Identificación:

Instrucción para la INS-IM-001

determinación de Revisión: 01
TSH Inicio de vigencia:
2024-02-14

DOCUMENTO CONTROLADO
INS-IM-001 Instrucción para la determinación de TSH
Copia controlada No.: original

Puesto o
Nombre Firma Fecha
función

Elaboró:
QFB. HECTOR HUGO PEREZ GESTOR DE
2024-02-14
RAMIREZ CALIDAD

Revisó: QFB. FERNANDO VERTIZ QUIMICO

2024-02-14
MENDOZA ANALISTA

Aprobó:
[Link] REBOLLAR DIRECTOR
2024-02-14
PEREZ GENERAL

Localización del documento:

BIOQUIMICA CLINICA

Control de Cambios

Fecha de
Estado inicio de Revisión Descripción del cambio realizado Realizó Revisó Aprobó
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1. Objetivo

Medición cuantitativa de la concentración de TSH en suero. Solo para diagnóstico

in vitro.

2. Alcance

El procedimiento que a continuación se describe, va dirigido a todo personal

capacitado para el proceso de muestras biológicas del “Laboratorio CIEM” como
herramienta de apoyo para el proceso del análisis de TSH.

3. Abreviaturas y definiciones

hTSH/TSH – Hormona estimulante de tiroides

4. Principio e interpretación clínica

La hormona estimulante de la tiroides es una glucoproteína de aproximadamente

30 000 daltones de peso molecular sintetizada y secretada por los tirotropos (células
basófilas) de la glándula pituitaria anterior. La TSH está formada por dos
subunidades unidas de forma no covalente, alfa y beta. Es un miembro de la familia
de hormonas glucoproteicas que incluye la hormona foliculoestimulante (FSH), la
hormona luteinizante (LH) y la gonadotropina coriónica humana (hCG). Estas
glucoproteínas constan de una subunidad α común y una subunidad β única, que
confiere especificidad biológica a cada hormona. La expresión y la actividad
biológica de la TSH requieren una asociación no covalente de las subunidades alfa
y beta.
Las principales funciones de la TSH son mantener la biosíntesis y la secreción de
las hormonas tiroideas tiroxina (T4) y 3,5,3′-triidotironina (T3). La TSH actúa sobre
el epitelio folicular tiroideo y su secreción está regulada por la hormona liberadora
de tirotropina (TRH). Las hormonas tiroideas T3 y T4 controlan la secreción de TRH
y TSH por retroalimentación negativa para mantener los niveles fisiológicos de las
principales hormonas del eje hipotálamo-hipófisis-tiroides. La reducción de los

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niveles de hormonas tiroideas circulantes debido a la insuficiencia tiroidea primaria

provoca el aumento de la producción de TRH y TSH, mientras que ocurre lo
contrario cuando hay exceso de hormonas tiroideas circulantes.
La TSH sérica sigue siendo la principal prueba de detección de la disfunción tiroidea.
En los casos de hipotiroidismo primario, los niveles de T3 y T4 son bajos y los
niveles de TSH están significativamente elevados. El hipotiroidismo secundario es
menos frecuente y tiene su origen en alteraciones del eje hipotálamo-hipófisis. El
hipertiroidismo primario se caracteriza por concentraciones séricas elevadas de
hormonas tiroideas y niveles deprimidos o indetectables de TSH. Cuando la FT4
sérica es baja y, sin embargo, la TSH sérica está mínimamente elevada, debe
considerarse el diagnóstico de hipotiroidismo central. La TSH por sí sola no puede
utilizarse para diagnosticar el hipotiroidismo central porque los ensayos actuales de
TSH miden isoformas de TSH biológicamente inactivas. La American Thyroid
Association ha recomendado formalmente el uso de la sensibilidad funcional como
medio para cuantificar la sensibilidad de los ensayos de TSH. Los ensayos de TSH
de tercera generación presentan un CV entre ensayos del 20 % en <0,02 μUI/mL y
sirven para discriminar a los pacientes con hipertiroidismo verdadero de aquellos
con supresión de TSH que se observa en el hipertiroidismo subclínico y en algunas
enfermedades no tiroideas. El diagnóstico de laboratorio del hipotiroidismo y el
hipertiroidismo se respalda con las pruebas de FT3 y FT4.
La muestra, el tampón y las microperlas magnéticas recubiertas con el anticuerpo
monoclonal anti-TSH, otro anticuerpo monoclonal anti-TSH marcado con ABEI se
mezclan completamente y se incuban, para formar complejos tipo sándwich.
Después de la precipitación en un campo magnético, el sobrenadante se decanta y,
luego, se realiza un ciclo de lavado. Posteriormente, se agrega el iniciador 1 + 2
para iniciar una reacción quimioluminiscente. La señal luminosa se mide con un
fotomultiplicador como unidades de luz relativas (RLU), que es proporcional a la
concentración de TSH presente en la muestra.

