RhoA en un anillo estrecho de la corteza.
Se afirma también que el sitio de formación del surco se define por un estímulo que se origina
en la parte central del huso, no en los microtúbulos astrales de los polos. Las explicaciones
más sencillas son:
a) Diferentes células utilizan diferentes mecanismos para posicionar el huso
b) Ambos mecanismos operan en una misma célula

MEIOSIS
La reproducción sexual incluye la unión de dos células, cada una con un conjunto haploide de cromosomas.
Fertilización: Unión de los
gametos masculino y femenino.
Los gametos son células haploides
resultantes de la meiosis.
Meiosis: Forma de reproducción
celular que incluye una replicación
de material genético y dos
divisiones celulares consecutivas.
La duplicación del número de
cromosomas en la fertilización se
compensa con la reducción
equivalente en el número de
cromosomas en una etapa previa a
la formación de los gametos; esto
se logra mediante la meiosis
(reducción)
La meiosis asegura la producción
de una fase haploide en el ciclo de
la vida, y la fertilización, una fase
diploide.
Sin la meiosis, el número de
cromosomas se duplicaría con
cada generación y la reproducción
sexual sería imposible.
 Reproducción celular: Mitosis y Meiosis
EMP

Comparación entre mitosis y meiosis:

Mitosis Meiosis
Las cromátidas de cada cromosoma se dividen y separan en Las cromátidas de cada par de homólogos se distribuyen en
dos núcleos hijos cuatro núcleos hijos
Ocurre por una división celular simple Ocurre por dos divisiones en secuencia sin una ronda
intermedia de replicación de ADN
Las células resultantes contienen pares de cromosomas Las células resultantes tienen solo un miembro de cada par
homólogos y características genéticas idénticas a la célula de cromosomas homólogos, los cuales han sufrido el
madre proceso de recombinación
Tipos de meiosis: Los eucariotas poseen diferencias con respecto a la etapa del ciclo vital en la que ocurre la meiosis y la
duración de la fase haploide.
1. Meiosis gamética o germinal: Ocurre en animales y numerosos protistas.
Divisiones meióticas vinculadas con la formación de gametos.
2. Meiosis cigótica o inicial: Ocurre en protistas y hongos.
Divisiones meióticas ocurren justo luego de la fertilización para producir esporas haploides.
3. Meiosis en esporas o intermedia: Ocurre en plastas y algas.
Divisiones meióticas no relacionadas con la formación de gametos ni con la fertilización.

Etapas de la meiosis
Como en la mitosis, el preludio de la meiosis incluye replicación de ADN. La fase S premeiótica tarda varias veces más que la
fase S premitótica. La meiosis consta de dos divisiones celulares en secuencia sin replicación intermedia. Estas divisiones son:
Meiosis I: En ella ocurre la separación de los cromosomas homólogos. Se cumple la primera ley de Mendel.
Meiosis II: En ella ocurre la separación de las cromátidas hermanas. Se cumple la segunda ley de Mendel. ¡Parecida a mitosis!
Entre ambas divisiones meióticas existe una fase denominada intercinesis.
La profase de la meiosis I suele prolongarse de manera extraordinaria en comparación con la profase mitótica. En las
mujeres, por ejemplo, los ovocitos inician la profase I de la meiosis antes del nacimiento y luego entran en un periodo de
paro prolongado (en diploteno). Los ovocitos reanudan la meiosis justo antes de la ovulación, que ocurre cada 28 días a partir
de la pubertad. Entonces, muchos ovocitos humanos permanecen varios decenios en la misma etapa de la profase I.

ETAPAS DE LA MEIOSIS
Los cromosomas se tornan visibles al MO, aunque no se observan las cromátidas
Las regiones homólogas de ADN de los cromosomas homólogos ya están en contacto
Leptoteno Ocurren las roturas en el ADN dúplex para la recombinación genética
Cerca del final, los telómeros de los cromosomas se localizan en la superficie interna de la
envoltura nuclear a un lado del núcleo (apariencia de ramillete de flores)
1
Asociación visible de los cromosomas homólogos (sinapsis)
La compactación cromosómica y la sinapsis hacen visible la asociación de homólogos
2
Cigoteno El complejo formado por un par de homólogos unidos se denomina bivalente o tétrada
3
Inicio de la formación de los complejos sinaptonémicos entre cada par de homólogos
Culmina con el final de la sinapsis
Inicia con el final de la sinapsis
Se caracteriza porque los complejos sinaptonémicos completamente formados
Paquiteno
Los homólogos se mantienen juntos a lo largo del complejo sinaptonémico
MEIOSIS I

4
La recombinación genética culmina al final del paquiteno
Profase I
Inicia con la disolución del complejo sinaptonémico
5
Comienzan a observarse los quiasmas
Puede ser una etapa muy prolongada en ovogénesis (actividad metabólica intensa)
Diploteno Durante ovogénesis, en diploteno, se observan cromosomas plumulados
Durante ovogénesis, en diploteno, hay transcripción y traducción
La transcripción durante diploteno en el ovocito aporta el ARN para la síntesis de
proteínas durante la ovogénesis y el desarrollo embrionario temprano

Ensamble del huso meiótico

Preparación de los cromosomas homólogos para su separación
Ocurre compactación de nuevo en las especies en que los cromosomas se dispersan
Diacinesis mucho durante diploteno
El aumento del FPM (factor promotor de la maduración) desencadena que la diacinesis
termine con: Desaparición del nucléolo
Rotura de la envoltura nuclear
Movimiento de las tétradas a la placa metafásica
 Reproducción celular: Mitosis y Meiosis
EMP
Los quiasmas aún pueden verse en los cromosomas homólogos alineados en la placa de metafase I
Los quiasmas mantienen unidos a los homólogos como bivalentes durante la metafase I
Si no se forman quiasmas entre los homólogos, los cromosomas del bivalente se separan luego de la
disolución del complejo sinaptonémico
Metafase I Los cromosomas homólogos de cada bivalente se conectan con fibras del huso de polos opuestos (un
cromosoma se conecta a un polo, el otro cromosoma se conecta al otro polo)
Las cromátidas hermanas están conectadas con microtúbulos de un mismo polo (porque los cinetocoros
hermanos se colocan lado a lado, orientándose hacia un mismo polo)
La orientación de los cromosomas materno y paterno de cada bivalente en la placa es aleatoria
Ocurre la separación de los cromosomas homólogos por disolución de los quiasmas
Anafase I Cada polo recibe una colección aleatoria de cromosomas paternos y maternos
Es el evento citológico que corresponde a la primera ley de Mendel
Produce cambios menos drásticos que la telofase mitótica
Telofase I Los cromosomas pueden distenderse, pero sin llegar al estado tan extendido del núcleo interfásico
La envoltura nuclear puede o no reformarse
Es una etapa en general corta
INTERCINESIS
Las células en esta etapa son espermatocito secundario secundario (masc) y ovocito secundario (fem)
Mucho más sencilla que profase I
Rotura de la envoltura nuclear (si se reformó en telofase I)
Profase II
Compactación de los cromosomas
Alineación en placa metafásica
Los cinetocoros hermanos se dirigen a polos contrarios y se unen a grupos opuestos de fibras
cromosómicas del huso
MEIOSIS II

Cdc20
La detención en metafase II en el ovocito se debe a factores que inhiben la activación de APC
Se impide degradación de ciclina B
Metafase II
Siempre que ciclina B permanezca a niveles altos en el ovocito, la actividad Cdk se mantiene y las células
no pueden avanzar a la siguiente etapa de la meiosis
El paro en metafase II del ovocito solo se libera cuando el ovocito (huevo) es fecundado
Cdc20
La fertilización induce entrada rápida de iones calcio, activación de APC y destrucción de la ciclina B
Ocurre la separación de las cromátidas hermanas 
Anafase II
Comienza con la separación sincrónica de los centrómeros; las cromátidas se mueven a polos opuestos
Telofase II Los cromosomas se encuentran de nuevo encerrados en una envoltura nuclear

