UNIVERSIDAD MAYOR DE SAN ANDRÉS

FACULTAD DE AGRONOMÍA

INGENIERÍA AGRONÓMICA

TESIS DE GRADO

EFECTO DE DOS MEDIOS DE CULTIVO EN LA INTRODUCCIÓN DE ÁPICES

VEGETATIVOS DE TRES MORFOTIPOS DE ARRACACHA ( Arracacia
xanthorrhiza Bancroft) EN CONDICIONES DE IN VITRO

MARY CLAUDIA POMA ACARAPI

LA PAZ – BOLIVIA

2014
 UNIVERSIDAD MAYOR DE SAN ANDRÉS
FACULTAD DE AGRONOMÍA
CARRERA DE INGENIERÍA AGRONÓMICA

EFECTO DE DOS MEDIOS DE CULTIVO EN LA INTRODUCCIÓN DE ÁPICES

VEGETATIVOS DE TRES MORFOTIPOS DE ARRACACHA ( Arracacia
xanthorrhiza Bancroft) EN CONDICIONES DE IN VITRO

Tesis de grado presentada como requisito

parcial para optar el Título de
Ingeniero Agrónomo

MARY CLAUDIA POMA ACARAPI

Asesores

Ph.D. Ing. Félix Marza Mamani ……………………………….

Ing. Freddy Porco Chiri ……………………………….

Tribunal Examinador

Ph.D. Ing. Alejandro Bonifacio Flores ……………………………….

Ing. René Calatayud Valdez ……………………………….

Ing. Rafael A. Murillo García ……………………………….

APROBADA

Presidente Tribunal Examinador ……………………………….

2014
 DEDICATORIA
A mis Padres por darme siempre su
apoyo y amor, por ser mí fuerza
para seguir adelante y alcanzar todas
mis metas.
A mis hermanos y a mis amigos que
siempre me han brindado su apoyo y
buenos deseos.
 AGRADECIMIENTOS

Deseo expresar mis más sinceros agradecimientos a:

- A mi madre por el sacrificio que hizo para apoyarme en toda

mi vida y en especial estos años, mi hermano y mis hermanas
por ser mi compañía y uno de mis motivos para seguir
adelante

- A mi novio Carlos Pacheco Candia, a mis amigos y a todos los

compañeros, docentes y personal administrativo de mi
Facultad de Agronomía

- Asesores Ing. Freddy Porco y Ph.D. Ing. Agr. Félix Marza

Mamani por haberme brindado todas las facilidades
necesarias para realizar este trabajo en el Laboratorio de
Biotecnología Vegetal de la Facultad de Cultivos de Tejidos
Vegetales y en especial por su constante impulso y
colaboración en el desarrollo y finalización de este trabajo.

- A los señores miembros del Tribunal Revisor Ph.D. Agr.

Alejandro Bonifacio Flores, Ing. Agr. René Calatayud, Ing.
Agr. [Link]. Rafael Murillo García quienes con sus aportes y
recomendaciones enriquecieron este trabajo.

…..MUCHAS GRACIAS.
 CONTENIDO

DEDICATORIA..............................................................................................................i
AGRADECIMIENTO.....................................................................................................ii
CONTENIDO................................................................................................................iii
ÍNDICE GENERAL.......................................................................................................iv
ÍNDICE DE CUADROS.................................................................................................v
ÍNDICE DE FIGURAS..................................................................................................vi
RESUMEN...................................................................................................................vii
SUMMARY..................................................................................................................viii
 ÍNDICE GENERAL

Página

I. INTRODUCCIÓN ......................................................................................................1

1.1 ANTECEDENTES ................................................................................................. 2

1.2 JUSTIFICACIÓN ................................................................................................... 2

II. OBJETIVOS.............................................................................................................3

2.1 Objetivo general .................................................................................................... 3

2.2 Objetivos específicos............................................................................................. 3

III. REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA ..................................................................................4

3.1 Generalidades del cultivo de arracacha ................................................................ 4

3.1.1 Origen................................................................................................................. 4

3.1.2 Clasificación taxonómica de arracacha .............................................................. 4

3.1.4 Descripción morfológica ..................................................................................... 5

3.1.5 Requerimientos edafoclimáticos ......................................................................... 9

3.1.6. Propagación ...................................................................................................... 9

3.1.7 Variabilidad Genética ....................................................................................... 11

3.1.9 Plagas y Enfermedades de arracacha.............................................................. 13

3.1.10 Composición nutricional de la arracacha ........................................................ 13

3.2 Biotecnología vegetal ......................................................................................... 15

3.2.1 Cultivo in vitro ................................................................................................... 15

3.2.2 Propagación a partir de meristemos ................................................................. 16

3.2.3 Cultivo de Ápices Vegetativos .......................................................................... 17

3.2.4 Asepsia............................................................................................................. 17

3.2.5 Problemas frecuentes en propagación in vitro ................................................. 18

3.2.6 Medio de Cultivo .............................................................................................. 19

3.2.7 Composición del Medio de Cultivo ................................................................... 20

IV. MATERIALES Y MÉTODOS ................................................................................27

4.1. Ubicación del área de estudio ............................................................................ 27

4.2. Materiales ........................................................................................................... 27

4.2.1. Material biológico............................................................................................. 27

4.2.2. Equipos ........................................................................................................... 27

4.2.3 Material de Vidrio y Metal ................................................................................. 28

4.2.4. Reactivos ......................................................................................................... 28

4.2.5 Instrumentos e implementos de laboratorio. ..................................................... 28

4.2.6 Ambiente de trabajo. ........................................................................................ 28

4.3. Metodología ........................................................................................................ 30

4.3.1 Fase 0. Selección y tratamiento del material vegetal. ...................................... 30

4.3.2 Fase 1. Preparación de Solución Stock y Medio de Cultivo ............................. 30

4.3.3 Fase 2. Introducción a condiciones in vitro y evaluación ................................. 32

4.4 Diseño experimental para la Desinfección de explantes de arracacha ............... 33

4.4.1 Variables de respuesta para la desinfección de explantes de arracacha ........ 34

4.5 Diseño experimental para los medios de cultivo en morfotipos de arracacha ..... 35

4.5.1 Modelo lineal aditivo ......................................................................................... 35

4.5.2 Variables de respuesta para el efecto de los medios en morfotipos de arracacha

.................................................................................................................................. 37

V. RESULTADOS Y DISCUSIONES .........................................................................38

5.1 Análisis de variables de respuesta para tratamientos desinfectantes ................. 38

5.1.1 Porcentaje explantes No Contaminados .......................................................... 38

5.1.2 Porcentaje de Necrosis .................................................................................... 40

5.1.3 Porcentaje de Oxidación .................................................................................. 42

5.1.4 Tiempo que trascurre para la formación de una hoja ....................................... 43

5.1.5 Elección del mejor tratamiento desinfectante ................................................... 44

5.2 Análisis de variables de respuesta para el morfotipos de arracacha en medios de

cultivo ........................................................................................................................ 46

5.2.1 Porcentaje de contaminación (PC) .................................................................. 46

5.2.2 Porcentaje de prendimiento (PP)...................................................................... 49

5.2.3 Altura de explante (AE) .................................................................................... 51

5.2.4 Diámetro de Corona (DC)................................................................................. 54

5.2.5 Número de brotes por explante (NBE) ............................................................. 56

5.2.6 Número de hojas (NH)...................................................................................... 59

5.2.7 Materia húmeda (MH) ....................................................................................... 62

 ÍNDICE DE CUADROS
Página
Cuadro 1. Rendimiento de los tres cultivares de Arracacha ..................................... 13

Cuadro 2. Composición química de Arracacha (100 g de materia seca). ................ 14

Cuadro 3. Características más representativas de los Morfotipos. ........................... 27

Cuadro 4. Tratamientos desinfectantes .................................................................... 34

Cuadro 5. Variables de respuesta ............................................................................ 34

Cuadro 6. Factores y niveles del estudio .................................................................. 36

Cuadro 7. Variables de respuesta ............................................................................ 37

Cuadro 8. Resultados alcanzados con el análisis ANVA, para las variables de

respuesta a la desinfección de explantes de arracacha ............................................ 38

Cuadro 9. Porcentaje de no contaminados, necrosis, oxidación y tiempo que

transcurre para la formación de una hoja .................................................................. 44

Cuadro 10. Porcentaje de contaminación de los ápices vegetativos de los morfotipos

de arracacha ............................................................................................................ 46

Cuadro 11. Análisis ANVA, para las variables de respuesta de introducción de

morfotipos de arracacha en medios de cultivo, evaluadas en el laboratorio de
Biotecnología Vegetal, Facultad de Agronomía ........................................................ 48

Cuadro 12. Comparación de promedios variable porcentaje de prendimiento, para 50

Cuadro 13. Comparación de promedios variable altura de explante (cm), ............... 52

Cuadro 14. Comparación de promedios variable altura de planta (cm), ................... 53

Cuadro 15. Comparación de promedios variable diámetro de corona (cm),............. 55

Cuadro 16. Comparación de promedios variable diámetro de corona (cm), para .... 55

Cuadro 17. Comparación de promedios variable Numero de Brotes, para .............. 57

Cuadro 18. Comparación de promedios variable días Numero de brote, para ......... 58

Cuadro 19. Comparación de promedios variable Numero de Hojas, para................ 60

Cuadro 20. Comparación de promedios variable Numero de Hojas, para................ 61

Cuadro 21. Comparación de promedios variable Materia Húmeda (gr), para .......... 63

Cuadro 22. Comparación de promedios variable Materia Húmeda (gr), para .......... 64
 ÍNDICE DE FIGURAS
Página

Figura 1. Raíz reservante (A. zanthorrhiza), presente al momento de la cosecha en

Toriri. ........................................................................................................................... 5

Figura 2. Hijuelo de Arracacha (A. zanthorrhiza), Blas, 2009. .................................... 6

Figura 3. Hojas de Arracacha (A. zanthorrhiza), presente al momento de la cosecha

en Toriri. ...................................................................................................................... 7

Figura 4. Inflorecencia de (A. zanthorrhiza), Blas (2009)............................................ 8

Figura 5. Selección de los brotes que originarán las nuevas plantas de arracacha
(Amaya y Julca, 2006). .............................................................................................. 10

Figura 6. Las tres principales formas hortícolas: Blanca, amarilla y morada.

(Blas,2009). ............................................................................................................... 11

Figura 7. Cultivo de meristemos. A partir de un meristemo aislado se puede obtener

una planta completa. Adaptado de Biotecnología, UNQ 2006 publicado por Segretín
(s.f). ........................................................................................................................... 16

Figura 8. Efecto de los tratamientos desinfectantes en explantes provenientes ...... 39

Figura 9. Efecto de los tratamientos desinfectantes en explantes provenientes ...... 41

Figura 10. Efecto de los tratamientos desinfectantes en explantes provenientes de

hijuelos para porcentaje de oxidación, según la prueba de Duncan al 5%................ 42

Figura 11. Efecto de los tratamientos desinfectantes en explantes provenientes de

hijuelos para Tiempo que trascurre para la formación de una hoja, según la prueba
de Duncan al 5% ....................................................................................................... 43

Figura 12. Interacción medio de cultivo por morfotipos de arracacha para porcentaje
de prendimiento......................................................................................................... 51

Figura 13. Interacción medio de cultivo por morfotipos de arracacha para altura de
explante. .................................................................................................................... 54

Figura 14. Interacción medio de cultivo por morfotipos de arracacha para diámetro
de corona .................................................................................................................. 56
Figura 15. Interacción medio de cultivo por morfotipos de arracacha para número de
brotes ........................................................................................................................ 59

Figura 16 . Interacción medio de cultivo por morfotipos de arracacha ..................... 62

Figura 17. Interacción medio de cultivo por morfotipos de ....................................... 64

 ÍNDICE DE ANEXOS
Páginas

Anexo 1. Ubicación del lugar de recolección del material vegetal Toriri, Inquisivi ... 77

Anexo 2. Fotografías de Hojas e Hijuelos o brotes de los tres morfotipos en estudio

.................................................................................................................................. 78

Anexo 3. Plantas madres cosechadas de arracacha ................................................ 79

Anexo 4. Equipos ..................................................................................................... 80

Anexo 5. Fotos del estudio ....................................................................................... 81

Anexo 6. Solución Stock de Murashige y Skoog (1962) ........................................... 84

Anexo 7. Solución Stock de Gamborg et al. (1968). ................................................. 87

Anexo 8. Reguladores de Crecimiento usados en la introducción ............................ 88

Anexo 9. Descripción de los hongos detectados e identificados durante el cultivo in

vitro de arracacha (Arracacia xanthorrhiza Bancroft). ............................................... 89
 RESUMEN

La arracacha es parte de una sorprendente variedad de raíces y tubérculos cuyo

cultivo está fuertemente limitado al área de los andes sudamericano (Hodge, 1954
citado por Seminario, 2004). La A. xanthorrhiza perteneciente a la familia Apiaceae
(Umbelliferae) (Mabberley, 1993), a la cual pertenecen también la zanahoria y el
apio.

En la presente investigación sobre el cultivo de arracacha (Arracacia xanthorrhiza

Bancroft), se planteo la introducción de este a condiciones in vitro a partir de apicales
vegetativos; previa selección del material adecuado, un proceso de desinfección,
utilizando para ello lo morfotipos de raíz amarillo claro (M1), raíz blanca (M2) y raíz
amarillo intenso (M3).

Para la desinfección se evaluaron diferentes concentraciones de hipoclorito de sodio

y tiempos de inmersión en 8 tratamientos. El procedimiento de desinfección con
hipoclorito de sodio (3%) y 10 min elimino eficientemente agentes contaminantes de
los explantes. Los porcentajes de contaminación en esta etapa de introducción in
vitro 13.42% en comparación con la experimentada inicialmente que fue de un
promedio del 30.06%.

En el establecimiento, los ápices de arracacha fueron extraídos asépticamente en la

cámara de flujo laminar y cultivados en el medio “MCA” y “MCB”, el principal el
objetivo fue determinar el medio de cultivo optimo. La evaluación fue la
Supervivencia de los explantes alcanzando los mejores promedios 95.8 % para el
M3, 85.58 para el M2 % y 85.00% para M1; Altura de explante 2.88 cm para el M3,
2.68 cm para el M2 % y 2.20 cm para M1; Diámetro de corona 1.3 cm para el M1,
1.1 cm para el M2 % y 1.0 cm para M3; Número de brotes por explante 7 para el M3
y M2 y 5 para M1; Número de hojas 2.8 para M1 y M2, 2.6 para el M3 en el medio de
cultivo MCA.

De acuerdo con los resultados obtenidos, los morfotipos de arracacha demostraron

un comportamiento favorable al proceso de introducción en el medio de cultivo MCA.
 SUMMARY

Arracacha is part of an amazing variety of root crops whose cultivation is strongly

limited to the area of the South American Andes (Hodge, 1954 cited by Seminar,
2004). The A. xanthorrhiza belonging to the Apiaceae (Umbelliferae ) ( Mabberley ,
1993), which also belong to the carrot and celery family.

In the research on the cultivation of arracacha (Arracacia xanthorrhiza Bancroft), the

introduction of such a condition was raised in vitro from vegetative apical; prior
selection of suitable material, a disinfection process , using for this purpose the
morphotypes yellow root clear (M1) , white root (M2) and bright yellow root (M3).

For disinfecting various sodium hypochlorite concentrations and dipping times of 8

treatments were evaluated. The disinfection process with sodium hypochlorite (3%)
and 10 min efficiently remove pollutants from explantes. Los pollution percentages in
this stage of in vitro introduction 13.42% compared to that was initially experienced an
average of 30.06 %.

In the listing, the apexes of arracacha were extracted aseptically in laminar flow
chamber and cultured in medium "MCA" and "MCB ", the main objective was to
determine the optimal culture medium. The assessment was the Survival of explants
reaching the top averages 95.8 % for M3, M2 for 85.58 % and 85.00 % for M1, 2.88
cm height explant for M3, 2.68 cm for the M2 % and 2.20 cm for M1; crown diameter
1.3 cm for M1, M2 1.1 cm to 1.0 cm % and for M3, number of shoots per explant 7 for
the M2 and M3 and 5 for M1, number of leaves 2.8 for M1 and M2, M3 2.6 for in the
culture medium MCA.

According to the results, the morphotypes showed a favorable behavior arracacha the
process of introducing into the culture medium MCA.
I. INTRODUCCIÓN

La arracacha (Arracacia xanthorrhiza Bancroft) es parte de una sorprendente

variedad de raíces y tubérculos cuyo cultivo está fuertemente limitado al área de los
andes sudamericano (Hodge, 1954 citado por Seminario, 2004), es cultivada en
Venezuela, Colombia, Ecuador, Perú, Bolivia y el Norte de Chile (Hermann y Heller,
1997 citado por Sánchez, 2003).

La A. xanthorrhiza perteneciente a la familia Apiaceae (Umbelliferae) (Mabberley,

1993), a la cual pertenecen también la zanahoria y el apio. Esta planta se comporta
como una especie bianual y alcanza una altura de 1 a 1.50 metros, el tallo presenta
ramificaciones cortas o brotes en su parte basal, denominadas colinos o hijuelos que
constituyen el material de propagación que contienen yemas (Tapia, 1997).

Amaya y Julca (2006) indica la importante en la alimentación por la fácil digestión

por ser rica en calcio, fósforo, fierro, niacina, vitamina A, piridoxina-B6, riboflavina-B2,
ácido ascórbico, proteínas, fibras y carbohidratos; características que le otorgan un
potencial alimentario y económico a la arracacha. Sánchez y Tapia (1991) citado por
Cárdenas (2008), señala que es un potencial productivo importante complementario
a los tubérculos, debido a sus variados sabores y a su adaptación a diferentes
condiciones ecológicas en los Andes.

El incremento del uso y procesamiento industrial de arracacha en el Brasil

(actualmente existen alimentos para bebés y sopas instantáneas); contrasta con lo
que sucede con la arracacha en nuestro país, donde sólo se consume fresca. Por
ello, son imperantes las investigaciones futuras que posibiliten su desarrollo como un
alimento alternativo con amplias y prometedoras perspectivas.

En la actualidad Bolivia se está quedando en una retraso que ya muchos países

están avanzando a pasos agigantados en temas de investigación en cultivo de
tejidos, cultivo in vitro, conservación in vitro, etc. El cultivo in vitro de cultivos andinos
ofrece grandes ventajas, en este momento es escasa la investigación en cultivo in
vitro en raíces andinas como la arracacha.

Mary Claudia Poma Acarapi 1

1.1 ANTECEDENTES

Entre las aplicaciones de la biotecnología vegetal los cultivos Andinos destacan el

uso del cultivo in vitro de yemas y meristemos caulinares para la micropropagación,
conservación y distribución de recursos genéticos de raíces y tubérculos (Mujica et
al, 2002).

La investigación (Landázuri, 1996 mencionado por Hermann, s.f) menciona el cultivo

de puntas apicales y la micropropagación de arracacha usando el medio de cultivo
MS suplementado con 3% de sacarosa, 5.6 ppm de BAP y 0.05 ppm de ANA.

En dos experimentos realizados en Brasil se evaluaron el efecto de BAP y las

concentraciones de GA3 en el desarrollo de arracacha in vitro usando el medio MS
(Murashige y Skoog, 1962) y B5 (Gamborg et al., 1968) más 0.1 mg L-1 de ANA ,
con ápices caulinares de 2 mm de los cultivares de Amarela Senador Amaral y
Amarela. Concluyeron que los mejores resultados se obtuvieron, con medio G5
añadiendo concentraciones de alrededor de 0.1 mg L-1 de ANA, 0.3 mg L-1 BAP y
0.25 mg L-1 de AG3 (Madeira et al., 2005).