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5. Materiales y reactivos
5.1 Método

Inmunoensayo por quimioluminiscencia tipo sándwich.

5.2 Lista de materiales

5.3 Reactivos
5.3.1 Preparación del reactivo

Los reactivos ya vienen preparados y listos para su uso, solo se deben atemperar
antes de usarlos.

5.3.2 Rendimiento aceptable del reactivo

Se considera aceptable 70% del kit (equivalente a 35 pruebas en la presentación de

50 pruebas), si no se presentan fallas que ameriten reprocesos o análisis
adicionales del control de calidad.

5.3.3 Almacenamiento y estabilidad del reactivo

Almacenamiento: Este producto debe almacenarse entre 2-8 °C antes de usar. En

uso se garantiza por proveedor una estabilidad mínima de 4 semanas.
La fecha de caducidad se encuentra impresa en el envase.

Mantener Lejos De La Luz Solar.

5.4 Equipos y aparatos

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Snibe Maglumi 800.

Centrifuga para muestras biológicas.

Pipeta de volumen variable (100 a 1000 µL)

6. Muestra
6.1 Preparación del paciente

Se debe solicitar al paciente un ayuno de 8 horas como mínimo o un máximo de 12

horas.

6.2 Tipo de muestra

Suero.

6.3 Almacenamiento y estabilidad de la muestra

- Las muestras extraídas del separador, los glóbulos rojos o el coágulo pueden
almacenarse hasta 8 horas a una temperatura de entre 15 °C y 25 °C, o
almacenarse 7 días a una temperatura de entre 2 °C y 8 °C o almacenarse
hasta 30 días congeladas a -20 °C o menos. Se evaluaron muestras
congeladas sometidas a hasta 1 ciclo de congelación y descongelación.
- Evite usar suero con lipemia.
- No use plasma o suero hemolizado.
6.4 Tipo de contenedor y aditivos

Tubo para suero con gel separador (tapón amarillo o dorado) o tubo con activador
de sílice (tapón rojo). Aditivos: gel de polímero y activador de coagulación

7. Procedimiento de calibración

Revisar procedimiento estándar de Operación MAGLUMI 800 (DEXT-01)

7.1 Preparación de los calibradores

Los calibradores vienen incluidos en el kit de la prueba y vienen listos para su uso.

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7.2 Almacenamiento y estabilidad de los calibradores

Los calibradores son estables hasta su fecha de caducidad (impresa en el envase)

si se almacenan en temperatura de refrigeración.

7.3 Aceptación de la calibración

Este método ha sido estandarizado con el Primer Estándar Internacional 92/510 de

la OMS. La prueba de los calibradores específicos permite que los valores RLU se
ajusten a la curva maestra asignada. Los resultados se determinan mediante una
curva de calibración que es específica del instrumento y generada por una
calibración de 2 puntos, y se proporciona una curva maestra (10 calibraciones)
mediante el reactivo CHIP de identificación por radiofrecuencia (RFID, por sus siglas
en inglés).

Hay dos parámetros principales a checar en los valores de calibración.

- Si el kit es recién abierto:

Ensayos de 1- paso: CV < 10%

- Si el kit ha sido abierto hace más de 1 a 2 semanas:

Ensayos de 1-paso: CV < 10%

Si la calibración es OK, localice la opción <Validar> y <Recalcular muestras

asociadas>, pulsar el botón <OK> para confirmar la calibración.

Si la calibración esta fuera de rango, localice la opción <rechazar> y pulse el botón

<OK> para rechazar la calibración. Después cheque la razón y recalibre.

