INSTITUTO TECNOLÓGICO DE ORIZABA

INGENIERÍA QUÍMICA
LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

MANUAL DE: MICROBIOLOGÍA

INDUSTRIAL

MODULO : INGENIERÍA E INNOVACIÓN EN ALIMENTOS (PLAN

DE COMPETENCIAS )

ALUMNO: RAMOS FIGUERIAS MARÍA DE LOS ÁNGELES

BAUTISTA MARTÍNEZ JESSICA
MARISM THAILY RODRÍGUEZ

ORIZABA, VER
 PRACTICA No. 6
PREPARACION DE MEDIOS Y SIEMBRA DE BACTERIAS EN MEDIOS DE
CULTIVO

METODOLOGÍA No. 6

1. COMPETENCIA A DESARROLLAR

Desarrollar la habilidad en la preparación de los diferentes medios de cultivo existentes

dentro del laboratorio, aplicando los nutrientes y las condiciones físicas que se requieren para
cultivar el microorganismo

FUNDAMENTO:

Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros

componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los microorganismos.
Puesto que la diversidad metabólica de los microorganismos es enorme, la variedad de
medios de cultivo es también muy grande. La mayoría de los medios de cultivo se
comercializan en forma de liofilizados que es preciso rehidratar. La preparación de un medio
de cultivo se reduce en general a pesar la cantidad de medio y redisolverla en agua destilada
(libre de inhibidores del crecimiento) siguiendo las instrucciones del fabricante. Las
sustancias termolábiles se esterilizan por filtración y se añaden al resto de los componentes
previamente esterilizados en el autoclave.

Los constituyentes habituales de los medios de cultivo son:

1. Agar. Se utiliza como agente solidificante. Es un polisacárido que se obtiene de

ciertas algas marinas. Las bacterias no son capaces de degradarlo.
2. Azúcares. Son una fuente de carbono para los microorganismos. Los más
empleados son la glucosa, la lactosa y la sacarosa.
3. Extractos. Son preparados de ciertos órganos o tejidos animales o vegetales
obtenidos con agua y calor. Ej.: extracto de carne, de levadura, de malta, etc.
4. Peptonas. Son proteínas hidrolizadas, se obtienen por digestión química o
enzimática de proteínas animales o vegetales.
 5. Fluidos corporales. Sangre completa, sangre desfibrinada, plasma o suero sanguíneo
son añadidos a los medios empleados para el cultivo de algunos microorganismos
patógenos.
6. Sistemas amortiguadores. Son sales que se añaden al medio para mantener el pH
dentro del rango óptimo del crecimiento bacteriano. Ej.: fosfatos bisódicos o
bipotásicos.
7. Indicadores de pH. Son indicadores ácido-base que se añaden para detectar cambios
de pH en el medio.
8. Agentes reductores. Sustancias que se añaden al medio para crear las condiciones que
permitan el desarrollo de los gérmenes microaerófilos o anaerobios. Ej.: cisteína y
tioglicolato.
9. Agentes selectivos. Sustancias como el cristal violeta, las sales biliares etc. que a
determinadas concentraciones en el medio actúan como agentes selectivos frente a
determinados microorganismos.

Tipos de medios de cultivo.

❖ Por su CONSISTENCIA:
a. Sólidos. Son aquellos que contienen un agente solidificante entre sus
componentes, normalmente agar. Se preparan en placas de Petri o en tubos en
slant (tubos con la superficie del medio inclinada).
b. Líquidos. Se denominan caldos y se preparan en tubos o erlenmeyers.

❖ Por su COMPOSICIÓN:
a. Medios generales. Permiten el desarrollo de una gran variedad de
microorganismos.
b. Medios de enriquecimiento. Favorecen el crecimiento de un determinado
grupo de microorganismos, sin llegar a inhibir totalmente el crecimiento del
resto.
 c. Medios selectivos. Permiten el crecimiento de un tipo de microorganismos
determinado, inhibiendo el desarrollo de los demás.
d. Medios diferenciales. Son aquellos en los que se pone de relieve alguna
propiedad que un determinado tipo de microorganismos posee

Siembra de microorganismos

En términos microbiológicos se entiende por SIEMBRA el proceso mediante el cual se lleva

una porción de una población de microorganismos (inóculo) de un cultivo bacteriano a un
medio nutritivo para su crecimiento.