¡TENER EN CUENTA!
Proceso de emparejamiento de cromosomas homólogos
1. SINAPSIS Inicia en cigoteno y está completo en paquiteno
Se acompaña de la formación del complejo sinaptonémico
Complejo formado por un par de cromosomas homólogos
2. BIVALENTE
Bivalente: se refiere a que el complejo contiene dos cromosomas homólogos
TÉTRADA
Tétrada: se refiere a que el complejo consta de cuatro cromátidas
Estructura similar a una escalera con filamentos de
proteína transversales que conectan dos elementos
laterales
Comienza a formarse en cigoteno, termina de formarse
en paquiteno, se desensambla para iniciar diploteno
La cromatina de cada homólogo se organiza en asas que
3. COMPLEJO se extienden desde uno de los elementos laterales del complejo sinaptonémico
SINAPTO Los elementos laterales están compuestos por cohesina que une a las cromátidas hermanas
NÉMICO El complejo sinaptonémico no es necesario para la recombinación
El complejo sinaptonémico se forma después del inicio de la recombinación
El complejo sinaptonémico funciona como marco que permite interacción de cromátidas para que
completen sus actividades de entrecruzamiento
En el interior del CS, en paquiteno, se observan los nodos de recombinación
Los nodos de recombinación son electrodensos y poseen 100 nm de diámetro
Corresponden a los sitios en los que se produce el entrecruzamiento
Contienen la maquinaria enzimática que facilita la recombinación genética
4. RECOMBI Es el intercambio de segmentos cromosómicos entre cromátidas homólogas (¡no hermanas!)
NACIÓN - Representa la fusión de un cromosoma materno y uno paterno
CROSSING
 Reproducción celular: Mitosis y Meiosis
EMP
OVER - Cortes iniciales en leptoteno, el proceso termina al final de paquiteno
ENTRECRUZA Posibilita que los alelos maternos y paternos en un cromosoma determinado se entremezclen
MIENTO Comprende la rotura física de moléculas individuales y ligadura de los extremos dobles de un ADN con los
extremos dobles cortados del homólogo
Proceso muy preciso que ocurre sin pérdida ni adición de un solo par de bases
La precisión de la recombinación se asegura con participación de enzimas de reparación del ADN
Se observan a partir del diploteno hasta la metafase I
Estructuras con forma de X que se localizan en sitios en los que hubo entrecruzamiento
5. QUIASMA Se forman por uniones covalentes entre cromátidas homólogas
Mantienen unido al bivalente durante la metafase I
Se disuelven cuando se separan los homólogos en anafase I

Movimiento de cromosomas en meiosis I y meiosis II

* Alineación en la placa metafásica de los bivalentes * Alineación en la placa metafásica de los cromosomas
* Los dos cromosomas de cada bivalente se conectan con * Las dos cromátidas de cada cromosoma se conectan con
fibras del huso de los polos opuestos fibras de los polos opuestos
* Los cinetocoros hermanos se disponen lado a lado, de * Los cinetocoros hermanos se disponen en sentidos
MF I frente al mismo polo MF II contrarios, cada uno enfrentando un polo diferente
* Las cromátidas se mantienen unidas a nivel de los brazos * Las cromátidas se mantienen unidas a nivel de los
y centrómeros mediante cohesina centrómeros mediante cohesina
* Los homólogos se mantienen como bivalentes mediante
el quiasma
* Separación de los cromosomas homólogos * Separación de las cromátidas hermanas
* Los homólogos se separan por disolución de los quiasmas, * Las cromátidas hermanas se separan por proteólisis de las
AF I que desaparecen cuando las cohesinas de los brazos de las AF II cohesinas del centrómero
cromátidas sufren proteólisis
* Las cromátidas hermanas se mueven juntas hacia un polo

En la mujer, la meiosis puede durar alrededor de 50 años

Las ovogonias entran en meiosis entre el tercero y séptimo mes de la vida intrauterina y se convierten en ovocitos I.
Los ovocitos I permanecen en diploteno desde antes del nacimiento hasta el comienzo de la pubertad.
Durante el diploteno tan prolongado, los cromosomas experimentan desenrollamiento (cromosomas plumulados).
A partir de la pubertad, en cada uno de los ciclos menstruales, varios ovocitos reanudan la meiosis I; solo uno se convierte en
ovocito II (a veces son dos o más).
El ovocito II se libera por el ovario en la ovulación, para ingresar a la trompa de Falopio. Este
ovocito II detiene la meiosis en etapa de metafase II. Solo completa la división meiótica si es
fecundado.
En la recién nacida, el número de ovocitos I es de, aproximadamente, 1 millón.
A los 12 años, el número de ovocitos es de, aproximadamente, 300 000. De ellos, aprox 400
alcanzan la madurez total, uno durante cada ciclo menstrual entre los 12 años y la
menopausia.
La meiosis de la mujer puede durar alrededor de 50 años. Existe mayor proporción de errores
cromosómicos en ovocitos envejecidos: a mayor edad de la madre, aumenta la probabilidad
de hijos con aberraciones cromosómicas
En el varón, la meiosis comienza a partir de la pubertad
Las espermatogonias entran en meiosis a partir de la pubertad y cada una genera 4
espermatozoides
La profase I dura unos 14 días, la meiosis se completa en alrededor de 24 días
A diferencia de la ovogénesis, la espermatogénesis se prolonga hasta una edad relativamente
avanzada
 Reproducción celular: Mitosis y Meiosis
EMP

Gametogonias:
2n ; 2c

Gonadocito primario:
2n ; 4c

Gonadocito secundario:
n ; 2c

Gametos
n;c

Gametogénesis femenina Gametogénesis masculina

Una ovogonia comprometida con la meiosis dará origen a un Una espermatogonia comprometida con la meiosos dará
huevo y a tres cuerpos polares. origen a cuatro espermatozoides.
La ovogénesis inicia en el desarrollo intrauterino y puede La espermatogénesis inicia en la pubertad y dura 24 días,
durar desde 10 hasta 50 años aproximadamente. ocurre a lo largo de casi toda la vida del individuo.

Fecundación
Características de los gametos en el momento de la fecundación
La fecundación suele producirse en el tercio externo de la trompa de Falopio, a donde arriba el ovocito II (estancado en
metafase II) luego de la ovulación.
Características del ovocito:
Célula de gran tamaño con abundantes microvellosidades en su membrana plasmática
Se encuentra envuelto por la membrana pelúcida y por células de la corona radiante
La membrana pelúcida contiene glucoproteínas (ZP1, ZP2 y ZP3)
Las células de la corona radiada se hallan unidas por un material cementante, el ácido hialurónico
Características del espermatozoide:
Posee una cabeza, un cuello y una cola
En la cabeza: posee el acrosoma, un derivado lisosómico que contiene varias hidrolasas (hialuronidasa y acrosina)
Para fecundar, debe sufrir maduración (en epidídimo) y capacitación (en tracto genital femenino)
La capacitación ocurre en el tracto genital femenino y da lugar a la aparición de movimientos muy enérgicos en los
espermatozoides, que se distinguen con el nombre de hiperactivación

Fases de la fecundación
La fecundación inicia a partir del momento en que no más de 100 espermatozoides totalmente diferenciados establecen
contacto con las células foliculares (de la corona radiada) que envuelven al ovocito II.
1. Penetración de la corona radiante
Inicia una vez que el espermatozoide toma contacto con la corona radiante
El espermatozoide, con su cromosoma intacto, trata de alcanzar la membrana pelúcida
Utiliza hialuronidasa de su membrana plasmática para abrirse un túnel en el cemento de las células foliculares
La hialuronidasa digiere el cemento y la hiperactivación hace avanzar al espermatozoide
Solo los espermatozoides más aptos llegan a la membrana pelúcida
2. Reacción acrosómica
Ocurre cuando el espermatozoide alcanza y se pone en contacto con la membrana pelúcida
Ocurre la fusión de la membrana externa del acrosoma con la membrana plasmática del espermatozoide
La proteína ZP3 interactúa con un receptor del espermatozoide que desencadena la reacción acrosómica
La reacción acrosómica hace posible el desprendimiento de la corona radiante, la penetración de la membrana
pelúcida por el espermatozoide y la fusión de su membrana con el ovocito II
3. Denudación
Desprendimiento de la corona radiante debido a la dispersión de las células foliculares por la acción de hialuronidasa
 Reproducción celular: Mitosis y Meiosis
EMP
4. Penetración de la membrana pelúcida
ZP2 interacciona con receptor PH20 de la membrana acrosómica interna (nueva membrana de la cabeza del
espermatozoide)
Desencadena que el espermatozoide comience a atravesar la membrana pelúcida en busca de la membrana del
ovocito II
Ocurre por acción de la acrosina, que destruye el material de la zona pelúcida + hiperactivación del espermatozoide
El espermatozoide se fabrica un túnel de trayecto diagonal
5. Fusión
Muchos espermatozoides atraviesan la membrana pelúcida, pero uno solo establece contacto con el ovocito II, lo
que hace desaparecer sus movimientos de hiperactivación
Ocurre la fusión de las membranas y los dos citoplasmas se conectan, lo que hace posible la entrada del contenido
del espermatozoide al interior del ovocito II
La membrana del espermatozoide involucrada es el segmento ecuatorial de la cabeza
La membrana del ovocito II involucrada es cualquier segmento excepto alguno cercano al núcleo
El orden de ingreso de los elementos del espermatozoide al ovocito es:
Parte posterior de la cabeza → cuello → cola → parte anterior de la cabeza
El ADN y el centriolo del espermatozoide sobreviven
Las mitocondrias del espermatozoide y el axonema se eliminan
6. Bloqueo de la polispermia
Ocurre mediante la reacción cortical
La fertilización del ovocito II desencadena la entrada rápida de iones calcio
Los iones calcio ingresados facilitan la fusión de vesículas corticales del ovocito con la membrana plasmática
Ocurre exocitosis de enzimas desde los gránulos corticales, estas enzimas alteran la estructura de la zona pelúcida,
lo que provoca la inmovilización y expulsión de los espermatozoides atrapados en ella
La membrana del ovocito también pierde la capacidad de fusionarse a nuevos espermatozoides
7. Reasunción de la meiosis II por el ovocito II
La reanudación de la meiosis II por el ovocito genera dos núcleos
haploides; el del óvulo (ya es la célula huevo) y el del segundo cuerpo
polar
8. Formación de pronúcleos masculino y femenino
El núcleo haploide del espermatozoide es el pronúcleo masculino, el del
óvulo es el pronúcleo femenino
Al tiempo que sus cromosomas se desenrollan y sus ADN se replican,
ambos pronúcleos se tornan esféricos y se dirigen a la región central de
la célula huevo
9. Singamia y anfimixis
Los pronúcleos se colocan uno muy cerca del otro en la región central de
la célula huevo
La singamia es la pérdida de las envolturas nucleares de los pronúcleos
Los cromosomas (ya duplicados) se vuelven a condensar y se colocan en
el ecuador de la célula
La anfimixis es la primera metafase mitótica del cigoto
 Métodos de estudio en Biología Celular
EMP

