GPT(ALT)

AA
C Método UV optimizado (IFCC) para la determinación de
alanina aminotransferasa (GPT/ALT) en suero o plasma

SIG­NI­FI­CA­CION CLI­NI­CA El Reactivo B con­tie­ne azi­da.

La alanina aminotransferasa (ALT o GPT) es una enzima Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales
unilocular (citoplasmática) cuya mayor actividad se localiza de trabajo en el laboratorio de análisis clínicos.
en el tejido hepático. La destrucción o cambio de permeabi- Todos los reactivos y las muestras deben descartarse de
lidad de las membranas celulares provoca la liberación de acuerdo a la normativa local vigente.
ALT a la circulación sanguínea.
Los mayores aumentos de actividad ALT en suero, se produ- ES­TA­BI­LI­DAD E INS­TRUC­CIO­NES DE
cen como consecuencia de alteraciones hepáticas. AL­MA­CE­NA­MIEN­TO
En el caso de hepatitis virales, el aumento de ALT precede Re­ac­ti­vos Pro­vis­tos: son es­ta­bles en re­fri­ge­ra­dor (2-10oC)
a la aparición de ictericia, alcanzando un máximo luego de has­ta la fe­cha de ven­ci­mien­to in­di­ca­da en la ca­ja.
la observación de dicho síntoma. Si los valores permane- Reactivo A re­cons­ti­tui­do: estable 30 días en refrigerador
cen elevados luego de 6 semanas, debe pensarse en la (2-10oC) o 3 días a temperatura ambiente a partir del mo-
posibilidad de una hepatitis activa o en el comienzo de una mento de su reconstitución.
hepatitis crónica, por lo que es de utilidad las determinacio-
nes seriadas de la enzima. IN­DI­CIOS DE INES­TA­BI­LI­DAD O DE­TE­RIO­RO DE LOS
La determinación de ALT adquiere importancia diagnóstica RE­AC­TI­VOS
cuando sus valores se comparan con los de otras enzimas Cuan­do el es­pec­tro­fo­tó­me­tro ha si­do lle­va­do a ce­ro con agua
de similar origen tisular, permitiendo así completar el perfil des­ti­la­da, lec­tu­ras de ab­sor­ban­cia del Reactivo A re­cons­ti­
enzimático de órganos como el hígado. tui­do in­fe­rio­res a 0,800 D.O. o su­pe­rio­res a 1,800 D.O. (a
340 nm) son in­di­cio de de­te­rio­ro del mis­mo.
FUN­DA­MEN­TOS DEL ME­TO­DO
Ba­sa­do en el si­guien­te es­que­ma re­ac­cio­nan­te: MUES­TRA
GPT Suero o plasma
L-alanina + 2-oxo­glu­ta­ra­to piruvato + L-glu­ta­ma­to a) Re­co­lec­ción: se de­be ob­te­ner de la ma­ne­ra usual.
LDH b) Adi­ti­vos: en caso de que la muestra a utilizar sea plasma,
piruvato + NADH + H+ L-lactato + NAD+ se debe usar heparina como anticoagulante.
c) Sus­tan­cias in­ter­fe­ren­tes co­no­ci­das:
RE­AC­TI­VOS PRO­VIS­TOS - Las muestras con he­mó­li­sis vi­si­ble o in­ten­sa pro­du­cen
A. Reactivo A: viales conteniendo 2-oxoglutarato, nico- va­lo­res fal­sa­men­te au­men­ta­dos por lo que no de­ben ser
tinamida adenina dinucleótido reducido (NADH) y lactato usa­dos.
deshidrogenasa (LDH). - Las mues­tras de pa­cien­tes he­mo­dia­li­za­dos o con hi­po­vi­
B. Reactivo B: so­lu­ción de buf­fer TRIS pH 7,5 (a 30oC) ta­mi­no­sis u otras pa­to­lo­gí­as aso­cia­das con de­fi­cien­cia de
con­te­nien­do L-alanina. pi­ri­do­xal fos­fa­to pro­du­cen va­lo­res fal­sa­men­te dis­mi­nui­dos.
Con­cen­tra­cio­nes fi­na­les (se­gún IFCC y SSCC) Referirse a la bibliografía de Young para los efectos de las
TRIS........................................ 100 mmol/l; pH 7,5 (a 30oC) drogas en el presente método.
L-alanina............................................................. 500 mmol/l d) Es­ta­bi­li­dad e ins­truc­cio­nes de al­ma­ce­na­mien­to: la
NADH................................................................ 0,18 mmol/l GPT en sue­ro es es­ta­ble has­ta 3 dí­as en re­fri­ge­ra­dor (2-
LDH.................................................................... ≥ 1.200 U/l 10oC), sin agre­ga­do de con­ser­va­ntes. No con­ge­lar.
2-oxo­glu­ta­ra­to...................................................... 15 mmol/l
MA­TE­RIAL RE­QUE­RI­DO (no pro­vis­to)
INS­TRUC­CIO­NES PA­RA SU USO - Es­pec­tro­fo­tó­me­tro.
Reactivo B: lis­to pa­ra usar. - Mi­cro­pi­pe­tas y pi­pe­tas para me­dir los vo­lú­me­nes in­di­ca­dos.
Reactivo A; preparación: agre­gar 20 ml de Reactivo B - Ba­ño de agua a la tem­pe­ra­tu­ra in­di­ca­da en el pro­ce­di­
a un frasco de Reactivo A. Ta­par, agi­tar has­ta di­so­lu­ción mien­to a seguir.
com­ple­ta y fechar. - Cro­nó­me­tro.

