Cromatografía de Líquidos de Alta

Resolución (HPLC)

Técnicas de análisis
Instituto Tecnológico de Morelia

Rodrigo Alejandro Escobar Camacho

Emilio Alexis Saucedo Salgado
 1. Introducción
La Cromatografía de Líquidos de Alta Resolucion (HPLC, por sus
siglas en ingles) es una tecnica analítica avanzada que permite la
separacion, identificacion y cuantificacion precisa de compuestos
químicos. Utilizada en una variedad de disciplinas, desde la
ingeniería de materiales hasta la farmacología, la HPLC se ha
convertido en una herramienta esencial para el analisis de
muestras complejas. En la ingeniería de materiales, por ejemplo,
la caracterizacion de polímeros y la deteccion de aditivos o
contaminantes es fundamental para garantizar la calidad y
funcionalidad de los materiales desarrollados. Comprender los
principios y aplicaciones de la HPLC permite a los ingenieros en
materiales optimizar procesos y desarrollar nuevas tecnologías.
 2. Principios Básicos de HPLC

La HPLC se basa en los principios de la cromatografía, donde los

compuestos de una mezcla se separan en función de sus interacciones
con dos fases: la fase estacionaria y la fase móvil. Estas interacciones
se determinan por factores como la polaridad, el peso molecular y la
solubilidad. A diferencia de la cromatografía líquida clásica, la HPLC
utiliza presiones elevadas para forzar la fase móvil a través de la
columna, lo que permite una separación más rápida y eficiente de los
componentes.

La fase móvil suele ser una mezcla de solventes que transporta los
compuestos a través de la columna, donde se produce la separación.
La fase estacionaria es un material poroso o gel modificado
químicamente que retiene ciertos compuestos más que otros,
permitiendo su separación basada en las diferencias de afinidad.
3. Componentes del Sistema HPLC

Un sistema HPLC está compuesto por varios elementos que trabajan

en conjunto para realizar la separación de compuestos:

Bomba: Proporciona un flujo constante y de alta presión de la fase móvil.

Las bombas modernas permiten ajustar el caudal y programar
gradientes de elución, lo que es crucial para analizar mezclas
complejas.
- Inyector: Introduce la muestra en la corriente de la fase móvil de
manera precisa. La inyección puede ser manual o automática, y el
volumen de la muestra se controla para garantizar la reproducibilidad.
- Columna: Es el elemento principal del sistema. Está rellena con un
material de alta superficie específica que actúa como fase estacionaria.
Las columnas pueden ser de fase normal o fase reversa, y su elección
depende del tipo de análisis.
- Detector: Registra la elución de los compuestos y convierte la señal en
datos cuantificables. Los detectores más comunes son el detector UV-
Vis, que mide la absorbancia de los compuestos, y los detectores
basados en espectrometría de masas.
- Sistema de adquisición de datos: Recoge y procesa las señales del
detector, generando cromatogramas que se utilizan para el análisis
cualitativo y cuantitativo de los componentes
4. Tipos de HPLC

Los diferentes tipos de HPLC permiten abordar una amplia gama de

problemas analíticos. Los principales tipos son:

- **Cromatografía de fase normal (NPC)**: Utiliza una fase estacionaria

polar, como sílice, y una fase móvil no polar, como hexano. Es adecuada
para compuestos no polares y se utiliza con frecuencia en la industria
de polímeros para analizar aditivos.
- Cromatografía de fase reversa (RPC): La fase estacionaria es no polar
(por ejemplo, C18) y la fase móvil es polar. Es la técnica más utilizada y
se emplea en la purificación de fármacos y en la industria alimentaria.
- Cromatografía de intercambio iónico: Se usa para separar compuestos
cargados, como proteínas, iones, y otros solutos polares. Es crucial en
aplicaciones ambientales para la detección de contaminantes iónicos.
- Cromatografía de exclusión por tamaño: Separación basada en el
tamaño molecular, ideal para analizar macromoléculas como proteínas
y polímeros. Se emplea ampliamente en la caracterización de
biopolímeros.