MÉTODOS DE ESTUDIO EN BIOLOGÍA CELULAR

Microscopía Óptica
Los microscopios son instrumentos que producen una imagen aumentada de un objeto.
Sus componentes principales son: (1)una fuente de luz, (2)una lente condensadora, (3) una platina que sostiene a la muestra,
(4) la lente del objetivo y (5) la lente ocular.
La fuente de luz, externa o incluida en la base del microscopio.
La lente condensadora reúne rayos difusos e ilumina el espécimen con un pequeño
cono de luz brillante.
La lente del objetivo recibe los rayos que fueron enfocados en la muestra, los
enfoca para formar una imagen real y magnificada del objeto dentro de la columna
del microscopio. Los rayos que recibe pueden ser:
a. los no modificados: no inciden sobre la muestra y pasan directamente al
objetivo, constituyen la luz del fondo del campo visual.
b. Los que fueron alterados por el espécimen: son los rayos que incidieron
sobre la muestra, emanan de las diferentes partes del espécimen.
La lente ocular toma la imagen formada por el objetivo como objeto y forma una
imagen virtual y aumentada de ella.
Un tercer sistema de lentes, el cristalino del ojo, utiliza la imagen formada por los
oculares como objeto para producir una imagen real en la retina: es lo que vemos.
La magnificación total de la imagen es producto de las magnificaciones hechas por
los oculares y los objetivos.

CONCEPTOS
Resolución: Calidad de la imagen producida. Capacidad de brindar imágenes individuales de puntos situados muy cerca.
Magnificación vacía: cuando el aumento de la imagen ya no brinda mayor información, pues los todos los detalles
producidos por la lente objetivo ya son observables a un aumento menor.
Poder de resolución: la capacidad para ver dos puntos vecinos separados. Es el que define la calidad óptica de una lente. Está
limitado por la longitud de onda de la iluminación según la ecuación:

d=

d es la distancia mínima que debe separar dos puntos en la muestra para resolverse.
Lambda es la longitud de onda de la luz (527nm en la luz blanca).
n es el índice de refracción del medio entre el espécimen y la lente objetivo.
Alfa es la mitad del ángulo del cono de luz que entra a la lente del objetivo.
n.senα se conoce también como abertura numérica (A.N.), es constante para cada lente, mide sus cualidades para reunir luz.
La difracción limita la resolución.
Límite de resolución es la mínima distancia entre dos puntos para diferenciarlos
Visibilidad: Se refiere a los factores que en realidad permiten observar un objeto.
Contraste: es la diferencia de apariencias entre las partes adyacentes de un objeto, o entre un objeto y su fondo.
Para observar objetos al microscopio, se hace incidir luz sobre el espécimen, y la luz que el espécimen ha difractado es la que
llega a nuestros ojos, por lo que es necesario que el objeto sea traslúcido, casi trasparente; y una de las mejores formas para
hacer que un objeto delgado y traslúcido sea visible al microscopio es teñirlo con algún pigmento que absorba sólo ciertas
longitudes de onda del espectro visible, lo que no se absorbe se transmite al ojo, lo que hace que el objeto teñido parezca
coloreado.
Preparación de tejidos y células para el MO
ESPECÍMENES A OBSERVAR AL MICROSCOPIO ÓPTICO

Montura Completa Corte

Objeto intacto, vivo o muerto. Puede ser un Tejido muerto, fijado y coloreado, pasado por
microorganismo, o parte de un organismo más el micrótomo y que sirve para ver estructuras al
grande. Muy opacos, deben cortarse. microscopio óptico y al electrónico.

Un tejido es fijado en una sustancia que penetra rápidamente en la membrana celular e inmoviliza todo el material
macromolecular; la estructura de la célula se mantiene lo más similar posible a la de la célula viva. Los fijadores más usuales
son formol, alcohol o ácido acético. Luego de ser fijado, el tejido se deshidrata haciéndolo pasar por soluciones de alcohol de
cada vez más elevada concentración, a fin de que éste remplace al agua que inicialmente estaba dentro de la célula. El
alcohol se desplaza luego con tolueno en lo que se llama aclaramiento. La deshidratación se hace para luego incluir a la
célula en parafina, sustancia que endurece el preparado, dejándolo listo para ser cortado con el micrótomo. El corte
resultante es sumergido en tolueno a fin de extraer la parafina, donde puede teñirse, tratarse con anticuerpos, enzimas, etc.
 Métodos de estudio en Biología Celular
EMP
Fijación Inclusión y Microtomía
El primer paso de la técnica histológica (luego de la El preparado es colocado en parafina fundida a 56°C en el
obtención de la muestra). Es un método para la calor de una estufa.
preservación de la morfología y composición química de El tejido, incluido en parafina, queda endurecido entonces
la célula y los tejidos. para poder ser cortado en finas láminas, suficientemente
Consiste en matar a las células y que las estructuras que delgadas como para ser atravesadas por la luz.
poseían cuando vivas se conserven con la menor cantidad Debe pasar por el micrótomo, aparato que corta las
de artefactos a lo largo del tiempo y durante los muestras con el espesor que se le indique.
siguientes pasos de la técnica histológica. Debe realizarse En ocasiones, el tejido es incluido en metacrilatos de bajo
inmediatamente después de la extracción de la muestra peso molecular, lo que brinda cortes más finos.
para evitar lesiones por la agonía, causada por la anoxia
(falta de oxígeno).
Coloración
El tejido debe ser lo suficientemente pequeño como para Permite contrastar entre sí diferentes estructuras. Luego
que el fijador difunda rápidamente al interior celular y al del corte, los preparados son transparentes y faltan
centro del bloque tisular. colores y contrastes que permitan ver componentes
Corrientemente, para los preparados de rutina (al MO) se celulares.
utiliza formol (fijador universal), también alcohol y ácido La tinción o coloración se efectúa con dos propósitos:
acético.  el estudio morfológico y estructural (sin mayor info de
la naturaleza química de lo que se observa) o
Deshidratación  la identificación de un determinado tipo de molécula o
Para la inclusión en parafina, el preparado debe estar libre sustancia, visualizándola microscópicamente
de agua (la parafina y el agua no son miscibles entre sí), (tinciones citoquímicas o histoquímicas).
por lo que se introduce al preparado en sucesivas Colorantes básicos: hematoxilina, azul de metileno, azul
soluciones de alcohol cada vez más concentradas, hasta de toluidina, azur B, cristal violeta, fuscsina básica.
que el agua haya sido reemplazada por alcohol. El alcohol Colorantes ácidos: eosina, ácido pícrico, naranja G, azul
aun no es miscible en parafina. El preparado es de anilina.
transferido a un solvente intermediario (aclarante) como Otras tinciones:
el tolueno o el xileno, miscibles con el alcohol y con la PAS: para teñir glucógeno y azúcares.
parafina. El tolueno aclara a la muestra y remplaza al Sudán: para teñir lípidos (TAG)
alcohol. Deja a la muestra lista para ser inmersa en Reacción de Feulgen: para teñir ADN
parafina.

Tipos de microscopios ópticos

De Campo Brillante
I. Fondo brillante contra el que la imagen del espécimen se
contrasta.
II. Ideal para muestras de alto contraste, como cortes teñidos
de tejidos. Es probable que no se obtenga visibilidad óptima
con otros especímenes.

De Contraste de Fases
I. Torna más visibles los objetos transparentes, por ej, una
célula viva.
II. Convierte las diferencias de índice de refracción en
diferencias de intensidad (oscuridad/brillantez), logra eso
por:
 Separación de luz directa proveniente del microscopio
desde la luz difractada que proviene del espécimen
 Los rayos de las dos fuentes interfieren unos con los otros
III. Son más útiles para estudiar componentes intracelulares de células vivas con resolución hasta cierto punto alta.
(movilidad de mitocondrias, cromosomas mitóticos y vacuolas pueden filmarse).
IV. Limitaciones ópticas: pérdida de resolución y formación de halos por cambios súbitos del índice de refracción.
V. Es un tipo de microscopio de interferencia; otros microscopios de interferencia minimizan los artefactos al lograr una
separación completa de rayos directos y difractados con trayectos complejos de luz y prismas.

