Agar Capmpylobater
Agar Capmpylobater
pH 7,3
bioMérieux SA Español - 1
Agar CampyFood (CFA) 13250 J - es - 2018-09
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6. Examine los cultivos después de 44 ± 4 horas de 2. Prepare la suspensión inicial en solución salina de
incubación. peptona o agua de peptona tamponada (p. ej. dilución
- Realice un recuento del número de colonias 1/10).
características. 3. Inocule 0,1 mL en una placa de agar CampyFood
- Consultar la norma EN ISO 7218 para conocer mediante siembra en superficie. Si fuera necesario,
el método de recuento y cálculo. (5) repita la operación usando diluciones decimales
Notas: posteriores. Según la norma EN ISO 7218 (5), es
- También se puede preparar la suspensión inicial en suficiente una placa por dilución si se analizan dos
agua de peptona tamponada, lo que permite la diluciones sucesivas.
detección simultánea de Salmonella. 4. Deje las placas a temperatura ambiente durante
- Si fuera necesario, para determinados productos aproximadamente 15 minutos para permitir que el
y para estimar números pequeños, distribuya inóculo se absorba.
e inocule sembrando 1 mL en 3 placas de CFA. 5. Coloque las placas en una atmósfera microaeróbica.
III - PROTOCOLO APROBADO POR EL AOAC RI 6. Incube las placas en posición invertida a 42 °C.
(N.° 071201): Examine los cultivos después de 44 ± 4 horas de
incubación.
Método simplificado de detección CampyFood
1. Introduzca asépticamente en la bolsa de LECTURA E INTERPRETACIÓN
homogeneización Combibag™, por el lado contrario al • Después de la incubación, observe la proliferación
bolsillo (consulte el folleto de la bolsa), 25 g de muestra bacteriana.
o 30 mL de agua de lavado de canales o la esponja. • Registre la presencia y, cuando corresponda, cuente
Nota: Los procedimientos de toma de muestras de cualquier colonia pequeña de color entre rojo intenso
agua de lavado de canales de pollo y de superficie de (burdeos) y rojo anaranjado, a veces con un brillo
canales de pavo han sido realizados conforme al metálico.
Método de Referencia USDA-FSIS MLG 41.01 (6). Nota: El brillo metálico es únicamente un criterio de
2. Añada 225 mL de caldo CampyFood. orientación, otros microorganismos también pueden
presentar dicha característica.
3. Mezcle con un homogeneizador de palas. Coloque la
bolsa en el homogeneizador de manera que la unión En algunos casos, las colonias de Campylobacter
horizontal del bolsillo interno quede alineada con la pueden:
abertura del homogeneizador. La parte superior de la - producir un color entre rojo rosáceo y marrón oscuro;
bolsa, donde se encuentra el bolsillo, debe - extenderse y presentar un centro oscuro rojo
mantenerse seca. anaranjado y un borde granular e irregular.
• La confirmación de los microorganismos aislados se
4. Extraiga un generador de atmósfera microaeróbica
debe realizar mediante pruebas adicionales.
(GENbox microaer) de su embalaje de aluminio,
dóblelo por la mitad en sentido longitudinal y Confirmación de resultados positivos
deposítelo en el bolsillo interior de la bolsa de
homogeneización Combibag. Debe llevar guantes Confirmación de Campylobacter según la norma
para realizar esta operación. ISO 10272-1:
Si se obtienen colonias características, vuelva a aislar
5. Cierre inmediatamente la bolsa con el clip de sellado
5 colonias en un agar sangre no selectivo y a
incluido en el kit. Cierre el clip en toda su longitud para
continuación realice la confirmación según el método
asegurar que la bolsa queda cerrada herméticamente.
descrito en la norma.