1.2 JUSTIFICACIÓN

La arracacha ha sido mencionada durante muchos años como un cultivo de valor

económico potencial y con grandes posibilidades de expansión. A pesar de ser una
planta oriunda de nuestra región, existen pocos estudios relacionados con el área de
biotecnología.

Una alternativa para obtener material vegetal sano es la Biotecnología Vegetal,

mediante la técnica de cultivo de tejidos vegetales, la cual consiste en cultivar un
explante de potencial de diferenciación bajo condiciones asépticas, proporcionándole
artificialmente condiciones físicas y químicas para su crecimiento y desarrollo. Esta
técnica puede minimizar los problemas la resultantes de la pérdida de vigor que va
sucediendo en el campo después de ciclos de cultivos sucesivos del material
tradicionalmente cultivado, permite la posibilidad de obtener plantas madres de gran
vigor, que es lo que interesa al productor.

Mary Claudia Poma Acarapi 2

Además que en nuestro medio, no existen estudios de introducción de morfotipos de
arracacha a condiciones in vitro comparando medios de cultivo. Otro aporte útil será
que en consecuencia la técnica desarrollada se podrá utilizar en trabajos
complementarios como la limpieza viral y conservación in vitro de arracacha,
microprogación, etc.

Es por esto que se realizó el estudio para aumentar la información sobre el

comportamiento y respuesta de la arracacha en condiciones de in vitro. En el
presente estudio se propagó tres morfotipos de Arracacha en condiciones in vitro en
base a dos medios de cultivo Murashige Skoog (1962) y Gamborg et al. (1968)
suplementados con ANA (Acido naftalenacético), BAP (Benzil amino purina) y AG3
(Acido Giberélico).

II. OBJETIVOS

2.1 Objetivo general

Determinar el efecto de los diferentes medios de cultivo en la introducción de ápices

vegetativos de tres morfotipos de arracacha (Arracacia xanthorrhiza Bacroft.) en
condiciones in vitro.

2.2 Objetivos específicos

 Establecer el proceso de desinfección para hijuelos de arracacha para su

introducción a condiciones in vitro.

 Evaluar el efecto de dos medios de cultivo en la introducción de tres morfotipos

de arracacha a condiciones in vitro.

 Determinar el comportamiento morfológico y desarrollo de tres morfotipos de

arracacha en condiciones in vitro.

Mary Claudia Poma Acarapi 3

III. REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA

3.1 Generalidades del cultivo de arracacha

3.1.1 Origen

La zanahoria blanca es originaria de los Andes, región en la que se han identificado

la mayoría de las especies del género Arracacia con una mayor variabilidad genética
en el sur de Ecuador. La zanahoria blanca es la única umbelífera domesticada en las
Américas y posiblemente su domesticación ocurrió en Colombia. Bukasov (1930),
citado por Cárdenas (1969) y Mujica (1990), (científicos destacados por sus estudios
en las propiedades de los vegetales), sugiere que la zanahoria blanca es la planta
cultivada más antigua de América. Indican, además que el cultivo habría empezado a
desarrollarse en época preincaica, pues existen restos arqueológicos de tumbas
incaicas.

La especie conocida como apio andino o apio criollo en Venezuela y Puerto Rico;
arracacha y racacha en Colombia, Perú, Bolivia, Centro América y Venezuela; virraca
en Perú y zanahoria blanca en Ecuador es una planta muy antigua originaria de los
Andes (Añez et al, 2002).

Rea (1995) en la ruta del Cuzco, pasando por el Collasuyo y el Lago Titicaca Resalta
la gran variabilidad genética de los tubérculos y raíces donde posiblemente fueron
domesticados y siguen la dirección de La Paz, Oruro y Cochabamba, Chuquisaca y
Potosí, llego esta diversidad parte de lo que hoy es Bolivia.

3.1.2 Clasificación taxonómica de arracacha

La arracacha fue descrita por Bancroft en 1825, como una dicotiledónea. Según
Rojas (2006) tiene la siguiente clasificación botánica:

Clase: Magnoliopsida
Orden: Umbellales (Apiales)
Familia: Umbilleferae (Apiaceae)
Género: Arracacia
Especie: A. xanthorrhiza Bancroft

Mary Claudia Poma Acarapi 4

3.1.3 Características Genéticas

El número cromosómico de la arracacha cultivada (Arracacia xanthorriza

Bancroft) es 2n= 44. Se sugiere que el número cromosómico básico de Arracacia
sería x = 11 y sería tetraploide de 2n= 4x = 44 cromosomas. (Blas, 1996).

3.1.4 Descripción morfológica

La planta es herbácea, tiene cuatro partes distintivas (raíz reservante, tallo llamado
cepa o corona, los hijuelos o ramas laterales llamados colinos y las hojas e
inflorescencias) (Blas, 2005). Hodge, (1954) indica que el cuerpo de la raíz es recto o
encorvado, aplanado a menudo en su parte superior por la presión de otras raíces y
terminado en un ápice delgado que emite fibras de escasa longitud. Su superficie
casi lisa, está cubierta por una delgada película que presenta cicatrices
transversales, como las raíces de la zanahoria. Así mismo indica que las raíces más
jóvenes tienen una epidermis lisa, las raíces viejas desarrollan unas capas corchosas
de color pardo, que dan a las raíces cosechadas una ligera apariencia de yucas.

Añez et al., (2002) señalan que la cepa en su parte inferior emite de 4 a 10 raíces
laterales, ovoides o cónicas de 5 a 25 cm de largo por 2.5 a 6 cm de diámetro. Cada
raíz se une a la cepa mediante un cuello estrecho extendiéndose hacia una base
ancha y redondeada.

Figura 1. Raíz reservante (A. zanthorrhiza), presente al momento de la cosecha en Toriri.

Mary Claudia Poma Acarapi 5

Álvarez (2001), menciona que el tallo se compone de una cepa llamada corona de
forma cilíndrica corta, de 4 a 10 cm de largo por 4 a 15 cm de diámetro, de su parte
superior salen ramificaciones cortas o brotes denominados colinos y a partir de ellos
se forman una planta nueva, en estructura similar a la cepa.

Hijuelos de yemas axilares de la parte superior de la cepa emergen brotes adheridos

a aquella, por medio de una base angosta y curvada, ensanchándose hacia arriba
semejando un cono invertido. Presentan gran cantidad de entrenudos angostos
cubiertos de escamas foliares. En su extremo superior brotan de cuatro a diez hojas
en cada hijo. Una vez separados de la cepa, emiten raíces en sus entre nudos
inferiores formando una nueva planta (Añez et al., 2002).

Figura 2. Hijuelo de Arracacha (A. zanthorrhiza), Blas, 2009.

Robles y Hashimoto (2006), infiere que entre el tallo y las raíces se encuentran en
una corona que da origen a la parte aérea y a las raíces tuberosas. En la parte
superior de la corona aparecen ramificaciones conocidas como hijuelos, brotes, hijos
o propágulos, utilizados para la propagación vegetativa, el número variable de 10 a
13 y de donde nacen las hojas.

Los hijuelos o propágulos son estructuras que se utilizan para la multiplicación de la

especie. Una planta puede producir de 8 a 31 propágulos los que tienen un periodo
de conservación muy corto (Mujica, 1990).

Mary Claudia Poma Acarapi 6

Álvarez (2001), menciona que las hojas son tripinnatifidas, largamente peciolada y a
su vez muy cortada, las hojas son muy parecidas al apio. En cuanto al color es un
poco difícil establecer diferencias. La lámina de la hoja se forma de varios pares de
foliolos opuestos y una terminal.

Así mismo menciona (Mujica, 1990) que las hojas son compuestas, con 3 o 4 pares
de foliolos opuestos, miden hasta 50 cm de largo, con un numero que varía de 55 a
95 hojas por planta. El mismo autor indica que la lámina de las hojas inferiores son
pecioluladas y se dividen en pinadas de forma irregular, las superiores son sésiles y
están divididas en lóbulos, los bordes son dentados.

Mujica (1990), el peciolo es abierto y envolvente en la base y se cierra arriba en

forma de tubo, de color verde oscuro, verde glauco, verde limón, purpura, violáceo o
vinoso, con la base más oscura o más clara.

Figura 3. Hojas de Arracacha (A. zanthorrhiza), presente al momento de la cosecha en

Toriri.

De acuerdo a Blas (2005), el eje floral presenta alrededor de 15- 20 umbelas

compuestas, la inflorescencia es una umbela compuesta con 8-14 umbelas, cada
umbela lleva 10-25 flores. La flor es perfecta en la parte externa de la umbela (flores
con gineceo y androceo funcional), sin embargo en la parte interna solo existen
normalmente flores estaminadas, las flores son muy pequeñas y el fruto desarrolla
solamente un máximo de dos granos (Hermann, 1997).

Mary Claudia Poma Acarapi 7

La flor es umbela compuesta con flores purpuras o amarillas (Higuita, 1968). Con dos
ramas laterales y una terminal, las flor se forma de un cáliz diminuto, 5 pétalos
verdosos que alternan con estambres largos y finos. Las semillas tienen bajo poder
germinativo (Cárdenas, 1969, citado por Mujica, 1990).

Una prueba de inducción floral fue efectuada, utilizando los “colinos” de las 3
principales formas hortícolas de arracacia blanca, amarilla y púrpura. Se
deshidrataron los colinos a tres niveles de pérdida de peso, y se aplicaron tres
niveles de estrés hídrico en el substrato (cantidad de agua disponible). Los
resultados concernientes al estrés hídrico y la deshidratación de los “colinos” no
permitieron poner en evidencia una tendencia clara sobre la inducción floral de la
arracacha (Blas et al, 2006).

Figura 4. Inflorecencia de (A. zanthorrhiza), Blas (2009).

Knudse (2009), indica que la inducción floral en la arracacha dependería del

genotipo; es decir que ciertos genotipos serían más aptos para la floración que
otras en condición de estrés hídrico.

En las flores femeninas como masculinas existen cinco pétalos, estos son más
erectos y ovales en las masculinas y más recurvadas en las extremidades de las
flores femeninas. En los dos tipos de flores los pétalos presentan una coloración
rosada, blanca, gris o marrón; las brácteas son simples y en la mayoría de las veces
están localizadas a un lado de la base de la flor femenina (Robles y Hashimoto,
2006).

Mary Claudia Poma Acarapi 8

Hermann (1997), manifiesta que en los Andes rara vez se observa la floración, pero
es más frecuente en zonas que se encuentran sobre los 900 m.s.n.m. de altitud y 20°
latitud sur. Se considera que los factores que influyen en la floración de la arracacha
no están claramente definidos.

El fruto es un diaquenio lanceolado oblongo de 6 a 15 mm de largo y de 4 a 5 mm de

ancho. Presenta un ápice puntiagudo, siendo comprimido lateralmente en toda su
extensión. El fruto es el resultado de la unión entre dos carpelos y termina con la
formación característica de un ápice bífido (Bustamante et al., 1993).

3.1.5 Requerimientos edafoclimáticos

La arracacha requiere de un clima subtropical, sin presencia de heladas, por lo cual

se encuentra en la parte de debajo de las zonas agroecológicas. En general la altitud
optima para su producción se ubica entre 1200 y 3000 msnm dependiendo de la
latitud (Tapia, 1997).

Rea (s.f.) la racacha (amarilla, blanca, morada), la mayor concentración se da a 3

100, 1 700 y 1 500 msnm, lo más alto en 2 600 m y lo más bajo a 400 msnm. Tapia
(1997) menciona a Cárdenas (1950) quien indica que para las condiciones de
Bolivia, la arracacha no produce bien por debajo de los 1000 msnm ya que no llega a
formar raíces; en pruebas efectuadas a nivel del mar, en la costa del Perú, se
encontró que los suelos arenosos el rendimiento era sustancialmente menor debido a
un ataque muy severo de nematodos (Moreno, 1995 citado por Tapia, 1997).

3.1.6. Propagación

[Link] Propagación por semillas

Amaya y Julca (2006) indica lo siguiente:

Dependiendo de la época de siembra y condiciones ambientales, las plantas de

arracacha florecen y producen semillas botánicas o sexuales viables.

Mary Claudia Poma Acarapi 9

La propagación a través de semillas botánicas muestra ser promisoria en la
reducción y eliminación de algunas restricciones asociadas con la propagación
vegetativa.

La germinación de las semillas se inicia normalmente entre los 20 y 30 días,

dependiendo de la temperatura.

El mejor substrato utilizado para obtener una buena germinación, emergencia

uniforme de las plántulas y reducción de patógenos, es la arena esterilizada.

El bajo porcentaje de germinación de semillas es atribuida al fenómeno de la

dormancia.

[Link] Propagación vegetativa

La propagación de arracacha con fines comerciales se realiza vegetativamente a

partir de los brotes que crecen en la parte aérea de la planta. Al contrario de las
semillas botánicas, mantienen la uniformidad y las características del clon que las
originó. Ellas no están en reposo absoluto pues ocurren modificaciones bioquímicas
y morfológicas desde su origen hasta su enraizamiento y producción de una nueva
planta (Amaya y Julca, 2006).

Figura 5. Selección de los brotes que originarán las nuevas plantas de arracacha (Amaya y
Julca, 2006).

Mary Claudia Poma Acarapi 10

3.1.7 Variabilidad Genética

Se pueden reconocer hasta tres tipos de arracacha según la coloración de la raíz que
es muy heterogénea: color externo puede variar de blanco, blanco con manchas
grises, violáceas o crema, crema con jaspes rosados, amarillo y amarillo ligeramente
bronceado. Mientras el color interno puede ser blanco, amarillo y morado entero o
con anillos y rayos medulares de color violáceo o morado (Ríos 1982 citado por
Tapia 1997).

Figura 6. Las tres principales formas hortícolas: Blanca, amarilla y morada. (Blas,2009).

Según Higuitia, 1977; las diferentes formas hortícolas se reconocen por el color del
follaje y el color externo e interno de la raíz, así tenemos:

• Amarilla: Esta arracacha produce raíces amarillas de muy buen sabor y el follaje es
verde.

• Blanca: Produce raíces blancas y presenta follaje verde.

• Morada: El follaje es de color carmín y las raíces son amarillas.

En general, existen unas nueve diferentes formas hortícolas resultantes de la

combinación de color de la raíz y del follaje .

Mary Claudia Poma Acarapi 11

3.1.8 Siembra y Rendimientos

Amaya y Julca (2006), manifiestan lo siguiente:

 Existen algunas controversias en relación al tiempo transcurrido entre el corte

de las plántulas y la siembra, así como entre la cosecha y siembra, las que
podrían influenciar en el desempeño de la próxima planta.

 Algunos autores recomiendan que luego de la preparación de los brotes, éstos

deben ser sembrados inmediatamente, otros prefieren guardarlas 3 a 4 días
después de la preparación de los brotes para facilitar la cicatrización de los
cortes, colocándolos en un lugar ventilado cuyo almacenamiento no debe
pasar de 60 días.

 Un método para almacenar los brotes consiste en cortar parte de la corona

después de la cosecha de la planta, colocándolas inmediatamente en contacto
con el suelo, en terreno limpio, cubriéndolos con capas de pasto seco de
forma que permita un sombreamiento y aireación, tratando de no
amontonarlas para evitar la pudrición.

Después de la preparación de los hijuelos se deja orear 3 a 5 días, según familias

comunidad de Chullina, provincia Bautista Saavedra, esto para tener mayor
capacidad de brotamiento. Existe tres épocas de siembra en el año, a) la miska que
se realiza en los meses de agosto, septiembre, octubre en asociación con el maíz, b)
la siembra grande (Jatuy Tarpuy). Se siembra en los meses de noviembre, diciembre
y enero, c) siembre atrasada (Kepa tarpuy). Se siembra en los meses de febrero,
marzo (Álvarez, 2001).

El autor anterior señala que los sistemas de siembra estas en función a la topografía,
estructura del suelo: Siembra normal, una vez aperturado los hoyos en terrenos
planos se depositan a los colinos perpendicularmente a la superficie del suelo.
Siembre en terrenos con pendiente, que tengan textura suelta y con poco contenido
de humedad, se siembra colocando los propágulos contra al pendiente o sea, con la
base hacia la pendiente con la finalidad de facilitar el aporque y la cosecha.

Mary Claudia Poma Acarapi 12

 Cuadro 1. Rendimiento de los tres cultivares de Arracacha

Morfotipos Rendimiento Rendimiento Rendimiento Rendimiento

Kg /planta media kg kg /Ha Tn/Ha
/planta
Racacha Blanca 0.50 a 1.80 1.15 33823.5 33.8
Racacha Amarilla 0.90 a 1.80 1.35 39705.8 39.7
Racacha Corazón 0.80 a 1.80 1.3 38235.2 38.2
Morado
Media Total 0.73 a 1.80 1.2 37254.8 37.2

Fuente: Álvarez (2001)

3.1.9 Plagas y Enfermedades de arracacha

En cuanto a enfermedades la principal es la pudrición de la raíz, Scleretium rolfasi.

En épocas de lluvia intensa es atacada por la enfermedad denominada mela mela o
melado, Septoria sp. , que afecta las raíces con la consiguiente mella calidad del
producto (Silva y Normanha, 1964 citado por Álvarez, 2001)

Está comprobado que algunos virus constituyen un factor limitante en los cultivos de
propagación vegetativa. El control de los virus se logra a través de su erradicación en
el material que servirá para su propagación y mediante el uso de variedades
resistentes. Aun se conoce muy poco acerca de los virus en las raíces andinas.
Hasta 1993, cuando se inició la Fase I del Programa Colaborativo de Biodiversidad
de Raíces y Tubérculos Andinos (RTAs), se sabía de la existencia de dos virus en
Arracacia xanthorrhiza (arracacha, zanahoria blanca) posteriormente se descubrieron
5 virus (Jones y Kenten, 1978; Kenten y Jones, 1979 citado por Lizárraga, s.f.).

3.1.10 Composición nutricional de la arracacha

León (1994), señala que la raíz contiene un almidón muy fino, formado por granos de
perfil redondeado o alargado, de 8 a 10 micras de ancho y de tamaño poco variable.
Es la combinación de almidón, fino, uniforme y de olor dado por las resinas, que
hacen agradable el sabor de la arracacha.

Mary Claudia Poma Acarapi 13

El cultivo se ha extendido; se industrializa como saborizante y ingrediente de sopas
instantáneas, su sabor supera a la papa (Tapia, 1997). Son recomendadas en dietas
para niños, personas convalecientes, por su contenido de calcio, fósforo y niacina. El
almidón de esta raíz, pues contiene alrededor de 23% de gránulos redondos que
varían de 5 a 27 µm, haciéndolo altamente digeribles. (Amaya y Julca, 2006).

En Bolivia hay emprendimientos proyectos como PIC-Harinas por PROINPA.

Alternativas con harina de arracacha: complementación y sustitución parcial de
harinas y almidones con productos nativos con alto potencial productivo y nutritivo
para la soberanía alimentaria.

Cuadro 2. Composición química de Arracacha (100 g de materia seca).

Composición Promedio Variación

Agua 74 g 64.12 – 81.37 g
Sólidos totales 26g 16.83 – 34.14 g
Hidratos de carbono 24.91g 19.25 – 29.87 g
Proteínas 0.96 g 0.60 – 1.85 g
Lípidos 0.26 g 0.18 – 0.35 g
Cenizas 1.3 g 1.05 – 1.38 g
Fibras 0.85 g 0.6 – 1.24 g
Almidón 23.51 g 16.91 – 26.49 g
Azúcar 1.66 g 0.65 – 1.98 g
Calorías (cal) 104 g 96.00 – 126.00 g
Acido ascórbico 23 mg 18.26 – 28.40 mg
Vitamina A 1759.87 mg 254.75 – 6878.53 mg
Vitamina B3 3.45 mg 1.00 – 4.50 mg
Vitamina B6 0.03 mg 0.01 – 0.07 mg
Calcio 65.25 mg 45.10 – 127.62 mg
Hierro 9.51 mg 3.60 – 15.41 mg
Fosforo 55 mg 32.50 – 158.70 mg
Potasio 2.4 mg 1.86 – 3.04 mg
Magnesio 64.12 mg 55.00 – 97.64 mg
Fuente: Pereira, 1995 consultado por Salas (2004).