PARA UNA CORRECTA REALIZACIÓN DE LA SIEMBRA SON NECESARIAS

CIERTAS CONDICIONES:

1. Que se lleve a cabo con instrumentos estériles sobre medios de cultivo estériles. Para
estudiar una bacteria determinada, es necesario destruir todos aquellos
microorganismos que pudieran encontrarse en el medio y en los instrumentos de
trabajo. Esto se consigue con la ESTERILIZACION, proceso que consiste en conseguir
que todos los microorganismos presentes mueran desde el punto de vista
microbiológico. Él termino esterilización es un término absoluto, es decir no existe
un medio “medio estéril”, es o no es estéril. A pesar de haber diversos métodos de
destrucción microbiana, uno de los agentes más importante y de mayor uso para la
esterilización es el calor. Aquí nos limitaremos a mencionar dos métodos de
esterilización que se basa en el uso de calor

● La esterilización
Se utilizan dos tipos principales de esterilización:

⮚ Por MÉTODOS FÍSICOS (calor, filtración, radiaciones).

⮚ Por MÉTODOS QUÍMICOS (empleo de soluciones químicas).

 2. Que el inóculo no se contamine, modifique o destruya: Normalmente se emplea el
calor directo, flameando las bocas de los tubos de ensayo, matraces, pipeta, etc. antes
y después de su utilización, a pesar de estar esterilizados previamente.
3. Que las condiciones ambientales durante el proceso sean lo más próximas a la
esterilidad para evitar contaminaciones durante el manejo del instrumental y de los
medios de cultivo. Esto se resuelve con el uso de cabinas estériles (con flujo de aire
y luz ultravioleta). Cuando no se dispone de ellas, se utiliza un mechero Bunsen que,
debido a que la fuerza de circulación del aire en sentido vertical y hacia arriba, sea
capaz de crear un ambiente semiestéril en la zona inmediata alrededor y debajo de la
llama, de forma que los riesgos de contaminación disminuyen considerablemente.

MARCO TEORICO

MEDIOS DE CULTIVO

Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros

componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los microorganismos.
La diversidad metabólica de estos es tan grande que la variedad de medios de cultivo es
enorme, no existiendo un medio de cultivo universal adecuado para todos ellos, ni siquiera
refiriéndonos a las bacterias con exclusividad.

CONSTITUYENES HABITUALES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

A continuación se da una idea general sobre algunos de los constituyentes habituales de los
medios de cultivo.

AGAR. Se utiliza como agente gelificante para dar solidez a los medios de cultivo. En el agar
bacteriológico el componente dominante es un polisacárido que se obtiene de ciertas algas
marinas y que presenta la indudable ventaja de que a excepción de algunos microorganismos
marinos, no es utilizado como nutriente. Un gel de agar al 1-2% se licua alrededor de los
100ºC y se gelifica alrededor de los 40ºC, dependiendo de su grado de pureza.
EXTRACTOS. Su preparación consiste en que ciertos órganos o tejidos animales o vegetales
(p.e. carne, hígado, cerebro, semillas, etc.) son extraídos con agua y calor y posteriormente
concentrados hasta la forma final de pasta o polvo. Estos preparados deshidratados son a
menudo empleados en la elaboración de los medios de cultivo. Los más utilizados son el
extracto de carne, de levadura y el de malta.

PEPTONAS. Son mezclas complejas de compuestos orgánicos, nitrogenados y sales

minerales, que se obtienen por digestión enzimática o química de proteínas animales o
vegetales (soja caseína carne, etc.). Las peptonas son muy ricas en pépticos y aminoácidos,
pero pueden ser deficientes en determinadas vitaminas y sales minerales.

FLUIDOS CORPORALES. Con frecuencia es necesario añadir a los medios de cultivo de

algunos patógenos sustancias como sangre completa, sangre desfibrinada, plasma o suero
sanguíneo, sobre todo para conseguir el primer aislamiento a partir del hospedador. La sangre
no puede ser esterilizada, y por tanto debe de ser obtenida en condiciones asépticas
directamente de un animal sano, y adicionada al medio de cultivo después de que este haya
sido auto clavado. Los fluidos corporales no solo aportan factores de crecimiento sino que
también aportan sustancias que neutralizan a inhibidores del crecimiento de algunas
bacterias. Un ejemplo podría ser la catalasa presente en las células sanguíneas destruye el
peróxido de hidrógeno que algunas bacterias que no poseen este enzima acumulan como
producto del metabolismo del oxígeno.

