UNIVERSIDAD CIENTÍFICA DEL SUR
CARRERA(S): Medicina veterinaria y zootecnia
Nutrición y dietética
PRÁCTICA DE LABORATORIO
CURSO: Bioquímica
PROFESOR(A): ROOSVELT DAVID, LEON LIZAMA
INFORME DE PRÁCTICA
PRÁCTICA N°: 11
TÍTULO: “HIDRÓLISIS DE LÍPIDOS”
INTEGRANTES:
● Del Rio Torres, Romina Alexandra 100%
● Tipiana Cachi, Valeria Romina- 100%
● Reyna Yañez, Mia Xiomara -100%
● Velásquez Qquehue, Nadia Celeste - 100%
HORARIO DE PRÁCTICA
FECHA DE REALIZACIÓN DE LA PRÁCTICA: 05/11/24
FECHA DE ENTREGA DEL INFORME: 13/11/24
LIMA, PERÚ
1. INTRODUCCIÓN
Los lípidos son un conjunto de moléculas orgánicas compuestas primordialmente por
átomos de carbono, hidrógeno y oxígeno. Asimismo, los lípidos poseen características
comunes entre sí, entre estas cabe destacar la extremadamente baja solubilidad en agua
pero muy elevada en solventes orgánicos; además, están presentes en el organismo y son
parte fundamental para un buen funcionamiento del metabolismo (1).
Desde un punto fisiológico, los lípidos junto con las proteínas son componentes
estructurales importantes de las membranas celulares, fuente de vitaminas liposolubles (A,
D, E y K), fuente de ácidos grasos esenciales y fuente de energía metabólica para las
funciones corporales a través de la B-oxidación. Además, actúan como hormonas,
antioxidantes, pigmentos o importantes factores de crecimiento y vitaminas (2).
Estos lípidos los podemos encontrar en alimentos ricos en ácidos grasos saturados como la
manteca, mantequilla, tocino, leche, aceite de coco; también en alimentos ricos en ácidos
grasos monoinsaturados como aceites o frutos secos. De acuerdo a la ingesta de grasa
saturada e insaturada se recomienda ingerir menos del 10% de la energía total. Por lo que,
la digestión de los lípidos comienza en el estómago con la lipasa gástrica dando origen a
glicerol y tres ácidos grasos (3). En este proceso, un ácido graso resulta saturado porque un
enlace doble se reemplaza por dos átomos de hidrógeno. Algunos ácidos grasos son
utilizados por las bacterias para sintetizar los fosfolípidos necesarios para construir sus
membranas de células.
En la parte clínica el nivel de los lípidos en el organismo es fundamental para mantener una
buena vitalidad en salud. Como ejemplo, tenemos que una acumulación de lípidos en pared
arterial sería parte de una enfermedad base inflamatoria del sistema cardiovascular como la
aterosclerosis (4).
2. OBJETIVOS
● Describir el proceso de hidrólisis de lípidos mediado por la lipasa pancreática a
través de procedimientos experimentales.
● Determinar las concentraciones de los parámetros que conforman parte del perfil
lipídico.
● Interpretar los valores de los parámetros del perfil lipídico de acuerdo con valores de
referencia.
3. MATERIALES Y MÉTODOS
1
Materiales en la mesa del profesor
● 01 solución de pancreatina 1% frasco 1000 mL
● 01 sales biliares 1% frasco 100 mL
● 01 aceite vegetal 30 mL
● 01 tampón fosfato 0.1M pH 7.8 frasco 5.0 mL
● Micropipetas de 100-1000 uL
● Tips de micropipetas
Materiales en la mesa de los estudiantes
● 01 gradilla
● 05 tubos de ensayo 13x100mm
● 01 piseta con agua destilada
● 03 pipetas graduadas de 5 mL
● Propipetas
● 01 fenolftaleína gotero 25 mL
● 01 hidróxido de sodio NaOH 0.05 N gotero 25 mL
4. PROCEDIMIENTO
● Se inicia preparando 4 tubos de solución (Tubo B, Tubo 1, Tubo 2 y Tubo 3)
de acuerdo a las indicaciones de la siguiente tabla:
● Posteriormente, se añaden 2 gotas de fenolftaleína a cada uno de los tubos.