PRE­CAU­CIO­NES CONDICIONES DE REACCION

Los re­ac­ti­vos son pa­ra uso diagnóstico "in vi­tro". (Disminución de absorbancia)

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- Longitud de onda: 340 nm (Hg 334 ó 366). VALORES DE REFERENCIA
- Temperatura de reacción: 25, 30 ó 37oC. Ver los VA­LO­RES Temperatura 25oC 30oC* 37oC*
DE RE­FE­REN­CIA co­rres­pon­dien­tes a ca­da tem­pe­ra­tu­ra. Hombres hasta 22 U/l hasta 29 U/l hasta 41 U/l
- Tiempo de reacción: 4 minutos. Mujeres hasta 17 U/l hasta 22 U/l hasta 31 U/l
Volúmenes de Muestra y de Reactivo A reconstituido: pueden
reducirse proporcionalmente, sin que varíen los factores de * Calculados
cálculo correspondientes. Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios
valores de referencia.

PROCEDIMIENTO CONVERSION DE UNIDADES AL SISTEMA SI

GPT (U/l) x 0,017 = GPT (ukat/l)
A) 30 ó 37oC
I- MACROTECNICA
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
En una cubeta mantenida a 30-37oC, colocar:
Ver Sustancias interferentes conocidas en MUESTRA.
Reactivo A reconstituido 2 ml Ab­sor­ban­cia ini­cial ba­ja: cuan­do una vez agre­ga­do el sue­ro
Muestra 200 ul la pri­me­ra lec­tu­ra (tiem­po 0) es in­fe­rior a 0,800 D.O., es­tan­do
el Reactivo A (sus­tra­to) en con­di­cio­nes, in­di­ca una mues­tra
Mez­clar in­me­dia­ta­men­te y dis­pa­rar si­mul­tá­ne­a­men­te el con muy al­ta ac­ti­vi­dad de GPT (que con­su­me el NADH aún
cro­nó­me­tro. Lue­go de 1 minuto re­gis­trar la ab­sor­ban­cia ini­ an­tes de es­ta lec­tu­ra) o con una con­cen­tra­ción de ce­to­á­ci­dos
cial (ver LI­MI­TA­CIO­NES DEL PRO­CE­DI­MIEN­TO) y lue­go, en­dó­ge­nos par­ti­cu­lar­men­te ele­va­da. En es­te ca­so, re­pe­tir la
a los 1, 2 y 3 mi­nu­tos de la pri­me­ra lec­tu­ra. De­ter­mi­nar la de­ter­mi­na­ción con mues­tra di­lui­da con so­lu­ción fi­sio­ló­gi­ca y
di­fe­ren­cia pro­me­dio de absor­ban­cia/min (∆A/min), res­tan­ mul­ti­pli­car el re­sul­ta­do por la di­lu­ción efectua­da.
do ca­da lec­tu­ra de la an­te­rior y pro­me­dian­do los va­lo­res. La humectación es causa de deterioro del Reactivo A.
Uti­li­zar es­te pro­me­dio pa­ra los cál­cu­los.
II- MICROTECNICA PERFORMANCE
En una cubeta mantenida a 30-37oC, colocar: a) Reproducibilidad: procesando simultáneamente repli-
cados de una misma muestra, se obtiene:
Reactivo A reconstituido 1 ml
Nivel D.S. C.V.
Muestra 100 ul 19,8 U/l ± 1,11 U/l 5,63 %
Mezclar inmediatamente. Continuar de modo similar al 118 U/l ± 2,02 U/l 1,71 %
descripto en el procedimiento anterior (A-I). b) Límite de detección: depende del fotómetro empleado y de
B) 25oC la longitud de onda. De acuerdo a la sensibilidad requerida, en
MACROTECNICA espectrofotómetros con cubetas de caras paralelas de 1 cm de
Em­ple­ar 500 ul de Mues­tra. Luego de agregar la muestra espesor, reproducibilidad ± 2 nm, luz espuria ≤ 0,5% y semiancho