El tiempo entre la apertura de la bolsa GENbox y el
cierre de la bolsa de homogeneización Combibag Confirmación NF VALIDATION y validación Microval:
no debe superar los 30 segundos. Confirmación de Campylobacter según los métodos de
Nota: No utilice el clip de sellado si no cierra detección y recuento simplificados:
correctamente. En el contexto de la marca NF validation y validación
6. Incube la bolsa de homogeneización Combibag Microval, todas las colonias características deben
durante 48 ± 4 horas a 42 ± 1 °C en una atmósfera confirmarse.
microaeróbica. Seleccione de 1 a 5 colonias características siguiendo
7. Inocule el agar CampyFood. uno de los procedimientos siguientes (para el método de
recuento, si se efectúa la confirmación de cinco colonias
8. Coloque las placas en una atmósfera microaeróbica.
se puede correr el riesgo de una sobrestimación debido a
9. Incube las placas en posición invertida a 42 ± 1 °C. la presencia de colonias características que no sean
Examine los cultivos después de 44 ± 4 horas de Campylobacter spp.):
incubación.
Pruebas convencionales descritas en los métodos
Método simplificado de recuento CampyFood normalizados por CEN o ISO (incluido el paso
1. Introduzca asépticamente en la bolsa de de purificación) (2, 3).
homogeneización Combibag, por el lado contrario al Método simplificado:
bolsillo (consulte el folleto de la bolsa): Vuelva a aislar colonias características de la manera
X g de muestra o X mL de agua de lavado de canales siguiente:
o la esponja. - la mitad de la colonia en un agar sangre no selectivo
Nota: Los procedimientos de toma de muestras de incubado a 41,5 °C durante 48 ± 4 horas en una
agua de lavado de canales de pollo y de superficie de atmósfera aeróbica.
canales de pavo han sido realizados conforme al
Método de Referencia USDA-FSIS MLG 41.01 (6).
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- la otra mitad de la colonia en un agar sangre no 3 colonias. Si el resultado es negativo, siga uno de los
selectivo incubado a 41,5 °C durante 48 ± 4 horas en otros procedimientos de confirmación.
una atmósfera microaeróbica.
Confirmación AOAC RI: Confirmación de Campylobacter
Nota: La incubación de los agares con sangre puede según los métodos de detección y recuento simplificados:
prolongarse hasta 72 horas. En este caso, el Método general:
Campylobacter puede tener una morfología menos
Confirme un mínimo de una colonia característica
característica (cocobacilos).
siguiendo las pruebas descritas en el Método de
Se deben realizar un examen microscópico y una prueba
Referencia USDA-FSIS MLG 41.01 (6).
de oxidasa a las colonias que han crecido
exclusivamente en una atmósfera microaeróbica. Se Método VIDAS® CAM:
puede confirmar el género Campylobacter si la colonia Prepare una suspensión en 2 mL de solución salina de
crece exclusivamente en condiciones microaerófilas, peptona empleando de 1 a 5 colonias características
tiene una morfología característica y es oxidasa positivo. aisladas o no aisladas.
Caliente en un baño María a 95-100 °C durante
Método VIDAS® CAM:
5 ± 1 minutos.
Prepare una suspensión en 2 mL de solución salina de Deje que los tubos alcancen la temperatura ambiente.
peptona empleando de 1 a 5 colonias características Mezcle cuidadosamente empleando un agitador tipo
aisladas o no aisladas. vórtex y transfiera 0,5 mL a un cartucho VIDAS® CAM.
Caliente en un baño María a 95-100 °C durante
5 ± 1 minutos. Si se utiliza el bloque calefactor VIDAS® Heat and Go,
Deje que los tubos alcancen la temperatura ambiente. transfiera 0,5 mL de la suspensión al pocillo para la
Mezcle cuidadosamente empleando un agitador tipo muestra del cartucho. Caliente durante 5 ± 1 minutos
vórtex y transfiera 0,5 mL a un cartucho VIDAS® CAM. (consulte el Manual de Usuario de VIDAS® Heat and Go).
Si se utiliza el bloque calefactor VIDAS® Heat and Go, Retire el cartucho y déjelo enfriar durante 10 minutos.
transfiera 0,5 mL de la suspensión al pocillo para la Realice el ensayo VIDAS®. Un resultado positivo
muestra del cartucho. Caliente durante 5 ± 1 minutos confirma la presencia de Campylobacter.