Luego, adicionar gota a gota una solución de NaOH 0.05 N en las
condiciones B, 1 y 2. Se debe repetir este proceso hasta que aparezca una
coloración débilmente grosella estable.
● Una vez que los tubos presentan la coloración indicada, se procede a añadir
Pancreatina al 1 %, de acuerdo a las indicaciones de la siguiente tabla:
2
● Incubar los tubos a la misma temperatura durante 20 minutos, agitándolos
cada 5 minutos.
● Luego de la incubación, adicionar a los tubos 1, 2 y 3 dos gotas de
fenolftaleína. Posteriormente, agregar NaOH 0,05N gota a gota y agitar
constantemente hasta la aparición de una coloración ligeramente grosella y
constante.
● Realizar anotaciones del número de gotas empleadas en cada tubo.
Considerando que 20 gotas equivalen a aproximadamente 1mL y determinar
el número de mL gastados en cada tubo.
● ● Finalmente, hacer cálculo de los miliequivalentes de ácidos grasos liberados
en cada tubo con la siguiente fórmula e interprete cada uno de los resultados
obtenidos en las 3 condiciones experimentales y asócielas con condiciones clínicas
que podrían presentarse en sus carreras profesionales:
mEq = gasto NaOH(mL) x N NaOH
5. RESULTADOS
6.
Figura 1. Se ven los 4 tubos de Figura 2. Se añadieron 2 gotas de fenolftaleína a cada un
ensayo con sus respectivas soluciones tubos, luego adicionamos gota a gota una solución de Na
según el cuadro. 0.05N a los tubos B, 1 y 2 .
En la figura 2 se observa que los tubos B, 1 y 2 tienen una coloración grosella
estable gracias a la solución de NaOH 0.05N debido a que cada tubo tuvo una
diferenciación en la cantidad de gotas agregadas, es decir, al tubo B se le echaron 7
3
gotas, al tubo 1, 5 gotas y al tubo 2, 6 gotas.
Figura 3. Los tubos retirados de la incubación
por 20 minutos luego de agregarles
Pancreatina al 1% según el cuadro.
La incubación de los tubos se dio por 20 minutos con intervalos de 5 minutos para
agitarlos haciendo que cambien de color. En el caso del tubo B, no cambio mucho de
color porque no se le agrego Pancreatina al 1% y por la cantidad de gotas de NaOH
0.05N agregadas mayor a los otros tubos.
Figura 4. Entonces, se repite lo mismo de
adicionar a los tubos 1, 2 y 3 dos gotas de
fenolftaleína y NaOH 0,05N gota a gota y
agitándolos hasta la aparición de una coloración
grosella y constante.
Como se ve en la figura 4, para los tubos 1, 2 y 3 se dieron diferencias otra vez en la
4
cantidad de gotas que se les agregaron, es decir, en el tubo 1 se echaron 10 gotas, en el
tubo 2 unas 5 gotas igual que al tubo 3 de NaOH 0,05N lo que les dio ese color.
Ahora se calculará los miliequivalentes de ácidos grasos liberados en cada tubo:
mEq = gasto NaOH(mL) x N NaOH
TUBO 1
mEq = 0.5 ml x 0.05 = 0.025
TUBO 2
mEq = 0.25 ml x 0.05 = 0.0125
TUBO 3
mEq = 0.25 ml x 0.05 = 0.0125
Figura 5. En el tubo 1 se ve que
hay mayor hidrólisis de lípidos
porque hay menos espuma,
puesto a que tiene todo
menos agua destilada.
Como podemos ver en el tubo B (sin pancreatina) y 2 (sin sales biliares) no hay mucha
hidrólisis, pero si emulsión de grasas por la espuma y el tubo 3 no tiene tampón fosfato.
Entonces, según los resultados obtenidos asociándolos a condiciones clínicas podemos
decir que la insuficiencia renal aguda puede alterar el metabolismo lipídico y promover la
movilización de lípidos.