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8. Desarrollo metodológico
- CARGUE EL RACK DE MUESTRAS
o Coloque las muestras en el rack y asegúrese de que el código de
barras este hacia la derecha.
o Cargue el rack de muestras hasta el fondo de cualquier rack. Si el rack
es reconocido correctamente se muestra un color verde. De lo
contrario se muestra un color rojo.
- IDENTIFICACIÓN DE MUESTRAS:
o Pulse el rack de muestras de color verde para seleccionarlo, y elija la
muestra en la posición correspondiente, una flecha el siguiente paso.
Sin código de barras, introduzca el ID de la muestra pulsando dos
veces. Con código de barras, esta será reconocida automáticamente.
o Elija el ensayo en el lado derecho de la pantalla.
o Cuando la edición finaliza, pulse “Lista de trabajo”, “y/o Grupo”. Para
verificar la lista de ensayos.
o Pulse <OK> - <Inicio> para procesar la prueba.
o Verifique los resultados en el menú del analizador en el apartado
“RESULTADOS”
9. Cálculo de resultados

El analizador calcula automáticamente la concentración en cada muestra por medio

de una curva maestra que es generada por un procedimiento de curva maestra de
calibración de 2 puntos. Los resultados se informan en unidades de mUI/mL. Para
más información, consulte las instrucciones de uso del analizador de inmunoensayo
por quimioluminiscencia totalmente automático de la serie MAGLUMI.

10. Procedimiento de control de calidad

Revisar el procedimiento para la gestión del control de calidad interno (PGC-33).

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11. Intervalo de reporte de resultados

- Límite de blanco (LoB)

El límite de blanco para el ensayo de TSH es 0,001 μUI/mL.

- Límite de detección (LoD)

El límite de detección para el ensayo de TSH es 0,006 μUI/mL.

- Rango de medida

Entre 0,010 μUI/mL y 100 μUI/mL (definido mediante el límite de cuantificación y el

límite superior de la curva principal).

Linealidad

Entre 0,006 μUI/mL y 2000 μUI/mL (definido mediante el límite de detección y el

límite superior de la curva principal × la proporción de dilución recomendada).

11.1 Instrucciones para muestras fuera del intervalo

Cuando el valor medido supera el límite superior del rango dinámico, diluir la
muestra con un diluyente adecuado aceptado por la marca o en su defecto albúmina
bovina. Debido a que los datos obtenidos mediante dilución pueden desviarse en
mayor medida de lo habitual, los datos deben tratarse como estimación.

11.2 Valores de alerta/críticos

No aplica.

12. Interferencias y reacciones cruzadas

Las sustancias hasta las siguientes concentraciones no interfirieron con el ensayo:

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13. Intervalos biológicos de referencia

0.350 - 4.940 uUI/mL

14. Verificación de desempeño del método

15. Fuentes potenciales de variación

- Cambios bruscos de voltaje
- Equipo no conectado a un sistema UPS (no break)
- Apagado brusco del equipo
- Falta de mantenimiento
16. Procedimiento cuando la técnica se vuelve inoperable

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Notificar inmediatamente al director de Laboratorio. Seguir la logística de

subcontratación según como se indica en el procedimiento de contratación y
subcontratación PGC-005.

17. Medio ambiente y seguridad

a. Control ambiental

Valor mínimo Valor máximo

Condición ambiental Observaciones
permisible permisible
Servicio: Laboratorio
Temperatura ambiente 10°C 30°C
Humedad relativa 0°C 70%
Presión atmosférica No aplica No aplica
Tensión eléctrica 110 V 240V
Ruido acústico No aplica No aplica
Ruido eléctrico No aplica No aplica
Partículas 50 µg/m3 de
suspendidas No aplica media en 24 h
Electromagnetismo No aplica No aplica
<10UFC/m2 x
Esterilidad biológica No aplica hora
Radiación solar No aplica 400 nm

b. Seguridad

Seguir instrucciones del procedimiento de seguridad e higiene PGC-002.

18. Referencias

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a. Documentos externos
- Inserto de MAGLUMI TSH (CLIA).
b. Documentos internos
- MAN-TC-002 Manual de seguridad e higiene
- MGC Manual de Gestión de Calidad
- PROC-GC-005 Procedimiento de contratación y subcontratación

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