Nomarski
I. Es un microscopio de interferencia, llamado microscopio de contraste diferencial (DIC).
II. Imagen con calidad 3D aparente.
III. Contraste en la DIC depende de velocidad de cambio del índice de refracción en la muestra: los bordes de la muestra se
ven con muy buen cambio
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De Fluorescencia
I. Los avances en visualización de células vivas se deben en gran parte a esta microscopía.
II. Permite observar la localización de sustancias fluorescentes: absorben radiación UV y emiten energía con λ visible (más
largas) [FLUORESCENCIA: absorber luz de λ corta y emitirla de nuevo con λ larga].
III. Brinda un gran contraste.
IV. Los compuestos fluorescentes pueden usarse en: (1) Inmunofluorescencia, (2) detectar ADN/ARN de manera específica,
(3) estudiar el tamaño de las moléculas que pueden pasar entre las células, (5) como sondas para determinar
concentración de calcio y (6) para estudiar procesos dinámicos en células vivas.
V. Fluorocromos usuales son la rodamina (roja) y fluoresceína (verde) (1)
VI. Por DNA recombinante se emplea una técnica no invasiva:
DNA GFP + DNA Proteína en estudio = Proteína Quimérica
VII. GFP proviene de Aequorea victoria (medusa). También hay YFP, BFP, CFP por mutagénesis del GFP. Sirven para observar
interacciones entre células coloreadas o para medir cambios en la distancia entre partes de una proteína [FRET].

Con video y procesamiento de imágenes

I. El campo es visto por medios electrónicos y grabado por videocámaras.
II. Cámaras CCD: poseen las siguientes ventajas
 Son sensibles a la luz (funcionan a escasa iluminación): es útil para observar especímenes vivos o con tinción
fluorescente.
 Detectan y amplifican diferencias muy pequeñas de contraste (los objetos muy pequeños se tornan visibles).
 La imagen puede convertirse a formatos digitales para procesarlas por computadora y aumentar la cantidad de
información (p. ej. puede sustraerse el fondo o hacer que las diferencias de brillo sean diferencias de color)
III. Detecta imágenes por debajo del LR normal del MO (0,2mcm).

Confocal de barrido láser

I. Produce una imagen de un plano delgado situado dentro de un espécimen mucho
más grueso.
II. Utiliza fluorescencia.
III. Un rayo laser barre el espécimen a una sola profundidad: solo ilumina un plano o
corte óptico dentro de la muestra.
IV. La luz emitida por el espécimen se enfoca a un sitio con una abertura puntual, los
rayos que emanen de un plano superior o inferior al plano de barrido no participan
en la formación de la imagen.
V. La abertura y el plano iluminado son confocales.
VI. El diámetro de la abertura puntual es ajustable: a menor diámetro de la abertura,
es más delgado el corte óptico y mayor la resolución, pero la señal es menos
intensa.
VII. Las imágenes de diferentes cortes ópticos (planos) pueden almacenarse y
fusionarse para reconstruir un modelo 3D.

Resumen de características de los microscopios ópticos

De preferencia para células fijadas
Microscopio de campo
Utiliza colorantes para hacer que la muestra adquiera contraste
brillante
Utilizado en exámenes histológicos de rutina
De preferencia para células vivas
Microscopio de contraste de
Utiliza las diferencias de índices de refracción para que la muestra adquiera contraste
fases
Utilizado en experimentación que requiere visualizar células vivas
De preferencia para células vivas
Microscopio de interferencia Utiliza la velocidad de cambios de índices de refracción para que la muestra adquiera
diferencial contraste, imagen de apariencia tridimensional
Utilizado en experimentación que requiere visualizar células vivas
Tanto para células vivas como muertas
Microscopio de fluorescencia Utiliza sustancias fluorescentes sobre un fondo oscuro, generando un gran contraste
Utilizado para localización de materiales celulares y observación de fenómenos dinámicos
De preferencia para células vivas
Microscopio con video y
Utiliza cámaras CCD sensibles a la luz que brindan gran resolución
procesamiento de imágenes
La imagen puede someterse a editado digital para aumentar resolución
Tanto para células vivas como muertas
Microscopio confocal de Utiliza técnicas de fluorescencia y además brinda imágenes de planos ópticos , que pueden
barrido láser superponerse para contruir un modelo tridimensional
Utilizado para obtener imágenes de alto contraste con detalles incrementados
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Microscopía Electrónica
La microscopía electrónica utiliza electrones en lugar de fotones luminosos. Como los electrones tienen una longitud de onda
menor que la de la luz, el microscopio electrónico tiene una mayor resolución que el microscopio óptico.

Tipos de ME

Microscopio electrónico de transmisión (MET)

I. Forma imágenes con electrones que se transmiten a través del espécimen. Se utiliza más para examen de estructura
celular interna.
II. Mucha my resolución que el MO; su gran poder de resolución se deriva de las propiedades de onda de los electrones.
III. El límite de resolución es directamente proporcional a λ: ↑λ ↓resolución.
IV. Límite teórico: 0,03 A (imposible por aberración de lentes). Límite práctico: 3 – 5 A. Límite real: 10 – 15 A.
V. Componentes: columna cilíndrica alta y hueca (para el paso del rayo de electrones), consola para controlar operaciones
de la columna, alambre de tungsteno que emite electrones al calentarse, bobinas en vez de lentes.
VI. Los electrones deben viajar en el vacío.
VII. La muestra se sostiene sobre una rejilla de metal.
VIII. La imagen que se obtiene del objetivo solo tiene una magnificación de 100x, pero tiene detalles como para aumentarla
10 000 veces más. En total, el MET puede magnificar de 1000 a 250 000 veces.
IX. Los electrones que pasaron por el espécimen se enfocan en una pantalla fluorescente, los que golpean la pantalla, la
excitan y se emite luz visible que el ojo percibe como una imagen del espécimen.
Preparación de tejidos y células para el MET
La preparación de la muestra para el ME es mucho más crítica que para el MO. Los daños menores (mitocondrias hinchadas,
ER roto) se vuelven mucho más evidentes.
3
Fijación: Mientras más rápido se efectúe, es menor el daño celular (se fijan fragmentos de menos 1mm ). Fijadores usuales
de microscopía electrónica: Glutaraldehído y OsO4.
Glutaraldehído: forma puentes cruzados entre proteínas. OsO4: Reacciona con AG y preserva membranas.
Deshidratación: Por medio de soluciones de alcohol de concentración creciente.
Aclaramiento: Se usa óxido de propileno.
Impregnación (inclusión): resinas epoxi (ej, 1,4-butenodiol-diglicidil-éter) para muestras normales, para estudios con
anticuerpos se utiliza resinas acrílicas.
Corte: Ultramicrótomo de vidrio o diamante. El bloque plástico se pasa sobre el borde afilado del micrótomo. La muestra
cortada se recoge con rejillas metálicas, que se hacen flotar sobre soluciones de metales pesados para la coloración.
Tinción: Los colorantes usuales son acetato de uranilo y citrato de plomo. Los átomos de metales pesados se adhieren a
macromoléculas y brindan la densidad atómica para dispersar los electrones.
La formación de un artefacto es muy frecuente en preparaciones descuidadas para la microscopía electrónica. El mejor
argumento de que una estructura particular no es un artefacto es la demostración de su existencia en células fijadas de
diversos modos o, aún mejor, sin fijación alguna.
Para visualizar células sin fijación, el tejido se congela con rapidez y se emplean técnicas especiales para revelar su estructura
(ej, criofijación y replicación por congelamiento y fractura).
OJO:
**La formación de la imagen depende de la dispersión diferencial de electrones por las distintas partes
del espécimen.
**Los electrones que rebotan de la muestra no participan en la formación de la imagen.
**La dispersión de electrones es proporcional al tamaño de los núcleos atómicos que componen la
muestra. CHON no tienen suficiente densidad electrónica (poca capacidad de dispersar electrones),
por eso las muestras se fijan y tiñen con metales pesados.
**Mientras más átomos de metales pesados se encuentren unidos, menor es la cantidad de electrones
que pasan por ahí.
**Entre menos electrones se enfoquen en la pantalla en un punto determinado, ese punto es más oscuro.
**La imagen del espécimen puede registrarse directamente en una placa fotográfica.
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Microscopio electrónico de Barrido (MEB)
I. Forma imágenes con electrones que rebotan de la superficie del espécimen. Se utiliza para examinar superficies de
objetos cuyo tamaño varía desde un virus a la cabeza de un animal.
II. Construcción y operación del MEB muy diferentes a las del MET.
III. En la preparación, el objetivo es producir una muestra con la misma forma y superficie que en el estado vivo pero sin
líquido, para poder observar el espécimen al vacío.
IV. Las muestras se fijan, se deshidratan en alcoholes y se secan en el secado de punto crítico: en el secado de punto crítico
se llega a una temperatura y presión donde no hay tensión superficial líquido/gas. El solvente de las células se sustituye
con un líquido temporal (CO2) que luego se vaporiza a presión.
V. Luego del secado, la muestra se cubre con una delgada capa de metal.
VI. Los electrones se aceleran en un rayo fino que barre la muestra.
VII. La imagen se forma con electrones que se reflejan de la muestra o los electrones secundarios que la muestra emite
después de ser golpeada por el rayo electrónico primario.
VIII. La formación de la imagen es indirecta (otro rayo de electrones explora la cara de un tubo de rayos catódicos y produce
una imagen similar a la que se ve en TV).
IX. La imagen refleja la topología superficial de la muestra [grietas, colinas, orificios].
X. Magnificación de 15 hasta 150mil veces la de un instrumento estándar.
XI. Resolución del microscopio electrónico de barrido depende del diámetro del rayo electrónico.
XII. El SEM da imágenes 3D; posee una profundidad de enfoque 500 veces mayor que la del MO.