Mary Claudia Poma Acarapi 14

3.2 Biotecnología vegetal

La biotecnología consiste en un gradiente de tecnologías que van desde las técnicas

de la biotecnología "tradicional", largamente establecidas y ampliamente conocidas y
utilizadas (fermentación de alimentos, control biológico), hasta la biotecnología
moderna, basada en la utilización de las nuevas técnicas del DNA recombinante
(llamadas de ingeniería genética), los anticuerpos monoclonales y los nuevos
métodos de cultivo de células y tejidos. (Osorio, s.f.).

La biotecnología vegetal a diferencia de las técnicas tradicionales de cultivo, permite

la propagación de grandes volúmenes de plantas en menor tiempo; así como el
manejo de las mismas en espacios reducidos, esta técnica es de gran utilidad en la
obtención de plantas libres de patógenos (Roca y Mroginski, 1991).

Marza (2009), sostiene que la biotecnología vegetal tiene una tremenda importancia
para el desarrollo tecnológico del país, especialmente en la investigación de nuevos
productos a partir de las especies con potencial y de los recursos genéticos, es una
técnica empleada sobre vegetales como ser los organismos vivos o sobre alguna de
sus partes (células, tallos, orgánulos, meristemos, hojas) para la obtención de un
producto nuevo o genotipos, que abarca desde la micropropagación hasta el cultivo
de células y protoplastos.

3.2.1 Cultivo in vitro

Los términos micropropagación, propagación in vitro y propagación por cultivo de

tejidos son sinónimos que se usan para denominar procedimientos que consiste en el
cultivo en condiciones asépticas de órganos, tejidos, células o protoplastos en un
medio de cultivo artificial para lograr el desarrollo y producción de plantas completas
in vitro (Barba et al., 2001).

El cultivo in vitro, consiste en producir plantas a partir de porciones muy pequeñas de

ellas, de tejidos o células cultivadas asépticamente en un tubo de ensayo o en otro
recipiente, donde se puedan controlar estrictamente las condiciones del ambiente y
la nutrición (Hartmann y Kester, 1995).

Mary Claudia Poma Acarapi 15

3.2.2 Propagación a partir de meristemos

Es el cultivo in vitro del domo apical (meristemo apical que como media mide
100x100 µm) más los primeros primordios foliares. El cultivo de meristemos es un
método efectivo para la eliminación de infecciones virales y es el material preferido
para la conservación de germoplasma (Penacho et al, s.f.)

Penacho et al (s.f.) la razón principal por la cual las células meristemáticas son
indemnes a los virus es que el meristemo carece de tejidos vasculares, que es por
donde se propagan los virus que van contaminando a la planta. Existen otros
factores:

 El meristemo apical tiene una mayor velocidad de crecimiento y en

consecuencia el virus "no alcanza" al meristemo.
 En una célula meristemática el virus tiene mayor dificultad de acoplamiento
con los ribosomas, debido a que estás células tienen un código de trabajo muy
definido.
 Existe una competencia por uso de algunos metabolitos entre células y virus.

En la yema apical se encuentran un grupo de células que conforman el meristemo

apical (tiene un tamaño entre 0,01 y 0,3 mm), tejido embrionario que tiene la
capacidad de formar todos los tejidos de la planta. A partir de ellos se pueden
regenerar plantas completas (Figura 7).

Figura 7. Cultivo de meristemos. A partir de un meristemo aislado se puede obtener una

planta completa. Adaptado de Biotecnología, UNQ 2006 publicado por Segretín (s.f).
Mary Claudia Poma Acarapi 16
El cultivo de meristemos tiene numerosas aplicaciones. Una de las más importantes
es la obtención de plantas libres de virus, ya que esta pequeña zona de tejido
generalmente no es afectada por estos patógenos vegetales. Otra muy importante es
la multiplicación vegetal. La potencialidad de la técnica se demuestra con un ejemplo:
a partir de una yema apical, se pueden obtener 4.000.000 de claveles en un año. La
técnica permite también multiplicar especies de plantas con reproducción lenta o
dificultosa o acelerar la producción de plantas bianuales (Segretín, s.f.).

3.2.3 Cultivo de Ápices Vegetativos

De manera general, el cultivo in vitro a partir de ápices vegetativos consiste en

cultivar asépticamente dichas estructuras provenientes de hijuelos laterales, en el
medio de sales inorgánicas de Murashige y Skoog (1962) suplementado con
reguladores del crecimiento en especial del tipo citocininas, después de una rigurosa
desinfección del material. Luego, mediante un incremento en la concentración del
regulador se promueve la brotación múltiple, permitiendo la realización de ciclos de
multiplicación y finalmente el desarrollo y obtención de plantas completas debido a la
capacidad totipotente inherente en las células vegetales (Sandoval, 1991 citado por
Buro, 2001).

Jiménez (1998), mención que el cultivo aséptico de ápices y meristemos da la

formación de una plántula y posteriormente la inducción de brotes axilares. Este
procedimiento constituye la base de la mayoría de los métodos de propagación in
vitro por vía organogénesis

3.2.4 Asepsia

Perla (2007), menciona que es importante tomar los siguientes aspectos recepto ala
desinfección:La asociación explante-medio y las condiciones físicas en que
normalmente se incuban los cultivos conforman un ambiente propicio para la
proliferación de microorganismos (bacterias, hongos), los cuales pueden destruir
tales cultivos, competir con el explante por el medio de cultivo o modificarlo. Evitar
las contaminaciones con microorganísmos es un aspecto básico que se debe tener
en cuenta para el éxito.

Mary Claudia Poma Acarapi 17

Para establecer cultivos asépticos es necesario:

a) trabajar en ambientes adecuados;

b) esterilizar los medios de cultivo;

c) desinfectar superficialmente los explantes, para liberarlos de microorganismos

exógenos

d) Manejar adecuadamente las normas de asepsia.

Es generalizado el uso de etanol (70 % v/v) y de hipoclorito de sodio (NaOCl) del 1 al

3 %. Con menor frecuencia se usan el hipoclorito de calcio [Ca (ClO)]2, del 6 al 12 %
y el cloruro de mercurio (HgCl 2) del 0.1 al 1.5 %. En algunos casos es útil agregar
algún agente tenso activo (por ejemplo, Tween-20, del 0.01 al 0.1 %). No es
necesario cuando se incluye un primer lavado con etanol.

Posteriormente es necesario dar varios lavados con agua destilada estéril dentro de
la cámara de flujo laminar. Por último vale tomar en cuenta que la desinfección debe
eliminar los microorganismos con el menor daño al explante.

3.2.5 Problemas frecuentes en propagación in vitro

Los problemas más frecuentes en propagación in vitro podrían resumirse en:

contaminación, oxidación y vitrificación de los tejidos.

 Contaminación: Ocasionada por fallas en la esterilización del medio de

cultivo o instrumentos, ineficiente desinfección del material, manipulación
inadecuada y presencia de contaminantes endógenos, cuya incidencia
aumenta en las estaciones de mayor humedad relativa.

 Oxidación: Causada por la liberación de fenoles al medio de cultivo, que

reaccionan con el oxígeno del frasco, produciendo una coloración rojiza,
amarillenta o café. Depende del tipo de material que se emplee (Pocasangre,
1994).

Mary Claudia Poma Acarapi 18

Así Buro (2001) indica, que los compuestos fenólicos actúan como inhibidores del
crecimiento emitidos por el propio explante, capaces de causar el envejecimiento y
muerte del mismo. Se han documentado incluso diferencias en los grados de
oxidación entre los cultivares de una misma especie (Arias, 1993).

 Vitrificación: Fenómeno llamado también hiperhidricidad que consiste en el

aumento del potencial hídrico de las células que causa el enverdecimiento de
los tejidos y los torna quebradizos. En algunos casos se hace referencia a
esta como una enfermedad fisiológica (Buro, 2001).

3.2.6 Medio de Cultivo

Pospisilova et al., (1999), infieren que el medio de cultivo es la combinación sólida o

líquida de nutrientes y del agua, usualmente incluye sales inorgánicas, carbohidratos,
vitaminas y aminoácidos. A menudo se denomina Medio Basal y puede ser
suplementado con algún regulador de crecimiento, los nutrientes son esenciales para
el crecimiento y desarrollo de la planta.

También Seelve et al. (2003), menciona que sin agua, nutrientes y minerales una
planta no puede vivir ni in vivo ni in vitro. También se debe añadir sacarosa al medio
de cultivo, ya que las plantas no son completamente autótrofas cuando se
desarrollan en estas condiciones.

George et al., (1999), en el libro “Plan Culture Media” recogen los medios más
utilizados para el cultivo de células y tejidos vegetales “in vitro” describiendo su
formula y usos. Por lo general los medios en formulaciones ya establecidas, definidas
por Heller (1952), Murashige y Skoog (1962), Gamborg (1968), Schenck y
Hildebrandt (1972).

Castillo (2004), expone que las cantidades a ocupar de macronutrintes,

micronutrientes, hierro y vitaminas son bastante pequeñas, sería bastante lento e
impreciso tener que pesarlas cada vez que se prepara un medio; por tanto es una
práctica habitual en todos los laboratorios preparar soluciones stock concentradas de
los distintos componentes, agrupados de forma que no se produzcan fenómenos de

Mary Claudia Poma Acarapi 19

precipitación. De esta manera, el medio de cultivo se compone de una mezcla de
sales minerales, vitaminas reguladores de crecimiento, azúcar, agua y agar.

Abdelnour y Escalant (1999), sugiere que una vez elaborado el medio de cultivo se
tiene que ajustar el pH a valores prefijados mediante la adición de NaOH y/o HCl 0.1-
1 N. Dependiendo de que se vaya a preparar un medio sólido o líquido, se añadirá en
el primer caso el agente solidificante (agar), se fundirá por calentamiento breve para,
finalmente, ser dosificado en los contenedores adecuados.

Los medios de cultivo se preparan a partir de soluciones concentradas 10 o 100

veces (Soluciones Madre o Stock). En la solución madre se pueden mezclar varias
sales minerales siempre que no se produzcan problemas de precipitación. Algunos
elementos, como el Fe, se utilizan en forma de quelatos para mantener su
disponibilidad durante el cultivo (Rey et al., s. f.).

3.2.7 Composición del Medio de Cultivo

La composición de los Medios de cultivos son los siguientes:

a) Sales Inorgánicas o Minerales

b) Compuestos Orgánicos
c) Complejos Naturales
d) Sustancias Antioxidantes
e) Materiales Inertes de Soporte

[Link] Sales Inorgánicas o Minerales

Gómez (1999), comenta que los nutrientes utilizados en cultivo in vitro son los
mismos requeridos normalmente por las plantas macro y micronutrientes. Por su
parte, Mejía (1998) citado por Conde (2002) menciona que las plantas necesitan
tomar del medio algunos iones inorgánicos que son indispensables para el
crecimiento de las plantas y están constituidos por: nitrógeno, fósforo, calcio, potasio,
magnesio, azufre, cloro y sodio.

Mary Claudia Poma Acarapi 20

Ramírez (1989) y López (1990), coinciden en que los micronutrientes intervienen en
el crecimiento y desarrollo. Los más esenciales para una adecuada actividad
metabólica de las células son: Fe, Mn, Zn, Bo, Cu, y Mo. Los últimos cinco elementos
son fundamentales para síntesis de la clorofila y la formación de cloroplastos.

[Link] Compuestos Orgánicos

Darías (1983), comenta que los compuestos orgánicos se clasifican en tres grupos:
Carbohidratos (fuentes de carbón), sustancias hormonales y vitaminas.
Frecuentemente se han obtenido buenos resultados con el empleo de ciertos
aminoácidos, algunas purinas, pirimidinas, hexitoles y ácidos orgánicos.

a) Fuentes de Carbono

Son utilizados como fuente de energía y como reguladores osmóticos. La sacarosa

es la fuente de carbono más ampliamente utilizada y se emplea a una concentración
de 2 - 4%. Ocasionalmente se utilizan otros carbohidratos como la glucosa en
cultivos de monocotiledóneas, así como la fructuosa, almidón, lactosa, maltosa
sorbitol, manitol y galactosa en otras especies; pero esos compuestos son inferiores
a la sacarosa como fuente de carbono. La sacarosa puede ser sustituida por azúcar
refinada que también genera óptimos resultados (Gómez, 2002).

Según López (1990), los carbohidratos son utilizados como fuente de energía y como
reguladores osmóticos. La sacarosa es el azúcar mas empleado universalmente. La
concentración a la cual se utiliza es de 20 a 45g/L. Asimismo Darías (1983) indica
que la sacarosa puede ser sustituida por el azúcar refinada obteniéndose óptimos
resultados en cultivo in vitro.

b) Reguladores de Crecimiento

Weaver (1976) citado por Quezada (1999), menciona que las sustancias de
crecimiento extraídas de los tejidos y las sustancias sintéticas que tienen efectos
reguladores no pueden ser llamados hormonas sino mas bien reguladores de
crecimiento. Estos se definen como compuestos orgánicos producidos por la plantas,
siendo suficiente utilizar bajas concentraciones para regular los procesos fisiológicos.

Mary Claudia Poma Acarapi 21

Ramírez (1989) y hurtado & Merino (1997), coinciden en que los reguladores de
crecimiento son un conjunto de sustancias químicas y orgánicas distinto de los
nutrientes, que en pequeñas cantidades estimulan, inhiben o modifican de algún
modo cualquier proceso fisiológico en las plantas.

De acuerdo con Hurtado y Merino (1997) actualmente los reguladores de crecimiento

están agrupadas y divididas en:

- Promotores de Crecimiento (auxinas, citocininas y giberelinas)

- Inhibidores de crecimiento (acido abscísico)
- El etileno

o Auxinas

Según Gómez (2002); las auxinas se sintetizan en ápices de tallos jóvenes, por lo
tanto tienen efecto en la dominancia apical y formación de órganos. Tienen
movimiento basipétalo (descendente), estimula la división celular tanto en yemas
existentes como en la emergencia de yemas adventicias. Promueve el
enraizamiento, tiene efecto en la síntesis de enzimas del ARN, de proteínas y en la
permeabilidad celular. La actividad de las auxinas en el medio es degradada por las
bacterias. Las más conocidas son:

Acido 3-indolacético................................................AIA (Muy termolábil)

Acido 3-indolbutírico................................................AIB

Acido naftalenácético..............................................ANA.

Acido 4-cIorofenoxiacético.....................................CPA.

Acido 2,4-dicIorofenoxiacético................................2,4-D

Acido 3,6-dicloro-2-metoxibenzóico........................Dicamba

Acido 2,4,5 triclorofenoxiacético.............................2,4,5-T

Acido 4 amino-3,5,6-tricloro-2-piridincarboxílico.....Picloram

Mary Claudia Poma Acarapi 22

 o Citocininas

Las citocininas fueron descubiertas en la década de 1950 como factores que

promueven la proliferación celular y mantienen el crecimiento de tejidos vegetales
cultivados in vitro. Poco después de su descubrimiento Skoog y Miller propusieron
que la formación de órganos en las plantas se debe al balance existente entre las
citoquininas y las auxinas (Wikipedia, 2007). Al respeto, Pierik (1990), indica que el
cultivo in vitro de plantas superiores las auxinas y las citocininas juegan un papel
importante en la morfogénesis in vitro.

Según Gómez (2002); las raíces son el principal centro para la biosíntesis y son
trastocadas hacia los brotes y hojas (movimiento acropétalo o ascendente). Son muy
importantes porque pueden estimular principalmente la división celular o citocinesis,
inducción en la formación de tallos y proliferación de yemas axilares, inhibición de la
formación de raíces. Son derivadas de la adenina y dentro de este grupo están:

- N6 Bencil aminopurina...............................................BAP.
- N6 Dimetilalil aminopurina..........................................2iP.
- N6 Furfuril aminopurina..............................................Kinetina.
- N6 (4-hidroxi, 3-metil, 2-butenil) adenina...................Zeatina.

o Giberelinas

Existen varios tipos de giberelinas, siendo los más comunes: GA1, GA3, GA4, GA7 y
GA9. Las funciones que llevan a cabo en la planta, se pueden resumir en los
siguientes puntos:

1. Incrementan el crecimiento en los tallos

2. Interrumpen el período de latencia de las semillas, haciéndolas germinar y
movilizan las reservas en azúcares
4. Inducen la brotación de yemas
5. Promueven el desarrollo de los frutos
6. Estimulan la síntesis de mRNA (RNA mensajero)

Mary Claudia Poma Acarapi 23

 c) Vitaminas

López (1999), menciona que las vitaminas son necesarias para llevar a cabo una
serie de reacciones catalíticas en el metabolismo y son requeridas en pequeñas
concentraciones. Las vitaminas mas empleadas son: tiamina, acido nicotínico,
myoinositol, acido pantotenico, acido fólico, riboflavina y el tocoferol.

Según Olmos, (1998); las vitaminas son necesarias para llevar a cabo una serie de
reacciones catalíticas en el metabolismo y son requeridas en pequeñas cantidades,
forman parte de un grupo de compuestos orgánicos esenciales en el metabolismo y
necesarios para el crecimiento celular y, en general, para el buen funcionamiento del
organismo vegetal. Las vitaminas más empleadas son:

• Tiamina: (Vitamina B1) se añade como tiamina-HCl en cantidades que varían de 0.1
a 30 mg/l. Esta es realmente la única vitamina esencial para el crecimiento de
células vegetales.

Al respecto Gómez (2008), indica que, el extracto de quinua es utilizado en el cultivo

de tejidos por su contenido alto en tiamina (0.840mg), esta vitamina aporta
metabolitos esenciales para el desarrollo fisiológico y metabólico de las vitroplantas.

• Ácido nicotínico :(Niacina).

• Piridoxina: (Vitamina B6): se añade como piridoxina-HCl.

• Mio-inositol: no es propiamente una vitamina, sino un azúcar-alcohol. Tiene un

efecto estimulante sobre la morfogénesis, participando probablemente en la vía
biosintética del ácido galacturónico.

• Ácido pantoténico: ayuda al crecimiento y regeneración de tejidos.

• Ácido fólico: disminuye la proliferación de tejido en la oscuridad, mientras que en la

luz la aumenta, esto es debido a que en presencia de luz.

• Riboflavina: es inhibidor del crecimiento de raíces.

Mary Claudia Poma Acarapi 24

• Vitamina E: ayuda a la formación de callos que provienen de embriones, y en
cultivos en suspensión, ayuda a la viabilidad de células.

[Link] Complejos Naturales

Gómez (1999) y Murillo (2002), coinciden en que muchas preparaciones de diversos

medios de cultivo se han empleado diferentes compuestos a fin de enriquecerlos,
entre los cuales podemos citar: el agua de coco, extracto de malta, hidrolizado
proteico, jugo de tomate, extracto de levadura, jugo de naranja y pulpa de plátano y
banano, etc.

[Link] Sustancias Antioxidantes

Según Gómez (1999), una de las principales dificultades del cultivo in vitro en
especies tropicales es la oxidación de fenoles. Estas sustancias si no son
controladas pueden en la mayoría de los casos, provocar la muerte de explante. Para
esto se han empleado diferentes antioxidantes los cuales en su mayoría no realizan
un control total de la enzima polifenoloxidasa.

Una mayor efectividad se puede lograr al adicionar el antioxidante en medio liquido o

hacer cortes de los explantes en una solución con estas sustancias: acido ascórbico,
L-cisteína, tiourea, peróxido de hidrógeno, policlar, polivinilpirrolidone. También el
carbón activado es otra sustancia que evita la oxidación de los explantes.

