UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA

LAB. BIOQUÍMICA
INFORME N°8

TEMA:
PRODUCCIÓN DE PIRUVATO DURANTE LA FERMENTACIÓN

GRUPO:
SARA LUCÍA RAMOS RAMOS
JUAN FERNANDO DUMAR OTERO
ANDREA SANCHEZ MARTINEZ
ANA CAMILA PALACIOS PADILLA
JULIÁN ANDRES VASQUEZ BENITEZ

DOCENTE:
Phd. GEAN CARLOS ARTEAGA

2024
MONTERÍA - CÓRDOBA
INTRODUCCIÓN
El piruvato es un compuesto muy importante para la célula ya que es un sustrato clave para
la producción de energía y de la síntesis de glucosa (neoglucogénesis). Antes de entrar en la
mitocondria, puede convertirse en lactato, mediante una reacción anaerobia (en ausencia o
bajo aporte de oxígeno) de bajo rendimiento en la producción de energía, cuando la vía
principal está interferida. También puede convertirse en el aminoácido alanina. Dentro de la
mitocondria, puede transformarse, mediante la piruvato deshidrogenasa (PDH), en acetil-
coenzima A (acetil-CoA), punto de entrada del ciclo de Krebs. Además, mediante la
piruvato carboxilasa, puede transformarse en oxalacetato, lo que constituye el primer paso
de la neoglucogénesis. El que se produzca una u otra de estas reacciones depende
básicamente de las necesidades energéticas del organismo y del aporte de oxígeno para la
producción de ATP.
En el presente informe se utilizarán métodos cualitativos para determinar la presencia de
piruvato mediante la fermentación de la levadura y se observará su producción a través de
cambios de color. Esto a su vez, dará a conocer el tipo de reacciones enzimáticas
necesarias para la fermentación o glucólisis.

OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
 Reconocer las diversas reacciones de la fermentación y producción de piruvato.
OBJETIVOS ESPECIFICOS
 Determinar la presencia de piruvato mediante la fermentación de levadura
 Observar la producción de piruvato, mediando cambios de color.

MATERIALES
 Vaso de precipitado de 400ml
 Calentador
 Pipetas de 5ml (2)
 Tubos de centrifuga (2)
 Tubos de ensayo (6)
 Gradilla
 Espátula
 Termómetro

REACTIVOS
  Levadura
 NaOH 10%
 Solución de glucosa 10%
 Fosfato de sodio bibásico 0,5M
 Fosfato de potasio monobásico 0,5M
 Ácido tricloroacetico 10%
 2,4-dinitrofenilhidracina saturada en HCl 2M
 Agua destilada

PROCEDIMIENTO
1. Se toman dos tubos de ensayo y se rotulan con las letras A y B, a cada uno se le
agrega 2,5 ml de solución de glucosa, al tubo A se le añade 2.5ml de suspensión de
levadura en solución de fosfato de sodio dibasico. Al tubo B se le añade 2.5 ml de
suspensión de levadura en solución de fosfato de potasio monobásico.
2. Llevamos a baño de maría ambos tubos y monitoreamos que la temperatura se
mantenga en 37°C durante 20 minutos con ayuda del termómetro.
3. Agregamos ATA a cada tubo y mezclamos fuertemente.
4. Llevamos a centrifuga durante 10 min a 2500rpm.
5. Tomamos del sobrenadante de cada tubo y vertemos 1ml en el tubo correspondiente
tubos C (para el sobrenadante A) y D (para el sobrenadante B). A cada uno
agregamos 0.5ml de 2,4-dinitrofenilhidracina en HCl, mezclamos fuertemente.
6. Tomamos un tubo diferente al que llamaremos patrón donde añadiremos 1ml de
solución de glucosa, 0.5ml de 2,4-dinitrofenilhidracina en HCl, mezclamos
fuertemente y agregamos 1ml de NaOH y 0.5ml de agua.
7. En tubos correspondientes F (para tubo C) y G (para tubo D) vertimos 0.5ml de las
soluciones, a estos nuevos tubos agregamos 1ml de NaOH y 0.5ml de agua.
Observaciones: la formación de un color rojo indica presencia de piruvato.

RESULTADOS
PRUEBA RESULTADO IMAGEN

TUBO A Una sola fase de color

(Solución de glucosa + blancuzco.
suspensión de levadura
en solución de fosfato de
sodio dibásico)
TUBO B Una sola fase de color
(Solución de glucosa + blancuzco.
suspensión de levadura
en solución de fosfato de
potasio monobásico)

20 min de baño de maría El tubo A comenzó a

a 37°C presentar efervescencia
al minuto 5 y el tubo B
al minuto 10.