SISTEMAS AMORTIGUADORES. Para mantener el pH dentro del rango optimo del

crecimiento bacteriano a veces, es necesario añadir algunos componentes al medio de cultivo.
Debido a que la mayoría de as bacterias son neutrófilas, se suelen emplear sales del tipo de
los fosfatos bisodicos ò bipotásicos u otras sustancias como las peptonas para prevenir la
desviación del pH.

INDICADORES DE PH. Con el objeto de poder detectar variaciones en el pH debido a

fermentaciones u otros procesos, se hace necesario a veces añadir indicadores acido-base que
nos lo indiquen.
AGENTES REDUCTORES. Con el objetivo de crear en los medios de cultivo condiciones
que permitan el desarrollo de los gérmenes microaerofilos ò anaerobios se añaden estos
agentes reductores siendo, los más empleados la cisteina y el tioglicolato entre otros.

AGENTES SELECTIVOS. La adición de determinadas sustancias a un medio de cultivo

puede convertirlo en selectivo. Así, por ejemplo, la adición de cristal violeta, sales biliares,
azida sodica, telurito potasico, antibióticos, etc., a la concentración adecuada hará que actúen
como agentes selectivos frene a determinados microorganismos.

TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO MEDIOS GENERALES.

Son aquellos que permiten el crecimiento de una gran variedad de microorganismos.

MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO. Son aquellos que favorecen el crecimiento de u

determinado tipo de microorganismo sin llegar a inhibir totalmente el crecimiento de los
demás.

MEDIOS SELECTIVOS. Son aquellos que permiten el crecimiento de un tipo de

microorganismos determinado, inhibiendo el desarrollo de los demás.

MEDIOS DIFERENCIALES. Son aquellos en los que se pone de manifiesto propiedades

que un determinado tipo de microorganismos posee

ACTIVIDADES

MATERIAL EQUIPO
a. Autoclave
a. Mecheros bunsen b. Parrilla
b. Asa de siembra c. Balanza granataria.
c. Matraces Erlenmeyer
d. Tubos de ensaye
REACTIVO
e. Pipetas
f. Probetas a. Agar nutritivo
g. Cajas petri b. Caldo nutritivo
h. Algodón c. Agua destilada.
i. Tijeras
j. Papel estraza o papel aluminio
k. Potenciómetro o papel indicador.
l. Agua destilada.
m. Tubos con cultivos bacterianos crecidos:
Escherichia coli, Salmonella, Staphylococcus
aureus.

METODOS
1º) PREPARACIÓN DE MATERIAL PARA ESTERILIZAR.

1. Se lava perfectamente el material que se va a esterilizar.

2. Se procede a secar el material.
3. Se envuelve con el papel aluminio o papel estraza
4. Se lleva a esterilizar a la estufa a una temperatura. de 1200C

PROCEDIMIENTO

A. Tubos de ensaye.
1. Tapar cada tubo con algodón de acuerdo con las instrucciones del instructor.
2. Proteger los tubos con papel de estraza o papel aluminio.
B. Pipetas.
1. Poner a cada pipeta un filtro de cada algodón de tal manera que el aire pase
libremente a través del.
2. Flamear el extremo de la pipeta para quemar el exceso de algodón.
3. Envolver con papel cada pipeta de acuerdo con las instrucciones del profesor.
C. Caja Petri
1. Envolver con papel cajas petri limpias.
2. Colocarlas con las tapas hacia abajo.
D. Matraces
1. Colocar a cada matraz un tapón de algodón.
2. Cubrir el tapón con un gorro de papel.
 2º) PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO:
Se resume en seis pasos la manera de preparar medios de cultivos.
1. La cantidad de cada uno de los medios deshidratados se debe disolver en un volumen
adecuado de agua destilada cuya especificación (relación: volumen de disolvente-
peso en gramos de medio de cultivo) viene indicada en la etiqueta del cada frasco.
2. Se determinara el pH del medio y si es necesario se ajustara. el pH se determina por
medio de indicadores o con el potenciómetro (normalmente los medios comerciales
dan el pH requerido)
3. El medio sé pondrá en recipientes adecuados, como los tubos matraces, cuyas bocas
se cierran con tapones de algodón.
4. Antes de esterilizar se cubre con papel de estraza.
5. Los medios se esterilizan en autoclave
6. Los tubos o cajas con medios de cultivos se incubaran 24 hrs. 370C para probar su
esterilidad .No deberá presentarse crecimiento microbiano después de 24 hrs. De
incubación en el medio sin inocular.
Preparación de medio sólido en tubo (slant).
1. Pesar el medio que contenga agar y rehidratar con agua destilada en un matraz.
2. Fundir el medio en un horno microondas o en una placa caliente. El medio debe hervir
hasta que se vuelva transparente.
3. Distribuir rápidamente el medio en los tubos antes de que comience a solidificar. Para
ello se empleará una pipeta y los tubos no se llenarán más de un tercio de su volumen.
4. Esterilizar en autoclave.
5. Sacar del autoclave e inclinar los tubos sobre la poyata para obtener tubos con medio
en slant.
Todos los medios se deben guardar en nevera a 4ºC.