mezclar inmediatamente y disparar simultáneamente el de banda ≤ 8 nm, para un ∆A/min de 0,001 el mínimo cambio
cronómetro. Luego de 3 minutos registrar la absorbancia de actividad detectable será de 1,8 U/l (a 340 nm y 30 ó 37oC).
inicial (ver LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO). Con- c) Ran­go di­ná­mi­co: el ran­go útil de lec­tu­ra se ex­tien­de
tinuar de modo similar al descripto en el procedimiento A-I. has­ta 0,200 ∆A/min (a 340 nm). Si la ∆A/min es su­pe­rior a
0,200 (a 340-334 nm) o 0,100 (a 366 nm) se de­be re­pe­tir la
de­ter­mi­na­ción con mues­tra di­lui­da (1:5 ó 1:10) con so­lu­ción
CALCULO DE LOS RESULTADOS fi­sio­ló­gi­ca, co­rri­gien­do con­se­cuen­te­men­te los re­sultados.
GPT (U/l) = ∆A/min x factor PARAMETROS PARA ANALIZADORES AUTOMATICOS
En cada caso deberá emplearse el factor de cálculo corres- Para las instrucciones de programación consulte el manual
pondiente de acuerdo a la temperatura de reacción seleccio- del usuario del analizador en uso.
nada (30-37oC o 25oC), como se indica en la siguiente tabla:
PRESENTACION
Temperat.
30-37oC 25oC - 10 x 20 ml (200 ml Reactivo B) (Cód. 1761302).
Long. onda
340 nm 1.740 791 BIBLIOGRAFIA
334 nm 1.780 809 - I.F.C.C. - Clin. Chim. Acta 105:147 F (1980).
366 nm 3.207 1.453 - S.S.C.C. - Scand. J. Clin. Lab. Invest. 33:291 (1974).
- D.G.K.C. - Z. Klin. Chem. 10:281 (1972).
METODO DE CONTROL DE CALIDAD - Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests",
Procesar 2 niveles de un material de control de calidad AACC Press, 4th ed., 2001.
(Standatrol S-E 2 niveles) con actividades conocidas de
GPT, con cada determinación.

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Símbolos
Los siguientes símbolos se utilizan en todos los kits de reactivos para diagnóstico de Wiener lab.

C
Este producto cumple con los requerimientos
previstos por la Directiva Europea 98/79 CE de
productos sanitarios para el diagnóstico "in vitro"
M Elaborado por:

P Representante autorizado en la Comunidad

Europea Nocivo

V Uso diagnóstico "in vitro"

Corrosivo / Cáustico

X Contenido suficiente para <n> ensayos

Irritante

H Fecha de caducidad

i Consultar instrucciones de uso

l Límite de temperatura (conservar a)

 No congelar
Calibr. Calibrador

b Control

F Riesgo biológico

Volumen después de la reconstitución

b Control Positivo

Cont. Contenido c Control Negativo

g Número de lote h Número de catálogo

M Wiener Laboratorios S.A.I.C.

Wiener lab.
Riobamba 2944
2000 - Rosario - Argentina
http://www.wiener-lab.com.ar
Dir. Téc.: Viviana E. Cétola
Bioquímica
Producto Autorizado A.N.M.A.T.
Disp. Nº: 5888/97-908/02-3425/13 2000 Rosario - Argentina
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