Centrifugado a 2000rpm Ambos tubos

durante 10 min. presentaron un
precipitado blanco.

TUBO C Produjo un color

(Sobrenadante A + 2,4- amarillo fuerte.
dinitrofenilhidracina)

TUBO F Produjo un color rojo

(0.5ml del tubo C + oscuro, parecido al
NaOH + Agua) ladrillo.

TUBO D Produjo un color

(Sobrenadante B + 2,4- amarillo fuerte.
dinitrofenilhidracina)
 TUBO G Produjo un color rojo
(0.5ml del tubo D + menos oscuro en
NaOH + Agua) comparación al tubo F.

PATRÓN Produjo un color naranja

(solución de glucosa + y grumos que al pasar
2,4-dinitrofenilhidracina los minutos se
+ NaOH + Agua) convirtieron en un
precipitado.

ANALISIS DE RESULTADOS
Con base a los resultados obtenidos durante la práctica se analizó lo siguiente:
 Los tubos A y B tienen una única fase blanca, lo que indica que la suspensión de
levadura se dispersa uniformemente en la solución. Esto es crucial para garantizar
una reacción homogénea durante el examen.
 En el quinto minuto marcó el inicio de la efervescencia, mientras que el décimo
minuto marcó el inicio de la efervescencia en el Tubo B. La diferencia en el tiempo
de inicio indica que el Tubo A fermentó más rápido. La producción de CO 2, un
subproducto de la fermentación alcohólica es la causa de la efervescencia.
 Un resultado esperado después de la centrifugación es un precipitado blanco. Este
precipitado es el resultado de las células de levadura sedimentadas durante el
proceso.
 El Tubo C (Sobrenadante A) y el Tubo D (Sobrenadante B): al reaccionar con DNP,
ambos tubos emitieron un fuerte color amarillo. El piruvato, el producto final de la
glucólisis, está presente en este color amarillo. La fuerza del color amarillo en el
 Tubo C indica una mayor concentración de piruvato, lo que respalda la idea de que
el Tubo A fermenta más rápido.

El patrón comienza con un color naranja y grumos que se convierten en un precipitado con
el tiempo. Esta es una característica de la reacción de DNP con la glucosa.

PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS
1. ¿Cuál es la función del ácido tricloroacético?

R/ El acido tricloroacetico es un acido organico derivado del acido acetico, dentro de sus
funciones encontramos la desnaturalizacion de proteinas presentes en el medio de
reaccion dejando el piruvato en el sobrenadante, tambien encontramos que es buen
precipitador de macromoleculas como acidos nucleicos, su sal de sodio es usada como un
herbicida y las soluciones que contienen como ingrediente a este acido son usadas en el
campo de la medicina para tratar las verrugas.

2. ¿Qué conclusiones se podría sacar de las muestras A y B?

R/ De acuerdo con la teoría de la reacción en el Tubo A (F) se debería evidenciar un

color más oscuro debido a que le añadimos fosfato de sodio dibasico, ya que el
piruvato descarboxilasa se inactiva en soluciones ligeramente alcalinas.
En el Tubo B (G) ya que se le añadió fosfato de potasio monobásico el cual es
menos alcalino, no inhibe por completo la función de la enzima piruvato
descarboxilasa y presenta un color más claro.

3. ¿Cuál es la reacción de la 2,4- dinitrofenilhidrazina con el piruvato?

R/ Al reaccionar 2,4- dinitrofenilhidrazina (DNP) con el piruvato obtenemos una
reacción de condensación debido a la formación de nuevo enlace covalente entre el
 grupo carbonilo del piruvato y el átomo de nitrógeno en el 2,4- dinitrofenilhidrazina
(DNP), además de esto, reconocemos que la reacción es de condensación debido a
la eliminación de moléculas de agua en los productos y también esta reacción es
exotérmica, es decir, libera energía en forma de calor debido a los nuevos enlaces
covalentes liberando energía potencial.

4. ¿Qué función cumple el NAD+ en la producción del piruvato?

R/ la glucólisis es el proceso el cual transforma la glucosa en piruvato, liberando

energía, en este proceso el nicotinamida adenina dinucleótido (NAD+) es el
encargado de aceptar los electrones, actuando como un intermediario esencial
conectando la glucólisis con la respiración celular, el NAD+ acepta dos electrones y
un protón del Gliceraldehído-3-fosfato (G3P) durante la oxidación, convirtiéndose
en nicotinamida adenina dinucleótido reducido (NADH) y liberando energía en
forma de ATP, el NADH, con su energía almacenada en los electrones adicionales,
puede transferir estos electrones a otras moléculas en la cadena de transporte de
electrones durante la respiración celular, el NADH se regenera a NAD+ a través de
la fermentación o la respiración celular, permitiendo que la glucólisis continúe.