3º) REALIZACIÓN DE LA SIEMBRA

1. Marcar el material con el nombre de la pareja y grupo.
2. Realizar la siembra, como sigue:
 a) Siembra en medio líquido: Se introduce el asa de siembra en el tubo con cultivo
crecido y se toma un inóculo que se lleva al tubo estéril con medio líquido
(agitándola en el seno del medio), tomando las precauciones mencionadas
anteriormente.
b) Siembra en placa: Dividida la placa en tres partes, sembrar en cada tercio el inóculo
tomado de los cultivos crecidos. Se introduce el asa de siembra en el tubo con
cultivo crecido y se toma una gota de inóculo que se extiende sobre el agar de la
placa deslizando el asa suavemente por su superficie en zig-zag.
c) Siembra en agar inclinado: Se introduce el asa de siembra en el tubo con cultivo
crecido y se toma un inóculo que se extiende sobre el agar inclinado deslizando el
asa suavemente por su superficie en zig-zag.

4º) INCUBACIÓN de los medios sembrados a 37 ºC hasta que haya habido crecimiento
bacteriano.

5º) OBSERVACIÓN DE LOS RESULTADOS:

En primer lugar, observar a simple vista diversas características como el color y el borde de
las colonias crecidas en el agar así como el olor y la turbidez del medio ya que en algunos
casos suelen ser típicos de un determinado tipo de microorganismo y pueden servir de ayuda
a la hora de su identificación. El siguiente paso sería la observación al microscopio, que será
objeto de otra práctica

Mencione que medidas preventivas debemos tomar para que la preparación de

los Agares Caldos etc, sea la correcta.

Los medios de cultivo se pueden preparar en el laboratorio a partir de cada uno de sus
constituyentes básicos, o por simple rehidratación de productos asequibles comercialmente
(medios de cultivo deshidratados). Generalmente se prefiere el uso de los medios de cultivo
deshidratados porque, además de simplificar el trabajo, con ellos se tiene mayor probabilidad
de obtener resultados reproducibles. Para su preparación se deben tener en cuenta los siguientes
aspectos:

● Prepararlos sólo a partir de productos que provengan de fabricantes o proveedores

que suministren productos de calidad.

● Utilizar agua destilada o desmineralizada con una calidad microbiológica y

fisicoquímica adecuada.

● Utilizar materiales de vidrio bien lavados y enjuagados con agua destilada o

desmineralizada.

● Controlar el tiempo y la temperatura recomendada durante su esterilización.

● Nunca se deben exceder las condiciones señaladas por el fabricante.

PREGUNTAS

1. ¿Por qué es necesario que el material que se usa durante la práctica este
correctamente esterilizado?

El objetivo de la esterilización no es otro que el de evitar la contaminación cruzada de

muestras o el crecimiento de microorganismos no deseados. En muchos ensayos clínicos o
de investigación científica se utilizan productos que están en contacto con muestras
biológicas o superficies para el crecimiento de una determinada especie o especies de
microorganismos. En caso de no haber esterilizado los productos o medios de cultivo, podrían
aparecer microrganismos no deseados que alterarían las condiciones del ensayo y, por ende,
invalidarían los resultados obtenidos.

2. ¿Qué es el agar y de donde se obtiene? y ¿Cuáles son los nutrimentos que

proporciona a los microorganismos?