En todas estas condiciones, el aumento de la hidrólisis de los lípidos puede dar lugar a un
exceso de ácidos grasos libres en el torrente sanguíneo, lo que puede tener consecuencias
metabólicas, como la formación de cuerpos cetónicos (en condiciones de cetosis),
alteraciones en los perfiles lipídicos y daño a órganos como el hígado y el riñón.
5
7. DISCUSIÓN
En el experimento la hidrólisis de los lípidos fue evidenciada mediante cambios en la
coloración de las soluciones debido a la adición de NaOH y pancreatina. El aumento
en la cantidad de gotas de NaOH reflejó una mayor necesidad de neutralización de
los ácidos grasos liberados, indicando que los tubos con mayor cantidad de enzima
(pancreatina) presentaron mayor actividad hidrolítica. Este fenómeno es consistente
con lo observado en estudios sobre la actividad de la lipasa pancreática, donde se ha
demostrado que esta enzima es clave para la hidrólisis de triglicéridos en ácidos
grasos y glicerol, facilitando su absorción en el intestino delgado (5).
La presencia de coloración grosella estable en los tubos de ensayo sugiere una
adecuada reacción entre el NaOH y los ácidos grasos generados. Este cambio de
color refleja el aumento de los ácidos grasos libres como resultado de la acción de la
lipasa en condiciones de pH alcalino, favorecido por la solución de NaOH. Estudios
anteriores también han señalado que la alcalinidad mejora la eficiencia de la lipasa,
lo que explica la relevancia del pH en el proceso de hidrólisis(6).
Por otro lado, las diferencias observadas en el número de gotas entre los tubos
pueden relacionarse con la variabilidad en la cantidad de enzima o sustrato presente,
como ha sido documentado en investigaciones sobre la neutralización de ácidos
grasos. La cantidad de NaOH utilizada es directamente proporcional a los ácidos
grasos liberados, lo cual apoya la cuantificación de la hidrólisis en función de los mEq
de ácidos grasos formados, un enfoque común en estudios bioquímicos para medir la
actividad de las enzimas hidrolíticas (7).
En conjunto, los resultados indican que la lipasa pancreática y las sales biliares son
esenciales en la digestión de lípidos, facilitando la liberación de ácidos grasos libres.
Esto es consistente con el comportamiento digestivo humano, donde ambas
sustancias son necesarias para una absorción efectiva de los lípidos en el intestino
delgado (8). El tubo 1, con todos los reactivos, mostró la mayor actividad hidrolítica y
requirió menos NaOH para neutralizar los ácidos grasos, lo que refleja la máxima
eficiencia en la degradación de triglicéridos bajo condiciones óptimas de pH y
cofactores.
Estos hallazgos tienen implicaciones clínicas importantes, la insuficiencia en la
función de la lipasa pancreática o la falta de sales biliares puede afectar la absorción
de lípidos y llevar a problemas de malabsorción, además de deficiencias de
vitaminas liposolubles. Esto es relevante en condiciones patológicas como
enfermedades hepáticas, donde la falta de sales biliares puede alterar el perfil
lipídico y promover la movilización de lípidos en exceso, lo que puede desencadenar
una cetosis y comprometer órganos como el hígado y los riñones (9).
8. CONCLUSIONES
6
● En el experimento, la hidrólisis de los triglicéridos fue facilitada por la lipasa
pancreática, lo que demuestra cómo esta enzima descompone los
triglicéridos en ácidos grasos y glicerol. La presencia de pancreatina y sales
biliares en los tubos incrementó la eficiencia de este proceso, como
evidenciado por el cambio en la coloración debido a la liberación de ácidos
grasos. Este procedimiento experimental permite observar de forma
controlada cómo la lipasa pancreática, junto con las sales biliares, realiza la
emulsificación de los lípidos en el organismo, un paso esencial para la
digestión y absorción en el intestino.
