FUNDACION UNIVERSITARIA DEL AREA ANDINA
INFORME DE LABORATORIO: EXTRACCION DE ADN
OPTOMETRIA-PRIMER SEMESTRE
DAVID EDUARDO JIMENEZ
VALENTINA PARRA MUÑOZ
JUAN ESTEBAN
RODRIGUEZ DEIBY JULIAN
RODRIGUEZ JOSE MANUEL
LORDUY
BIOCIENCIAS
24/10/2024
WILLIAN ORLANDO HERNANDEZ SAENZ
OBJETIVO
El objetivo de este experimento es extraer ADN de celular epiteliales de la boca mediante
el uso de gárgaras con solución salina y observar el ADN replicado.
MATERIALES
Solución salina.
Tubo falcón grande.
Centrifugadora con refrigeración.
Solución de lavado.
Micropipeteador.
Tubo de eppendorf.
Proteinquinasa.
Vortex.
Propanol.
Guantes.
Bata.
Una persona para hacer las gárgaras.
INTRODUCCION
La extracción de ADN es una técnica fundamental en biología molecular que permite
obtener y estudiar el material genético de los organismos. en este experimento, se utiliza
un método sencillo y no invasivo que consta en hacer gárgaras con solución salina para
obtener ADN de células epiteliales de la boca. Este procedimiento es útil para entender
procedimientos básicos sobre la estructura de ADN y su importancia en la biología.
FUNDAMENTO TEORICO
El ADN es la molécula que contiene la información genética de los seres vivos. Se
encuentra en el núcleo de las células y su estructura está formada por dos cadenas de
nucleótidos puestas en forma de doble hélice, la extracción del ADN implica la ruptura
de las membranas celulares y la separación del ADN de otros componentes celulares,
como proteínas y lípidos.
PROCEDIMIENTO
1. Enjuagar la boca vigorosamente con 20 ml de solución salina al 0,9% por dos
minutos y luego meterlo en él tubo de falcón de 15ml.
2. Meter a centrifugar a 3.000 rpm durante 5 minutos a 4ºc, ahí las células se precipitan por la
gravedad que ejerce la máquina. Tras los 5 minutos desechar el sobrenadante para concentrar la
solución en un volumen menor.
3. resuspender el precipitado celular, agregando 500 ml en solución de lavado con un
micropipeteador.
4. agitar él tubo y luego transferir la resuspension a un tubo eppendorf de 1.5ml (tubo 1) para
poder replicar el ADN.
5. centrifugar a 14.000 rpm por 5 minutos, en este momento las células se irán al fondo, después
se saca el tubo de la centrifugadora y quitar el sobrenadante para agregar 500ml del buffer de
lisis.
6. añadir 2,5 ml de proteinasa k de 10 mg/ml y agitar manualmente o con vortex.
7. incubar a 56ºc por media hora o hasta que no haya insolubles.
8. añadir 500 ml de solución salina, con el fin de precipitar las proteínas. Agitar fuertemente de
manera manual por 15 segundos o utilizar el vortex.
9. centrifugar a 1.000 rpm por 10 minutos.
10. Tomar 800 ml del sobrenadante y transferirlo a un tubo nuevo marcado como (tubo 2),
11. Añadir 700 ml de isopropanol a temperatura ambiente y agitar suavemente por inversión.
12. Centrifugar a 15.000 rpm por 10 minutos para precipitar el ADN y descartar el sobrenadante.
13. Agregar 250ml de etanol 70% frio para retirar las sales residuales y centrifugar a 10.000 rpm
por 2 minutos.
14. Descartar el sobrenadante, dejar secar el tubo con el ADN a temperatura ambiente por 15
minutos.
15. Reconstituir el ADN agregado 50 ml del buffer de reconstitución.
16. Conservar a 4ºc si se va a realizar la PCR el mismo día, en caso de no ser así, se debe
conservar a 20ºc y descongelar una hora antes de amplificar por PCR.
DISCUSION
la extracción de ADN atreves de gárgaras es un metodo efectivo y accesible que ilustra
como se puede obtener muestras de ADN de manera no invasiva, este procedimiento no
solo muestra la presencia de ADN, sino que también resalta la importancia de la sal y el
alcohol en el proceso de extracción, la sal ayuda a estabilizar el ADN, mientras que el
alcohol provoca su precipitación.
CONCLUSION
Lo que se vio en el laboratorio fue un ejemplo de un método sencillo y efectivo que
permite a los estudiantes observar y comprender la estructura del ADN. Este experimento
proporciona una base sólida en temas complejos como la genética y biología molecular.