Comparación
MO MET MEB

Fijación por congelamiento o criofijación: Las células y los tejidos no tienen que fijarse con sustancias químicas e
impregnarse con resinas plásticas para observarse al microscopio electrónico. Una alternativa es congelar con rapidez a las
células y tejidos.
La criofijación o congelamiento rápido detiene los procesos metabólicos y conserva la estructura biológica igual que un
fijador químico; no altera a las macromoléculas celulares, por lo que es menos probable la formación de artefactos.
La principal dificultad es la formación de cristales de hielo, que destruye el contenido celular donde se forma; la mejor
manera de evitar la formación de hielo es congelar a las células con demasiada rapidez (en propano líquido, etc).
Los tejidos criofijados pueden cortarse con un micrótomo especial para su examen al microscopio óptico o electrónico.

Microscopía de Fuerza Atómica

I. El microscopio de fuerza atómica (MFA) no es un microscopio óptico ni electrónico.
II. Instrumento de barrido de alta resolución, importante en nanotecnología y biología molecular.
III. Barre con una fina sonda la superficie del espécimen, la sonda está unida a una “viga” que se desplaza por variaciones en
la topografía del espécimen.
IV. El desplazamiento de la viga se correlaciona con variaciones de altura en el espécimen.
V. Se genera una imagen topográfica 3D de la superficie del espécimen.
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Otros estudios en biología celular y molecular
Las otras técnicas de estudio en Biología Celular y Molecular que debemos estudiar son: la Criofractura, la Radioautografía,
el Cultivo Celular, las Técnicas de Fraccionamiento Celular, de Proteínas y de Ácidos Nucleicos, la tecnología del ADN
recombinante, PCR (reacción en cadena de la polimerasa), Hibridación de ácidos nucleicos y síntesis química del ADN y el
uso de anticuerpos.

Criofractura, grabado y réplica

(Replicación por congelamiento y fractura. Grabado por congelamiento)
La ultraestructura de células congeladas se observa con ésta técnica al ME.
1. Pequeños fragmentos de tejido se colocan en un disco metálico pequeño y se
congelan con rapidez. El disco metálico se monta sobre una placa fría en una cámara
de vacío.
2. La muestra congelada se golpea con el borde de una navaja, que fractura al tejido. El
plano de fractura se extiende desde el punto de contacto y divide el tejido en dos
piezas (como un hacha separa dos trozos de madera), entre los sitios que presenten
menos resistencia (el centro de las membranas). Los organelos causan desviaciones en
el plano de la fractura, como elevaciones o depresiones o crestas que reflejan los
contornos del protoplasma que se atravesó: las superficies expuestas contienen
información respecto al contenido de la célula. El objetivo de este método es revelar
dicha información.
3. La réplica se logra al usar la superficie de fractura como un molde sobre el cual:
a) Se deposita una capa de metal pesado en ángulo para producir un efecto de
sombras que acentúen la topografía. b) Sobre la capa de metal se deposita una
capa de carbono perpendicularmente para formar una capa uniforme que pegue los
parches de metal en una capa sólida.
La réplica de metal/carbono es la que se coloca en la rejilla para espécimen y se
visualiza con el ME. El tejido puede descongelarse y desecharse.
Las variaciones del grosor del metal depositado son las que
producen el contraste necesario para visualizar la réplica.
El método es muy adecuado para examinar la distribución de las
proteínas integrales de membrana. Gracias al método se llegó al
modelo de mosaico fluido para la membrana.
La réplica por congelación y fractura puede aportar más
información si se incluye el grabado por congelamiento: el
espécimen, congelado y fracturado dentro de la cámara fría, se
expone al vacío a una temperatura más alta por unos minutos,
donde se evapora (sublima) una capa de hielo de la superficie
expuesta. La superficie puede cubrirse con metal/carbono para
crear una réplica que revela tanto la superficie externa como la
interna de las membranas celulares. En el grabado profundo se
quita aún más hielo y se obtienen imágenes mejores.
La técnica brinda una resolución muy alta. Puede usarse para revelar la estructura y distribución de complejos
macromoleculares, como los del citoesqueleto, como se supone que existen dentro de la célula viva.

Radioautografía
O Autorradiografía, es una técnica muy amplia que se emplea para localizar los sitios
que contienen un isótopo específico, ya sea en una célula u otro medio. Es un medio Espectrometría por
para visualizar procesos bioquímicos al permitir determinar la localización de centelleo líquido:
materiales con marca radiactiva dentro de una célula. se usa para medir la cantidad de
Se usa para localizar radioisótopos dentro de cortes de tejidos que se inmovilizaron radiactividad en una muestra.
en una laminilla (microscopía óptica) o una rejilla para el MET (microscopía
electrónica), en un gel de poliacrilamida o un filtro de nitrocelulosa.
La emulsión se aplica a los cortes a manera de capa muy delgada y el espécimen se coloca en un recipiente a prueba de luz
para permitir que la emulsión se exponga por las emisiones. La cantidad de granos de plata que se forman es mayor entre
más tiempo permanece el espécimen antes del revelado. Cuando la laminilla o rejilla revelada se examina al microscopio, la
localización de los gránulos de plata en la capa de emulsión indica la localización de la radiactividad en las células
subyacentes.
Cultivo Celular
Técnica con la que se intentan comprender procesos mediante análisis en un sistema in vitro simplificado y controlado.
Sirve para el estudio de células porque pueden extraerse de las influencias a las que están sujetas dentro de un organismo
multicelular.
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La mayoría de los artículos publicados describen investigaciones que se
realizan en células cultivadas, porque:
*Las células cultivadas pueden obtenerse en grandes cantidades.
*Casi todos los cultivos contienen un solo tipo de célula.
*Muchas actividades celulares pueden estudiarse en un cultivo.
*Las células pueden diferenciarse en un cultivo.
*Las células cultivadas responden a tratamientos con fármacos,
hormonas, factores de crecimiento y otras sustancias activas.
Se debe mantener las condiciones estériles en el cultivo (seducen a
microorganismos invasores).
Cultivo Primario: hecho con las células que se obtienen directamente
del organismo. Casi todos los cultivos primarios de animales se toman
de células embrionarias (se disocian más fácilmente que células de los
tejidos adultos). Esa disociación se efectúa:
1° Con una enzima proteolítica, como la tripsina (que digiere dominios
EC de proteínas que median la add celular).
2° El tejido se lava para eliminar la enzima.
2+
3° Se suspende en una solución salina que carece de Ca y contiene
agentes quelantes de calcio como el EDTA (el calcio facilita mucho la
add celular, por eso es necesario que no esté presente).
Cultivo Secundario: El cultivo obtenido a partir de un cultivo anterior.
Una vez preparadas, las células pueden iniciar dos tipos básicos de
cultivos: cultivo en masa o cultivo clonal.
En el cultivo en masa, una cantidad más o menos grande de células se
asientan y unen al fondo de la caja de cultivos para formar una capa
uniforme; forman una monocapa que cubre el fondo de la caja.
En el cultivo clonal, se agrega una cantidad pequeña de células (para
que queden separadas unas de otras). Cada célula se divide y forma
una colonia o clon separado cuyos miembros provienen de la célula
original.
Las células normales pueden dividirse una cantidad limitada de veces
(50 a 100) antes de envejecer y morir; por ello muchas de las usadas en
estos estudios son modificadas genéticamente para crecer por un
tiempo indefinido: lo que se conoce como línea celular; casi siempre
forman tumores cuando se inyectan a animales de laboratorio.
Las líneas celulares humanas (p. ej. células HeLa) suelen derivarse de tumores o de células tratadas con virus o carcinógenos.
Las células vegetales también pueden crecer en cultivo.
Primera técnica: Las paredes celulares se digieren con celulasa, que “desnuda” a la célula de su pared y la deja siendo un
protoplasto. Pueden crecer en un callo (cúmulo indiferenciado) en el que es posible inducir brotes de los que la plantita
puede regenerarse.
Segunda técnica: con tratamiento hormonal, puede hacerse que las células del tejido de la hoja se “desdiferencien” y
transformen en material de callo, que puede transferirse a un medio líquido para iniciar un cultivo.