[Link] Materiales Inertes de Soporte

López (1990), indica que comúnmente se ha empleado el agar como un sistema de

“soporte” para la preparación de medios sólidos o semisólidos. Las ventajas que
representa el agar son:

- Con agua el agar forma geles que se derriten a 100ºC y se solidifican a 45ºC., esto
significa que este gel es estable a todas las temperaturas de incubación.
- El agar no es alterado por las enzimas vegetales.
- El agar no reacciona con los constituyentes del medio.
- No interfiere con la movilización de los constituyentes de medio.

Mary Claudia Poma Acarapi 25

Según Hurtado y Merino (1997), el agar es el material de soporte más ampliamente
usado en cultivo de tejidos vegetales, pues provee al medio de un excelente gel
húmedo que sirve como soporte al inoculo.

Sin embargo, fisiológicamente no es inerte puesto que es fuente de cantidades

variables de sustancias inhibidoras o estimulantes al crecimiento. De acuerdo, a
Gómez (1999) el agar debe ser añadido en concentraciones de 6 a 9 g/L (medio
solido) y de 2 a 4 g/L (medio semisólido).

[Link] Agua

La calidad del agua es importante ya que constituye el 95% del medio nutritivo, se
recomienda utilizarla destilada o desionizada (Pierik, 1990).

El agua corriente apta para el consumo humano no es lo adecuadamente pura para

el cultivo de plántulas debido a que presenta un alto contenido de minerales, aceites,
óxidos metálicos, productos corrosivos, microorganismos, material orgánico y sales
disueltas (Rosell y Villalobos, 1990)

Mary Claudia Poma Acarapi 26

IV. MATERIALES Y MÉTODOS

4.1. Ubicación del área de estudio

La presente investigación se llevó acabo en el Laboratorios de Biotecnología Vegetal

de la Facultad de Agronomía dependiente de la Universidad Mayor de San Andrés de
La Paz.

4.2. Materiales

4.2.1. Material biológico

Para el desarrollo del presente estudio se utilizaron hijuelos (colinos) de arracacha

(Anexo1) pertenecientes a los morfotipo 1 (raíces amarillas claras y follaje de color
carmín), morfotipo 2 (raíces blancas y follaje es verde) y morfotipo 3 (raíces amarillas
intensas y follaje verde) recolectadas de la comunidad Toriri (Anexo 2 y 3); ubicada
a los 16º 47´ 5´´ de latitud sur, a 60º 7´75´´ de longitud oeste, a una altura promedio
de 2550 msnm, la comunidad pertenece al cantón Licoma, al municipio de Villa
Libertad Licoma, provincia Inquisivi del departamento de La Paz.

Cuadro 3. Características más representativas de los Morfotipos.

Morfotipo Color de Raíz Color de Numero Número Ciclo Rendimiento

Hojas de brotes hojas/brote Vegetativo (Tn/Ha)

M1 amarillas claras Rojo 21.90 3.67 355 11.69

carmín
M2 blanco verde 23.20 3.67 262.33 16.64
M3 amarillas intenso verde 18.63 4.97 257.67 25.6

Fuente: Placencio, 2012.

4.2.2. Equipos

Los equipos que se usaron en el laboratorio fueron: Temporizador (Control de horas

luz - oscuridad), Termómetro de máximas y mínimas, Destilador de agua, Autoclave,
balanza analítica, agitador magnético, pHmetro, Cámara de flujo laminar,
Microondas, Refrigerador y Cámara fotográfica (Anexo 4).

Mary Claudia Poma Acarapi 27

4.2.3 Material de Vidrio y Metal

Vasos precipitados (50 y 100 ml.), Probetas de 100, 250 y 500 ml., Gradillas, Matraz
Erlenmeyer (500 ml.), Cajas Petri, Frascos de vidrio para almacenar soluciones (250,
500 ml) y Pipetas graduadas (4, 10 y 25 ml.).

4.2.4. Reactivos

Sales Minerales, Vitaminas de MS (Murashige y Skoog, 1962) ver Anexo 6 y de B5

Gamborg et al., 1968) ver Anexo 7, Hipoclorito de sodio, Agar, Agua destilada,
Alcohol. Acido clorhídrico, Hidróxido de sodio, agua destilada, Reguladores de
Crecimiento ANA (ácido α-naftalenacético), BAP (bencil amino purina) y AG3 (Acido
giberélico). Y también un antioxidante acido cítrico.

4.2.5 Instrumentos e implementos de laboratorio.

Propipeta, Pinzas, Magos de bisturí, Hojas de bisturí Nº 9 y 11, Papel madera, Papel
aluminio, Parafilm, Algodón, Mechero de alcohol, Espátulas, Pipetas, Pipetómetro,
marcador permanente.

4.2.6 Ambiente de trabajo.

El Laboratorio de Biotecnología Vegetal, cuenta con los siguientes ambientes:

a) Área de lavado y preparación de medios.

En este ambiente se procedió al lavado de todo el instrumental y material de vidrio

necesario para la investigación, el detergente líquido es el más recomendado por
tener un menor efecto residual (Peróxidos) sobre el material de laboratorio además
de la eficiencia en la eliminación de partículas y la facilidad de enjuague, el mismo se
realizó en múltiples sesiones de agua limpia y finalmente con agua destilada tibia.

La preparación de medios, conlleva diferentes aspectos, desde, la utilización de

soluciones stock, el pesado de los reactivos, el ajuste del medio de cultivo, la
distribución del medio en los tubos de ensayo, y finalmente el sellado de los tubos
con papel aluminio.

Mary Claudia Poma Acarapi 28

De la misma forma, la preparación del material de apoyo exige ciertas normas de
importancia, como ser: la cobertura del instrumental metálico con papel aluminio (en
las puntas), recipientes con agua destilada, placas petri cubiertas con papel sábana.
Todo este procedimiento se realizó en el área de preparación de medios.

b) Área de esterilización.

Este ambiente cuenta con equipos específicos para la esterilización, uno de ellos es
la autoclave, aparato que sirve para esterilizar objetos y sustancias situados en su
interior, por medio de vapor y altas temperaturas. Una vez ya preparados los medios
de cultivo y material de apoyo, se procedió a la esterilización a una temperatura de
121 ºC, a una presión de 15 lb/pulg2, durante 15 minutos, para después de 24 hrs.
ser utilizados en la sala de siembra y transferencia.

c) Área de siembra y transferencia de explantes.

Este ambiente reúne las condiciones necesarias para la transferencia y siembra de

explantes en forma aséptica, condiciones proporcionadas por la cámara de flujo
laminar, donde 24 hrs antes se realizó una limpieza minuciosa con hipoclorito de
sodio (lavandina) al 3% (v/v) y alcohol al 70% (v/v) con la finalidad de eliminar
cualquier elemento contaminante.

d) Sala de crecimiento.

Sala de crecimiento, este ambiente reúne las condiciones adecuadas para el

desarrollo de las vitroplantas, cuenta con estantes metálicos a los que se adaptaron
tubos fluorescentes blancos de 40 y 60 W, que proveen una intensidad lumínica
aproximada de 1200-1500 lux (lumen por metro cuadrado) y una temperatura de 22 a
25 ºC, el fotoperiodo de 16/8 horas de luz/oscuridad debidamente controladas por un
temporizador automático, todos estos datos fueron tomados dúrate los 2 meses de
investigación.

Mary Claudia Poma Acarapi 29

4.3. Metodología

Durante el trabajo de investigación se usó, la metodología empleada por Murashige y

Skoog (1962) y Gamborg et al. (1968) que fue adecuada a las condiciones
requeridas, a esta se añadió las diferentes concentraciones de reguladores de
crecimiento, planteados durante el desarrollo de la investigación, con el fin de cumplir
con los objetivos del trabajo este se dividió en tres fases las cuales se describen a
continuación.

4.3.1 Fase 0. Selección y tratamiento del material vegetal.

El 20/07/2011 se colectó las plantas madres en la comunidad de Toriri. Se realizó

una segunda recolección en 29/07/2012. Para la obtención de plantas madres, la
selección se realizó tomando en cuenta las características propias del cultivo, plantas
que no presentaron enfermedades o plagas. Una vez elegida las plantas madres y
antes de extraer los hijuelos se realizó el lavado con agua para eliminar fragmentos
de suelo y la desinfección se hizo con etanol al 70% (v/v) para eliminar los
contaminantes externos, como ser los hongos y las bacterias que habitan en forma
natural en el ambiente, posteriormente fueron guardados en el conservador de
plastoformo. A continuación se realizó el traslado a la ciudad de La Paz, traslado los
hijuelos o colinos al laboratorio donde fueron cultivados en el medio y se aplicaron
los tratamientos propuestos.

4.3.2 Fase 1. Preparación de Solución Stock y Medio de Cultivo

Se realizo la limpieza, esterilización de todos ambientes con hipoclorito de sodio al

3% y los mesones con etanol 90 %, esta operación se hizo cada vez que se usó los
ambientes y equipos. El desinfectado de la cámara de flujo laminar se hizo solo con
etanol al 90% y hipoclorito de sodio al 3%.

El lavado de los cristales: probetas, vasos de precipitados, elermeyers, los frascos,

cajas Petri, gotero, varilla, las espátulas y los recipientes de cristal: se realizó el
lavado con detergente, se enjuago de cuatro aguas el último enjuague se realizó con
agua destilada, luego se volteo sobre el mesón desinfectado.

Mary Claudia Poma Acarapi 30

Para ejecutar la preparación de las soluciones Stock están basadas en sales y vita
minas, la primera solución Stock de Murashige y Skoog (1962); compuesta por cinco
soluciones stock: A, B, C, D y E. La preparación de la segunda solución Stock
Gamborg et al. (1968); compuesta por cinco soluciones stock: Macronutrientes,
micronutrientes, cloruro de calcio, quelatos de hierro y vitaminas-aminoácidos.

Para preparar el medio de cultivo se siguió los siguientes pasos: en una probeta de
500ml se añadió las 5 soluciones stock del MS y se completo con agua destilada;
se lo vacio a un recipiente de 500 ml en erlenmeyer. En seguida se añadió sacarosa
3 % (p/v) a la solución, se procedió a agitar hasta homogeneizar la mezcla
seguidamente se añadió 0,1 mg L-1, ANA, 0,3 mg L-1 BAP y 0,25 mg L-1 GA3, se
ajusto el pH a 5.6 a 5.7 y finalmente se procedió a agregar el agente solidificante
agar 0,55 % (p/v) el cual se debe calentar para diluir y homogenizar el medio de
cultivo.

Cuando el medio estuvo casi transparente homogéneo se distribuyó en los vasitos y

magentas, con 5 ml y 15 ml e inmediatamente se sello con el papel aluminio y
papel madera, se lo apretó con una liga. La misma operación se siguió para preparar
el medio de cultivo (MCB), se uso el medio basal GB, sacarosa 3 % (p/v) y se añadió
reguladores de crecimiento 0,1 mg L-1, ANA, 0,3 mg L-1 BAP y 0,25 mg L-1 GA3.

Para la esterilización de los medios de cultivo se situó los vasitos con medio dentro
del autoclave, así mismo; se ubico las cajas petri envueltos en papel madera cada
par, las pinzas y los mangos de bisturí con papel aluminio (en las puntas), materiales
como los algodones en un frasco sellado con papel aluminio y plasfilm, el agua
destilada (para enjuagar los explantes), luego se aseguro muy bien el autoclave.

Una vez ya preparados los medios de cultivo y material de apoyo, se procedió a la

esterilización a una temperatura de 121 ºC, a una presión de 15 lb/pulg2, durante 15
minutos, para después de 24 hrs. ser utilizados en la sala de siembra y transferencia.

Mary Claudia Poma Acarapi 31

4.3.3 Fase 2. Introducción a condiciones in vitro y evaluación

Desinfección

La concentración y el tiempo a utilizar se determinaron a través de tratamientos

previos que se realizaron en las cuales se trabajó con 8 tratamientos de desinfección
(% hipoclorito de sodio y tiempos de inversión).

La desinfección se realiza en el área siembra y transferencia. Este ambiente reúne

las condiciones necesarias para la transferencia y siembra de explantes en forma
aséptica, condiciones proporcionadas por la cámara de flujo laminar. Se realiza una
desinfección física atreves de rayos ultravioleta en la cámara de flujo laminar a las
soluciones de etanol, lavandina, los bisturís, pinzas, el algodón, el agua destilada, las
cajas petri, los frascos para enjuagar, plastiflix, marcador indeleble, guardapolvo,
guantes, barbijo, gorra y los mecheros por espacio de 30 minutos, después se
procedió a apagar el UV y se espera unos 15 minutos antes de entrar al ambiente.

Previa entrada del material vegetal a la cámara de flujo laminar se dejó bajo el
chorro de agua para evitar el estrés del hijuelo, con la ayuda de un cuchillo, se cortan
hojas y parte de raíz aun existente en el hijuelo, recién se introdujo el material
vegetal a la cámara flujo laminar y se procedió de la siguiente manera:

Se sumergió en etanol 70 % (p/v) por espacio de 10 segundos los explantes,

posteriormente se introdujo al hipoclorito de sodio al 3% por espacio de 10 minutos
y se hicieron tres lavados con agua destilada, el cual contenía Acido cítrico 0,1%
(p/v) para disminuir la oxidación del explante.

Introducción a condiciones in vitro

Para la siembra inicial se procedió a la limpieza del tablero (de la cámara flujo
laminar) este procedimiento se realizó cada vez que se uso, empleando alcohol
antiséptico y algodón estéril; paralelamente se realizó el encendido del mechero de
alcohol, se flamearon los instrumentos (tapa de cajas petri, el bisturí, mango de
bisturí y las pinzas).

Mary Claudia Poma Acarapi 32

Con la ayuda de una pinza se procedió a sujetar los hijuelos para realizar cortes para
obtener ápices en la caja Petri con el bisturí; una vez cortado el explante de 5 a 10
mm aproximadamente, se destapo el medio de cultivo e inmediatamente se realizo la
introducción del explante. Una vez realizada la siembra se flameó rápidamente y en
seguida se sella con el plastiflix, luego se llevó a la sala de crecimiento (área estéril
y ambiente controlado).

La evaluación se hizo con respecto a las variables de respuestas, se utilizó muestreo

destructivo para algunas variables (número de hojas, número de hijuelos) al no
existir la planta para sus posteriores mediciones se tomo en cuenta a la siguiente
muestra hasta obtener todos los datos deseados. Unas vez concluidas la toma de
datos y al considerarse que no existían nuevos eventos entonces se procedió a
realizar el análisis de los datos obtenidos.

4.4 Diseño experimental para la Desinfección de explantes de arracacha

Para los tratamientos desinfectantes en ápices de arracacha se utilizó para su

análisis el Diseño de Bloques al azar, donde la variable estudiada son los
tratamientos de desinfección y el bloque corresponde a las repeticiones. Se utilizo el
siguiente modelo lineal matemático (Calzada, 1970).

XijK = μ + βj + αi + εijk

DONDE:

Xij = Observación cualquiera

µ = Media general
βj = Efecto i- ésimo repetición (Bloque)
αi = Efecto del j- ésimo Tratamiento de Desinfección
εijk = Error Experimental

Mary Claudia Poma Acarapi 33

 Cuadro 4. Tratamientos desinfectantes

Tratamiento Concentracion de Tiempo

hipoclorito de sodio (%) (min)
A1 4 15
A2 4 10
A3 3 15
A4 3 10
A5 2 20
A6 2 15
A7 1 20
A8 1 15

4.4.1 Variables de respuesta para la desinfección de explantes de arracacha

El Cuadro 5, nos muestra las variables analizadas durante el proceso de

desinfección
Cuadro 5. Variables de respuesta

Variable Símbolo Características Operacionalización de la

variable

Porcentaje PNC Se registro la cantidad de explantes ANVA, Prueba de promedios

explantes No que no presento agentes
Contaminados contaminantes(Bacterias hongos y
levaduras)

Porcentaje de PN Se realizo el conteo de explantes ANVA, Prueba de promedios

Necrosis muertos.

Porcentaje de PO Se realizara en los que respondan Por conteo del número brotes
Oxidación a la producción de brotes. y calculo de promedios. ANVA,
Prueba de medias Duncan

TFH Se realizara en los que respondan Conteo del número, calculo de

Tiempo que
a la producción de hojas. porcentajes. ANVA, Prueba de
trascurre para la
promedios
formación de una
hoja

Las variables de respuesta con las que se trabajaran nos coadyuvaran para
comparar los tratamientos desinfectantes.
Mary Claudia Poma Acarapi 34
4.5 Diseño experimental para los medios de cultivo en morfotipos de arracacha

El diseño experimental empleado en el presente estudio fue el completamente al

azar con arreglo bifactorial; el factor A fue el medio de cultivo y el factor B los
morfotipos de arracacha; sus combinaciones constituyeron 6 tratamientos con 10
repeticiones, la unidad experimental consistió en 2 magentas con 4 explantes en
cada magenta, totalizando 60 unidades experimentales.

4.5.1 Modelo lineal aditivo

Según Romero, 2009, menciona que el modelo lineal aditivo corresponde a diseño
completamente al azar con arreglo bifactorial, y el modelo es el siguiente:

XijK = μ + αi + βJ + (αβ)ij + εijk

DONDE:

Xij = Observación cualquiera

µ = Media general

αi = Efecto i- ésimo nivel del factor medio de cultivo

βj = Efecto del j- ésimo nivel del factor morfotipo de arracacha

(αβ) ij = Interacción del i- ésimo nivel del factor medio de cultivo con
el j- ésimo nivel del factor morfotipo de arracacha

εijk = Error Experimental

Mary Claudia Poma Acarapi 35

 Cuadro 6. Factores y niveles del estudio

Factor A: Medio de Cultivo Símbolo

a1 = MS + (ANA, BAP y GA3) MCA

a2 = B5 + (ANA, BAP y GA3) MCB

Factor B: Morfotipo de Arracacha Símbolo

b1 = Raíz amarillo claro M1

b2 = Raíz blanca M2

b3 = Raíz amarillo intenso M3

MS = Murashige y Skoog (1962) (Anexo 6)

B5 = Gamborg et al., (1968) (Anexo 7)

Reguladores de crecimiento = 0,1 mg L-1 ANA + 0,3 mg L-1 BAP + 0,25 mg L-1 GA3)

Los tratamientos fueron los siguientes:

T1= Medio Cultivo (A) + Morfotipo (1)

T2= Medio Cultivo (A) + Morfotipo (2)

T3= Medio Cultivo (A) + Morfotipo (3)

T4= Medio Cultivo (B) + Morfotipo (1)

T5= Medio Cultivo (B) + Morfotipo (2)

T6= Medio Cultivo (B) + Morfotipo (3)

Mary Claudia Poma Acarapi 36

4.5.2 Variables de respuesta para el efecto de los medios en morfotipos de
arracacha

El Cuadro 7, nos muestra las variables analizadas durante el desarrollo del presente
estudio.
Cuadro 7. Variables de respuesta

Variable Símbol Características Operacionalización de la

o variable

Porcentaje de PC Se registró la cantidad de explantes que Conteo del número de vitro

contaminación presenten contaminación fúngica, plantas contaminadas, calculo
bacteriana u oxidación. de porcentajes

Porcentaje de PP Se realizó en conteo de vitro plantas que se ANVA, Prueba de promedios

Prendimiento adaptaron, inician el proceso de formación
de partes vegetativas.

Altura de AP Se procedió a medir con una regla y en ANVA, Prueba de promedios

planta centímetros cada planta. Se medió cada
semana y se considerará desde el
momento de la siembra.