El agar, o agar -agar, es un polisacárido que se obtiene de algas del género Gelidium, algas
que se han utilizado en la cocina tradicional japonesa, por sus propiededes gelificantes, desde
hace muchos siglos. También se obtiene de otras algas, entre ellas especies de los géneros
Gracillaria , de las que procede actualmente la mayoría del agar, y de Gelidiella y Pterocladia,
que aportan pequeñas cantidades. El agar de mejor calidad de obtiene de Gelidium, aunque
en los últimos años se ha extendido mucho la obtención a partir de cultivos marinos de
Gracillaria, que son ahora la fuente principal de este polisacárido.

El agar se considera formado por la mezcla de dos tipos de polisacáridos, la agarosa y la

agaropectina. La agarosa es el componente principal, representando alrededor del 70% del
total. Tanto la agarosa como la agaropectina tienen la misma estructura básica, estando
formadas por unidades alternadas de D-galactosa y de 3,6-anhidro-L-galactopiranosa unidas
por enlaces a-(1-3) and b-(1-4).

Nutrientes.

Es una fuente vitaminas del grupo B, proteína vegetal y minerales como el potasio (226 mg
por 100 gramos), hierro (1,9 mg), Magnesio (67 mg) y calcio (54 mg).

3. ¿Cuál es la composición química de los medios: medio nutritivo, agar EMB,

Agar papa-dextrosa? ¿Cuáles son los componentes o propiedades responsables
de su función como medios selectivos o diferenciales?

Medios nutritivos:

FÓRMULA (en gramos por litro)

● PLURIPEPTON 5.0

● EXTRACTO DE CARNE 3.0

● CLORURO DE SODIO 8.0

● AGAR 15.0

● pH FINAL: 7.3 ± 0.2

Agar EMB

FÓRMULA (en gramos por litro)

 ● PEPTONA 10.0

● LACTOSA 5.0

● SACAROSA 5.0

● FOSFATO DIPOTÁSICO 2.0

● EOSINA 0.4

● AZUL DE METILENO 0.065

● AGAR 13.5

● PH FINAL: 7.2 ± 0.2

Agar papa-dextrosa

FÓRMULA (en gramos por litro)

● Extracto de papa 4 g

● Dextrosa 20 g

● Agar 15 g

Medios de cultivo selectivo

Cuando se pretende que el propio cultivo de la bacteria diferencie entre distintos tipos de
bacterias se utilizan Medios de cultivo diferenciales (ej. Medio para la fermentación de la
lactosa): algún componente del medio proporciona un cambio visible del cultivo si existen
ciertas bacterias (en el caso de la lactosa la acumulación de ácidos).

Puede favorecerse la probabilidad de seleccionar cierta bacteria específica de una mezcla de

ellas utilizando medios de cultivo selectivos o realizando un enriquecimiento de la bacteria
que se pretende seleccionar, en detrimento de otras bacterias de la mezcla. Los Medios de
cultivo selectivos (como el Agar Mac Conkey) son medios sólidos que contienen sustancias
que inhiben el crecimiento de algunas bacterias, pero permite el de otras. El Agar Mac
Conkey contiene sales biliares antibacterianas pero permiten el crecimiento de las
Enterobacterias cuyo hábitat natural (el intestino) contiene tales sales antibacterianas. El
resultado es el crecimiento selectivo de las bacterias que resisten las sales biliares, entre ellas
las enterobacterias. El efecto antibacteriano selectivo de algunos medios de cultivo permite
su utilización sin aplicar la esterilización convencional.

4. ¿Por qué el agar nutritivo es un medio de uso general para el cultivo de

bacterias? Proponga algunas sustancias que se le agregarían para hacerlo
selectivo para bacterias Gram negartivas?

Medio de cultivo nutritivo no selectivo, en el cual la pluripeptona y el extracto de carne

constituyen la fuente de carbono, nitrógeno y aportan nutrientes para el desarrollo bacteriano.
El agregado de cloruro de sodio mantiene el balance osmótico y el agar es el agente
solidificante. Puede ser suplementado con sangre ovina desfibrinada estéril para favorecer el
crecimiento de microorganismos exigentes en sus requerimientos nutricionales y permite una
clara visualización de las reacciones de hemólisis.

5. Menciona los errores más comunes que se cometen durante la realización de la

práctica.

Las posibles fuentes de error son:

● Selección inadecuada del medio de cultivo o uso inapropiado.

● Adición de un volumen incorrecto de agua o utilización de agua corriente

con impurezas.

● Adición de menor cantidad de agar al medio, lo cual se manifiesta por la no

solidificación correcta del mismo.