Fraccionamiento Celular
Si queremos estudiar una función particular de la mitocondria, o aislar una enzima particular del Golgi, es conveniente
primero aislar la organela en estado purificado. Suele lograrse mediante la centrifugación diferencial: que depende del
principio de que:
“En tanto más densas que el medio circundante sean, las partículas de diferente tamaño y forma viajan hacia el fondo de un
tubo centrifugado a distintas velocidades cuando se colocan en un campo de centrifugación”.
1. Rotura celular con un homogeneizador mecánico en una solución amortiguada isotónica (a menudo con sacarosa) que
previene roturas de membrana por ósmosis.
2. El homogeneizado se somete a una serie de centrifugaciones secuenciales de cada vez mayor fuerza centrífuga. Primero
fuerzas centrifugas bajas por poco tiempo (para organelas grandes), el sedimento se separa y se centrifuga el sobrenadante.
Luego se aplica fuerzas cada vez mayores por más tiempo.
3. Las fracciones, en orden de sedimentación, son: nuclear, mitocondrial, microsómica, soluble.
4. El aislamiento de microsomas requiere la unltacentrífuga (puede generar velocidades de 75mil rpm con fuerzas
equivalentes a 500 000 veces la de la gravedad).
Para aislar organelas particulares, se requiere de una purificación adicional mediante centrifugación por gradiente de
densidad donde se usa sacarosa para crear el gradiente. Los organelos celulares aislados conservan su actividad normal
siempre que se conserven bien.
Sistema libre de células: Sistema formado por los organelos resultantes de la homogeneización de varias células, conservan
sus funciones y sirven para estudiar gran variedad de funciones celulares.
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Fraccionamiento de Proteínas: Cromatografía Líquida
Cromatografía es el término que agrupa a técnicas donde una mezcla de componentes disueltos se
fracciona a su paso por una matriz porosa. Aquí nos encargamos de la cromatografía líquida (nada más
), que presenta:
Una fase inmóvil: matriz donde se mueve un solvente.
Una fase móvil: solvente con proteínas disueltas.
La fase inmóvil posee sitios de unión a proteínas. Mientras my afinidad posean las proteínas por la
matriz, más lento es su paso por la columna: se separa así a las proteínas por fracciones en diferentes
tubos.
HPLC: Cromatografía Mejorada de Alto Desempeño. Utiliza columnas altas y delgadas con una matriz
apretada no compresible. La fase móvil pasa a alta presión.

Cromatografía de Intercambio Iónico Cromatografía por Filtración en Gel Cromatografía por Afinidad
Fundamento: Propiedades
Fundamento: Carga iónica de la estructurales únicas de la proteína.
proteína. Fundamento: Tamaño Efectivo (Radio
Resinas: Matriz (agarosa por ej) unida
Resinas: De celulosa con residuos hidrodinámico) de la proteína.
covalentemente a sustancias
cargados unidos covalentemente. Resinas: De polisacáridos con enlaces
específicas (sustratos, ligandos,
DEAE Celulosa: Intercambiador aniónico (+) cruzados: Dextranos y Agarosa.
anticuerpos).
CM Celulosa: Intercambiador catiónico (-) Orden de salida de la columna:
Orden de salida de la columna:
Orden de salida de la columna: Proteínas más grandes a proteínas más
Proteínas no afines a proteína de unión
Proteínas con uniones más débiles a pequeñas.
específica a la resina.
proteínas con uniones más fuertes.
PUEDE LOGRAR PURIFICACIÓN CASI
TOTAL EN UN SOLO PASO.

Fraccionamiento de Proteínas: Electroforesis en gel de

poliacrilamida (PAGE)
Fundamento: capacidad de moléculas cargadas para migrar cuando se colocan en un campo
eléctrico (Densidad de carga). [Depende también del tamaño y de la forma de la proteína]
Al hacer electroforesis de proteínas, casi siempre se utiliza PAGE. La acrilamida es una
matriz gelatinosa con enlaces cruzados que forma un tamiz molecular. Puede amoldarse
como una losa entre placas de vidrio o como un tubo dentro de un cilindro de vidrio. El gel
polimerizado se suspende entre dos compartimientos que contienen un buffer en el que se
sumergen electrodos opuestos. El ejemplo siguiente es en un gel con forma de losa:
1. La muestra concentrada que contiene proteínas se coloca en ranuras sobre el borde
superior del gel.
2. Se aplica voltaje y la corriente fluye por la losa, las proteínas se mueven hacia el electrodo
de carga opuesta. Generalmente el buffer es alcalino, por lo que las proteínas poseen carga
negativa y migran al ánodo, que tiene carga positiva.
3. Luego de la electroforesis, la losa se retira de las placas de vidrio y se tiñe con Azul de
Coomassie o Tinción de Plata.
¿Cómo anticipamos el patrón de migración de una proteína?
Densidad de Carga: ↑ densidad de carga → ↑ velocidad de migración.
Tamaño: ↑ tamaño de la proteína → ↓ velocidad de migración.
Forma: Globulares y compactas migran más rápido que proteínas fibrosas y alargadas.
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El % de poliacrilamida del gel tiene relación inversa con el tamaño de las proteínas que se quiere separar! Ej:
5% de acrilamida → proteínas de 60 a 250 KDa.
15% de acrilamida → proteínas de 10 a 50 KDa.
A menor concentración de acrilamida en el gel, menos enlaces cruzados: la migración de moléculas proteicas es más rápida.
Otras opciones, aparte de la tinción, para la placa electroforética son:
*Uso de radioautografía: si la electroforesis se realizó con proteínas marcadas radiactivamente.
*El gel puede rebanarse: las proteínas de cada rebanada se aíslan aparte.
*Transferencia a una membrana de nitrocelulosa: por medio de una segunda electroforesis donde se forma una mancha,
a partir de ahí puede realizarse técnicas como Western Blot.

SDS PAGE
PAGE en presencia de SDS (Dodecil sulfato de Sodio), un detergente aniónico. SDS se une a todos los tipos de moléculas
proteicas y:
1. Las despliega, eliminando diferencias de forma como factor de separación.
2. Número de moléculas SDS que se une a una proteína es casi proporcional a la masa de la proteína, aprox 1,4g. de SDS por
gramo de proteína, por lo que todas poseen una densidad de carga equivalente.
En la SDS PAGE las proteínas se separan únicamente por diferencias en su masa molecular.
Las más grandes migran más despacio.
SDS PAGE puede usarse para: Fraccionamiento, determinación de masa molecular de una proteína.

Electroforesis en gel 2D
Sirve para fraccionar mezclas complejas de proteínas. Utiliza dos propiedades de las proteínas:
Punto isoeléctrico → Enfoque Isoeléctrico → Gel tubular.
Masa Molecular → SDS PAGE → Gel con forma de losa.
La técnica posee la resolución suficiente para distinguir la mayoría de las proteínas de una célula. Es ideal para detectar
cambios en proteínas de una célula en diferentes condiciones, en diferentes etapas del desarrollo o del ciclo celular o en
diferentes organismos.
NO es adecuada para diferenciar entre proteínas que tienen ↑↑Masa molecular, son ↑↑hidrófobas o tienen ↓↓ copias x
célula.

Fraccionamiento de Ácidos Nucleicos

Los métodos de fraccionamiento de ácidos nucleicos se basan en el tamaño, la composición de bases, la topología y la
secuencia de nucleótidos.

Fraccionamiento de Ácidos Nucleicos: Electroforesis en gel

RNA – DNA de ↓ tamaño Electroforesis en gel de poliacrilamida
RNA – DNA de ↑ tamaño Electroforesis en gel de agarosa (más porosa). La agarosa es un polisacárido extraído de
un alga.
DNA > 25 kb Electroforesis en campo con pulsos:
Luego de la electroforesis, los fragmentos de DNA en el gel se tiñen con bromuro de etidio, un agente intercalante que posee
fluorescencia al exponerse a luz UV.
La electroforesis tiene una sensibilidad muy alta: es capaz de diferenciar ácidos nucleicos con 1 nucleótido de diferencia.
La electroforesis se usa también para separar moléculas con diferente conformación: circular/lineal, relajada/superenrollada.