Número de NBE Se realizó en los que respondan a la Por conteo del número brotes
brotes por producción de brotes. y calculo de promedios. ANVA,
explante Prueba de medias Duncan

Número de NH Se contabilizó aquellas hojas bien Conteo del número, calculo de

hojas estructuradas, en los que respondan a la porcentajes. ANVA, Prueba de
producción de hojas. promedios

Diámetro de DC Se medirá en mm ANVA, Prueba de promedios

Corona

Materia MH Pesaje de las vitro plantas frescas Se Calculo de porcentajes, prueba

húmeda realizara al finalizar los tratamientos a las 8 de promedios. ANVA
semanas

Las variables de respuesta con las que se trabajaran nos coadyuvaran para
comparar los dos medios de cultivo.

Mary Claudia Poma Acarapi 37

V. RESULTADOS Y DISCUSIONES

Los explantes evaluados provinieron de hijuelos colectadas de la comunidad Licoma

en perteneciente al municipio Inquisivi de plantas madres sanas, con alto potencial
de rendimiento. Con el análisis de los datos obtenidos en la investigación se llegaron
a los siguientes resultados y conclusiones:

5.1 Análisis de variables de respuesta para tratamientos desinfectantes

Cuadro 8. Resultados alcanzados con el análisis ANVA, para las variables de respuesta a la
desinfección de explantes de arracacha

VARIABLES
DE PNC PN PO TPH
RESPUESTA
FV GL CM Prob > CM Prob > CM Prob > CM Prob >
F F F F
Bloque 9 174.479 233.507 52.083 0.500

Tratamiento 7 5945.313 0.000** 5320.3125 0.000** 1959.821 0.000** 7.429 0.000**

Error 63 116.939 124.380 40.179 0.563

Total 79

CV:15.24 CV:13.95 CV:18.43 CV:11.54

CV = coeficiente de variación; ** = altamente significativo; * = significativo; ns = no significativo

5.1.1 Porcentaje explantes No Contaminados

El análisis de varianza para el Porcentaje explantes No Contaminados (Cuadro 8)

indica que existen diferencias altamente significativas entre los tratamientos para la
variable porcentaje de explantes no Contaminados. Esta reportó un coeficiente de
variación de 13.95 % que muestra un manejo homogéneo de las unidades
experimentales.

Mary Claudia Poma Acarapi 38

 Figura 8. Efecto de los tratamientos desinfectantes en explantes provenientes
de hijuelos para porcentaje de No contaminados, según la prueba de Duncan al 5%

En el Figura 8, de la prueba de Duncan a un nivel de significancia α= 0.05, se

observa que existen diferencias en los tratamientos desinfectantes como resultado
de la introducción de los explantes, que cuando se utilizó: A1 (4 % de NaClO durante
15 min), A2 (4 % de NaClO durante 10 min) y A3 (3 % de NaClO durante 15 min)
obteniendo 97.5%, 95% y 90% de no contaminados respectivamente lo negativo de
estos tratamientos son que posteriormente causaron necrosis en los explantes
introducidos, resultaron ser muy altas las concentraciones de hipoclorito de sodio y el
tiempo de inmersión.

El tratamiento más apropiado para el porcentaje de no contaminados es el A4 (3 %

de NaClO durante 10 min) ya que demostró ser muy efectivo en la eliminación de
microorganismos externos presentes en la superficie del explante sin causar
necrosis, como se observa en los resultados en la figura 9. Y los tratamientos
desinfectantes A5 (2 % de NaClO durante 20 min), A6 (2 % de NaClO durante
15min), A7 (1 % de NaClO durante 20 min) y A8 (1 % de NaClO durante 15 min)
fueron concentraciones muy bajas para eliminar microorganismos presentes en los
hijuelos tratados.

Mary Claudia Poma Acarapi 39

La diferencia de los resultados obtenidos en la variable de No Contaminados se
asume al hecho que los hijuelos de arracacha se encuentran casi en contando
directo con el suelo lo que favorece que el tejido este más expuesto a agentes
contaminantes lo cual dificulta la total eliminación.

Por este motivo que los tratamientos como el (A5, A6, A7 y A8) resultaron ser
inapropiados para poder eliminar agentes contaminantes, debido a las bajas
concentraciones de hipoclorito de sodio.

Al respecto, Villalobos y Pérez (1979) citado por Sánchez (2004) mencionan que el
contacto directo con el suelo inducen alta contaminación de los explantes,
especialmente cuando estos son extraídos de plantas provenientes de campo.

Observando que la mayoría de los explantes contaminados hubo la presencia de

bacterias. Jiménez (1999) menciona que los métodos de desinfección utilizados no
siempre eliminan las poblaciones de bacterias asociadas a los tejidos de las plantas
in vivo; muchas son capaces de permanecer latentes en el interior de las células, en
los espacios intercelulares o en los haces conductores quedando protegidas, de esta
manera, de los agentes químicos. Esto podría explicar los resultados obtenidos en
cuanto a la presencia de una mayor proporción de contaminantes bacterianos.

5.1.2 Porcentaje de Necrosis

El análisis de fuentes de variación para el Porcentaje de Necrosis (Cuadro 8) indica

que existen diferencias altamente significativas entre los tratamientos para la variable
No Contaminados. Esta reportó un coeficiente de variación de 18.43 %.

Los resultados presentados en la figura 9, mediante prueba de Duncan a un nivel de

significancia α= 0.05, se observa que el mejor tratamiento desinfectante para los
hijuelos de arracacha en la variable de necrosis es A4 (3 % de NaClO durante 10
min), presentando 25% de necrosis cuando el hipoclorito de sodio tiene una
concentración casi intermedia comparadas con las otros tratamientos y un tiempo
también intermedio contrastadas con los demás tiempos usados.

Mary Claudia Poma Acarapi 40

 Figura 9. Efecto de los tratamientos desinfectantes en explantes provenientes
de hijuelos para porcentaje de necrosis, según la prueba de Duncan al 5%

También se observó que los tratamientos no adecuados para este fin son:A1 (4 % de
NaClO durante 15 min), A2 (4 % de NaClO durante 10 min) y A3 (3 % de NaClO
durante 15 min) causando 87.5%, 70% y 60% de necrosis respectivamente (ver
Figura 9).

Los resultados obtenidos para porcentaje de necrosis concuerdan con Sánchez

(2004), quien menciona que las concentraciones altas o períodos de inmersión más
prolongados causan necrosis en los explantes, dicho autor obtuvo bajos porcentajes
de necrosis utilizando 20% de blanqueador comercial (1.05 NaClO) durante 20 min
de inmersión.

Al respecto, Gómez (1999) menciona que la concentración y el tiempo de exposición

necesaria para una desinfección adecuada, varían en función al tipo de explante
utilizado y su posterior regeneración. Vega et al. (2007), señala que mayor tiempo
exposición al NaClO permite una mayor penetración del agente químico de tal
manera que no solo produjo la eliminación de los microorganismos contaminantes,
sino también pudo haber afectado a los tejidos internos y por tanto a la viabilidad del
material vegetal.

Mary Claudia Poma Acarapi 41

5.1.3 Porcentaje de Oxidación

El análisis de varianza para el Porcentaje de Oxidación (Cuadro 8) indica que

existen diferencias altamente significativas entre los tratamientos para la variable No
Contaminados. Esta reporto un coeficiente de variación de 11.54 % que muestra un
manejo homogéneo de las unidades experimentales.

Figura 10. Efecto de los tratamientos desinfectantes en explantes provenientes de hijuelos

para porcentaje de oxidación, según la prueba de Duncan al 5%

Los resultados presentados en la figura 10, mediante prueba de Duncan a un nivel

de significancia α= 0.05, se observa altos porcentajes de oxidación el los tratamiento
A1 (4 % de NaClO durante 15 min), A2 (4 % de NaClO durante 10 min) y A3 (3 % de
NaClO durante 15 min) con 60, 50 y 40% de oxidación respectivamente, y los demás
tratamientos tuvieron un 25% de oxidación. Se observó que el mejor tratamiento fue
A4 (3 % de NaClO durante 10 min) ya que los tres primeros tuvieron mucha
oxidación causando lento desarrollo y muerte de los explantes.

Por su parte los demás (A5, A6, A7 y A8) tuvieron baja oxidación pero las
concentraciones y tiempos de inmersión son insuficientes para una buena
desinfección del explante. En la mayoría de los explantes de hijuelos, los
tratamientos desinfectantes presentaron baja oxidación, el cual, con el transcurso el
tiempo se difundió en el medio.

Mary Claudia Poma Acarapi 42

Debido que el NaClO además de ser un desinfectante también es un agente
Oxidante, Roca y Mroginski (1991); es probable que las altas concentración de
NaClO y las características del explante, el enjuague de los explante no haya sido
suficiente para eliminar los restos de hipoclorito.

Así mismo se puede señalar que durante la incisión de los explantes ocurren daños
celulares, en respuesta de ellos se activan el metabolismo de fenoles, la cual se
manifiesta con el empardecimiento del medio de cultivo, que se inicia en la zona
central del explante y puede extenderse por todo el medio de cultivo, como
consecuencia del proceso de oxidación (Quezada, 1999).

5.1.4 Tiempo que trascurre para la formación de una hoja

El análisis de fuentes de variación para el Tiempo que trascurre para la formación de

una hoja (Cuadro 8) indica que existen diferencias altamente significativas entre los
tratamientos para la variable No Contaminados. Esta reportó un coeficiente de
variación de 15.24 % que muestra un manejo homogéneo de las unidades
experimentales.

Figura 11. Efecto de los tratamientos desinfectantes en explantes provenientes de hijuelos

para Tiempo que trascurre para la formación de una hoja, según la prueba de Duncan al 5%

Mary Claudia Poma Acarapi 43

Los resultados presentados en la figura 11, mediante prueba de Duncan a un nivel
de significancia α= 0.05, nos muestra que el mejor tratamiento corresponde al A4 (3
% de NaClO durante 10 min) con un promedio de 4.5 días en que llegaron a formar
una hoja.

Los resultados obtenidos para el tiempo de formación de una hoja se deberían al

desinfectante y tiempo de inmersión del explante a emplearse, ya que si exponemos
mucho tiempo el explante al desinfectante ocasionamos que este se absorba
compuestos del desinfectante, lo que genera una lenta regeneración.

Podemos ver que el tratamientos A1 (4 % de NaClO durante 15 min) tardo mucho

mas es regenerase y A7 (1 % de NaClO durante 20 min) aunque tengan menor
concentración de NaClO también su regeneración tardó debido a que el tratamiento
A7 tiene mayor tiempo de inmersión lo cual generó que el explante absorba
compuestos del NaClO.

5.1.5 Elección del mejor tratamiento desinfectante

Cuadro 9. Porcentaje de no contaminados, necrosis, oxidación y tiempo que transcurre para

la formación de una hoja

Tratamientos PNC PN PO TFH

(%) (%) (%) (Días)
A1 97.50 87.50 60 7.5
A2 95.00 70.00 50 8.0
A3 90.00 60.00 40 6.3
A4 85.00 25.00 25 5.4
A5 67.50 30.00 25 5.8
A6 52.50 35.00 25 6.1
A7 45.00 37.50 25 6.3
A8 35.00 37.50 25 6.6

Mary Claudia Poma Acarapi 44

En base a la información recopilada por el análisis de las diferentes variables
establecidas, se pudo establecer que el tratamiento A4 se presentó como óptimo
para la desinfección inicial de apicales vegetativos de Arracacia xanthorrhiza
Bancroft debido a que a través de este procedimiento los explantes fueron menos
afectados (menor grado de oxidación menores proporciones de necrosis y rápida
regeneración del explante), como se observa en el cuadro 9.

Como se observo oxidación para disminuir este problema para la fase de

establecimiento se uso acido cítrico.

Respecto Vega et al. (2007) indica que un optima desinfección, permite un mejor
desarrollo del material vegetal, traducido en términos de mayor tamaño de los
individuos establecidos y un menor tiempo de generación de las primeras estructuras
foliares, aspectos que son indicativos de una respuesta favorable del material vegetal
a las condiciones de cultivo in vitro.

Utilizar en el proceso de desinfección superficial hipoclorito de sodio puesto que es

de fácil manejo y no fue tóxico en concentraciones 2 y 3 % el material a sembrar. Es
generalizado el uso de etanol (70 % v/v) y de hipoclorito de sodio (NaOCl) del 1 al 3
% por sus buenos resultados para la desinfección, con menor frecuencia se usan el
hipoclorito de calcio [Ca (OCl)]2, del 6 al 12 % y el cloruro de mercurio (HgCl2) del
0.1 al 1.5 %. (Perla, 2007).

Por último es muy importante tomar en cuenta, que la desinfección debe eliminar
los microorganísmos con el menor daño al explante, por esta razón es importante el
tiempo de inmersión y la concentración del desinfectante que se va utilizar con un
determinado material vegetal para generar una introducción exitosa.

Mary Claudia Poma Acarapi 45

5.2 Análisis de variables de respuesta para el morfotipos de arracacha en
medios de cultivo

En esta fase se observó un buen porcentaje de prendimiento, atribuible a un especial

cuidado en la extracción de ápices, un adecuado manejo en la cámara de flujo
laminar y al efectivo protocolo de desinfección utilizado. Las variables en estudio
evaluadas son el, porcentaje de contaminación, porcentaje de prendimiento, altura de
explante, diámetro de corona, número de brotes, número de hojas y materia húmeda
elementos que reflejan un adecuado establecimiento in vitro.

5.2.1 Porcentaje de contaminación (PC)

Cuadro 10. Porcentaje de contaminación de los ápices vegetativos de los morfotipos de

arracacha

Morfotipos de Arracacha Ápices % de % de

Introducidos Contaminación Necrosamiento

Raíz Amarillo Claro (M1) 20 13.75 15

Raíz Blanco (M2) 20 10 10
Raíz Amarillo Intenso (M3) 20 17.5 0
Sub Total 60 13.42 8.33

En el cuadro 10, se observa que el porcentaje de contaminación es de 13.75 % para

todos los morfotipos como promedio, el mayor porcentaje de vitroplantas
contaminadas se obtuvo en morfotipo Raíz Amarillo Intenso (M3) con 27.5% y un
porcentaje menor para Raíz Blanco (M2) con 20%. Durante las 8 semanas de
evaluación se observaron las principales causas de muerte fueron por oxidación y
por fenoles.

En la realización del presente trabajo los hongos contaminantes correspondieron a

los géneros: Aspergillus, Cladosporium, Alternaria, Curvularia, Fusarium y
Penicillium. Los hongos Fusarium sp., Aspergillus sp. y Penicillium sp. Alternaria sp.
los hongos con mayor predominancia, Curvularia sp., y Cladosporium sp. se
presentaron el menor porcentaje. Los contaminantes como ser Penicillum y
Aspergillus son contaminantes comunes de laboratorio.

Mary Claudia Poma Acarapi 46

Estos resultados son análogos a los encontrados por Borges et al., 2005 quienes
detectaron los hongos Fusarium sp. Botryodiplodia sp. Alternaria sp. y Aspergillus sp.
Sin embargo, contrastan con los observados por Viloria (2003), quien indicó al hongo
Fusarium sp. como el microorganismo que predominó en los segmentos de
diferentes especies cultivadas en condiciones in vitro y en menor cuantía a otros
tales como: Aspergillus sp. Penicillium. sp. Curvularia sp., Syncephalastrum sp en
diferentes cultivos de raíz.

Estas diferencias pueden estar afectadas por el momento o época de recolección del
material vegetal y a la técnica de desinfección superficial utilizada. Lo anterior se
fundamenta en el hecho que durante la época lluviosa se ha registrado en otros
cultivos que los porcentajes de contaminación son altos, lo cual coincide con lo
indicado por Amin y Jauwal (2003), quienes señalaron que la época del año tiene
influencia sobre la contaminación de los explantes, ya que durante los meses secos
encontraron menor contaminación.

En relación a la desinfección superficial utilizada en el presente trabajo, también

podría haber diferencias con respecto a los contaminantes presentes, ya que no
todos los desinfectantes superficiales permiten remover en igual forma las bacterias y
hongos exógenos en el explante. Los contaminantes pueden estar en la superficie o
en el interior, o en ambas partes.

Según Serrano (1993), una vez desinfectado el material vegetal que se va a utilizar
como fuente de explante, resulta muy importante evaluar su crecimiento posterior, ya
que los vapores del cloro pueden afectar las capas celulares externas y necrosarlas
porque penetran profundamente y, aunque por lo general, se obtiene una buena
desinfección, también pueden afectar los tejidos internos y darse el caso que el
tratamiento utilizado para la desinfección del explante sea efectivo, pero afecte el
crecimiento del explante.

El cuadro 11 muestra los resultados alcanzados en el análisis ANVA, para cada una
de las variables de respuesta para el efecto de los Medios de cultivo en morfotipos
de Arracacha.

Mary Claudia Poma Acarapi 47

 Cuadro 11. Análisis ANVA, para las variables de respuesta de introducción de morfotipos de arracacha en medios de cultivo, evaluadas
en el laboratorio de Biotecnología Vegetal, Facultad de Agronomía

VARIABLES DE PP AE DC NBE NH MH
RESPUESTA
GL CM Prob > F CM Prob > F CM Prob > F CM Prob > F CM Prob > F CM Prob > F
FV

Medio Cultivo 1 14260.42 0.001** 11.35 0.001** 3.267 0.001** 70.417 0.001** 2.400 0.002** 1.998 0.001**

Morfotipo 1 31.25 0.902ns 2.81 0.001** 0.180 0.001** 2.817 0.010** 0.867 0.029** 1.094 0.001**

Medio Cultivo* 2 197.92 0.523** 0.29 0.050** 0.250 0.001** 4.317 0.001** 0.200 0.424** 0.058 0.498**
Morfotipo

Error 54 52.08 0.05 0.008 0.561 0.230 0.182

Total 59

CV: 10.13 CV: 9.97 CV: 10.24 CV: 13.66 CV: 18.93 CV: 13.14

CV = coeficiente de variación; ** = altamente significativo; * = significativo; ns = no significativo

48
5.2.2 Porcentaje de prendimiento (PP)

El análisis ANVA para la variable porcentaje de prendimiento (Cuadro 11), éste

reporto un coeficiente de variación de 10,13 % que muestra un manejo
homogéneo de las unidades experimentales, así mismo existen diferencias
altamente significativas a 1% de probabilidad, para el factor A (medio de cultivo) y
la interacción A*B (medio de cultivo*morfotipos de arracacha ), pero no se
encontraron efectos significativos para el factor B (morfotipos de arracacha).

Esta diferencia podría atribuirse al manejo que se realizó previo a la siembra en

campo y a los cuidados que se tuvo durante la recolección del material, su
empacado y su traslado, que disminuye la contaminación, estimula su desarrollo y
acelera el desarrollo celular, sin olvidar el comportamiento propio de la especie,
determinada por sus características genéticas y su respuesta a las condiciones
del medio en el que se desarrollan.

Por su parte Villalobos y Pérez (1991), argumentan que la diferenciación de novo

está ligada a la proliferación celular y la organización de las nuevas células sigue
una “programación” influenciada por las condiciones de cultivo in vitro
conjuntamente con la ganancia de peso. Bravo (1997), consideró que el método
de desinfección da resultados eficientes cuando son aplicados en forma correcta
previo a la recolección y transporte.

El investigador Okabe (1997), indica que el material vegetal proveniente del

campo debe desinfectarse antes de introducirlo a condiciones asépticas. Por esta
razón se recomienda introducir el material al invernadero y tratarlo en un período
prudente con fungicidas para bajar la incidencia de patógenos endógenos.

El éxito de tejidos vegetales depende sustancialmente del medio de cultivo

empleado. Para establecer un sistema de cultivo de tejidos se elabora un medio
de cultivo óptimo que se ajuste a los principales requerimiento nutricional de la
especie vegetal, al tipo de explante, y al sistema de cultivo. La efectividad de un
cultivo depende tanto de los ingredientes básicos nutrientes, azúcar y hormonas
como el agente gelatinizador (Szabados et al., s.f.).