(consulte el Manual de Usuario de VIDAS® Heat and Go).
Retire el cartucho y déjelo enfriar durante 10 minutos. CONTROL DE CALIDAD
Realice el ensayo VIDAS®. Un resultado positivo El agar CampyFood se ha diseñado y desarrollado para
confirma la presencia de Campylobacter. satisfacer las exigencias de calidad más estrictas.
Los resultados de las cepas analizadas en el control de
Nota: Para el método de recuento simplificado, realice el calidad lote por lote figuran en el certificado de control de
ensayo VIDAS® CAM a cada colonia característica calidad, que está disponible en la biblioteca técnica de
aislada (no realice más de 5 ensayos VIDAS® CAM a bioMérieux ([Link]).
5 colonias características aunque haya un número mayor
de colonias en el agar CampyFood). Si se analiza una LIMITES DE LA PRUEBA
mezcla de varias colonias y se obtiene un resultado • Ciertas cepas distintas de Campylobacter que crecen
positivo con VIDAS® CAM, el número total de colonias en este medio pueden producir colonias rojas
analizadas se considerará Campylobacter. (Acinetobacter baumanii, B. cereus, Leuconostoc,
P. aeruginosa, E. cloacae, Lactobacillus spp, etc.).
Kit de látex de Campylobacter spp
Generalmente producen colonias más grandes con
Realice una prueba de látex con el kit de látex aspecto mucoso.
Campylobacter directamente sobre una colonia aislada • Algunas cepas de Campylobacter pueden producir un
(siga las instrucciones del folleto). También se ha crecimiento débil en condiciones aeróbicas (este
validado el uso de la prueba de látex tras el aislamiento fenómeno aparece como un crecimiento débil en el
en agar Columbia con sangre. punto de inoculación, en particular en medios con
Espectrometría de masas VITEK® MS sangre no selectivos incubados en condiciones
Use una colonia aislada en CampyFood o una colonia aeróbicas mediante el método de confirmación
purificada en agar sangre para realizar una prueba con convencional).
VITEK® MS (siga las recomendaciones del Manual de • El crecimiento depende de los requerimientos
usuario del flujo de trabajo de VITEK® MS). particulares de cada microorganismo. Por lo tanto, es
Para la confirmación deben usarse cultivos almacenados posible que algunas cepas de Campylobacter que
durante menos de 24 horas tras la incubación. requieran condiciones específicas (sustrato,
Nota: El instrumento VITEK® MS está destinado a usarse temperatura, etc.), no lleguen a desarrollarse o
para la confirmación de Campylobacter. Solo debe produzcan colonias incoloras, por ejemplo algunos
tenerse en cuenta la confirmación en el nivel de género. C. fetus, C. lari, C. upsaliensis y C. sputorum.
La identificación no se incluye en el contexto de la • Durante la ampliación de la certificación
certificación de NF VALIDATION. NF VALIDATION para el método Agar CampyFood, la
prueba de látex no permitió la detección de 9 de las
En el caso de obtener resultados discordantes (positivo 152 cepas de Campylobacter analizadas con agar
con el método alternativo, no confirmado con uno de los CampyFood. No obstante, estas 9 cepas se detectaron
métodos arriba descritos y, particularmente, en la prueba cuando se realizó la prueba con una mezcla de
de látex), el laboratorio debe llevar a cabo los pasos 3 colonias.
necesarios para asegurar la validez de los resultados
obtenidos. Por ejemplo, puede seguirse uno de los otros
procedimientos de confirmación indicados.
Si el resultado de la prueba de látex es negativo, puede
realizarse una nueva prueba con una mezcla de
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RENDIMIENTO
Los datos de rendimiento obtenidos en el contexto de la El AOAC Research Institute ha validado y certificado
certificación de NF VALIDATION están disponibles en el el método CampyFood simplificado como
informe resumido del sitio web de AFNOR Certification: Performance Tested Method (certificado n.º 071201)
[Link] para la detección y recuento de Campylobacter.
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Fecha de fabricación
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HISTÓRICO DE REVISIONES
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