Fraccionamiento de Ácidos Nucleicos: Separación por Ultracentrifugación

Tamaño, forma, densidad de la sustancia Determinan si una sustancia se asienta o no
Densidad y viscosidad del medio en un medio
Durante la centrifugación: Partículas con más densidad que el medio se concentran en el fondo del tubo.
Partículas + grandes sedimentan más rápido que partículas pequeñas de densidad similar.
El desarrollo de ultracentrífugas permitió generar fuerzas centrífugas de hasta 500 000 veces la fuerza de la gravedad. Esta
fuerza contrarresta a la difusión, que ocasiona que las partículas se dispersen aleatoriamente.
Sedimentación por Velocidad [Por zona de velocidad] Centrifugación de Equilibrio [Centrifugación Isopícnica]
 Separación según la longitud del nucleótido*  Separación según densidad de flotación
 Medio con [sacarosa] creciente  Solución muy concentrada de sales de Cs; con el
A my coeficiente de sedimentación, más lejos se mueve la molécula centrifugado forma gradientes de densidad
La centrifugación nunca alcanza el equilibrio porque los ácidos La centrifugación es prolongada (2 a 3 días).
nucleicos son más densos que el medio. El método es bastante sensible como para separar moléculas de
Al final, el contenido del tubo se fracciona y se determinan las DNA con diferente composición de bases o diferentes isótopos de
14 15
posiciones relativas de las moléculas. nitrógeno ( N, N)
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Velocidad de Se mide en unidades Proporciona tamaño

Coeficiente de
Sedimentación: Svedberg. relativo en moléculas
Sedimentación:
Rapidez con que una Conocer el coef. De del mismo tipo:
Velocidad de
molécula se mueve como sedimentación no rRNA de E coli:
Sedimentación dividida
rta a una fuerza proporciona la masa 5S: 120NT. 16S: 1600NT.
por la fuerza centrífuga.
centrífuga. molecular. 23S: 3200NT.

Hibridación de Ácidos Nucleicos

Técnicas que se basan en que 2 moléculas de ácidos nucleicos de cadena sencilla con secuencias de bases complementarias
pueden formar un híbrido de doble cadena.
Ej: DNA desnaturalizado + mRNA de proteína específica = Híbrido mRNA-DNA
Otro ejemplo: en una mezcla de fragmentos de DNA de longitud y composición de bases idénticas se quiere aislar un
fragmento que representa una porción del gen de la globinaβ. Entonces, un mRNA de globinaβ se puede usar para crear un
híbrido mRNA-DNA que se puede separar del resto por cromatografía.
Puede ser que 2 poblaciones de moléculas estén en solución, o una puede estar inmovilizada, por ejemplo, dentro de un
cromosoma.
La hibridación es fundamental para métodos de identificación de moléculas, como lo son:

Gen diana
Southern Blot: Identificar DNA que forme híbridos con una cadena marcada de DNA.

Sonda
Northern Blot: Identificar RNA que forme híbridos con una cadena marcada de DNA.
Una sonda es un fragmento de DNA/RNA marcado que se agrega al medio y se une a una “diana”.
Las sondas pueden etiquetarse de diferente manera:
32
Isótopo radiactivo ( P), detectado por autorradiografía. El uso de fluoróforos detectados por fluorescencia. Biotina, que se
detecta con avidina marcada con un fluoróforo.
La hibridación puede proporcionar una medida de la similitud en la secuencia de NT entre dos muestras de DNA de
organismos distintos; mientras más lejana sea la relación evolutiva entre las dos especies, mayor es la divergencia en sus
secuencias de DNA. Cuando se permite que DNA de distintas especies formen de nuevo hélices dobles en diferentes
combinaciones, la temperatura de fusión (Tm) de las cadenas dobles híbridas proporcionan una medida de la distancia
evolutiva entre organismos.

ADN Recombinante
ADN recombinante es el nombre que se da a moléculas que contienen secuencias de DNA derivadas de más de una fuente.
Una de sus aplicaciones más importantes es el aislamiento de algún segmento de DNA que codifica un polipéptido
determinado. Para la construir un DNA recombinante son necesarias las endonucleasas de restricción.
Endonucleasas de restricción
O simplemente, enzimas de restricción. Aisladas a partir de bacterias.
En bacterias destruyen DNA vírico restringiendo el crecimiento de los virus. El DNA bacteriano está protegido por metilación,
una modificación que bloquea la acción de la enzima.
Las ER aisladas de cientos de organismos procariotas reconocen más de 100 secuencias de nucleótidos diferentes, que en su
mayoría son:
*de 4 – 6 nucleútidos de largo
*con alguna simetría interna (palíndromo).
Las secuencias con simetría rotatoria doble son conocidas como palíndromos. En la imagen de la
derecha, los puntos indican dónde la secuencia se halla metilada en el DNA bacteriano. Las
flechas indican el punto de corte de la enzima EcoRI.
Secuencia Corte escalonado.
reconocida Extremos
por Eco RI pegajosos.

Secuencia Corte no
reconocida escalonado.
por SmaI Extremos romos.

Varias enzimas de restricción se pueden utilizar en la elaboración de mapas de restricción.

Formación de DNA recombinante:

1) Tratar un plásmido bacteriano (u otro vector) y la porción de DNA que se desea aislar con la misma enzima de restricción.
Esta enzima deberá hacer cortes escalonados, es decir, dejar extremos pegajosos.
2) Incubar los fragmentos de plásmido y DNA en presencia de una ligasa (enzima que creará uniones fosfodiéster entre
plásmido y DNA). En el procedimiento, se produce gran cantidad de moléculas recombinantes distintas, cada una de las
cuales posee el plásmido más alguna porción de DNA.
3) Se separa el recombinante deseado mediante clonación de DNA.
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EMP
Clonación de DNA
Técnica utilizada para:
1) Producir grandes cantidades de un segmento de DNA específico.
2) Aislar una forma pura de cualquier segmento de DNA en una población grande y heterogénea de moléculas de DNA
(separar los diferentes DNA de una mezcla).
DNA Recombinante

DNA + Vector ¡La bacteria

Bacteria Hospedadora hospedadora replica al
Plásmido DNA recombinante!
DNA de Bacteriófago λ

Vector: Vehículo para transportar DNA extraño a la célula hospedadora. Posee secuencias que le permiten replicarse dentro
de la célula hospedadora.
El número de moléculas de DNA aumenta en proporción con el número de células bacterianas o con la progenie vírica que se
forman. De un solo DNA recombinante en una sola célula bacteriana puede obtenerse millones de copias en un período
corto.
Clonación de DNA eucariota en plásmidos bacterianos:
1) Formación del recombinante DNA-Plásmido. El plásmido está modificado: contiene un origen de replicación y uno o más
genes para resistencia a antibióticos.
2) Los plásmidos se agregan a un cultivo de bacterias tratadas con calcio. Al ser estimuladas por calor, las bacterias captan el
DNA del medio.
Solo un pequeño porcentaje de las células son competentes para captar y retener moléculas de
plásmido recombinante. El plásmido, dentro de la bacteria, se replica en forma autónoma y se pasa
a la progenie durante la división celular.
3) Las bacterias que contengan el plásmido pueden seleccionarse de las demás tratando al cultivo con el antibiótico para el
cual el plásmido trae la resistencia.
Todo lo hecho hasta ahora tiene el objetivo de aislar un pequeño fragmento de DNA que contiene el
gen de la insulina. Se ha formado una población de bacterias que contienen muchos plásmidos
recombinantes distintos, muy pocos de los cuales albergan el gen que se busca.
4) Las células con plásmido pueden crecer a bajas densidades en cajas de Petri donde cada clon de bacterias permanece
separado de otros clones de bacterias. Los clones poseen diferentes fragmentos de DNA ajenos. Así, el investigador puede
buscar entre las colonias las pocas que contienen el gen que busca: el de la insulina.
5) Se detecta el DNA particular (de la insulina) en un clon de bacterias por medio de técnicas combinadas de chapado de
réplica e hibridación in situ.
6) Se cosechan las células, se extrae el DNA recombinante (se lo separa del cromosoma bacteriano por centrifugación de
equilibrio). Se trata al plásmido recombinante con la misma enzima de restricción que se usó para su formación, liberando los
segmentos clonados.
7) El DNA clonado se separa del plásmido por centrifugación.
Clonación de DNA eucariota en cromosomas de fagos:
El genoma λ es una molécula lineal de DNA de cadena doble de unas 50 kb de largo. La cepa que se
utiliza habitualmente contiene dos sitios de división para EcoRI.
1) Se procesa el DNA del bacteriófago λ con EcoRI, que lo parte en 3 segmentos. Toda la información esencial para la
infección y lisis celular está contenida en los dos segmentos exteriores, el fragmento del medio puede remplazarse por un
DNA de hasta unas 25 kb.
2) Las moléculas recombinantes pueden empacarse in vitro en cabezas de fagos, que pueden usarse para infectar bacterias
hospedadoras.
3) Dentro de la bacteria, el DNA eucariota se amplifica con el DNA vírico y se empaca en una nueva generación de viriones
que se liberan cuando la célula se destruye.
4) Luego de la liberación de fagos se observa una “placa” en el prado bacteriano en el sitio de infección. Cada placa tiene
millones de partículas de fago.
El fragmento λ es atractivo como vector porque: El DNA se empaca en una forma fácil de almacenar
y extraer; todo paquete con DNA recombinante es capaz de infectar a una célula bacteriana; una
sola caja de petri puede contener más de 100 000 placas diferentes.
Las cajas de cultivo que contienen colonias bacterianas o placas de fagos se revisan para detectar una secuencia de DNA
particular con técnicas combinadas de chapado de réplica e hibridación in situ.