Mary Claudia Poma Acarapi 49

En base a los resultados obtenidos se realizó la comparación de medias para el
factor A (medio de cultivo), factor B (morfotipos de arracacha) y la interacción A*B
(medio de cultivo*morfotipos de arracacha), cuyos resultados se muestran en los
siguientes cuadros y figura.

Cuadro 12. Comparación de promedios variable porcentaje de prendimiento, para

Medio de Cultivo, según la prueba de Duncan al 5%

Duncan Media Medio de Cultivo

A 79.90 MCA

B 61.99 MCB

Los resultados presentados en el cuadro 12, mediante prueba de Duncan a un

nivel de significancia α= 0.05, se observa que ambos tratamientos con respecto al
medio de cultivo si existe diferencias, teniendo para el medio MCA 79.90
porcentaje de prendimiento y para el medio MCB 61.99 porcentaje de
prendimiento

Esta diferencia podría atribuirse a las diferentes concentraciones de nutrientes

que tienen los medios de cultivo con los que trabajamos, el medio MCA contiene
mayores niveles de nitrógeno que el MCB, cuando un medio tiene alto nivel de
nitrógeno generalmente favorece a la oxidación y posteriormente a la necrosis lo
cual causa problemas al explante pero los resultados contrarían eso demostrando
que es mejor el MCA.

De acuerdo a Margara (1988) citado por Olivera (s.f) menciona que esto podría
deberse a que los medios ricos en nitrógeno pueden favorecer la necrosis de los
tejidos lo cual coincide con nuestros resultado.

En cuanto al medio de cultivo su composición es un factor importante y

determinante en el crecimiento, en la investigación se trabajó con dos medios uno
concentraciones de sales como el MS a comparación del G5. Al respecto Uribe et
al. (2008), indica que se conoce que en algunos casos la disminución de la
concentración de los medios de cultivo favorece el desarrollo y vigor de los
explantes.

Mary Claudia Poma Acarapi 50

En la figura 12 se observa que el M1 presenta un comportamiento diferente en
ambos medio de cultivo obteniendo un mayor porcentaje de prendimiento en el
medio MCA y el menor porcentaje de prendimiento en el medio MCB.

Figura 12. Interacción medio de cultivo por morfotipos de arracacha para porcentaje de
prendimiento.

5.2.3 Altura de explante (AE)

El análisis ANVA (Cuadro 11), reportó un coeficiente de variación de 9.97 % lo

que muestra un manejo homogéneo de todas las unidades experimentales, así
mismo nos muestra que existen diferencias altamente significativas a un 1% de
probabilidad, para el Factor A (medio de cultivo), Factor B (morfotipos de
arracacha) y para la interacción A*B (medio de cultivo* morfotipos de arracacha).

Esta diferencia podría atribuirse a las diferentes concentraciones de sales

inorgánicas que contienen los medios, sumado a esto el manejo que se realizó
durante el desarrollo de la vitro planta al cambiar el tamaño de la planta; también
se cambió el tamaño del contenedor para facilitar el desarrollo, sin olvidar el
comportamiento propio de la especie, determinada por sus características
genéticas y su respuesta a las condiciones del medio en el que se desarrollan.

En base a los resultados obtenidos se realizó la comparación de medias para el

factor A (medio de cultivo), factor B (morfotipos de arracacha) y la interacción A*B
(medio de cultivo*morfotipos de arracacha), cuyos resultados se muestran en los
siguientes cuadros y figura.

Mary Claudia Poma Acarapi 51

 Cuadro 13. Comparación de promedios variable altura de explante (cm),

para medio de cultivo, según la prueba de Duncan al 5%

Duncan Media Medio de Cultivo

A 2.33 MCA

B 1.65 MCB

En el Cuadro 13, de la prueba de Duncan a un nivel de significancia α= 0.05, se

observa que existen diferencias en los medio de cultivo, en el medio MCA
presenta una mayor longitud de explante con 2.33 cm demostrando un mayor
crecimiento, el medio MCB presenta explantes con una longitud 1.65 cm.

De acuerdo a los resultados obtenidos el medio MS permite una mayor longitud

de explante esto se debe a que los explantes tuvieron una mejor reacción al
medio de cultivo lo que lo que permitió que estas se desarrollen con mayor
facilidad, esto podría deberse a que los medios de cultivo tienen diferentes
niveles de nutrientes. Según Litz, (s.f.) el medio de cultivo, generalmete usado es
el desarrollado por Murashige y Skoog (1962), la concentracion alta de sales de
este medio parece ser muy beneficiosa para el crecimiento de las vitroplantas.

Investigaciones como de Pérez et al. (2010), con medios de cultivo indican que el
efecto del medio de cultivo, proporcionando el medio de cultivo MS existe mayor
crecimiento, esta respuesta puede estar relacionada con la mayor concentración
de sales inorgánicas en comparación con el medio B5 donde la fuente de
nitrógeno está en bajas concentraciones o diferentes presentaciones.

La deficiencia del nitrógeno conduce a un desarrollo lento de la planta, afectando

la elongación de los tejidos y la producción de órganos (Aular y Rojas, 1994).
Resultados similares fueron señalados por Vílchez et al. (2007) y Arumon y
Roychowdhury (2008) quienes lograron mayor número y longitud de brotes
utilizando el medio de cultivo MS.

Mary Claudia Poma Acarapi 52

 Cuadro 14. Comparación de promedios variable altura de planta (cm),

para morfotipo, según la prueba de Duncan al 5%

Duncan Media Morfotipo

A 2.23 M3

A 2.23 M2

B 1.85 M1

Los resultados presentado en el Cuadro 14, de la prueba de Duncan a un nivel de

significancia α= 0.05, representan los promedios en longitud se puede observar
que morfotipo raíz amarillo intenso y raíz blanco presentan la mayor longitud con
promedio de 2.33 cm de altura y un segundo grupo morfotipo raíz amarillo claro
con un comportamiento diferente que representa una altura promedio de 1.85 cm.

El morfotipo de raíz amarillo claro presento un promedio de elongación de 2.33

cm pero estas presentaron un leve necrosamiento del explante en el medio de
cultivo. Esto nos indica que la longitud del brote está relacionada con los
porcentajes de contaminación y necrosamiento que son causados por la oxidación
del explante hacia el medio de cultivo que influye la longitud a desarrollarse.

Sin olvidar el comportamiento propio de la especie, determinada por sus

características genéticas y su respuesta a las condiciones del medio en el que se
[Link]í mismo las arracachas de raíz amarillo intenso y raíz blanca son
morfotipos que presentan una gran capacidad de elongación en ambientes
naturales o en la agricultura convencional (Placencio, 2012).

De acuerdo a los resultados obtenidos las vitroplantas obtenidas del morfotipo

raíz amarillo y raíz blanco presentaron mayor elongación y no se observó
necrosamiento del explante.

En quela Figura 13, se observa que el M3 presenta un comportamiento diferente

en ambos medios de cultivo teniendo una mayor longitud de vitroplanta y un
comportamiento similar entre los M2 y M1 en el medio de cultivo.

Mary Claudia Poma Acarapi 53

Con respecto al medio las vitroplantas presentaron una mayor longitud en el
medio de cultivo A y en el medio cultivo B una longitud menor.

Figura 13. Interacción medio de cultivo por morfotipos de arracacha para altura de
explante.

De acuerdo a los resultados obtenidos se observan que las diferencias

encontradas en los promedios de longitud de explante de los diferentes morfotipos
son debidas a sus características genéticas y la influencia de los nutrientes
presentes en el medio. Y que existió una mejor respuesta al medio MCA respecto
al MCB.

5.2.4 Diámetro de Corona (DC)

El análisis ANVA (Cuadro 11), reportó un coeficiente de variación de 10.24 % lo

que muestra un manejo homogéneo de todas las unidades experimentales, así
mismo nos muestra que existen diferencias altamente significativas a un 1% de
probabilidad, para el Factor A (medio de cultivo), Factor B (morfotipos de
arracacha) y para la interacción A*B (medio de cultivo* morfotipos de arracacha).

En base a los resultados obtenidos se realizó la comparación de medias para el

factor A (medio de cultivo), factor B (morfotipos de arracacha) y la interacción A*B
(medio de cultivo*morfotipos de arracacha), cuyos resultados se muestran en los
siguientes cuadros y figura.

Mary Claudia Poma Acarapi 54

 Cuadro 15. Comparación de promedios variable diámetro de corona (cm),

Para medio de cultivo, según la prueba de Duncan al 5%

Duncan Media Medio de Cultivo

A 1.01 MCA

B 0.69 MCB

En el Cuadro 15, de la prueba de Duncan a un nivel de significancia α= 0.05, se

observa que existen diferencias en los medio de cultivo, en el medio MCA
presenta una mayor diámetro de corona con 1.01 cm demostrando un mayor
crecimiento, el medio MCB presenta explantes con diámetro de corona con 0.69
cm.
Cuadro 16. Comparación de promedios variable diámetro de corona (cm), para

Morfotipo, según la prueba de Duncan al 5%

Duncan Media Morfotipo

A 0.95 M1

B 0.84 M2
B 0.82 M3

Los resultados presentado en el Cuadro 16, de la prueba de Duncan a un nivel de

significancia α= 0.05, representan los promedios de diámetro se puede observar
que el M1 presentan el mayor diámetro con un promedio de 0.95 cm y un
segundo grupo con un comportamiento similar entre el M2 y M3 que presentan
un diámetro promedio de 0.84 a 0.82 cm.

El desarrollo del tallo está en función al estado intrínseco de la planta por lo tanto
el grosor o diámetro del tallo en este caso seudo tallo (la corona) son
características unidas las condiciones donde se desarrollan y sobre todo al
morfotipo. La diferencia de los resultados entre morfotipos está relacionada con la
capacidad de regeneración del explante para la formación de nuevas células, que
viene determinado por el genotipo y el estado de desarrollo de la planta tal como
afirma Pierik (1990).

Mary Claudia Poma Acarapi 55

Así mismo las arracachas de raíz morfotipo raíz blanca y raíz amarillo claro son
morfotipos que presentan una gran capacidad de producción de hijuelos y raíces
en ambientes naturales o en la agricultura convencional (Placencio, 2012)

En quela Figura 14, se observa que el M1 presenta un comportamiento diferente

en ambos medios de cultivo teniendo mayor diámetro de corona en las
vitroplántulas y un comportamiento igual tiene M2 y M3 en el medio de cultivo.
Con respecto al diámetro de corona los morfotipos presentaron un mayor
diámetro, en el medio de cultivo MCA y en el medio MCB un menor diámetro.

Figura 14. Interacción medio de cultivo por morfotipos de arracacha para

diámetro de corona

5.2.5 Número de brotes por explante (NBE)

El ANVA cuyos resultados se muestran en el Cuadro 11, reportó un coeficiente de

variación de 13.66 % lo que muestra un manejo homogéneo de las unidades
experimentales, así mismo existen diferencias altamente significativas a un 1% de
probabilidad, para el Factor A (medio de cultivo), Factor B (morfotipos de
arracacha) y para la interacción A*B (medio de cultivo* morfotipos de arracacha).

Esta diferencia podría atribuirse a que las diferentes concentraciones de

nutrientes que afectan e inciden en la formación de brotes, sumado a esto el
manejo que se realizó previo a la siembra y durante la toma de muestras, sin
olvidar que el tipo de corte empleado durante la toma de muestra, los cuidados
que se tuvo durante el proceso de siembra; lo cual estimula su desarrollo y
acelera el desarrollo celular, sin olvidar el comportamiento propio de la especie,
determinada por sus características genéticas.

Mary Claudia Poma Acarapi 56

Esta respuesta puede estar relacionada con la disminución de sales minerales o
la variación en la composición del medio de cultivo B5 en comparación con el
medio MS, especialmente en la ausencia de NH4NO3, [Link] embargo, las
fuentes de nitrato, ión amonio y fosfato en el medio B5 son proporcionadas por
otros compuestos como (NH4)2SO4 y KNO3 (Pérez et al., 2010).

En base a los resultados obtenidos se realizó la comparación de medias para el

factor A (medio de cultivo), factor B (morfotipos de arracacha) y la interacción A*B
(medio de cultivo*morfotipos de arracacha), cuyos resultados se muestran en los
siguientes cuadros y figura.

Cuadro 17. Comparación de promedios variable Numero de Brotes, para

Medio de Cultivo, según la prueba de Duncan al 5%

Duncan Media Medio de cultivo

A 5.40 MCA

B 4.40 MCB

Los resultados presentado en el Cuadro 17, mediante la prueba de Duncan a un

nivel de significancia α= 0.05 se observan que en ambos tratamientos con
respecto al medio de cultivo existen diferencias significativas teniendo para el
medio MCA 5.40 brotes por explante y para el medio MCB 4.40 brotes por
explante, esto indica que existe diferencias en la proliferación de brotes en los
medios empleados.

En el Cuadro 17, se observa que la aplicación de ambos medios tiene diferencias

significativas en los índices de introducción en los morfotipos estudiados y esto se
debe a que los medios presentan diferentes niveles de nutrientes.

Según Perez et al. (2010), la respuesta producida con el medio de cultivo B5 para
el menor número de brotes pudiera ser consecuencia de la menor concentración
de nitrato y distinta fuente en el medio de cultivo. Cabe destacar que el nitrato
representa una de las formas más asimilables de nitrógeno por parte de la planta,
que promueve la formación de nuevos brotes.

Mary Claudia Poma Acarapi 57

Para el trabajo de investigación se utilizó dos medios de cultivo Murashige y
Skoog (1962) y Gamborg et al. (1968), adicionando sacarosa, reguladores de
crecimiento (ANA, BAP y GA3) y gelificante agar, para todas las morfotipos.
Merino (1997) indica que el éxito que se obtenga en un cultivo de tejidos
vegetales depende del uso del medio nutritivo adecuado, como también el empleo
de tejidos viables y la calidad de reactivos, usando las sustancias químicas
necesarias y combinaciones apropiadas nutrientes.

Cuadro 18. Comparación de promedios variable días Numero de brote, para

morfotipo, según la prueba de Duncan al 5%

Duncan Media Morfotipo

A 5.70 M2

A 5.70 M1

B 5.05 M3

Los resultados presentado en el Cuadro 18, de la prueba de Duncan a un nivel de

significancia α= 0.05, representan los promedios de brotes de los tres morfotipos
en la cual se aprecia la formación de dos grupos de las cuales los M2 y M1
tuvieron un mayor promedio en la formación de brotes con 5.70, el segundo grupo
conformado por el morfotipo raíz amarillo intenso presenta un promedio de 5.05
brotes por explante.

Esta diferencia podría atribuirse a que las diferentes concentraciones de

nutrientes especialmente macronutrientes que afectan e inciden en la formación
de brotes, sumado a esto el manejo que se realizó durante el desarrollo del brote
al cambiar el tamaño de la planta también se cambio el tamaño del contenedor
para facilitar el desarrollo, sin olvidar el comportamiento propio de la especie,
determinada por sus características genéticas y su respuesta a las condiciones
del medio en el que se desarrollan.

El morfotipo raíz blanca y raíz amarillo claro tienen una gran capacidad de
producción de brotes tanto in vivo como in vitro y estos se desarrollan mejor en el
medio MS.

Mary Claudia Poma Acarapi 58

La diferencia de los resultados entre morfotipos está relacionada con la capacidad
de regeneración del explante para la formación de brotes, que viene determinado
por el genotipo y el estado de desarrollo de la planta tal como afirma Pierik (1990).
Así mismo las arracachas de raíz morfotipo raíz blanca y raíz amarillo claro son
morfotipos que presentan una gran capacidad de producción de hijuelos en
ambientes naturales o en la agricultura convencional (Placencio, 2012).

Como se observa en la Figura 15, el morfotipo M3 y M2 mostraron mayor número

de brotes en el medio de Cultivo A con 7.10 brotes por explante en comparación
de medio de cultivo B en el cual se registró 4.40 brotes por explante. Y podemos
apreciar que el M1 se comportó de manera similar en ambos medios con un
promedio de 5.07 brotes por explante.

Figura 15. Interacción medio de cultivo por morfotipos de arracacha para número de
brotes

5.2.6 Número de hojas (NH)

El ANVA cuyos resultados se muestran en el Cuadro 11, donde reporta un

coeficiente de variación de 18.99 % muestra un manejo homogéneo de las
unidades experimentales, así mismo existen diferencias altamente significativas a
un 1% de probabilidad, para el Factor A (medio de cultivo), Factor B (morfotipos
de arracacha) y para la interacción A*B (medio de cultivo* morfotipos de
arracacha).

Esta diferencia podría atribuirse a las diferentes concentraciones de sales

inorgánicas de los medios aplicados que afectan e inciden en la formación de

Mary Claudia Poma Acarapi 59

hojas, sumado a esto el manejo que se realizó durante el desarrollo de la
vitroplanta, al cambiar el tamaño de la planta también se cambio el tamaño del
contenedor para facilitar el desarrollo, sin olvidar el comportamiento propio de la
especie, determinada por sus características genéticas.

En base a los resultados obtenidos se realizó la comparación de medias para el

factor A (medio de cultivo), factor B (morfotipos de arracacha) y la interacción A*B
(medio de cultivo*morfotipos de arracacha), cuyos resultados se muestran en los
siguientes cuadros y figura.

Cuadro 19. Comparación de promedios variable Numero de Hojas, para

Medio de cultivo, según la prueba de Duncan al 5%

Duncan Media Medio de Cultivo

A 2.73 MCA

B 2.33 MCB

Los resultados presentado en el Cuadro 19, mediante la prueba de Duncan a un

nivel de significancia α= 0.05, indica que existe diferencias en la formación de
hojas en medio MCA y MCB, teniendo la mayor formación de hojas en el medio
MCA con 2.73 hojas por explante y en el medio MC B de 2.33 hojas por explante
como promedio.

El medio MS presento una mayor emisión de hojas, en cambio en el medio MC B

no se observa un número significativo de hojas por esto podría deberse a los
niveles de nitrógeno en los medios, el MCA presenta mayores niveles de nitratos
con respecto al MCB.

Perez et al. (2010), señala que cabe destacar que el nitrato representa una de las
formas más asimilables de nitrógeno por parte de la planta, que promueve la
formación de nuevas hojas, Barwale et al. (1986) señalan que las deficiencias de
nitrógeno originan un número bajo de brotes por explante, con tallos finos y cortos
con hojas pequeñas.

Cadavid (2000), el nitrógeno tiene efectos más rápidos en la planta; favorece el

crecimiento vegetativo, imparte el color verde a las hojas y regula el uso del
Mary Claudia Poma Acarapi 60
fosforo y potasio. La deficiencia de nitrógeno provoca crecimiento reducido,
desarrollo radicular restringido y causas amarillentas de las hojas como síntoma.
de deficiencia.

Cuadro 20. Comparación de promedios variable Numero de Hojas, para

Morfotipo, según la prueba de Duncan al 5%

Duncan Media Morfotipo

A 2.70 M1

A 2.60 M2
B 2.60 M2

B 2.30 M3

Los resultados presentado en el Cuadro 20, mediante la prueba de Duncan a un

nivel de significancia α= 0.05, de acuerdo a los resultados obtenidos se observa
que el morfotipo M1 presenta el mayor promedio con respecto a la formación de
hojas con 2.70 hojas por explante y tenemos un similar comportamiento para
morfotipo M2 con 2.60 hojas por explante y M3 intenso con 2.30 hojas por
explante como promedio.

El morfotipo raíz blanca y raíz amarillo claro tienen una gran capacidad de
producción de hojas en condiciones in vitro y el morfotipo raíz amarillo intenso
tuvo el menor número de hojas.

La diferencia de los resultados entre morfotipos está relacionada con la capacidad

de regeneración del explante para la formación de hojas, que viene determinado
por el genotipo y el estado de desarrollo de la planta tal como afirma Pierik (1990).