5. Consulte la vía de la glucólisis y determine los pasos irreversibles de esta vía.

R/ ¿Qué es la glucólisis?
El término “glucólisis” se compone del griego “glycos” que significa “azúcar”, y
“lysis” que quiere decir “ruptura”. En este sentido, la glucólisis es el proceso por
medio del cual se modifica la composición de la glucosa para extraer energía
suficiente en beneficio de las células. De hecho, no sólo actúa como fuente de
energía, sino que repercute en la actividad celular de distintas formas, sin generar
energía adicional necesariamente.

¿Qué es irreversible?
A las reacciones químicas que simplemente ocurren en una dirección hasta que los
reactivos terminan. A estas reacciones se les conoce como irreversibles.
La irreversibilidad es importante, ya que la hace ser el punto de control de la
glucólisis. Como hay otros sustratos aparte la glucosa que entran en la glucólisis, el
punto de control no está colocado en la primera reacción, sino en ésta. La
fosfofructoquinasa tiene centros alostéricos sensibles a las concentraciones de
intermediarios cómo citrato y ácidos grasos. Liberando una enzima llamada
fosfofructocinasa-2 que fosforila en el carbono 2 y regula la reacción.
La glucólisis se regula enzimáticamente en los tres puntos irreversibles de esta ruta,
esto es, en la primera reacción (G → G-6P), por medio de la hexoquinasa; en la
tercera reacción (F-6P → F-1,6-BP) por medio de la PFK1 y en el último paso
(PEP → Piruvato) por la piruvato quinasa.
 La hexoquinasa es un punto de regulación poco importante, ya que se inhibe
cuando hay mucho G-6P en músculo. Es un punto poco importante ya que el G-6P
se utiliza para otras vías.

La fosfofructoquinasa-1 es la enzima principal de la regulación de la glucólisis,

actúa como una llave de agua, si está activa cataliza muchas reacciones y se obtiene
más fructosa-1,6-bisfosfato, lo que permitirá a las enzimas siguientes transformar
mucho piruvato. Si está inhibida, se obtienen bajas concentraciones de producto y
por lo tanto se obtiene poco piruvato. Esta enzima es controlada por regulación
alostérica: por un lado, se activa por concentraciones elevadas de ADP y AMP,
inhibiéndose en abundancia de ATP y citrato, y por otro se activa en presencia de un
regulador generado por la PFK2 que es la fructosa-2,6-bisfosfato (F-2,6-BP), que
no es un metabolito ni de la glucólisis ni de la gluconeogénesis, sino un regulador
de ambas vías que refleja el nivel de glucagón en sangre.

La lógica de la inhibición y activación son las siguientes:

ATP: inhibe esta enzima pues si hay una alta concentración de ATP entonces la
célula no necesita generar más.

Citrato: Si la concentración de citrato es alta el ciclo de Krebs va más despacio de lo

que el sustrato (acetil-CoA) llega para degradarse, y la concentración de glucosa
será más alta. En el ciclo de Krebs se produce mucho NADH y FADH2, para que
funcionen se han de reoxidar en la cadena de transporte electrónico creando
gradiente de protones, si el gradiente no se gasta las coenzimas no se re-oxidan y el
ciclo de Krebs se para.

AMP, ADP: la alta concentración de estas moléculas implica que hay una carencia
de ATP, por lo que es necesario realizar glucólisis, para generar piruvato y energía.

La piruvato quinasa se regula distintamente según el tejido en el que trabaje, pero

en hígado se inhibe en presencia de ATP y Acetil Coenzima-A (Acetil-CoA), y se
activa de nuevo ante la F-1,6-BP y la concentración de fosfoenolpiruvato.

CONCLUSION
La prueba producción de piruvato durante la fermentación de la levadura se llevó a cabo
exitosamente con ayuda del docente y el auxiliar de laboratorio, se cumplieron los objetivos
planteados en el presente informe y se ampliaron los conocimientos con las investigaciones
propuestas en el cuestionario, el proceso de glucolisis y su relevancia en el organismo es de
gran importancia en nuestro crecimiento personal y profesional, le extendemos un
agradecimiento al Phd. Gean Carlos Artega por su labor y acompañamiento en todo el
proceso de este curso de lab. Bioquímica.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
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¿Qué es el piruvato? (2014, 7 octubre). Guía Metabólica.
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info/es-piruvato

ANEXOS Y EVIDENCIAS ALMACENADAS DURANTE EL CURSO