● Utilización de balanzas inadecuadas cuyo margen de error altera la composición

del medio.

● Distribución errónea del volumen del medio que puede resultar inapropiado para
su utilización.
 ● Disolución insuficiente del agar. Al distribuir el medio agarizado en recipientes
(tubos) dan como resultado tubos con medio que no logran solidificar.

● La esterilización a temperaturas elevadas y/o durante períodos de tiempo

largos, puede ocasionar el deterioro de algunos constituyentes.

● Los residuos adheridos al vidrio pueden inhibir algunos microorganismos exigentes

particularmente a los virus.

Anexar fotografías, esquemas y observaciones pertinentes.

OBSERVACIONES RAMOS FIGUEIRAS MARÍA DE LOS ÁNGELES

Para la elaboración de esta práctica se nos asignó que prepararemos 300 ml de agar nutritivo,
hicimos una regla de 3 de acuerdo a los datos que estaban detrás del envase de agar, en donde
especificaba que se debían de agregar 23 gr de polvo por cada litro de agua, por lo tanto, de
acuerdo a los cálculos teníamos que agregar 6.9 gr de polvo pero agregamos más por
indicaciones de la profesora, para asegurar un buen resultado. El agar tiene un aroma parecido
a caldo de pollo y color rojo, además nos costó mucho trabajo medirlo porque estaba
demasiado solidificado en el envase

OBSERVACIONES MARIAM THAILY

Hicimos 13 tubos de ensaye cada dos de cada medio de cultivo y un blanco, nos tocó el
cultivo para [Link]. todos las bacterias que se iban a sembrar ocupaban esterilización menos
las salmonella, de primera instancia hicimos nuestro medio de cultivo el E. Coli que tenia un
color bastante rojo se tenia que dejar hervir, estos se debían de trabajar rápido ya que se
endurecía. pusimos los medios de cultivo en los tubos de ensayo, llevándolos a la mitad en
una zona aséptica. En este caso había un caldo nutritivo este no se solidificada. En nuestras
muestras vimos como se formaron las colonias de forma redonda algunos se les formaron
hongos por que no tuvieron unas buena esterilización.
 OBSERVACIONES BAUTISTA MARTINEZ JESSICA

Al inicio de esta práctica hicimos el agar que nos correspondía que fue el gar de Esosina y
azul de metieno, que también es conocido como agar EMB por sus siglas en ingles. Para
prepararlo pesamos 6.9 gr ya que el empaque indicaba 23gr del agar, pero ya que el agar tenía
mucho tiempo de haber sido comprado agregamos un poco más de lo pesado, esto fue por
indicaciones de la profesora, este agar al rehidratarlo tenía un color vino y olia como a caldo
de res

Agar azul de metileno y eosina

OBSERVACIONES MARÍA DE LOS ÁNGELES RAMOS FIGUEIRAS

Seguido de esto agregamos 300 ml de agua que medimos con ayuda de una probeta de 100 ml,
el polvo se disuelve fácilmente y comenzamos a calentar en una parrilla eléctrica con agitación
constante esperando a que nuestra solución llegará al punto de ebullición, este procedimiento
tardo mucho hasta que la profesora nos dio la indicación de que dejáramos de agitar hasta que
comenzará a ebullir, haciendo esto la solución llegó más rápido a su punto de ebullición,
comenzamos a agitar y notamos que la solución se puso espumosa, dejamos ebullir alrededor
de 2 minutos y apagamos la parrilla.

OBSERVACIONES BAUTISTA MARTÍNEZ JESSICA

A continuación, agregamos 300ml de agua que medimos con una probeta, después lo llevamos a la parrilla
y comenzamos a agítalo durante aprox 15 min hasta que ebulliera y dejamos ebullir aprox 5 min y
procedimos a pagar la parrilla

Comenzamos
a calentar el
agar disuelto,
presentaba un
color rojo
oscuro
 La solución presento un pH neutro de entre 6 y 7

Medición del pH de la solución

OBSERVACIONES RAMOS FIGUEIRAS MARÍA DE LOS ÁNGELES

Vertemos en un matraz balón de fondo plano de 500 ml y lo cerramos herméticamente con

ayuda de algodón y aluminio, pasamos a esterilizarlo, como se trataba de un medio liquido se
debía usar un autoclave pero en este caso usamos una olla express que cumple con la misma
función.