Pero podemos señalar las arracachas de raíz morfotipo raíz blanca y raíz
amarillo claro son morfotipos que presentan una menor capacidad de producción
de hijuelos en ambientes naturales o en la agricultura convencional, al contario el
morfotipo de raíz amarillo intenso obtiene mayor formación de hojas en esas
condiciones (Placencio, 2012).

Mary Claudia Poma Acarapi 61

En la figura 16, se observa que el morfotipo M1 presenta casi un comportamiento
similar ambos medios de cultivo teniendo un mayor número de hojas y un
comportamiento parecido tienen el (M2) y (M3) los cuales tiene un mayor número
de hojas en el medio MCA y menor en el MCB.

Figura 16 . Interacción medio de cultivo por morfotipos de arracacha

para número de hojas

El desarrollo de las hojas están en función al estado intrínseco de la planta por lo

tanto el número, longitud y ancho de las hojas, son características unidas las
condiciones donde se desarrollan y sobre todo a la variedad, también se cuenta la
variación de dichas características en la introducción, en una primera y segundo
ciclo de multiplicación (Lassoudiere,1987).

En condiciones in vitro respecto al número de hojas, el morfotipo (M1) se

comporta mejor obteniendo un número superior y el morfotipo (M3) logra el menor
número de hojas, los dos se comportan al inverso que en condiciones normales.

5.2.7 Materia húmeda (MH)

El ANVA materia húmeda cuyos resultados se muestran en el Cuadro 11, donde

reporta un coeficiente de variación de 13,14 % muestra un manejo homogéneo
de las unidades experimentales, así mismo existen diferencias altamente
significativas a un 1% de probabilidad, para el Factor A (medio de cultivo), Factor
B (morfotipos de arracacha) y para la interacción A*B (medio de cultivo*
morfotipos de arracacha).

Mary Claudia Poma Acarapi 62

Se requiere de tecnología para la óptima regeneración de brotes y regeneración
de vitroplantas de calidad, características determinadas por el genotipo y
afectadas por el ambiente (Enriquez et al., 1998).

En base a los resultados obtenidos se realizó la comparación de medias para el

factor A (medio de cultivo), factor B (morfotipos de arracacha) y la interacción A*B
(medio de cultivo*morfotipos de arracacha), cuyos resultados se muestran en los
siguientes cuadros y figura.

Cuadro 21. Comparación de promedios variable Materia Húmeda (gr), para

Medio de Cultivo, según la prueba de Duncan al 5%

Duncan Media Medio de Cultivo

A 3.33 MCA

B 3.06 MCB

Los resultados presentado en el Cuadro 21, mediante la prueba de Duncan a un

nivel de significancia α= 0.05, indica que existe diferencias en la formación
materia húmeda en medio MCA y MCB teniendo la mayor formación materia
húmeda en el medio MCA con 3.33 gr por explante y en el medio MCB de 3.06 gr
de materia húmeda por explante como promedio.

Los resultados obtenidos para materia húmeda se atribuirían a que el medio MCA
tiene alto contenido de nitrógeno respecto al MCB. Otros trabajos que evaluaron
medios de cultivo encontraron respuestas similares a la investigación, Cárdenas
(1995), índica que el medio de cultivo Murashige-Skoog (1962) promovió mayor
peso fresco comparado con el medio de Gamborg, Miller y Ojima (1968).

Mientras que Fuentes-Carvajal et al. (2006) estudiaron la deficiencia N, P y K en

el cultivo hidropónico de zábila, evidenciándose ciertas limitaciones en el
desarrollo vegetativo de las plantas, especialmente en las dimensiones foliares,
longitud radical, biomasa.

Mary Claudia Poma Acarapi 63

 Cuadro 22. Comparación de promedios variable Materia Húmeda (gr), para

Morfotipo, según la prueba de Duncan al 5%

Duncan Media Morfotipo

A 3.40 Raíz Amarillo Intenso

B 3.35 Raíz Blanco

B 2.97 Raíz Amarillo Claro

Los resultados presentado en el Cuadro 22, mediante la prueba de Duncan a un

nivel de significancia α= 0.05, representan los promedios de materia húmeda de
los tres morfotipos, en la cual se aprecia la formación de dos grupos de los cuales
el morfotipo raíz amarillo intenso tuvo un mayor promedio en la formación de
materia húmeda o fresca con 3.40 gr el segundo conformado por morfotipo raíz
blanco y raíz amarillo claro presentan promedios que varían de 3.35 gr y 297 g.

Por su parte Villalobos y Thorpe (1991) argumentan que la diferenciación de novo

está ligada a la proliferación celular y la organización de las nuevas células sigue
una “programación” influenciada por las condiciones de cultivo in vitro
conjuntamente con la ganancia de peso.

Rauber y Grunewaldt (1988), quienes mencionan que la habilidad para

regeneración de brote está controlada fuertemente por el genotipo.

Figura 17. Interacción medio de cultivo por morfotipos de

arracacha para materia húmeda

Mary Claudia Poma Acarapi 64

En la figura 17, se observa que el comportamiento de los morfotipos se dividen en
dos grupos, el primero conformado por (M2) y (M3) con un mayor peso de materia
húmeda o fresca en el medio de cultivo MCA que en el medio de cultivo MCB y un
segundo el (M1) que forma peso de materia húmeda o fresca similar en ambos
medios.

Estos resultados contrastan con los obtenidos por Sánchez y Cuevas (2001),
quienes lograron obtener los mejores resultados de sobrevivencia de 80% de
explantes de pimentero, libres de oxidación, con la adición de polivinil pirrolidona
PVP (0,5 y 1,0 g/l) en presencia de luz.

De acuerdo con Davies y Creasy, citados por George y Sherington (2000), las
enzimas involucradas en la biosíntesis y la oxidación de fenoles se incrementan
con la luz, por lo que es conveniente mantener los explantes en la oscuridad unos
días antes de pasarlos a una intensidad lumínica baja. Por último, no es frecuente
observar oxidación de tejidos de otros cultivo y son pocos los cultivares que
presentan ennegrecimiento (Villalobos y Pérez, 1991).

Mary Claudia Poma Acarapi 65

VI. Conclusiones y Recomendaciones

6.1 Conclusiones

Después de discutir los resultados obtenidos y de acuerdo a los objetivos

propuestos se llego a las siguientes conclusiones:

Etapa de desinfección

La utilización de hipoclorito de sodio en las concentraciones de 1, 1, 2 y 2 % v/v y

los tiempos de inmersión de 15, 20,15 y 20 minutos, correspondiente a los
tratamientos A8, A7, A6 y A5 son ineficaces para la eliminación de agentes
patógenos en la introducción explantes de arracacha, resultando ser los
tratamientos con más altos porcentajes de contaminación con 65, 55, 47.5 y
32.5%.

Los tratamientos desinfectantes A1 (4 % de NaClO durante 15 min), A2 (4 % de

NaClO durante 10 min) y A3 (3 % de NaClO durante 15 min) resultaron ser
efectivos para la obtención de explantes asépticos, pero la concentración y el
tiempo de inmersión resultaron posteriormente ser muy perjudiciales causando
necrosis en los explantes de 87.5, 70 y 60%.

Una desinfección efectiva previno la contaminación de los ápices vegetativos

provenientes de los hijuelos de arracacha, el cual se logró sumergiendo los
explantes en una solución de hipoclorito de sodio (NaClO) al 3% durante 10 min
perteneciente al tratamiento desinfectante A4, este tratamiento mostró ser óptimo
para la desinfección inicial de apicales vegetativos de Arracacia xanthorrhiza
Bancroft debido a que a través de este procedimiento los explantes fueron menos
afectados ( menor incidencia de necrosis y rápida regeneración del explante).

Todos los tratamientos desinfectantes presentaron en diferentes niveles

oxidación, pero sobresalieron los tratamientos A1, A2 y A3 con porcentajes de
60,50 y 40%, que posteriormente causaron necrosis a los explantes, los
tratamientos A4, A5, A6, A7 y A8 tuvieron una oxidación del 25%. Para reducir la
oxidación se utilizó acido cítrico.

Mary Claudia Poma Acarapi 66

 Etapa de introducción in vitro

Los porcentajes de contaminación en esta etapa de introducción in vitro 13.42%

en comparación con la experimentada inicialmente que fue de un promedio del
30.06%.

De acuerdo a las respuestas obtenidas se observó que en el medio de cultivo(A y

B) si existen diferencias altamente significativas en las variables de respuesta
estudiadas (porcentaje de prendimiento, altura de planta, diámetro de corona,
número de brotes por explante, numero de hojas y materia húmeda). Pero
resaltando que en el medio A se observó un mayor desarrollo.

El medio adecuado para altura de explante es igual para cada uno de los
morfotipos, para el M3, M2 y M1 el mejor medio es el MCA logrando promedios de
2.88, 2.68 y 2.2 cm respectivamente, en el medio MCB observándose menor
desarrollo con 1.85, 1.71 y 1.51cm. Para número de hojas existió una mejor
respuesta de los morfotipos M1, M2 y M3 al MCA con 2.8, 2.8 y 2.6 hojas y en el
MCB se observó 2.6, 2.4 y 2.0 hojas por explante.

Se determinó el comportamiento in vitro de los tres morfotipos de Arracacia

xanthorrhiza Bacroft. en los dos medios de cultivo (MCA y MCB), las cuales
obedecen características fenotípicas y genotípicas de cada morfotipo.

Se estableció que el medio adecuado para la introducción de las morfotipos de

arracacha es el MCA logrando alcanzar la formación promedio de 5.4 brotes por
explante en comparación del medio MCB con 4.4 brotes. Los morfotipos M1 y M2
tuvieron una formación de 7.10 y 7.00 en el MCA, en el MCB se observa 4.40 y
4.30 y el M3 se presentó un comportamiento casi similar en ambos medios.

Los resultados obtenidos en esta investigación permiten inferir que las

concentraciones de nutrientes del medio de cultivo y el manejo realizado al
explante durante la fase de introducción influyen en la capacidad regenerativa del
tejido para obtener un mayor número de brotes; lo que garantizaría un aumento
de la productividad y eficiencia para la fase de multiplicación para la propagación
in vitro de arracacha.

Mary Claudia Poma Acarapi 67

6.2 Recomendaciones

Realizar estudios de aplicación de antioxidantes y concentraciones para la reducir

la oxidación en el proceso de desinfección para el establecimiento in vitro de
arracacha.

Se recomienda continuar con el proceso de aclimatación para conocer los

problemas existentes antes de la salida a campo de las vitroplantas obtenidos en
el presente trabajo.

Finalmente, se recomienda proseguir estudios para establecer medios de

hormonas (sintéticas y naturales), y concentraciones para la siguiente fase de
cultivo para multiplicación in vitro.

Mary Claudia Poma Acarapi 68

VII. BIBLIOGRAFÍA

ABDELNOUR, A y ESCALANTE, J. 1999. Conceptos básicos del cultivo de

tejidos vegetales. Cartago, Costa Rica. Editorial del CATIE. 38 p.

ÁLVAREZ, V.H. 2001. Manejo y conservación in-situ de mauk´a (Mirabilis

expanda, R. y P.) Standy, Yacon (Smallanthus sonchifolius, H. Robinson) y
Racacha (Arracacia xanthorrhiza, Bancroft) en la Comunidad de Chullina,
Provincia bautista Saavedra del departamento de La Paz. Tesis (Ing Agr).
Universidad Mayor de San Andrés. Facultad de Agronomía. La Paz, Bolivia pp 73-
143.

AMAYA, J. E. y JULCA, J. L. 2006. “Arracacha” Arracacia xanthorrhiza Bancroft.

Biodiversidad y Conservación de los Recursos Filogenéticos Medio Ambiente.
s/[Link], Perú. 15 p.

AMIN, W. y JAUWAL, F. 2003. Culture. Techniques for Micropropagation and

Breeding. Macmillan Publishing. USA. pp. 82-123.

AÑEZ, B.; ESPINOZA W y VASQUEZ W. 2002. Producción de apio andino en

respuesta al suministro de fertilizantes. Universidad los andes, instituto de
investigaciones agropecuarias (I.I.A.P.), Mérida – Venezuela pp 40 – 42. (En
línea) consultado 16 de junio. 2010. Disponible en: http:[Link].

ARIAS, O. (1993). Comercial Micropropagation of Banana. Biotechnology

applications for banana and platain improvement. INIBAP. Montpellier, Francia.
pp. 139-142.

ARUMON, M. y ROYCHOWDHURY, B. 2008. The in vitro propagation of Aloe

vera sp. TIG Research Journal 1(2): pp 116-118

AULAR, J. y ROJAS, E. 1994. Influencia del nitrógeno sobre el crecimiento y

producción de parchita Passiflora edulis Sims. F. Flavicarpa Degener. Agronomía
Tropical. 44(1): pp 121-134.

BARBA, A.; LUNA, B.; ROMERO, J. 2001. Micropropagación de Plantas. Ed.

Trillas. Distrito Federal, México. pp 7-8

BARWALE, U.; KERNS, H. y M. WIDHOLM.1986. Plant regeneration from callus

culture of several soybean genotypes via embryogenesis and organogenesis.
Planta. 167: pp 473-481

BLAS, R. 1996. Determinación del número de cromosomas de la arracacha

(Arracacia xanthorrhiza Bancroft). Tesis Ing. Agr., Universidad Nacional Agraria La
Molina, Lima, Peru .

Mary Claudia Poma Acarapi 69

BLAS, R. 2005. Diversity of Arracacia species in Peru. Ph. D. thesis. Genbloux
Agricultural University, Belgium, 154 p.

BLAS, R.; JULCA A. y BAUDOIN J.P. 2006. Inducción floral de arracacha

(Arracacia xanthorrhiza Bancroft). IDESIA Vol. 24. Chile. pp. 31-36

BORGES, R.; URIZAR, M., FLORES R. y RODRÍGUEZ E. 2005. Adaptación de

un método de embriogénesis somática para la regeneración de embriones
asexuales de pinabete (Abies guatemalensis Rehder).

BRAVO, F. 1997. Desarrollo de un sistema de cultivo in vitro para los explantes

nodales de caoba (Swietenia macrophylla King.). Tesis MSc. Centro Agronómico
Tropical de investigación y enseñanza (CATIE). Turrialba, Costa Rica.

BURO, R. 2001. Validación del protocolo de micropropagación de musáceas en

cinco líneas comerciales pertenecientes al clon Williams. Instituto tecnológico de
costa rica. Escuela de biología. Departamento de ingeniería en biotecnología.
Cartago, Costa Rica. (En línea) Consultado 25 de may. 2010. Disponible en:
[Link]

BUSTAMANTE, P. G.; CASALI, V.W.W.; SILVA, E.A.M. da; CEMON, P.R. s.f.
biología floral da Imandioquinha salsa (Arracacia xanthorriza) In: Relatorio de
Pesquisa: Projeto Olericultura 87/92. Belo Horizonte_MG:EPAMIC, pp.215-217.

CACERES, E. 1993. Cultivos Andinos. Oruro, Bolivia: FM. pp 10-25

CADAVID, L.F. 2000. La fertilización de la yuca (Manihot esculenta Crantz) en la

región de Montano y pescador, Cauca. Suelos Ecuatoriales. 81 p.

CARDENAS, K. X. 2008. Efecto de la harina de corona de racacha en la dieta en

cerdos de engorde de la raza mejorada Camborroug en la comunidad de Loma
Liquinas-Cochabamba. Tesis (Ing Agr). Universidad Mayor de San Andrés.
Facultad de Agronomía. La Paz, Bolivia pp 11-71

CÁRDENAS, M. L. 1995. Cultivo in vitro de brotes de "ajo" Allium sativum L. de

tres variedades obtenidas en Marín, N. L. México. Tesis Maestría. Universidad
Autónoma de Nuevo León, Facultad de Ciencias Biológicas Nuevo León, México.
42 p.

CASTILLO, G. 2004. Desarrollo de Métodos Cromatográficos para la

Determinación de Giberelinas y Auxinas para el estudio de su Biosíntesis. Tesis
de Maestría. Facultad de Química. Universidad de la Habana

CONDE, E. 2002. Determinacion de una Técnica alternativa para la multiplicación

in vitro de Citrus Reshini Hort. Ex Tanaka. Tesis de Lic. En Biología. Universidad
Mayor de San Andres. La Paz, Bolivia. 71p.

Mary Claudia Poma Acarapi 70

DARIAS, R. 1993. Recopilación de temas sobre Técnicas de Cultivos de Tejidos y
Células Vegetales. Oruro, Bolivia y Universidad Cienfuegos de Matanzas. s/ed.
p169

ENRÍQUEZ, J. R.; CARRILLO, G. y VELÁZQUEZ, J. 1998. Producción de

vitroplántulas de Tomate (Lycopersicon esculentum Mill) y determinación de la
producción de fruto. Montocillo, México. Consultado 25 de mar. 2013. Disponible
en:

FUENTES-CARVAJAL, A., VÉLIZ, J. y IMERY, J. 2006. Efecto de la deficiencia

de micronutrientes en el desarrollo vegetativo de Aloe vera. INTERCIENCIA.
31(2): pp 116-122.

GEORGE, E.F. 1996. Plant propagation by tissue culture, Part 2 In practice

Segunda Ed. Exegetics Ltd. Edintong, England 632 p

GEORGE, H. y SHERRINGTONG, B. 2000. Embryogenesis, organogenesis and

plant regeneration. En: Ixon, R. (Ed). Plant Cell Culture, A Practical Approach. IRL
Press, Oxford, USA. pp. 79-105

GÓMEZ, E. 2002. Fundamentos físico químicos relacionados con el cultivo de

tejidos in vitro. 21p

GÓMEZ, R. 1999. Aplicaciones de la Biotecnología en la Mejora Genética de

plantas y la producción de semillas. Modulo 1. Cultivo in vitro. Ed. rev. Santa
Clara,Cuba. pp. 32-47

HARTMANN, H. y KESTER, D. 1995. Propagación de plantas, principios y

prácticas. Mexico, CECSA. pp 649 - 608 p.

HERMANN, M. 1997. Arracacha (Arracacia xanthorrhiza Bancroft). In: Andean

roots and tubers: Ahipa, Arracacha, maca and yacon. Promoting the conservation
and use of underutilized and neglected crops. Hermann, M. and J. Heller (eds).
21. Institute of Plant Genetics and Crop Plant Research, Gatersleben /
International Plant Genetic Resources Institute, Rome, Italy. pp. 75- 172.

HERMANN, M. s.f. Arracacha (Arracacia xanthorrhiza Bancroft). Centro

Internacional de la Papa (CIP). La Molina. Lima, Perú. (En línea) Consultado 25
de may. 2010. Disponible en:
[Link]

HODGE, W.H. 1954. The edible Arracacha – a Little known root of the Andes.
Economic Botany 8: pp 195- 221. Consultado 30 de may. 2012. Disponible en:
[Link]
PDF/[Link]

Mary Claudia Poma Acarapi 71

HURTADO, D. y MERINO, M. 1997. Cultivo de Tejidos Vegetales. Primera
Edición. Ed. Trillas. Distrito Federal, México 225p

JIMÉNEZ, E. 1998. Propagación y mejora genética de plantas por biotecnología.

Ed. rev. Santa Clara, Cuba. pp. 13-24

JIMÉNEZ, E. 1999. Aplicaciones de la biotecnología en la mejora genética de

plantas y en la producción de semillas. Módulo 4. Propagación masiva de plantas
in vitro. Instituto de Biotecnología de las Plantas,Santa Clara, Cuba. 82 p.

JIMÉNEZ, F.S. 2005. Características nutricionales de la arracacha (Arracacia

xanthorrhiza) y sus perspectivas en la alimentación. Lima, Perú. (En línea)
Consultado 20 de may. 2012. Disponible en:
[Link]

KNUDSEN, S. 1999. Flower induction in the Andean root crop arracacha

(Arracacia xanthorrhiza Bancroft). A description and evaluation of the
morfhological changes following dehytratation. Tesis M. Sc. en Botánica, The
Royal Veterinary and Agricultural University Copenhagen, Denmark. 71 p.

