Universidad Autónoma de San Luis Potosí
Facultad de Ciencias Químicas
Agentes microscópicos y el ser Humano
Pruebas bioquímcas
Alumna: Nogues Medina Claudia Patricia Clave: 310342
Maestro: Hector Manuel Aguilar López
Grupo: martes, miercoles y viernes Hora: 8:00-9:00
Kigler:
FUNDAMENTO
En el medio de cultivo, la peptona de carne y la tripteína, aportan los nutrientes. La
lactosa y la glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es
el sustrato necesario para la producción de ácido sulfhídrico, el citrato de hierro y
amonio, es la fuente de iones Fe3+, se combinan con el ácido sulfhídrico y producen
sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de
sodio mantiene el balance osmótico. Por fermentación de azúcares se producen ácidos
que se detectan por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en
medio ácido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno el que reacciona
luego con una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro de color negro.
1- Superficie alcalina/profundidad ácida (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa.
2- Superficie ácida/Profundidad ácida (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, y lactosa.
3- Superficie alcalina/Profundidad alcalina (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no fermentador de azúcares.
4- La presencia de burbujas o la ruptura del medio de cultivo indican que el microorganismo produce gas.
5- El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce ácido sulfhídrico.
LIA
FUNDAMENTO
La glucosa es el hidrato de carbono fermentable y la lisina es el sustrato utilizado para
detectar la presencia de las enzimas decarboxilasa y deaminasa. El citrato de hierro-
amonio y el tiosulfato de sodio son indicadores de la producción de ácido sulfhídrico. El
purpura de bromocresol, es el indicador de pH. Los microorganismos fermentadores de
glucosa acidifican el medio y provocan el viraje del color púrpura al amarillo. El ambiente
ácido favorece la actividad enzimática decarboxilasa y se metaboliza la lisina a
cadaverina elevando el pH del medio de cultivo y tornándolo al color púrpura o violeta.
Los microorganismos fermentadores de glucosa que no tienen actividad lisina
decarboxilasa, producen un viraje de la totalidad del medio de cultivo al color amarillo. La generación de sulfuro de
hidrógeno, se visualiza por el ennegrecimiento del medio por la formación de sulfuro de hierro. Esto produce un ácido
alfa-ceto-carbónico, el cual con la sal de hierro y bajo la influencia del oxígeno forma un color rojizo en la superficie del
medio.
Descarboxilación de la lisina:
Resultado Positivo: superficie alcalina / profundidad alcalina (pico violeta / fondo violeta).
Resultado negativo: superficie alcalina /profundidad ácida (pico violeta / fondo amarillo).
Desaminación de la lisina:
Resultado positivo: superficie rojiza / profundidad ácida.
Producción de SH2
Resultado positivo: ennegrecimiento del medio de cultivo (especialmente en el límite entre la superficie y profundidad).
Resultado negativo: Sin cambio de color.
FEA
En el medio de cultivo, el extracto de levadura aporta los nutrientes necesarios para el adecuado
desarrollo bacteriano.
El aminoácido fenilalanina es sometido a la desaminación oxidativa catalizada por la enzima
fenilalanina deaminasa (es una flavoproteína), para producir ácido fenilpirúvico y amoníaco. La
presencia del ácido fenilpirúvico se demuestra con el agregado de cloruro férrico en medio ácido,
con el cual se forma un quelato de color verdoso entre el ácido fenil pirúvico y los iones Fe3+.
Positivo: desarrollo de color verde pálido a intenso en el pico de flauta y en el líquido de
condensación.
Negativo: sin cambios de color. El medio permanece amarillo debido al color del reactivo.
Citrato de Simmons
Las sales de fosfato forman un sistema buffer, el magnesio es cofactor enzimático. El cloruro de
sodio mantiene el balance osmótico, el azul de bromotimol es el indicador de pH, que vira al color
azul en medio alcalino y el agar es el agente solidificante. El medio de cultivo es diferencial en
base a que los microorganismos capaces de utilizar citrato como única fuente de carbono usan
sales de amonio como única fuente de nitrógeno, con la consiguiente producción de alcalinidad.
El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa, a
través del ciclo del ácido tricarboxílico. El desdoblamiento del citrato genera progresivamente,
oxalacetato y piruvato. Este último, en presencia de un medio alcalino, da origen a ácidos
orgánicos que, al ser utilizados como fuente de carbono, producen carbonatos y bicarbonatos
alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es indicativo de la producción de citrato permeasa
Positivo: crecimiento bacteriano con un intenso color azul en el pico de flauta.
Negativo: ausencia de crecimiento y permanencia del color verde del medio de cultivo.
Mio
La tripteína aporta gran cantidad de triptofano, sustrato de la enzima triptofanasa a partir del cual se forma indol que
puede ser revelado con el reactivo de Ehrlich o de Kovac´s por la formación de un compuesto de color rojo. La glucosa
es el hidrato de carbono fermentable, la ornitina es el sustrato para la detección de la enzima ornitina decarboxilasa, el
púrpura de bromocresol es el indicador de pH, que en medio alcalino es de color púrpura y en medio ácido es amarillo.
El agar es el agente solidificante condición necesaria para detectar movilidad, que se evidencia por el enturbiamiento del
medio o por crecimiento que difunde más allá de la línea de inoculación del microorganismo en estudio.
Los microorganismos fermentadores de glucosa acidifican el medio de cultivo y producen viraje del color púrpura al
amarillo. Las condiciones de acidez son favorables para la actividad enzimática ornitina decarboxilasa, que actua sobre
la ornitina generando putrescina, con la consecuente alcalinización del medio de cultivo y viraje al color púrpura.