OBSRVSCIONES JESSICA BAUTISTA

Procedimos a pasar parte de la muestra en un matraz de fondo de balón y después lo cerramos

herméticamente con un tapon que hicimos previamente que era de algodón y un poco de
aluminio, después lo metimos en la autoclave esto con el fin de eterizarlo
 Esterilización en medio líquido

OBSERVACIONES MARÍA DE LOS ÁNGELES RAMOS

Por otro lado, en cuanto a la esterilización del material de laboratorio que lavamos y secamos
perfectamente, se nos asignaron 3 matraces Erlenmeyer y 20 tubos de ensayo que sellamos
con ayuda de algodón y papel estraza en forma de barco de papel, 3 cajas Petri que
envolvimos con papel estraza como si fueran tortillas y por último 5 pipetas que envolvimos
completamente con el mismo papel en forma de espiral.

OBSERVACIONES JESSICA BAUTISTA MARTÍNEZ

Para esterilizar el material de laboratorio que nos proporcionaron que fueron 20 tubos de
ensayo, 3 matraces Erlenmeyer, 3 cajas Petri y 5 pipetas, estos los forramos con papel de
estraza y otros les pusimos tapones de algodón y papel aluminio
Preparación de matraces, cajas Petri y
pipetas para esterilizar
.
Preparación
de tubos de
ensaye para
esterilizar
Debido a que los materiales son un medio solido procedimos a esterilizarlos en la estufa alrededor
de 3 horas.

Esterilización en medio sólido

Al regresar a laboratorio sacamos nuestro material de la estufa y lo colocamos en una jerga

para evitar accidentes provocados por el choque de temperatura, en cuanto a nuestro agar,
notamos que se había solidificado por lo tanto lo pusimos a calentar un poco en una parrilla
eléctrica para volverlo a licuar y poder realizar el medio de cultivo.

Material estéril
Para la preparación de nuestro medio de cultivo tomamos 2 tubos de ensayo y le vertimos
cuidadosamente el agar a ¾ realizando este procedimiento siempre cerca de la llama y
esterilizando tanto la boquilla del agar como la boquilla del tubo de ensayo, una vez vertido
lo cerramos flameando de nuevo ambas boquillas y los dejamos enfriar de manera inclinada

Preparación de medio de cultivo con a

eosina y azul de metileno

Tardaron bastante tiempo en enfriar por lo que lo metimos unos minutos al refrigerador, una
vez solidificado tomamos un tubo de ensayo con muestra de salmonella y con ayuda de un
asa cultivamos en zigzag dentro de uno de nuestros tubos, el otro tubo lo dejamos como
testigo ya que si no crecía nada en él nos daríamos cuenta de que hicimos bien el
procedimiento.

Cultivamos salmonella en agar

Tubo de ensayo con
eosina y azul de
cultivo de salmonella
metileno
El agar sobrante lo tiramos en una planta debido
a que es una fuente de nutrientes y no causa daño
al medio ambiente, el resto de material estéril lo
almacenamos en la gaveta para practicas
posteriores, ambos tubos los llevamos a
incubación por aproximadamente 48 horas.
Incubación

RESULTADOS

Pasadas las 48 horas revisamos nuestros cultivos y notamos que nuestros resultados fueron
lo esperado, crecieron colonias de salmonella en uno de los tubos y en el testigo no creció
absolutamente nada

Testigo: no presento Cultivo de salmonella: crecimiento

crecimiento de colonias, se aprecia color
blanquizco
 CONCLUSIÓN RAMOS FIGUEIRAS MARÍA DE LOS ÁNGELES

De acuerdo a lo antes mencionado llegue a la conclusión que la esterilización y la preparación

de medios de cultivo es una actividad imprescindible en la microbiología industrial, ya que
estos brindan a los microorganismos los nutrientes necesarios para su crecimiento y posterior
observación y estudio en el microscopio. Es importante realizar los procedimientos de
manera precisa y tener mucho cuidado con las medidas de asepsia para evitar contratiempos
o malos resultados.