Reacción en Cadena de la Polimerasa

Técnica que permite amplificar un fragmento específico de DNA sin necesidad de usar bacterias ni endonucleasas de
restricción. PCR es fácil de adaptar a moldes de RNA:
Transcriptasa Inversa DNA ya puede usarse
RNA DNA en PCR!
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La PCR utiliza una Polimerasa de DNA especial: la Polimerasa Taq extraída de una bacteria llamada Termus aquaticus. La Taq
funciona normalmente a 70°C.
Procedimiento: DNA + Taq + ↑[dATP, dGTP, dCTP, dTTP] + Cebadores.
Ciclos que se repiten, diferentes temperaturas en cada etapa del ciclo:

95°C: Desnaturalización del DNA

60°C: Unión de cebadores a DNA blanco
72°C: Taq funciona

Con cada ronda se duplica la cantidad de DNA flanqueado por los cebadores. El aumento de la cantidad de DNA es
2 3 4
exponencial (en el segundo ciclo, 2 ; en el tercero, 2 ; en el cuarto, 2 ; etc.). Puede conseguirse miles de millones de copias
en algunas horas con “generadores de ciclos térmicos”.
Aplicaciones de la PCR: Amplificación para clonación o análisis, investigación de la presencia de secuencias de DNA
específicas, comparación de moléculas de DNA y cuantificación de plantillas de DNA o RNA.

Uso de anticuerpos
Los anticuerpos o inmunoglobulinas son proteínas que se producen en los tejidos linfoides como respuesta a materiales
extraños o antígenos. Los anticuerpos tienen como propiedad su especificidad para unirse solo con moléculas
seleccionadas que tienen una pequeña parte que se adapta a los sitios de unión de antígeno de las moléculas de
anticuerpo.
Pueden obtenerse dos anticuerpos que distinguen a dos polipéptidos que difieren solo en un aminoácido o en una sola
modificación postraduccional.
Los anticuerpos pueden obtenerse de dos formas:
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Procedimiento:
1. Inyección repetida a un animal (conejo o cabra) de un antígeno
Anticuerpos 2. Extracción de sangre del animal tras varias semanas, la sangre contiene los anticuerpos
policlonales 3. Se produce antisuero eliminando células y factores de coagulación a partir de la sangre
4. Purificación de las inmunoglobulinas
OBS: Siempre se producen distintas especies de diferentes inmunoglobulinas.
Tener en cuenta que:
a. Las células productoras de anticuerpos específicos no crecen ni se dividen en cultivo
b. Las células de mieloma maligno son cancerosas y crecen en cultivo; producen anticuerpos
Podemos combinar las propiedades del linfocito productores de anticuerpos con las células inmortales
de mieloma. La función de linfocito y célula de mieloma se denomina hibridoma.
El hibridoma: a. crece y prolifera de manera indefinida
Anticuerpos
b. produce grandes cantidades del anticuerpo que el linfocito normal sintetizaba
monoclonales
Procedimiento:
1. Inyección del antígeno en un ratón para inducir proliferación de linfocitos productores de anticuerpo
2. Extracción del bazo tras varias semanas, separación de las células individuales
3. Fusión de los linfocitos productores de anticuerpos con células de mieloma maligno
4. Incubación de las células en medio HAT, donde solo pueden sobrevivir los hibridomas.
5. Crecimiento de los hibridomas en pocillos separados y control para detectar producción de anticuerpo
Utilidades de los anticuerpos:
1. Purificación de proteínas
2. Identificar una proteína particular entre una mezcla de proteínas (Western blot)
2. Los anticuerpos monoclonales
a. tienen una participación en medicina diagnóstica en pruebas para determinar la concentración de proteínas en
sangre u orina (¡pruebas de embarazo!)
b. agentes terapéuticos en humanos (artritis reumatoide)

Inmunocitoquímica o inmunohistoquímica
Técnicas que se basan en el uso de anticuerpos para localizar una proteína específica dentro de la célula. Mediante un
anticuerpo marcado puede detectarse el sitio de la célula donde reside determinada molécula.
Anticuerpo + marcador fluorescente (microscopio fluorescente)
Anticuerpo + peroxidasa (microscopía óptica)
Anticuerpo + metales pesados (oro) (microscopía electrónica)
Anticuerpo + isótopos radiactivos (microscopía óptica y electrónica)

Inmunofluorescencia
Para localizar una proteína particular dentro
de una célula tal como se observa al
microscopio óptico.
Inmunofluorescencia directa:
Se unen anticuerpos a marcadores
fluorescentes (rodamina o fluoresceína), se
incuban con células o secciones de células y
se observa al microscopio de fluorescencia.
Inmunofluorescencia indirecta:
Las células se incuban con un anticuerpo no
marcado y se permite que formen complejos
con el antígeno correspondiente. Se revela la
localización de la pareja antígeno anticuerpo
con preparación de anticuerpos con marca
fluorescente dirigidos contra los anticuerpos
empleados en el primer paso.
La inmunofluorescencia indirecta produce una imagen más brillante que la directa. También, el anticuerpo fluorescente
utilizado es más fácil de conseguir.

Al microscopio electrónico, la localización de antígenos se logra con anticuerpos que se marcaron con materiales
electrodensos (ferritina, oro).
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Reseña de organelas e inclusiones citoplásmicas a la microscopía

Organela Tamaño A la microscopía óptica A la microscopía electrónica
Rodeado por dos membranas que
Organela más grande de la célula.
poseen complejos de poros, entre las
Límites bien definidos.
Núcleo 5 – 10 μm
Se puede observar nucléolos y
membranas existe una cisterna
perinuclear. Regiones de
distribución de cromatina.
heterocromatina y eucromatina.
Región basófila circular dentro del
núcleo. Visible en células vivas con el Estructura densa no membranosa que
Nucléolo 1 – 2 μm
microscopio de interferencia durante contiene material fibrilar y granular.
toda la interfase.
Membrana externa de la célula y
membranas que rodean a orgánulos
Membrana
6 – 10 nm No visible intracelulares; dos capas electrodensas
plasmática separadas por una capa intermedia
electrolúcida
Con frecuencia, se ve una región basófila Los túbulos, cisternas y sacos aplanados
Superficie
RER 5 – 10 μm
2 en el citoplasma que recibe el nombre están limitados por la membrana con
de ergastoplasma. ribosomas adosados.
No visible. El citoplasma en la región del Los túbulos, cisternas y sacos aplanados
En todo el
REL citoplasma
REL puede excibir eosinofilia bien están limitados por la membrana sin
definida. ribosomas adosados.
A veces se observa una zona sin tinción.
En las impregnaciones con metales Las pilas o rimeros de sacos
Aparato de Superficie
2 pesados, aparece un entramado membranosos aplanados con frecuencia
Golgi 5 – 10 μm
reticular. Visible en células vivas con el se hallan contiguos al núcleo.
microscopio de interferencia.
Muchas vesículas limitadas por
membrana, de tamaño relativamente
Vesículas de Se ven solo cuando son muy grandes (ej,
50 nm – 1 μm pequeño y diámetro uniforme. Con
secreción gránulos de zimógenos en el páncreas)
frecuencia polarizadas hacia un lado de
la célula.
A veces, se observa en situaciones
favorables (p. ej. en células hepáticas o
Membrana doble: una externa lisa y una
Mitocondrias 0,2 – 7 μm neuronas) unos puntos oscuros muy
interna con muchos pliegues (crestas).
pequeños, visibles en las células teñidas
con colorantes como verde Jano
Estructuras tubulovesiculares con luz
subdividida en las cuales se ven material
Endosomas 20 – 500 nm No visibles.
electrolúcido u otras vesículas más
pequeñas.
Solo visibles con tinciones histoquímicas Vesículas limitadas por membrana
Lisosomas 200 – 500 nm
enzimáticas especiales. simple, a menudo, electrodensas.
Vesículas limitadas por membrana
Solo visibles con tinciones histoquímicas
Peroxisomas 200 – 500 nm
enzimáticas especiales.
simple, a menudo, con inclusiones
cristaloides electrodensas.
Se ven solo cuando se organizan en Patrón de tinción lineal y alargado con
Citoesqueleto 6 – 25nm estructuras mayores (p. ej. fibrillas espesor y características típicas de cada
musculares). clase de filamento.
Puntos oscuros muy pequeños que, con
Ribosomas 25 nm No visibles.
frecuencia, se asocian al RER
Inclusiones pequeñas, muy densas,
Glucógeno 10 – 40 nm Se observa con tinción de PAS.
como racimos, sin membranas.
Visibles con facilidad cuando son muy
Inclusiones sin membrana. Suelen
grandes. Teñidos con H y E se observan
Lípidos 0,2 - 80 μm
como espacios vacíos. Se tiñen con
aparecer como espacios vacíos en el
corte.
Sudán.