Movilidad:
Resultado positivo: presencia de turbidez o crecimiento más allá de la línea de siembra.
Resultado negativo: crecimiento solamente en la línea de siembra.
Ornitina decarboxilasa:
Resultado positivo: color púrpura.
Resultado negativo: color amarillo.
Indol:
Resultado positivo: color rojo.
Resultado negativo: el color del reactivo revelador permanece incoloro-amarillento
SIM
Medio de cultivo en el cual la tripteína y la peptona aportan nutrientes para el desarrollo microbiano. El triptófano es un
aminoácido constituyente de muchas peptonas y particularmente de la tripteína y puede ser metabolizado por algunas
bacterias para formar indol. En el proceso interviene un conjunto de enzimas llamadas triptofanasa. El indol producido se
combina con el aldehido del reactivo de Ehrlich o de Kovac´s, para originar un compuesto de
color rojo. A partir del tiosulfato de sodio los microorganismos pueden generar ácido sulfhídrico
que reacciona con el hierro presente formándose un compuesto de color negro. El agar es el
agente solidificante y a esta concentración le otorga al medio la propiedad de ser semisólido,
condición necesaria para detectar movilidad, que se evidencia por el enturbiamiento del medio o
por crecimiento que difunde más allá de la línea de siembra del microorganismo en estudio.
Movilidad:
Resultado positivo: presencia de turbidez o crecimiento más allá de la línea de siembra.
Resultado negativo: crecimiento solamente en la línea de siembra.
Producción de SH2
Resultado positivo: ennegrecimiento del medio de cultivo a lo largo de la línea de siembra o en todo el medio.
Resultado negativo: el medio permanece sin cambio de color.
Prueba del indol:
Resultado positivo: color rojo.
Resultado negativo: el color del reactivo revelador permanece incoloro-amarillento.
Caldo urea
En el medio de cultivo, la tripteína y la glucosa, aportan los nutrientes para el desarrollo de
microorganismos. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, y el rojo de fenol es el
indicador de pH. Las bacterias hidrolizan la urea por medio de la enzima ureasa liberan
amoníaco y dióxido de carbono. Estos productos alcalinizan el medio de cultivo haciendo virar
el indicador rojo de fenol del color amarillo al rojo.
Microorganismos que hidrolizan la urea: el medio de cultivo es de color rosado-rojizo.
Microorganismos que no hidrolizan la urea: el medio de cultivo permanece de color amarillo.
Caldo malonato
La prueba del malonato consiste en evidenciar aquellas bacterias que son capaces de utilizar el malonato de sodio como
única fuente de carbono y el sulfato de amonio como fuente de nitrógeno. En este caso, cualquier intento de alcalinización
por el uso de las peptonas será contrarrestada por la producción de ácidos generados por la fermentación de la dextrosa.
Cuando la prueba es negativa, el caldo queda del mismo color original (verde). En raras ocasiones el medio podría
acidificarse debido a la fermentación de la dextrosa; sin el uso de las peptonas y el indicador de pH haría virar el color
del medio hacia amarillo. Para que ello ocurra el pH debe bajar a 6. Cuando esta prueba
es positiva se dice que el microorganismo utilizó el malonato y al sulfato de amonio como
fuentes de carbono y nitrógeno respectivamente, sin hacer uso de los otros
componentes.
Caldo del mismo color (verde): prueba negativa
Caldo amarillo: prueba negativa
Caldo azul claro o intenso: prueba positiva
Gelatina
Las proteínas que se producen naturalmente son demasiado grandes para entrar a la célula
bacteriana; por lo tanto, para que una célula utilice estas proteínas primero debe ser degradada
a componentes mas pequeños, las enzimas exocelulares de tipo proteolítico; gelatinasas, son
secretadas por ciertas bacterias para desdoblar a las proteína y dicha capacidad ayuda a la
identificación bacteriana El catabolismo de la proteínas por las gelatinasas da el resulta de una
mezcla de aminoácidos
POSITIVO:
a) Medio licuado
NEGATIVO:
a) El medio se mantiene sólido
VP-RM
La glucosa puede ser metabolizada por los microorganismos, a través de distintas vías metabólicas. Según la vía utilizada,
se originarán productos finales ácidos (ácido láctico, ácido acético, ácido fórmico), o productos finales neutros (acetil metil
carbinol). Esta diferencia en el metabolismo bacteriano, podría ser reconocida por la adición de un indicador como rojo
de metilo, para revelar la presencia de productos ácidos, y por la adición de alfa naftol e hidróxido de potasio para
evidenciar la presencia de productos finales neutros. Voges y Proskauer, describieron una coloración rojiza que aparecía
después de adicionar hidróxido de potasio a los cultivos de ciertos microorganismos en medio con glucosa. Esta
coloración se debe a la oxidación del acetilmetil carbinol a diacetilo el cual reacciona con la peptona del medio para dar
un color rojo.
Prueba del rojo de metilo:
Resultado positivo: color rojo.
Resultado negativo: color amarillo.
Prueba de Voges Proskauer:
Resultado positivo: desarrollo de un color rojo en pocos minutos después de una completa
agitación del tubo.
Resultado negativo: ausencia de color rojo.
Bibliografía
[Link]
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[Link]
[Link]
[Link]
[Link]
McFaddin Pruebas Bioquímicas tercera edición