5. Parámetros y Variables Importantes

La optimización de un método HPLC requiere la comprensión de varias

variables críticas:

- Selectividad: Definida por la capacidad de la columna para discriminar

entre compuestos similares. El ajuste del pH de la fase móvil y la
elección de la fase estacionaria son esenciales para mejorar la
selectividad.
- Resolución: La eficiencia de la separación depende de factores como
el tamaño de las partículas en la columna y el caudal de la fase móvil.
Una buena resolución es necesaria para identificar picos cercanos en el
cromatograma.
- Composición de la fase móvil: La proporción de solventes puede ser
modificada para optimizar la elución de los compuestos. El uso de
gradientes de elución es común en mezclas complejas.
- Temperatura: Controlar la temperatura de la columna puede mejorar la
separación y reducir el tiempo de análisis. Los sistemas con control de
temperatura son estándar en laboratorios modernos.

6. Ventajas y Desventajas de HPLC

La HPLC ofrece numerosas ventajas, pero también tiene algunas

limitaciones:

- Ventajas:

• Alta reproducible
• capacidad para analizar muestras complejas
• La posibilidad de obtener datos tanto cualitativos como
cuantitativos.
• Es una técnica versátil y puede adaptarse a diferentes tipos de
análisis mediante la modificación de la fase estacionaria y la fase
móvil.

-Desventajas:

• El coste inicial del equipo es elevado

• El mantenimiento requiere técnicos especializados.
• La generación de residuos de solventes es una preocupación
ambiental y debe gestionarse adecuadamente
7. Aplicaciones Prácticas de HPLC

La HPLC es indispensable en diversas áreas de la ciencia y la industria.

Algunos ejemplos específicos incluyen:

-Ingeniería de materiales: Se utiliza para analizar la pureza de

monómeros, detectar aditivos o contaminantes, y estudiar productos de
degradación en polímeros. La estabilidad de los materiales puede
evaluarse mediante HPLC.
-Industria farmacéutica: Asegura la calidad de los medicamentos
mediante la identificación de impurezas y estudios de estabilidad.
-Análisis ambiental: Detección y cuantificación de contaminantes como
pesticidas, herbicidas, y residuos industriales en agua y suelo.
-Ciencia de los alimentos: Garantiza la seguridad alimentaria mediante
la identificación de conservantes, colorantes y otros aditivos.
8. Conclusión

La Cromatografía de Líquidos de Alta Resolución (HPLC) es una técnica

fundamental en el análisis químico moderno, cuya relevancia sigue
creciendo en diversas disciplinas científicas e industriales. En el campo
de la ingeniería de materiales, la HPLC ha demostrado ser esencial para
la caracterización precisa de compuestos, desde la identificación de
contaminantes hasta la evaluación de la pureza de los materiales
sintetizados. La capacidad de esta técnica para proporcionar datos
cuantitativos y cualitativos de alta resolución permite optimizar procesos
y garantizar la calidad de los productos finales.

A medida que las necesidades analíticas se vuelven más complejas, la

HPLC continúa evolucionando. Los avances recientes incluyen la
integración con técnicas de detección más sensibles, como la
espectrometría de masas, y el desarrollo de fases estacionarias más
selectivas que mejoran la eficiencia de separación. Estas innovaciones
permiten abordar desafíos como el análisis de materiales
nanoestructurados y la detección de compuestos en concentraciones
ultra bajas.

Mirando hacia el futuro, se espera que la HPLC desempeñe un papel

aún más significativo en la ingeniería de materiales, especialmente en
áreas como el desarrollo de nuevos polímeros y materiales avanzados
para aplicaciones específicas. La combinación de la HPLC con
tecnologías emergentes, como la inteligencia artificial y la
automatización, promete optimizar los procesos analíticos y abrir
nuevas posibilidades para la investigación y el desarrollo.
 9. Referencias
1. Snyder, L. R., Kirkland, J. J., & Dolan, J. W. (2010). Introduction
to Modern Liquid Chromatography. Wiley.
2. McMaster, M. C. (2007). HPLC: A Practical User’s Guide. Wiley-
Interscience.
3. Journal of Chromatography A, artículos de investigación
recientes sobre avances en HPLC.
4. Materiales y métodos de cromatografía en ingeniería de
materiales: publicaciones académicas especializadas.