LEÓN, J. 1964. Plantas Alimenticias Andinas. Instituto Interamericano de Ciencias

agrícolas zona Andina. Lima,Peru. pp 24

LITZ R. E. y JARRET R. L. s.f. Regeneración de Plantas en el cultivo de tejidos:

embriogenesis somática y organogenesis. Tropical Research and Education
Center, Institute of Food and Agricultural sciences , University of Florida, E.U. (En
línea) Consultado 23 de feb. 2013. Disponible en:
[Link]

LÓPEZ, P. 1990. Medios de cultivo: Fundamento teórico-práctico del cultivo de

tejidos vegetales. Estudio de la FAO ( Organización de las Naciones Unidas para
la Agricultura y la Alimentación )(Rosell y Villalobos) Roma, Italia pp 15-16

MABBERLEY, D.M. 1993. The plant book: A portable dictionary of higher plants
utilizing Cronquist’s, an integrated system of classification of flowering plants.
Cambridge University Press. Cambridge, NY, USA

MADEIRA, N.R.; TEIXEIRA, J.B.; ARIMURA, C.T. y JUNQUEIRA, C.S. 2005.

Influência da concentração de BAP e AG3 no desenvolvimento in vitro de
mandioquinha-salsa. Horticultura Brasileira, Brasília, Brasil. v.23, n.4, p.982-985.
(En línea) Consultado 25 de may. 2010. Disponible en:
[Link]

Mary Claudia Poma Acarapi 72

MORÁN, M y CAHO, M (2000). MICROPROPAGACION. Cultivo de Células
tejidos y órganos vegetales. Departamento de biotecnología Salamanca, Chile.
(En linea) Consultado 20 de may. 2012. Disponible en:
[Link]

MUJICA, A.; JACOBSEN, S-E, JUAN, I. y ROCA, W. (2002). Potencialidades de

los cultivos andinos, sub utilizados por la biotecnología. Puno, Perú. (En línea)
Consultado 25 de may. 2010. Disponible en:
[Link]

MURILLO, R. 2002. Curso de Biotecnología Vegetal. Micropropagación in vitro.

IBTEN (Instituto Bolivia de Ciencia Tecnología Nuclear). La Paz, Bolivia. Pp 1-12

OKABE, K. 1997. Principios básicos del cultivo de tejidos vegetales (volumen 2)

Informe final. ICTA (Instituto de Ciencias y Tecnología Agrícola). Voluntarios
Japoneses en Cooperación Técnica con el Extranjero (JOCV). Bárcena,
Guatemala. p. 90.

OLMOS, S. y ERNESTINA. 1998. Métodos de propagación y conservación de

germoplasma. Biotecnología y Mejoramiento Vegetal. 45p.

PÉREZ, J.; ALBANY, N.; VILCHEZ, J.; LEON DE SIERRALTA, S. y MOLINA, M.

2010. Efecto del medio de cultivo en la multiplicación in vitro de Aloe barbadensis
Mill. Universidad del Zulia, Facultad de Agronomía, Departamento de Química
PAISSS. Rev. Fac. Agron. pp 447-459

PERLA, H. 2007. Evaluación de métodos de desinfección y tipos de explante de

la especie vegetal Piper oradendron Trel. & Standl., para el establecimiento de su
cultivo in vitro. Tesis (Msc). Universidad de San Carlos de [Link] de
Ciencias Químicas y Farmacia. Guatemala. 18 p.

PIERIK, R. 1990. Cultivo in vitro de Plantas Superiores. Ed. Mundi-Prensa.

Madrid, España. 327p

POCASANGRE, L. 1994. Manual sobre micropropagación de banano y plátano.

FIA. La Lima, Honduras pp. 15-43.

POSPISILOVA et al. 1999. Temporal requirements for phytohormone balance in

the control of organogenesis in vitro. Developmental Biology 112:494.

QUEZADA, J. 1999. Evaluacion del Potencial de dos Ecotipos de ajo (Allium

sativum L.) en el Proceso de Microbulbificación in vitro. Tesis (Ing Agr). Escuela
Militar de Ingeniería. La Paz, Bolivia. pp 112p

Mary Claudia Poma Acarapi 73

QUEZADA, J. A.; ASCARRUNZ. M.E. y SILVA, M.A. (2000). Evaluación de la
Respuesta de dos ecotipos de ajo (Allium sativum L.) a la variación de medios y
reguladores de crecimiento, en el proceso de microbulbificación in vitro.
BIOFARBO. La Paz, Bolivia. Vol. VIII. (En línea) Consultado 25 de mar. 2013.
Disponible en: [Link]

RAMÍREZ, N. (1989). Cultivo de Tejidos Vegetales. Ed. Pueblo y Educación. La

Habana, Cuba. pp 31-39

RAUBER, M. y GRUNWALDT, J. 1988. In vitro regeneration in Allium spp. Plant.

Cell. Rep. 7(6): pp 426-429.

REA, J, (1995). Manejo y Conservación Comunitaria de Recursos Genéticos

Agrícolas en Bolivia. (En línea) Consultado 20 de may. 2010. Disponible
en:[Link]

REY, H. Y.; MROGINSKI, L. A. y SCOCCHI, A. M. 1995. Embriogénesis somática

en especies cítricas por cultivo de núcelas. Argentina. pp. 54-64.

ROBLES, A. Y HASHIMOTO, J. 2006. Arracacha (Arracacia xanthorrhiza

Bancroft). Biodiversidad y conservación de los recursos filogenéticos. Trujillo,
Perú. (En línea) consultado 10 agosto. 2009. Disponible en
http:[Link]

ROCA, W y MROGINSKI L. 1991. Cultivo de Tejidos en la Agricultura. Publicación

CIAT Cali Colombia.

ROJAS, F. 2006. Catálogo de plantas. Fac. de Agronomía UMSA. La Paz -

Bolivia 78p.

ROMERO, P. (2009) Diseños Factoriales. Departamento de Probabilidad y

Estadística. Distrito Federal, México. Consultado 19 nov. 2009. Disponible en:
[Link]

ROSEL, C.; VILLALOBOS, A. (1990) Fundamentos Teórico-Práctico del Cultivo

de tejidos Vegetales. Roma, Italia: s/ed. pp12.

SANCHES, G. y CUEVAS, D. 2001. Establecimiento de cultivos de tejidos

vegetales in vitro. Cultivo de Tejidos en la Agricultura: Fundamentos y
Aplicaciones. CIAT, Cali, Colombia. 45 p.

SANCHÉZ, C. 2004. Control de la Oxidación y la Contaminación en el Cultivo in

vitro de fresa (Fragaria ananassa Duch.). República Dominicana. pp 14-15.

SEELVE et al. 2003. Aplicaciones del Cultivo de Tejidos en especies forestales.

Ciencia y Desarrollo, CONACYT. México. 51: 43-59.

Mary Claudia Poma Acarapi 74

SEGRETÍN, M. E. s.f. Los cultivos celulares y sus aplicaciones II (cultivos de
células vegetales). Argentina. Consultado 25 de may. 2010. Disponible en:
[Link]

SEMINARIO, J. 2004. Raíces Andinas: Contribuciones al Conocimiento y a la

capacitación. Serie Conservación y uso de la biodiversidad de raíces y tubérculos
andinos: Una década de investigación para el desarrollo (1993-2003). Universidad
de Cajamarca, Centro internacional de la Papa, Agencia Suiza para el Desarrollo
y la Cooperación. Lima, Perú, 376 p

SZABADOS, L.; NÚÑEZ, V.M.; TELLO, L. M.; MAFLA, G.; ROA, J. y ROCA, W.
s.f. Agentes gelatizanizadores en el cultivo de Tejidos. Unidad de Investigación en
Biotecnologia (UIB), Centro Internacional de Agricultura Tropical (CIAT). Cali,
Colombia. Consultado 25 de mar. 2013. Disponible en:
[Link]

TAPIA, M. E. 1997. Cultivos subexplotados y su aporte a la alimentación. Oficina

Regional de la FAO. Santiago, Chile. pp.104-107.

URIBE, M., DELAVEAU, C., GARCÉS, M. y ESCOBAR, R. 2008. “Efecto de

asepsia y fitohormonas en el establecimiento in vitro de Berberidopsis corallina, a
partir de segmentos nodales”. 58-64.

VEGA, C.; BERMENJO, J.C.; VILLEGAS, G.; QUESADA, J.; AGUILAR, M. y

CONDE, E. 2007. Propagación masiva de Polylepis tomentella Weddell ssp. nana
mediante técnicas de cultivo in vitro. Unidad de Biotecnología Vegetal del Instituto
de Biología Molecular y Biotecnología, Facultad de Ciencias Puras y Naturales,
Universidad Mayor de San André[Link] Paz, Bolivia.

VILCHEZ, J., O. FERRER y N. ALBANY. 2007. Multiplicación in vitro de zábila en

sistema de inmersión temporal. Rev. Fac. Agron. (LUZ) 24 Supl. 1: pp 78-82.

VILLALOBOS, A. y PÉREZ, J. 1991. Presentación de resultados experimentales

de arándano, Jornada de divulgación 20 de febrero de 1991, Paysandú Uruguay

VILORIA, T. 2003. Adaptación de un método de embriogénesis somática para la

regeneración de embriones asexuales de pinabete (Abies guatemalensis Rehder)
(Fase II). CONCYT. Informe Final Proyecto 30-00. 2003.

Mary Claudia Poma Acarapi 75

Mary Claudia Poma Acarapi 76
Anexo 1. Ubicación del lugar de recolección del material vegetal Toriri, Inquisivi

Mary Claudia Poma Acarapi 77

 Anexo 2. Fotografías de Hojas e Hijuelos o brotes de los tres morfotipos en
estudio

(Morfotipo 1) Amarillo claro

(Morfotipo 2) Blanco

(Morfotipo 3) Amarillo intenso

Mary Claudia Poma Acarapi 78

 Anexo 3. Plantas madres cosechadas de arracacha

M1 M2

M3

Mary Claudia Poma Acarapi 79

 Anexo 4. Equipos

Autoclave Destiladora

Microondas Agitador magnetico

PHmetro Balanza

Mary Claudia Poma Acarapi 80

 Anexo 5. Fotos del estudio

A. selección del material vegetal

B. El proceso de preparación del medio de cultivo

C. Vaso con medio de cultivo más reguladores de crecimiento.

Mary Claudia Poma Acarapi 81

 D. proceso de esterilización

E. Proceso de desinfección del material vegetal

F. proceso de siembra de meristemos de arracacha

Mary Claudia Poma Acarapi 82

 G. el material en la cámara de desarrollo fase inicial del estudio

H. El desarrollo de los explantes

Mary Claudia Poma Acarapi 83

 Anexo 6. Solución Stock de Murashige y Skoog (1962)
Cuadro: Composición del Medio Basal Murashige y Skoog (1962)

Sol. NOMBRE FORMULA QUIMICA PESO PESO

(g) (mg)
A Nitrato de Amonio NH4 NO3 16.5 16500
Nitrato de Potasio KNO3 19 19000
Cloruro de calcio di hidratado CaCl3 2 H O 4.4 4400
Fosfato monobásico de potasio KH2 PO4 1.7 1700
Ácido Bóri H2 BO3 0.062 62
Co
Sulfato d Magnesio tetra hidratado MgSO4 * 4H2 O 0.223 223
Sulfato de Zinc heptahidratado ZnSO4 *7H2 O 0.086 86
Yoduro de potasio KI 0.83 830
Molibdato de sodio dihitratado Na2MoO4 · 2 H2O 0.25 250
Sulfato de cobre pentahidratado CuSO4*5 H2O 0.025 25
Cloruro de cobaltoso hexahidratado CoCl2 · 6 H2O 0.025 25
B Sulfato de Magnesio heptahidratado MgSO4 *7H O 3.7 3700
C Etilen diamin tetra acetato di sódico Na2EDTA 0.3725 372.5
Sulfato ferroso heptahidratado FeSO4 *7H2 O 0.2785 278.5
D Myoinositol C6H12O6 1 1000
E Tiamina - HCl 0.01 10
Glicina 0.05 50
Ácido nicotínico 0.0125 12.5
Piridoxina - HCl 0.0125 12.5

PROCEDIMIENTO.

Al preparar soluciones stock se deben tener en cuenta las siguientes

consideraciones:

a) Las sales deben disolverse por separado.

b) No se deben mezclar sulfatos con fosfatos para evitar que se precipiten.

c) Las soluciones stock deben ser guardados en frascos color ámbar puesto que
se llegan a precipitar con la luz directa.

d) La solución stock de vitaminas debe ser guardada en congelación, las otras

soluciones se deben guardar en refrigeración a 4 °C.

e) La preparación de soluciones requiere agua destilada, bidestilada y

desionizada.

Mary Claudia Poma Acarapi 84

f) Las soluciones Stock deben ser chequeadas periódicamente para ver si están
contaminadas por bacterias (la apariencia de solución es lechosa) y hongos
(presencia de micelios).

g) Las auxinas que están en forma ácida deben disolverse en KOH o NaOH (1N).
Se utiliza aproximadamente 0.3-1.2 ml de HCl y de KOH por cada 10 mg de
regulador de crecimiento para disolverlos.

Preparación de las soluciones Stock.

Solución Stock de Murashige y Skoog (1962).

Esta primera solución concentrada, es la combinación de diferentes sales

preparadas en cinco partes, las cuales son: Solución A, B, C, D y E, cuya
composición para la preparación es la siguiente:

A) SOLUCIÓN “A”X 10 (Para 10 litros de medio de cultivo)

NOMBRE FORMULA PESO (g) PESO

QUÍMICA (mg)
Nitrato de Amonio NH4 NO3 16.5 16500
Nitrato de Potasio KNO3 19 19000
Cloruro de calcio di hidratado CaCl3 2 H O 4.4 4400
Fosfato monobásico de potasio KH2 PO4 1.7 1700
Ácido Bórico H2 BO3 0.062 62
Sulfato d Manganoso tetra hidratado MnSO4 * 4H2 O 0.223*** 223
Sulfato de Zinc heptahidratado ZnSO4 *7H2 O 0.086 86
*** Si el sulfato es MnSO4 * H2 O (Monohidratado), pesar 0.151 g

Todas estas sales pesar en forma individual y disolver en 20 – 50 ml de agua

destilada y verterlos en una probeta de 1000 ml de capacidad que tenga 250 ml
de agua destilada desionizada en agitación.

En forma individual, disolver cada uno de las siguientes sales en 100 ml de agua
destilada.

NOMBRE FORMULA PESO (g) PESO

QUIMICA (mg)
Yoduro de potasio KI 0.83 830
Molibdato de sodio dihitratado Na2MoO4 · 2 H2O 0.25 250
Sulfato de cobre pentahidratado CuSO4*5 H2O 0.025 25
Cloruro de cobaltoso hexahidratado CoCl2 · 6 H2O 0.025 25

Mary Claudia Poma Acarapi 85

De estas presoluciones pipetear a la solución stock en agitación:

 8,2 ml de Kl

 2,5 ml de Na2MoO4 · 2 H2O

 0,25 ml de CuSO4*5 H2O

 0,25 ml de CoCl2 · 6 H2O

La solución stock enrazar a un litro en un probeta de 1000 ml.

B) SOLUCIÓN “B “X 10 (Para 10 litros de medio de cultivo)

Pesar 3.7 de Sulfato de Magnesio heptahidratado (MgSO 4 *7H O) y disolver en

500 ml de agua destilada.

C) SOLUCIÓN “C” X 10 (Para 10 litros de medio de cultivo)

NOMBRE FORMULA PESO (g) PESO

QUIMICA (mg)
Etilen diamin tetra acetato di sódico Na2EDTA 0.3725 372.5
Sulfato ferroso heptahidratado FeSO4 *7H2 O 0.2785 278.5

Disolver el FeSO4 *7H2 O en 25 ml de agua destilada y el Na2EDTA en 25 ml de

agua destilada tibia. Enfriar y mezclar ambas solucionar para después completar
con agua destilada hasta 500 ml.

D) SOLUCIÓN “D” X 10 (Para 10 litros de medio de cultivo)

Disolver en 500 ml de agua destilada 1 g de Myo-inositol (C6H12O6)

E) SOLUCIÓN “E” X 10 (Para 10 litros de medio de cultivo)

VITAMINAS PESO (g) PESO

(mg)
Tiamina - HCl 0.01 10
Glicina 0.05 50
Ácido nicotínico 0.0125 12.5
Piridoxina - HCl 0.0125 12.5

Disolver cada vitamina y completar hasta 250 ml con agua destilada.

Mary Claudia Poma Acarapi 86

 Anexo 7. Solución Stock de Gamborg et al. (1968).

Componentes Concentración (mg/L)

Medio de Solucion
cultivo Madre
Macronutrientes 10X
KNO3 2500 25000
MgSO4 122.1 1221
NaH2PO4*H2O 130.5 1305
CaCl2*2H2O 113.2 1132
(NH4)2*SO4 134 1340
Micronutrientes 10X
MnSO4*H2O 10 100
ZnSO4*7H2O 2 20
H3BO3 3 30
KI 0.75 7.5
CuSO4*5H2O 0.025 0.25
CoCl2*6H2O 0.025 0.25
Na2Mo4*H2O 0.25 2.5
Solucion de hierro
FeSO4*7H2O 27.8 278
Na2EDTA 37.3 373
Vitaminas 10X
Tiamina-HCl 10 100
Ac. nicotínico 1 10
Piridoxina-HCl 1 10
Fuente: George, 1996

Mary Claudia Poma Acarapi 87

 Anexo 8. Reguladores de Crecimiento usados en la introducción

Mary Claudia Poma Acarapi 88

 Anexo 9. Descripción de los hongos detectados e identificados durante el cultivo
in vitro de arracacha (Arracacia xanthorrhiza Bancroft).

Hongo Descripción del hongo

Aspergillus sp. Conidioforos erectos, simples, terminando en un ensanchamiento,
globoso o clavado, presentando fialides en el ápice o en toda la
superficie; conidios (fialoesporas) unicelulares, globosa, a menudo de
variados colores en masa, en cadenas secas basipetalas.
Cladosporium sp. Conidioforos largos, oscuros, erectos, ramificados en el ápice, simples
o agrupados; conidios (blastoporas) oscuras, de 1-2 células, variables
en forma y tamaño, ovoides a cilíndricas e irregulares, algunas
típicamente en forma de limón.
Curvularia sp. Conidioforos marrones, simples, con esporas apicales o en nuevos
puntos de crecimiento simpodiales; conidios (poroesporas) oscuras,
células terminales claras, de 3-5 células, mas o menos fusiformes,
típicamente curvadas, con una de las células centrales más alargada.
Fusarium sp. Micelio extensivo y algodonoso en medios de cultivo, a menudo con
una coloración rosada, púrpura o amarilla, en el medio o en el micelio;
conidioforos variables, simples y suaves, o rígidos, cortos, ramificados
irregularmente o presentando un conjunto de fialides simples o
agrupados en un esporodoquio; conidios (fialoesporas) hialinos,
variables, principalmente de dos tipos, a menudo formadas en
pequeñas cabezuelas húmedas. Macroconidios con varias células
ligeramente curvadas o dobladas en los extremos, típicamente en
forma de canoa; microconidios unicelulares ovoides u oblongos,
individuales o en cadenas; algunos conidios intermedios, de 2-3
células, oblongos o ligeramente curvados.
Alternaria sp. Conidioforos oscuros, generalmente simples, cortos o elongados,
típicamente con conidios (poroesporas) oscuras, típicamente con
septos longitudinales o transversales; de forma variada, obclavados a
elípticos, u ovoides, frecuentemente formados acropetalmente en
cadenas largas; en algunas instancias formados individualmente y
presentando un apéndice apical simple o ramificado.

Mary Claudia Poma Acarapi 89