● Los cálculos de miliequivalentes de ácidos grasos liberados mediante la
adición de NaOH permiten cuantificar la hidrólisis en cada condición
experimental. Al añadir un volumen específico de NaOH gota a gota, se
neutralizan los ácidos grasos liberados, lo que refleja las concentraciones de
estos en cada muestra. Los tubos con mayor presencia de reactivos
enzimáticos mostraron mayores concentraciones de ácidos grasos, lo que
confirma la importancia de la lipasa y las sales biliares en la liberación de
estos componentes del perfil lipídico. Estos valores experimentales
representan de manera aproximada lo que se podría encontrar en un perfil
lipídico clínico y destacan la relación entre condiciones óptimas de pH,
cofactores y concentración de lípidos hidrolizados.
● En términos clínicos, los resultados del experimento muestran una deficiencia
en la actividad de la lipasa pancreática o en la producción de sales biliares
podría llevar a problemas como la malabsorción de grasas. Esto podría
reflejarse en un perfil lipídico alterado, caracterizado por niveles elevados de
ácidos grasos libres, lo cual podría desencadenar problemas metabólicos
como cetosis o acumulación de lípidos en sangre. Estos factores son
clínicamente relevantes, ya que el perfil lipídico es un indicador del estado de
salud del sistema cardiovascular y hepático. Condiciones patológicas, como
enfermedades hepáticas o insuficiencia pancreática, pueden alterar
significativamente el perfil lipídico, afectando la homeostasis y la salud
general del paciente.
9. RECOMENDACIONES
● Durante la práctica de laboratorio se recomienda el uso apropiado
de los elementos de protección personal (EPPS), ya que estos nos
permitirán cuidar de nuestra integridad física.
● Se recomienda realizar una correcta enumeración de los tubos para
facilitar su identificación, evitando confusiones durante el
experimento y la obtención de resultados alterados.
7
● Al momento de elaborar las soluciones es importante considerar las
cantidades establecidas para cada tubo, ya que esto nos permitirá
obtener un valor adecuado.
● Es recomendable cumplir con los tiempos y temperaturas
establecidas, ya que la variación de alguna de estas puede cambiar
el resultado de manera significativa.
10. BIBLIOGRAFÍA
(1) Universidad Complutense de Madrid [Internet]. [Consultado el 12 de noviembre
de 2024]. Disponible en: https://www.ucm.es/data/cont/docs/458-2013-07-24-cap-6-
grasas.pdf
(2) TDX (Tesis Doctorals en Xarxa) [Internet]. [consultado el 12 de noviembre de
2024]. Disponible en:
https://www.tdx.cat/bitstream/handle/10803/1805/2.INTRODUCCION.pdf
(3) Administrator. Grasas [Internet]. Fundación Española del Corazón. Available
from: https://fundaciondelcorazon.com/nutricion/nutrientes/805-grasas.html
(4) Los lípidos del organismo: funciones [Internet]. Available from:
https://www.fbbva.es/microsites/salud_cardio/mult/fbbva_libroCorazon_cap13.pdf
(5) Castro E, Castillo L. Lipasa pancreática. Revista de Biología. Disponible en:
https://www.researchgate.net/profile/Edwin-Castro-Mendoza/publication/
384897511_LIPASA_PANCREATICA/links/670d399a23e2381cf6f0be70/LIPASA-
PANCREATICA.pdf
(6) Di Santo Meztler GP. Estudio de la actividad de hidrólisis y síntesis de una lipasa
presente en el látex de Araujia hortorum. [Tesis]. La Plata: Universidad Nacional de La
Plata; 2012. Disponible en:
https://sedici.unlp.edu.ar/bitstream/handle/10915/72122/Documento_completo.pdf-
PDFA.pdf?sequence=1
(7) LibreTexts. 11.5: Neutralization of Fatty Acids and Hydrolysis of Triglycerides.
Disponible en: https://bmcchem.biomedcentral.com/articles/10.1186/1752-153X-5-67
(8) Bhatia M, Porter J. The Role of Pancreatic Lipase and Bile Acids in Digestion and
Absorption of Lipids. Gastroenterology Clinics. 2017;46(2):321-335.
8
(9) Mouchiroud L, Ransijn A, de Wit H. Malabsorción lipídica: causas y consecuencias.
Revista de Gastroenterología y Nutrición. 2017;8(2):123-134.