CONCLUSIÓN MARIAM THAILY

Vimos cómo podemos trabajar un medio de cultivo y aprender cuáles bacterias utilizan
esterilización. Saber cómo es que se forman las colonias y también saber cómo esterilizar nuestros
materiales de laboratorio. Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento
y otros componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los microorganismos.
Puesto que la diversidad metabólica de los microorganismos es enorme, la variedad de medios de
cultivo es también muy grande. La mayoría de los medios de cultivo se comercializan en forma de
liofilizados que es preciso rehidratar. La preparación de un medio de cultivo se reduce en general a
pesar la cantidad de medio y redisolverla en agua destilada libre de inhibidores del crecimiento
siguiendo las instrucciones del fabricante. Las sustancias termolábiles se esterilizan por filtración y
se añaden al resto de los componentes previamente esterilizados en el autoclave.

También vimos la esterilización en la cual existe el método físico como lo son calor, filtración y
radiaciones y estas las esterilizaciones químicas que son empleadas por agentes químicos.

En nuestros tubos de ensayo vimos cómo se formaron las colonias, en nuestros medios de cultivo.
Algunos se les formaron hongos.

CONCLUSIÓN BAUTISTA MARTINEZ

Podemos concluir que la esterilización de los materiales es muy importante para el proceso de esta
práctica y muchas más en microbiología, esta técnica es muy importante llevarla a cabo con mucho
cuidado, también que la incubación de las bacterias es un proceso un poco tardado, pero con el
debido procedimiento se puede lograr un buen resultado. También que los medios de cultivo son
muy variados y tienen procedimientos un poco diferentes entre ellos, pero todos vienen en formato
de polvo para poder rehidratarse.
 COMPARACIÓN DE RESULTADOS

A los demás equipos se les asignaron medios de cultivo diferentes, pero en cada uno de los
casos se cumplió con el objetivo de hacer crecer una colonia y que en el testigo no hubiera
crecimiento.

Agar de salmonella. Se trató de un medio

Caldo nutritivo. A diferencia de nosotros su
selectivo a diferencia del nuestro que es
medio de cultivo fue líquido por lo que se
general, pero la técnica fue parecida a la
notó el crecimiento de bacterias por la
nuestra y tuvieron resultados positivos.
turbidez
Agar 110. Se trató de un medio selectivo y diferencial para el cultivo
y aislamiento de Staphylococcus. El procedimiento fue parecido al
nuestro y los resultados fueron los que es esperaban, en la primera
imagen (testigo) se observa que no hubo crecimiento de
microorganismos, mientras que en la segunda imagen se aprecia el
cultivo de Staphylococcus
 DISPOSICIÓN FINAL Y TRATAMIENTO DE RESIDUOS

El agar sobrante lo vertimos sobre una planta de la institución debido a que es fuente de
nutrientes y no causa daño al medio ambiente.

BIBLIOGRAFÍA

De Cultivo, M. (s/f). PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO. [Link].

[Link]

De los, •. Almacenamiento, & de cultivo • Objetivo • Fundamento • Procedimiento •

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PRACTICA No. 6

PREPARACION DE MEDIOS Y SIEMBRA DE BACTERIAS EN MEDIOS DE

CULTIVO

LISTA DE COTEJO PARA EL REPORTE DE LA PRÁCTICA DE LABORATORIO

El reporte es un recuento breve de las actividades realizadas en la práctica, identificando los

pasos del método científico que se hayan aplicado, incluyendo los resultados y las
conclusiones, junto con las respuestas a las preguntas que se hayan planteado
Competencias Estándares Sí No Observaciones

1) Esterilizo material y preparo los

diferentes medios de cultivo para
el crecimiento microbiano
2) Distingue las características como
el color y el borde de las colonias
Científico crecidas en el agar así como el
olor y la turbidez del medio ya que
Técnicas
en algunos casos suelen ser típicos
de un determinado tipo de
microorganismo
3) Utilizó la ropa de trabajo
adecuadamente.
4) Cuidado y limpieza del
instrumental
5) Sigue las indicaciones del docente
al respecto del manejo de algunos
productos peligrosos o delicados.
6) Secuencia lógica de los pasos a
seguir
7) Capacidad de análisis e
interpretación de resultados
8) Correcta expresión, redacción y
Metodológicas ortografía; elaboración de un
informe final conforme a los
pasos del método científico;
cuestionario contestado
correctamente.
9) Empleo de vocabulario técnico
adecuado
10) Cumplimiento de la tarea en el
tiempo asignado
11) Consulta sus dudas de forma clara
y concisa
12) Mantenimiento del orden en el
lugar de trabajo
Sociales 13) Comunicación con los integrantes
del grupo de trabajo
14) Respeto por las normas de
seguridad e higiene